导读:本文包含了双向凝胶蛋白电泳论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:硝酸银染色,线粒体,蛋白组学,双向电泳
双向凝胶蛋白电泳论文文献综述
魏义勇,李科,刘云,喻守佳,王海英[1]（2018）在《优化硝酸银染色在心肌线粒体蛋白双向电泳后凝胶染色中的应用》一文中研究指出蛋白组学研究中双向电泳(2-DE)后的SDS-PAGE凝胶染色存在灵敏度和质谱兼容性问题。线粒体中存在大量微量蛋白,对于这类亚细胞器蛋白质2-DE后的凝胶染色,这两种特性显得尤为重要。经典的硝酸银染色虽灵敏度高,但之后的质谱鉴定兼容性欠佳。因此,该研究通过优化硝酸银染色方法观察大鼠心肌线粒体蛋白质2-DE后的凝胶染色效果,挖取部分蛋白质斑点酶解后行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定,验证优化硝酸银染色与质谱鉴定的兼容性。结果表明,优化后的硝酸银染色方法灵敏度高,与MALDI-TOF-MS兼容性好,是一种线粒体蛋白质2-DE后染色的理想方法。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2018年09期）
陈壮飞,肖耀军,黄泽海,陈彤,赵善超[2]（2017）在《荧光差异双向凝胶电泳筛选肾透明细胞癌及癌旁组织中的差异表达蛋白》一文中研究指出目的寻找肾癌相关肿瘤标记物,用于肾癌临床诊断、药物治疗靶点的选择及预后监测。方法采用荧光差异双向凝胶电泳技术筛选15例肾透明细胞癌及癌旁正常肾组织差异表达蛋白质点。统计学采用t检验进行定量比较,以两组蛋白含量比值在1.5倍及以上,P<0.05,被认为是差异表达蛋白质点。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱或串联质谱技术进行差异表达蛋白质点鉴定。结果共筛选分离出27个差异表达蛋白质点,经质谱技术共成功鉴定了26种蛋白质,11种蛋白质在肾癌组织中上调,15种蛋白质下调。其功能覆盖细胞活动的多个方面,其中线粒体短/支链特异性酰基辅酶A脱氢酶、醛糖1-表异构酶、PRDX4、CAPG、β-防御素107、微纤丝相关糖蛋白4等6种蛋白是我们首次采用蛋白质组学技术成功筛选的肾癌差异表达蛋白质,并发现了1个预测蛋白(UCRIL)。结论荧光差异双向凝胶电泳在肾癌组织中获得较好的筛选效果,新筛选的差异表达蛋白有望成为肾癌分子生物学标记物,为后续研究提供了实验依据。(本文来源于《南方医科大学学报》期刊2017年11期）
张译元,唐红,郭延华,王新华,王立民[3]（2017）在《绵羊血清蛋白双向凝胶电泳技术的建立》一文中研究指出【目的】建立和优化绵羊血清蛋白双向电泳体系(2-DE)。【方法】从样品提取及处理、IPG胶条的选择、SDS-PAGE浓度的选择等多个方面对双向电泳分离条件进行比较。【结果】采用10%TCA/丙酮沉淀法处理血清蛋白质,18 cm p H 4~7的IPG胶条2.5 mg上样量,10%SDS-PAGE,获得的2-DE图谱效果较好。【结论】获得良好的绵羊血清蛋白双向电泳图谱,建立并优化了绵羊蛋白质组学的双向电泳技术体系,为转基因绵羊生物安全性评价提供了重要的技术条件。(本文来源于《新疆农业科学》期刊2017年01期）
刘铁军,李昆珊,刘健,仇永乐,吴景景[4]（2015）在《应用双向荧光差异凝胶电泳和质谱技术筛选口腔扁平苔藓唾液差异蛋白》一文中研究指出目的:应用双向荧光差异凝胶电泳(2-D DIGE)和质谱技术筛选、鉴定与口腔扁平苔藓(OLP)患者唾液有关的差异蛋白。方法:收集3例OLP患者及3例健康人唾液,提取唾液总蛋白采用2-D DIGE技术分离蛋白质,寻找差异蛋白质点应用液相色谱一质谱联用技术(LC-MS)对差异蛋白质点进行质谱鉴定。结果:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示各样品条带清晰,无明显蛋白质丢失,经2-D DIGE分离蛋白质后,蛋白质点重复性较好。OLP患者组和健康对照组唾液差异蛋白质点数平均为(317±71)个,用质谱技术鉴定了重复性较好的4个差异蛋白质点(分泌型IgAl、锌α-2-糖蛋白、唾液淀粉酶、血清白蛋白)在OLP患者唾液中表达量均上调。结论:分泌型IgAl、锌α-2-糖蛋白、唾液淀粉酶、血清白蛋白在OLP患者唾液中高表达可能参与了OLP的发生、发展。(本文来源于《实用口腔医学杂志》期刊2015年06期）
陈金烟,韩俊永,薛士杰,金静君,王坤[5]（2014）在《双向凝胶电泳技术在食管癌差异蛋白表达检测中的应用》一文中研究指出目的寻找食管鳞癌早期诊断、疗效评估、预后监测的生物学标记物。方法应用双向凝胶电泳分析10例患者食管鳞癌组织和相应癌旁组织的蛋白表达谱,并对差异表达蛋白质进行质谱鉴定。结果共鉴定出29个差异表达蛋白,包括核不均一核糖核蛋白F等12个上调蛋白和人类蛋白酶体激活剂PA28β等17个下调蛋白。结论食管鳞癌组织与相应癌旁组织的蛋白表达谱的表达具有显着差异性,表达差异的蛋白有可能成为食管鳞癌潜在的肿瘤标志物。(本文来源于《福建医药杂志》期刊2014年06期）
王文平,杨爱珍[6]（2014）在《苔藓植物双向凝胶电泳蛋白样品制备的优化》一文中研究指出比较了苔藓植物小立碗藓3种蛋白样品制备方法,结果分析表明,直接研磨法和叁氯乙酸(TCA)/丙酮(acetone)沉淀法检测的蛋白点的数量相差不明显;直接研磨法提取蛋白所得到的2-DE图谱蛋白点模糊,分辨率低,横竖条纹干扰严重;叁氯乙酸(TCA)/丙酮(acetone)沉淀法分离效果较好,分辨率有所提高。改良的酚抽提/乙酸铵沉淀法检测的蛋白点远远多于前两种方法,所得到的图谱质量最高,分辨率大大提升,蛋白点分布均匀清晰,横竖条纹干扰也很少,凝胶背景干净,是最佳的小立碗藓蛋白样品制备的方法。(本文来源于《北京农学院学报》期刊2014年04期）
王慧娜,高建华,张淑英,高庆荣,张卫东[7]（2014）在《不同方法提取的小麦籽粒蛋白双向电泳凝胶分离效果的分析比较》一文中研究指出为探索适于小麦籽粒蛋白质组学研究的样品制备最优方法,本研究以Rht10鲁麦15开花后第31天的籽粒为材料,采用4种不同蛋白质提取方法:TCA/丙酮法、尿素/硫脲法、酚提取法Ⅰ和酚提取法Ⅱ,对不同提取方法得到的蛋白量以及蛋白分离结果进行比较分析。结果显示:TCA/丙酮法和尿素/硫脲法获得的蛋白点较少,分别为484个和489个,蛋白质损失较大,蛋白质在碱性端(pH7附近)堆积严重;酚提取方法Ⅰ得到的蛋白点709个,部分蛋白点弥散,碱性端蛋白轻微堆积;酚提取方法Ⅱ得到的蛋白点866个,蛋白点清晰,无碱性蛋白堆积。研究结果表明,在小麦籽粒蛋白质组的研究中,酚提取方法更为适合小麦籽粒蛋白的提取,同时方法Ⅱ优于方法Ⅰ。(本文来源于《分子植物育种》期刊2014年04期）
李昆珊[8]（2014）在《应用双向荧光差异凝胶电泳和质谱技术筛选口腔扁平苔藓唾液差异蛋白》一文中研究指出目的：口腔扁平苔藓（oral lichen planus，OLP）是一种常见的口腔黏膜疾病，病因不明，易反复发作，有一定的癌变倾向，被世界卫生组织（WHO）定义为癌前状态。在我们前期研究中，应用基因芯片技术筛选出142个差异表达基因，而基因是通过指导蛋白质的合成来进行表达。随着人类基因组测序计划的完成，研究重点逐渐转向功能基因组学，然而仅凭基因DNA序列及其表达仍不足以解决基因表达时间及表达量甚至蛋白质的翻译后加工及修饰等情况，因此，这些基因组学不能解决的问题可以在蛋白质组学的研究中找到答案。目前，随着蛋白质组学技术的发展，其研究越来越多地应用到生命科学、医学等各个领域，尤其是在研究疾病的病因及发病机制中发挥着重要作用。以往采用双向凝胶电泳技术研究扁平苔藓差异蛋白的方法误差较大，蛋白定量不准确，而且蛋白质组学对组织和血液研究较多，对唾液的研究较少。而唾液取材的简便、安全、低成本和无创性以及含有许多有助于疾病早期诊断的蛋白质，使得唾液的蛋白质组学研究发展受到人们的关注，但是由于唾液的蛋白质种类较多，蛋白质浓度相差较大，对于唾液蛋白的提取没有统一标准和规范，还需要进一步探索。本研究采用双向荧光差异凝胶电泳和质谱技术筛选、鉴定与口腔扁平苔藓患者唾液有关的差异蛋白，以探讨唾液中某些相关蛋白质表达量的变化与口腔扁平苔藓发生的可能作用机制。方法：1提取唾液蛋白预试验分别采用甲醇/NH4HCO3沉淀法、苯酚抽提法及2-D Clean-Up Kit的方法提取新鲜唾液蛋白，并将苯酚抽提复溶后的蛋白经超声处理50s，通过观察十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白条带，确定提取唾液蛋白的最适方法。2唾液蛋白十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳收集9例口腔扁平苔藓患者及9例正常人唾液，为了减少个体差异对__________________________________________________________________________________________________本研究的影响，分别将每组3例唾液混合，作为一个试验样品。按照2-DClean-Up Kit说明书操作提取唾液总蛋白，Bradford法测定蛋白浓度，通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白条带观察唾液蛋白的提取情况。3双向荧光差异凝胶电泳技术分离蛋白质、质谱技术鉴定差异蛋白采用双向荧光差异凝胶电泳技术分离蛋白质，Typhoon9410扫描获取电泳图谱，DecyderTM2D6.5软件寻找差异蛋白质点，将凝胶进行Deeppurple染色，然后用Ettan Spot Picker将差异蛋白质点从凝胶中切下，胰酶酶解，应用液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）对差异蛋白质点进行分析，将生成的质谱数据用Bio Works3.3.1数据分析软件中的SEQUEST算法进行计算，在NCBI中搜索数据库，鉴定蛋白质。结果：1预试验结果预试验应用甲醇/NH4HCO3沉淀法、苯酚抽提法提取唾液蛋白，用DIGEbuffer复溶后均有粘稠透明胶状物出现，且甲醇/NH4HCO3沉淀法提取蛋白后蛋白有明显的丢失现象，将胶状物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳后出现蛋白条带，说明唾液蛋白复溶时并没有完全溶解到DIGEbuffer中，为了增加唾液蛋白的溶解度，将苯酚抽提蛋白复溶后经超声处理50s，测定蛋白浓度，尽管蛋白浓度有所上升，但仍有胶状物存在，唾液蛋白并没有完全溶解。而经2-D Clean-Up Kit提取蛋白，DIGE buffer复溶蛋白后，没有发现胶状物的存在，进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示各样品条带清晰，无明显蛋白质丢失、降解。2-D Clean-UpKit适合唾液蛋白质的提取。2十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果口腔扁平苔藓患者组和正常人组用2-D Clean-Up Kit提取唾液蛋白，进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示蛋白条带清晰，没有明显蛋白丢失和降解。3双向荧光差异凝胶电泳结果双向荧光差异凝胶电泳分离蛋白质后，图像重复性较好、分辨率较高，蛋白质等电点和分子量分布范围较广。DecyderTM2D6.5软件分析扁平苔藓患者组和正常人组唾液差异蛋白质点数平均为317±71个，并用液相色谱-质谱技术鉴定了重复性较好的4个差异蛋白质点，分别为分泌型IgA1、锌α-2-糖蛋白、唾液淀粉酶、血清白蛋白，它们在OLP患者唾液中表达量均上调。结论：12-D Clean-Up Kit适合唾液蛋白质的提取。2口腔扁平苔藓患者唾液中存在差异蛋白表达，其中分泌型IgA1、锌α-2-糖蛋白、唾液淀粉酶、血清白蛋白在口腔扁平苔藓患者中表达上调，提示它们可能参与了口腔扁平苔藓的发生、发展。(本文来源于《河北医科大学》期刊2014-03-01）
郝友进,胡文霞,陈斌[9]（2014）在《葱蝇非滞育与夏滞育蛹蛋白的双向凝胶电泳比较分析》一文中研究指出【目的】比较分析葱蝇Delia antiqua非滞育与夏滞育蛹的蛋白表达差异,为进一步揭示昆虫滞育的分子调控机理和昆虫防治提供理论基础。【方法】以非滞育和夏滞育的蛹为材料,提取总蛋白;进行双向凝胶电泳和凝胶图像分析,对并差异蛋白质进行MALDI-TOF MS质谱鉴定,获得该点的质量指纹图谱;利用MASCOT软件在NCBI和SWISS PORT蛋白质数据库中进行搜索鉴定。【结果】非滞育和夏滞育蛹的蛋白表达存在显着差异。通过质谱鉴定和生物信息学分析,13个差异表达的蛋白质分别为胶原蛋白、纺锤丝组装非正常蛋白6(SAS6)、5,10-亚甲基四氢叶酸合成酶(MTHFS)、Bnb蛋白(bangles and beads)及其他功能未知蛋白。【结论】葱蝇在夏滞育时期,蛹体内的某些蛋白被上调或下调表达。本研究所鉴定的蛋白中,部分可能是参与滞育相关的蛋白质网络中的成员,它们可能在抗高温、染色体分离、叶酸代谢等生理过程中发挥重要作用。(本文来源于《昆虫学报》期刊2014年02期）
卢国栋,张克山,刘永杰,尚佑军,郭建宏[10]（2011）在《BHK-21细胞蛋白样品双向凝胶电泳条件的优化》一文中研究指出分别从BHK-21细胞处理方法、样品上样量、聚丙烯酰胺凝胶浓度和染色方法4个方面优化了BHK-21细胞蛋白双向凝胶电泳的技术条件,以为口蹄疫病毒感染细胞比较蛋白质组学研究奠定基础。结果表明,处理细胞时,采用超声破碎方法优于反复冻融方法;用考马斯亮蓝染色时,7cm胶条上样量为100μg时图谱的蛋白点较多且分离清晰;浓度为10%的聚丙烯酰胺凝胶所得的蛋白点较多;通过2种染色方法的比较,硝酸银染色方法优于考马斯亮蓝染色方法。优化后的双向凝胶电泳技术得到的图谱,蛋白点多且清晰,重复性好,拖尾现象减少,符合软件分析的要求,可用于口蹄疫病毒感染BHK-21细胞蛋白质组学研究。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2011年12期）
双向凝胶蛋白电泳论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的寻找肾癌相关肿瘤标记物,用于肾癌临床诊断、药物治疗靶点的选择及预后监测。方法采用荧光差异双向凝胶电泳技术筛选15例肾透明细胞癌及癌旁正常肾组织差异表达蛋白质点。统计学采用t检验进行定量比较,以两组蛋白含量比值在1.5倍及以上,P<0.05,被认为是差异表达蛋白质点。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱或串联质谱技术进行差异表达蛋白质点鉴定。结果共筛选分离出27个差异表达蛋白质点,经质谱技术共成功鉴定了26种蛋白质,11种蛋白质在肾癌组织中上调,15种蛋白质下调。其功能覆盖细胞活动的多个方面,其中线粒体短/支链特异性酰基辅酶A脱氢酶、醛糖1-表异构酶、PRDX4、CAPG、β-防御素107、微纤丝相关糖蛋白4等6种蛋白是我们首次采用蛋白质组学技术成功筛选的肾癌差异表达蛋白质,并发现了1个预测蛋白(UCRIL)。结论荧光差异双向凝胶电泳在肾癌组织中获得较好的筛选效果,新筛选的差异表达蛋白有望成为肾癌分子生物学标记物,为后续研究提供了实验依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
双向凝胶蛋白电泳论文参考文献
[1].魏义勇,李科,刘云,喻守佳,王海英.优化硝酸银染色在心肌线粒体蛋白双向电泳后凝胶染色中的应用[J].中国细胞生物学学报.2018
[2].陈壮飞,肖耀军,黄泽海,陈彤,赵善超.荧光差异双向凝胶电泳筛选肾透明细胞癌及癌旁组织中的差异表达蛋白[J].南方医科大学学报.2017
[3].张译元,唐红,郭延华,王新华,王立民.绵羊血清蛋白双向凝胶电泳技术的建立[J].新疆农业科学.2017
[4].刘铁军,李昆珊,刘健,仇永乐,吴景景.应用双向荧光差异凝胶电泳和质谱技术筛选口腔扁平苔藓唾液差异蛋白[J].实用口腔医学杂志.2015
[5].陈金烟,韩俊永,薛士杰,金静君,王坤.双向凝胶电泳技术在食管癌差异蛋白表达检测中的应用[J].福建医药杂志.2014
[6].王文平,杨爱珍.苔藓植物双向凝胶电泳蛋白样品制备的优化[J].北京农学院学报.2014
[7].王慧娜,高建华,张淑英,高庆荣,张卫东.不同方法提取的小麦籽粒蛋白双向电泳凝胶分离效果的分析比较[J].分子植物育种.2014
[8].李昆珊.应用双向荧光差异凝胶电泳和质谱技术筛选口腔扁平苔藓唾液差异蛋白[D].河北医科大学.2014
[9].郝友进,胡文霞,陈斌.葱蝇非滞育与夏滞育蛹蛋白的双向凝胶电泳比较分析[J].昆虫学报.2014
[10].卢国栋,张克山,刘永杰,尚佑军,郭建宏.BHK-21细胞蛋白样品双向凝胶电泳条件的优化[J].中国兽医科学.2011