导读:本文包含了细胞骨架微丝论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:筛管特异质体,微丝,蛋白成分,免疫胶体金标记法
细胞骨架微丝论文文献综述
宋西娇,廖珍凤,谢礼,张恒木,洪健[1]（2018）在《免疫胶体金标记法研究筛管特异质体中微丝来源的细胞骨架成分》一文中研究指出叶绿体等细胞器在细胞内的位置维持和运动受细胞骨架的调控。筛管特异质体是筛管细胞内的特征性细胞器,其发生与叶绿体同源。研究利用免疫胶体金标记法结合商品化的微丝蛋白抗体,发现微丝蛋白actin和myosin除了能被标记到叶绿体上,还能被标记到筛管特异质体上。该结果暗示了微丝蛋白可能也参与了筛管特异质体在筛管细胞中的位置维持和运动,为细胞器运动的研究提供了新线索。(本文来源于《电子显微学报》期刊2018年04期）
[2]（2016）在《中国科学院植物研究所乐捷研究组揭示植物微丝细胞骨架相关蛋白ARP3参与重力响应机制》一文中研究指出重力是重要的地球环境因素之一,植物在长期的进化中形成了特有的重力感知和响应机制来调控植物发育和形态建成(如根的向地性生长和地上部的背地性直立生长),保障了植物可以有效地利用营养、水分和光能。已有较多的研究结果表明,微丝细胞骨架在植物响应重力变化中起到重要作用;但是由于以往研究中所用的微丝抑制剂、研究材料、植物器官的不同,至今仍没有明确的有关微丝细(本文来源于《蔬菜》期刊2016年10期）
邹俊杰,郑中玉,薛陕,李瀚海,王育人[3]（2016）在《微丝细胞骨架参与植物重力感知和响应的机制研究》一文中研究指出重力是重要的地球环境因素之一,在长期的进化中植物形成了特有的重力感知和响应机制调控着植物发育和形态建成;如根的向地性生长和地上部背地性直立生长,从而保障了植物可以有效地利用营养、水分和光能。已有较多的研究结果表明,微丝细胞骨架在植物响应重力变化中起到重要作用;但是由于以往研究中所用的微丝抑制剂、研究材料、器官的不同,至今还没有明确的有关微丝细胞骨架如何参与植物重力响应的精细机制。根据"淀粉体-平衡石"假说,植物感重细胞(如根尖小柱细胞和茎内皮层细胞)内淀粉体在感知重力变化发生沉降,可迅速将物理信号转化为生物化学信号。由于感重细胞内存在着复杂的亚细胞结构(如细胞骨架,内膜系统等)造成了淀粉体运动复杂性。我们首次应用流体力学微流变方法分析了拟南芥根尖中央小柱细胞内淀粉体的运动特性,发现在重力刺激(旋转90度)下野生型感重细胞内的淀粉体运动具有明显的"牢笼-逃逸(cageescape)"和协同运动的力学效应。在ARP2/3微丝相关蛋白复合体突变体(dis1-1,dis2-1)的中央小柱细胞中,由于淀粉体被异常形成的粗微丝束所束缚和分离,缺少明显的淀粉体"牢笼-逃逸"和协同运动;而微丝解聚剂(Latrunculin B)预处理可以显着地打破微丝突变体中存在的淀粉体运动的"牢笼"效应。我们进一步的研究结果还表明,ARP3/DIS1亚基不仅参与感重细胞内重力感知,还参与了作为重要的重力信号生长素在胞间的极性运输;在dis1-1突变体中,多个生长素运输载体PIN家族蛋白(PIN2,PIN3,PIN7)胞内运转的发生异常,影响了生长素在根上、下两侧细胞内不对称分布的迅速建立,造成根的向地弯曲生长延迟。此研究结果揭示了微丝细胞骨架在植物重力感知、信号传递中的功能,对于进一步揭示植物发育和形态建成的调控机制,以及改良作物株型、抗倒伏等农艺性状提供了新的研究方法和理论依据(Zheng et al.,2015,Molecular Plant;Zou et al.,2016,JXB)(本文来源于《2016年全国植物生物学大会摘要集》期刊2016-10-09）
修成奎,雷燕,王强,景晓杨[4]（2016）在《人参叁七川芎提取物对复制性衰老血管平滑肌细胞骨架蛋白微丝的影响》一文中研究指出观察人参叁七川芎提取物对复制性衰老血管平滑肌细胞骨架蛋白微丝F-actin和G-actin的影响。以人主动脉平滑肌细胞(HASMC)作为研究对象,复制性衰老9代细胞作为衰老模型,实验分为青年组(5代细胞)、模型组(9代细胞)、中药低剂量组(100 mg·L-1)、中药中剂量组(200 mg·L-1)、中药高剂量组(400 mg·L-1)及白藜芦醇组(10μmol·L-1),药物干预时间为48 h。应用β-半乳糖苷酶特异染色法计算蓝染细胞比率,CCK-8检测细胞增殖能力,流式细胞技术分析细胞周期,免疫荧光染色观察细胞F-actin和G-actin形态的改变,Western blot检测F-actin蛋白的表达情况。与模型组相比,中药各给药组及白藜芦醇组可以有效的降低β-半乳糖苷酶染色蓝染细胞数量,提高细胞的增殖能力,减少G0/G1期的细胞数量,同时增加S期的细胞数量,减少F-actin蛋白的表达量及应力纤维的形成,且药物干预效果明显,具有统计学意义。复制性衰老的血管平滑肌细胞可以作为衰老研究的模型,细胞骨架微丝蛋白G-actin和F-actin形态及蛋白表达在细胞衰老过程中改变明显,人参叁七川芎提取物对细胞G-actin和F-actin有明显干预作用,其可能间接通过此作用延缓了血管老化的进程。(本文来源于《中国中药杂志》期刊2016年03期）
杨美玲[5]（2015）在《Rap2对微丝细胞骨架结构的调控及机制》一文中研究指出Rap2属于Ras家族中的Rap亚族,Rap亚族包括Rap1和Rap2,大量文献显示Ras、Rap1具有调控细胞骨架,细胞粘附等功能,而Rap2与Rap1在氨基酸序列上有60%同源性,与Ras有46%同源性,且Rap2特异效应分子MAP4K4、MINK、TINK、PARG均提示Rap2与微丝细胞骨架可能存在联系,本文主要阐明Rap2与微丝细胞骨架关系及其调控机制,为深入研究Rap2信号通路及其生物学功能奠定基础。本文首先利用免疫荧光方法静态比较在稳定表达和瞬时表达Rap2的微丝细胞骨架的形态改变情况,发现在Rap2过表达的NC65,CRL1932,CCF-RC-2细胞中,有60%以上细胞明显变圆,应力纤维排布明显紊乱,细胞失去原有铺展状态,且肌动蛋白与Rap2有共定位的趋势,其次利用活细胞工作站的方法动态观察Rap2对微丝细胞骨架动态变化,Rap2过表达的细胞中,细胞极性消失,微丝骨架紊乱,Rap2干扰后细胞运动能力减慢,应力纤维减弱,并提前进入凋亡状态。对于机制的探索,利用GST-Pull Down实验发现在Rap2过表达的细胞中,Rap2显着下调Rho A蛋白活性,增高Rac活性,降低Cdc42活性;免疫荧光方法在CRL1932、CRL1933瞬时表达Rap2后分别FAKY397、Paxillin,Vinculin染色,发现在Rap2过表达后,约60%细胞极性丧失或者伪足呈均一化分布,且Rap2抑制FAKY397磷酸化水平。综上所述,Rap2对微丝细胞骨架改变明显,通过下调Rho蛋白活性,增高Rac活性,降低Cdc42活性和改变黏着斑分布极性等使细胞变小变圆,应力纤维减弱,应力纤维排布紊乱,微丝骨架紊乱。(本文来源于《哈尔滨工业大学》期刊2015-06-01）
马文霞[6]（2015）在《抑癌基因WTX通过调节微丝细胞骨架稳定性抑制结直肠癌转移》一文中研究指出研究背景和目的肿瘤蛋白质组学技术,作为本世纪肿瘤学研究领域的新技术,在发现与肿瘤发生发展相关基因及阐明相关基因参与的信号通路、明确其影响肿瘤进展的分子机制等方面有重要作用。蛋白质组学可以实现对整条分子信号通路的逐点筛选,可为肿瘤治疗提供潜在的分子靶标。结直肠癌作为我国常见及高发肿瘤之一,其发病率逐年攀升,死亡率居高不下,通过肿瘤比较蛋白质组学相关技术筛选并发现影响结直肠癌转移的相关基因,并应用分子生物学方法研究其下游分子信号通路进而查找潜在的治疗可攻分子靶点、控制肿瘤转移,对改善患者预后,提高生存期限具有重要意义。WTX,全称 Wilms Tumor gene on the X chromosome,又名 FAM123B,是首个被发现定位于X染色体上的抑癌基因,其在生物体多项正常生理功能,如调控间叶组织分化中发挥重要作用;并被报道与Wilms Tumor等多种肿瘤发生、发展相关。有趣的是,WTX基因序列中包含3个腺瘤样结肠息肉病(adenomatous polyposis coli,APC)结合区域,可与APC直接结合并调控其表达水平及细胞内定位分布;且本课题组在研究前期曾在全身多种器官肿瘤及配对正常组织中广泛检测了 WTX表达水平,结果显示:与正常结直肠黏膜上皮相比,WTX在结直肠癌组织中的表达明显降低。提示WTX基因表达缺失,可能在结直肠癌的发生、发展过程中发挥作用。我们前期在结直肠癌细胞SW620中,瞬时过表达WTX后,检测细胞生物学功能变化,结果显示,在WTX过表达后,SW620细胞迁移能力下降。但是,本课题组在结直肠癌肿瘤组织中提取配对组织蛋白,做基因表达相关性分析时发现,WTX 基因表达与 EMT(Epithelial Mesenchymal Transition,上皮间质转化)相关蛋白,E-cadherin、N-cadherin、Vimentin等表达无明显相关性,提示WTX影响结直肠癌转移并非通过EMT相关路径。那么,WTX究竟在结直肠癌发生、发展中发挥什么作用?WTX是否影响了结直肠癌增殖、转移?若对肿瘤迁移有影响,而非通过EMT途径,那么其作用机制是什么?WTX发挥相关作用,是否有相互作用蛋白参与,调控的具体分子信号通路是什么?这些问题都有待明确。本课题拟通过检测WTX对结直肠癌生物学行为的影响,了解其与结直肠癌增殖、侵袭、转移的关系,通过筛选WTX相互作用蛋白及结直肠癌侵袭、转移相关的候选蛋白,探讨WTX参与结直肠癌侵袭和转移的分子路径,旨在阐释WTX在结直肠癌中的功能作用并揭示其参与肿瘤转移的分子机制,为临床肿瘤治疗提供新的分子靶点。研究方法1、WTX对结直肠癌生物学特性的影响(1)WTX过表达对结直肠癌细胞生物学特性影响1)利用WTX CDS区全长慢病毒载体感染WTX低表达结直肠癌细胞株SW620、HT29,构建稳定过表达细胞株,利用荧光定量PCR及westemblot检测WTX基因的表达。2)利用CCK8、平板克隆形成率和Transwell细胞迁移实验、划痕实验结合检测WTX基因过表达对SW620、HT29细胞增殖、侵袭能力的影响。(2)WTX沉默对结直肠癌生物学特性影响1)设计叁个WTX干扰片段及一个阴性对照片段,将片段瞬时转染WTX高表达结直肠癌细胞SW480、HCT116,QPCR与Western blotting联合筛选WTX最有效干扰片段,送吉凯基因公司构建WTX有效沉默慢病毒载体,并包装成慢病毒上清液。2)利用WTX干扰慢病毒上清感染WTX高表达结直肠癌细胞株,荧光定量PCR及western blot检测WTX基因的表达。3)利用CCK8、平板克隆、Transwell细胞迁移实验、划痕实验结合检测WTX基因过表达对SW480HCT116细胞增殖、侵袭能力的影响。2、WTX相互结合作用蛋白的筛选鉴定与调控机制分析(1)提取SW620-W+及HT29-W+细胞蛋白,以WTX特异性单克隆抗体作为“诱饵”行CO-IP实验,检测WTX与小G蛋白家族3个主要成员蛋白的直接结合作用,得到WTX相互作用蛋白CDC42;CO-IP与Con-focal验证WTX与CDC42的相互结合作用,Western blotting检测WTX结直肠癌重组稳定表达细胞株中,WTX表达改变前后,CDC42总表达及活性表达量变化。(2)WTX与CDC42相互结合结构域的初步分析。1)WTX除全长型外,在大多数细胞内存在另外2种亚型,一:在WTX基因N末端50～326AA缺失;二:在WTX基因C末端786～804AA与全长型碱基不同,而804～1135AA缺失。为了明确WTX与CDC42结合是否亚型特异性,首先将按WTX亚型序列构建1、2、3号叁个亚型表达载体,将带Flag标签的截短子载体以阳离子脂质体法瞬时转染入结直肠癌SW620细胞,以Flag标签抗体为“诱饵”捕获CDC42,Western blotting检测叁个亚型片段对CDC42的“捕获”情况;并transwell细胞迁移能力检测实验检测亚型载体瞬时转染对细胞迁移能力的影响。2)将WTX中间区域再次“截短”为长度不同的5个片段,设计并合成带特定酶切位点及Tag的引物,PCR扩增截短子片段,将产物插入GV141载体骨架(吉凯基因公司),测序鉴定,构建截短子质粒载体。将载体以阳离子脂质体法瞬时转染入结直肠癌SW620细胞,以Flag标签抗体为“诱饵”捕获CDC42,Western blotting检测可“捕获”CDC42的通道所对应的WTX片段区域。(3)WTX抑制CDC42活性的具体机制分析。1)根据文献,明确RhoGDIα可作为small GTPases家族叁个主要成员包括CDC42的活性调节“开关”而发挥作用,它可以抑制RHO蛋白与GDP的解离及与GTP的结合,从而将RHO蛋白维持在失活形式。CO-IP检测WTX与RhoGDI相互结合关系,Con-focal辅助验证WTX与CDC42的结合。2)WTX与RhoGDI相互结合结构域的分析。利用已构建WTX截短子载体为“诱饵”,去“捕获”RhoGDIα,分析WTX-CDC42-RhoGDI 结合模式。3)CO-IP进一步分析,WTX-CDC42-RhoGDI叁者作用模式。分别设计CDC42及RhoGDIα干扰片段各3个及一个阴性对照片段,将片段瞬时转染SW620-W+细胞,QPCR与Western blotting联合筛选CDC42/RhoGDIα最有效干扰片段(沉默效果>50%)。将SW620-W+细胞分为叁组,以阳离子脂质体法分别瞬时转染NC、Si-CDC42或Si-RhoGDIα,提取细胞蛋白,在Si-CDC42组细胞中,以WTX为“诱饵”去“捕获”RhoGDIα;在Si-RhoGDIα组细胞中,以WTX为“诱饵”去“捕获”CDC42,检测分析WTX与CDC42/RhoGDIα三者作用模式,WTX与CDC42/RhoGDIα 结合是否以 RhoGDIα/CDC42 为中介?3、WTX-CDC42在结直肠癌细胞迁移中作用(1)“rescue”实验明确WTX与CDC42上、下游关系1)根据预测WTX可能与CDC42存在负性调节关系,在SW620-W+细胞中,双重过表达CDC42,CCK8及transwell实验检测双过表达细胞SW620-W+C+与对照细胞SW620-W+、SW620-N1相比,增值、侵袭能力“恢复”情况。2)在SW480-W-细胞中,双重沉默CDC42,CCK8与transwell实验检测双干扰细胞SW480-W-C-与对照细胞SW480-W-、SW480-N1相比,增值、侵袭能力“恢复”情况。(2)鬼笔环肽标记F-actin,在WTX过表达及沉默表达细胞组(SW620-W+/N1与SW480-W-/N1)中,利用免疫荧光观察细胞actin骨架形态变化。用 mDia2/Fmnl2+F-actin 双色标记 filopodia,用 Arp2/3+F-actin 双标记lamellipodia,用 α-actinin+myosinⅡA 双标记应力纤维,用 paxillin+myosinⅡA 双标记黏着斑,免疫荧光分析WTX-CDC42影响结直肠癌细胞actin骨架的具体形式。(3)WTX调节结直肠癌细胞actin骨架形态变化的具体作用通路利用Western Blot检测WTX过表达及干扰细胞株中中CDC42下游MRCK、LIMK1/2、p-Cofilin、p-moesin、p-MLC等蛋白质的表达变化,筛选并分析得到结直肠内WTX下游影响细胞actin骨架形态变化的作用信号通路。4、统计学分析采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析。荧光定量PCR结果比较2-△△Ct值采用单样本T检验(One-Sample T Test)分析;Transwell迁移实验、平板克隆形成实验根据分组量采用两独立样本t检验(Independent-Samples T test)或单因素方差分析(One-Way ANOVA)法进行分析。CCK8体外增殖及裸鼠皮下成瘤实验采用析因设计(Factorial design analysis of variance)的方差分析。P<0.05 为差异有统计学意义。研究结果1、WTX对结直肠癌生物学特性的影响(1)利用慢病毒感染构建结直肠癌WTX基因稳定过表达/阴性对照细胞株HT29-W+/HT29-N1 和 SW620-W+/SW620-N1。荧光定量 PCR 鉴定 HT29-W+与 HT29-N1、SW620-W+与 SW620-N1 之间WTX的表达差异,结果显示两种细胞系之间WTX表达差别明显,有统计学意义(t= 46.9,P<0.001;t= 17.575,P<0.01);Western blot 检测证实HT29-W+/SW620-W+细胞组WTX基因的表达量较HT29-N1/SW620-N1明显升高,HT29-W+/HT29-N1、SW620-W+/SW620-N1 细胞稳定株构建成功。(2)设计叁个WTX干扰片段分别命名为WTX SI-1、SI-2、SI-3,瞬时转染SW480及HCT116细胞株后,QPCR结果提示,片段SI-1沉默效果最佳,干扰效率>50%,Western blotting与QPCR结果一致,SI-1选作后续用WTX干扰序列。将WTXSI-1序列送上海吉凯基因技术公司,包装WTX干扰慢病毒载体。利用WTX干扰慢病毒感染结直肠癌SW480、HCT116细胞,构建SW480-W-/SW480-N1、HCT116-W-/HCT116-N1 两组稳定沉默细胞株;荧光定量 PCR 鉴定 SW480-W-与 SW480-N1、HCT116-W-与 HCT116-N1 之间 WTX 的表达差异,结果显示两组细胞系之间WTX表达差别明显,有统计学意义(t=-8.973,P<0.05;t=-22.420,P<0.01);Western blot 检测证实SW480-W-/HCT116-W-细胞组 WTX 基因的表达量较 SW480-N1/HCT116-N1 明显降低,提示WTX结直肠癌细胞干扰稳定株构建成功。(3)WTX过表达或沉默前后,CCK8、平板克隆实验测细胞体外增殖能力CCK8 结果示:WTX 沉默后,SW480-W-/SW480-N1、HCT116-W-/HCT116-N1细胞中2组的生长时间水平差异具有统计学意义(F=l 170.056,P<0.001;F=1167.374,P<0.001);各时间2组细胞间差异具有统计学意义(F=335.429,P<0.001;F=177.889,P<0.001);WTX 过表达后,HT29-N1/HT29-W+、SW620-W+/SW620-N1细胞中2组的生长时间水平差异具有统计学意义(F=652.200,P<0.001;F=802.765,P<0.001);各时间2组细胞间差异具有统计学意义(F=277.843,P<0.001;F=133.312,P<0.001)。平板克隆结果示:WTX稳定过表达后,HT29-N1/HT29-W+细胞组和SW620-N1/SW620-W+组的克隆形成率分别为61%/14.67%、45%/22%,差异具有统计学意义(T=13.998,P<0.001;T=26.039,P<0.001);WTX稳定沉默表达后,SW480-N1/SW480-W-细胞组和HCT116-N1/HCT116-W-组的克隆形成率分别为 25.2%/61.13%、29.47%/73.53%,差异具有统计学意义(T=-12.013,P<0.001;T=-17.742,P<0.001)。以上实验结果提示:转入WTX基因后,SW620、HT29细胞增殖能力明显减弱;沉默WTX基因后,SW480、HCT116细胞增值能力增强。(4)WTX过表达或沉默前后,transwell、划痕实验测细胞体外迁移能力transwell 示:WTX 过表达后,HT29-W+/SW620-W+细胞组较 HT29-N1/SW620-N1细胞组迁移能力明显减弱,差异具有统计学意义(t=8,798,p<0.001;t=21.985,p<0.001);WTX 沉默后,SW480-W-/HCT116-W-组较SW480-N1/HCT116-N1细胞组迁移能力明显增强,差异均具有统计学意义(t=-13.770,p<0.001;t=-8.711,p<0.001)。划痕实验结果示:WTX过表达后,HT29-W+/SW620-W+组划痕后72h细胞间距明显宽于 HT29-N1/SW620-N1 组;WTX沉默后,SW480-W-/HCT116-W-组划痕后 48～72h 细胞间距明显窄于 SW480-N1/HCT116-N1 组。上述实验结果表明,转入WTX基因后,结直肠癌细胞SW620、HT29体外迁移能力降低;沉默WTX基因后,结直肠癌细胞SW480、HCT116体外迁移能力增强。2、WTX相互结合作用蛋白的筛选鉴定与调控机制分析(1)以WTX看克隆抗体为“诱饵”,行CO-IP(免疫共沉淀)检测WTX与小G蛋白家族主要成员CDC42、RAC1、RhoA的相互结合作用,结果显示:WTX与小G蛋白家族成员CDC42有相互结合作用,而与RAC1、RhoA无直接结合作用。Con-focal验证WTX与CDC42的结合作用,结果显示:在结直肠癌SW620与SW480细胞株中,WTX与CDC42在细胞浆内存在共定位。且在SW620中,WTX与CDC42的结合在SW620-W+中明显弱于SW620-N1细胞;而在SW480细胞中,WTX与CDC42在SW480-W-中的结合明显强于SW480-N1细胞。Western blotting检测CDC42总表达及活性表达量,结果显示:WTX过表达后,CDC42活性表达量(GTP-boundCDC42)降低;而WTX沉默表达后,CDC42活性量增高,而总表达量均无明显差异。提示:WTX可以负向调控CDC42活性。(2)WTX与CDC42相互结合结构域的初步分析。1)构建WTX叁个亚型载体,PCR扩增片段,将片段插入GV141载体,行后双酶切琼脂糖凝胶电泳初步鉴定,结果提示扩增载体片段长度与分别预期相符合,将初步质粒载体转化大肠杆菌DH5α,摇菌提取质粒测序,测序结果示载体系列与NCBI公布匹配,WTX1、2、3号叁个亚型载体构建成功。2)将3个亚型载体及阴性对照载体瞬时转染SW620细胞,transwell实验检测细胞细胞迁移能力变化,结果显示:1、2、3号载体瞬时转染SW620细胞后,与阴性对照组相比,细胞迁移能力均出现下降,差异具有统计学意义(F=19.747,P<0.001);提取转染了 3个亚型载体的SW620细胞蛋白行CO-IP实验,结果显示:叁组细胞中WTX均可以沉淀CDC42,但是在转染3号载体的细胞中,WTX沉淀CDC42的能力明显低于1、2号载体组。3)将WTX中间区域再次“截短”构建成5个不等长度的片段,PCR扩增片段,将片段插入GV141载体,行后双酶切琼脂糖凝胶电泳初步鉴定,结果提示扩增“截短子”片段长度与预期相符合,将初步质粒载体转化大肠杆菌DH5α,摇菌提取质粒测序,测序结果示“截短子”序列与NCBI公布匹配,WTX“截短子”载体构建成功。4)用5个截短子片段分别沉淀CDC42,综合分析可沉淀CDC42的WTX片段区域,CO-IP结果示:WTX与CDC42结合是通过WTX N端327-716AA位点。(3)WTX抑制CDC42活性的具体机制。1)CO-IP结果显示,以WTX抗体作为“诱饵”,可以成功捕获RhoGDIα,提示RhoGDIα为WTX另一个直接结合作用蛋白。2)设计CDC42与RhoGDIα沉默siRNA片段各3个,分别命名为CDC42 SI-1、SI-2、SI-3,RhoGDIα SI-1、SI-2、SI-3,将片段瞬时转染 SW480 及 SW620 细胞株后,QPCR结果提示,CDC42片段SI-1及RhoGDIα SI-1、SI-2沉默效果效率>50%,Western blotting与QPCR结果一致,两个基因均选用SI-1作后续实验。WTX-RhoGDIα-CDC42 叁者 CO-IP 结果示:沉默 CDC42 以后,WTX 与RhoGDIα结合没有明显变化;但是,沉默RhoGDIα后,WTX与CDC42结合减弱,但是依旧存在结合。结合“截短子”实验结果,该两部分实验提示:WTX部分通过RhoGDIα与CDC42相结合,RhoGDIα是部分WTX与CDC42相结合作用的中介。3)截短子分析结果显示,WTX与RhoGDIα发生结合片段,与WTX结合CDC42的片段一致,提示WTX-RhoGDIα-CDC42叁者“复合物”的存在形式。以上结果综合提示:WTX与CDC42/RhoGDIα结合需要以另外一个蛋白即RhoGDIα/CDC42为中介。(WTX可能正向“维持”RhoGDIα与CDC42的结合,抑制CDC42从GDP-bound的“失活”形式向GTP-bound的“活性”形式转换。)3、CDC42在结直肠癌迁移中的作用(1)“rescue”实验明确WTX与CDC42上、下游关系1)在SW620-W+细胞中,双重过表达CDC42后,SW620-W+C+组与对照组细胞 SW620-N1、SW620-W+细胞组相比,CCK8 结果示:SW620W+C+/SW620W+/SW620-N1细胞中3组的生长时间水平差异具有统计学意义(F=1557.996,P<0.001);各时间3组细胞间差异具有统计学意义(F=148.127,P<0.001);生长时间与组间交互作用差异具有统计学意义(F=18.913,P<0.001)。结果提示:在转入WTX基因后,SW620细胞增殖能力减弱;但当同时转入WTX与CDC42时,被抑制的SW620细胞增值能力有所“回复”。transwell示:SW620W+细胞组迁移能力最弱,其次为SW620W+C+组,对照组细胞SW620-N1组最强,差异具有统计学意义(F=116.901,p<0.001)。提示:在转入WTX基因后,SW620细胞迁移能力减弱;但当同时转入WTX与CDC42时,被抑制的SW620细胞迁移能力有所“回复”。2)在SW480-W-细胞中,双重沉默CDC42后,SW480-W-C-组与对照组细胞SW480-N1、SW480-W-细胞组相比,CCK8 结果示:SW480W-C-/SW480W-/SW480-N1细胞中3组的生长时间水平差异具有统计学意义(F=672.235,P<0.001);各时间3组细胞间差异具有统计学意义(F=362.501;P<0.001);组间与生长时间交互作用差异具有统计学意义(F=57.727,P<0.001)。结果提示:在沉默WTX基因后,SW480细胞增殖能力增强;但当同时沉默WTX与CDC42时,被促进的SW620细胞增值能力有所“回复”。transwell示:SW480W-细胞组迁移能力最强,其次为SW480W-C-组,对照组细胞SW480-N1组最低,差异具有统计学意义(F=225.470、p<0.001)。提示:在沉默WTX基因后,SW480细胞迁移能力增强;但当同时沉默WTX与CDC42时,被抑制的SW480细胞迁移能力有所“回复”。以上结果提示,CDC42为WTX直接结合作用蛋白,且CDC42位于WTX下游信号通路,CDC42的表达变化可以“逆转”上游WTX蛋白表达失调所引起的结直肠癌增值、侵袭能力变化。(2)免疫荧光结果观察到,在SW480细胞中,当WTX被沉默后,与对照组细胞相比,细胞内部及周边出现丝状、束状的ACTIN骨架纤维明显增加;在SW620细胞中,当过表达WTX后,与对照组细胞相比,细胞膜周边丝状的骨架纤维明显减少。结果提示,WTX对结直肠癌细胞ACTIN骨架组装存在负向调控作用。(3)在SW620N1/SW620W+、SW480N1/SW480W-细胞组中,免疫荧光双色标记丝状伪足、层状伪足、应力纤维及黏着斑,观察到与对照组细胞相比,WTX过表达或沉默后,细胞丝状伪足、层状伪足形成数量并无明显变化;但是,WTX沉默后,细胞应力纤维及黏着斑形成明显增加。(4)Western Blotting检测到 WTX沉默后,WTX/CDC42下游MRCK、LIMK1/2、p-cofilin 表达增加,WTX 过表达后 WTX/CDC42 下游 MRCK、LIMKI/2、p-Cofilin、表达下调,而mDia2、Fmnl2表达无明显变化。且结直肠癌组织中,QPCR检测并分析WTX与MRCKα表达相关性,结果提示二者mRNA水平表达负性相关,相关系数0.72。以上提示结直肠癌细胞中,WTX通过WTX—GTP-CDC42—MRCK—LIMK1/2—p-Cofilin—F-actin polymerization 信号通路调节结直肠癌细胞actin骨架形态变化。研究结论1、证实WTX具有抑制结直肠癌细胞增殖及侵袭作用;2、WTX通过RhoGDIα与CDC42相结合作用,抑制CDC42活性,从而调节结直肠癌细胞骨架活动,抑制结直肠癌侵袭、转移;3、WTX 通过 WTX—GTP-CDC42—MRCK—LIMK1/2—p-Cofilin—F-actin 信号通路抑制结直肠癌细胞应力纤维及黏着斑等微丝骨架的组装形成,从而抑制肿瘤细胞迁移、侵袭。(本文来源于《南方医科大学》期刊2015-03-24）
Bao-long,LI,Yi-fan,WANG,Jing-hai,GONG[7]（2014）在《基于找形模型研究微丝束对细胞骨架刚度的影响(英文)》一文中研究指出研究目的:基于找形分析建立的细胞骨架力学模型研究微丝束对细胞骨架刚度的影响。创新要点:目前存在的细胞模型很少考虑微丝束对细胞力学特性的重要作用。本文基于细胞找形模型模拟了同时包含微丝和微丝束的细胞骨架网络结构,并且分析了细胞中微丝束的排列方向、微丝束的含量以及微丝波动对细胞刚度的影响。研究方法:基于找形模型,随机生成由微丝、微丝束(梁单元)以及交联蛋白(索单元)形成的细胞骨架网络结构,依靠非线性有限元计算和样本统计,计算出模型的弹性模量。通过分别改变模型中微丝束的排列方向、微丝束的含量以及模型初始最大位移等参数,得出细胞骨架模型的弹性模量随这些参数的变化趋势,以此来研究微丝束对细胞刚度的影响。重要结论:细胞骨架网络中微丝的波动会导致细胞刚度降低;与拉伸方向平行排列的微丝束可以显着地提高细胞的刚度,相比之下随机分布的微丝束对细胞刚度没有贡献;在微丝材料总量固定的情况下,细胞刚度随着平行排列微丝束含量的增加呈现出先升高后降低的趋势。(本文来源于《Journal of Zhejiang University-Science A(Applied Physics & Engineering)》期刊2014年09期）
杜文佳,党跃修,汪玉良,雷栓虎,黄良增[8]（2014）在《微丝聚合剂重构大鼠脊髓星形胶质细胞骨架对水通道蛋白4与K+通道蛋白4.1基因表达的影响》一文中研究指出目的:探讨不同浓度微丝聚合剂(Jasplakinolide,JSK)对大鼠脊髓星形胶质细胞水通道蛋白4(aquaporins-4,AQP4)和K+通道蛋白4.1(potassium ion channel protein-4.1,Kir4.1)基因表达的影响。方法:分离培养原代大鼠脊髓星形胶质细胞并鉴定,采用浓度为0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.40μg/ml的JSK干预细胞2h。噻唑蓝比色法(3-4,5-Dimethylthiazol-2-yl-25-diphenyltetrazolium brom,MTT)检测细胞的增殖情况,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架的变化和Real-time PCR法检测AQP4和Kir4.1 mRNA表达的变化。结果:0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml和0.40μg/ml浓度的JSK在干预细胞2h时与空白对照组相比对细胞的增殖无明显差异(P>0.05),各浓度间相比无统计学意义。激光共聚焦显微镜观察0.05μg/ml、0.10μg/ml和0.20μg/ml浓度的JSK可以使得微丝空间结构发生重构,而0.40μg/ml浓度则使细胞微丝发生破坏。Real-time PCR检测显示,0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml和0.40μg/ml浓度的JSK均能显着降低AQP4和Kir4.1基因的表达,并与对照组相比有统计学意义(P<0.05),且0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml和0.40μg/ml浓度间相比也有统计学意义。结论:0.05μg/ml、0.10μg/ml和0.20μg/ml浓度的JSK可使大鼠脊髓星形胶质细胞微丝发生重构且可以下调AQP4和Kir4.1基因的表达。(本文来源于《中国脊柱脊髓杂志》期刊2014年06期）
黄善金[9]（2012）在《AIP1调控微丝细胞骨架动态和水稻生长发育》一文中研究指出微丝动态变化对于各项依赖于微丝的生理过程的正常实现至关重要。然而细胞如何对微丝的动态变化实现严格调控我们还了解甚少。其中肌动蛋白相互作用蛋白1(actin-interacting protein 1,AIP1)通过与微丝解聚因子(actin depolymerizingfactor,ADF)协作调控微丝动态。但AIP1如何与ADF在植物细胞内协作促进微丝动态以及它们互作的生化作用机制还不清楚。我们于是对水稻AIP1的功能和生化作用机制进行了分析,发现过量表达和RNA干扰引起的AIP1转录本水平的变化影响水稻生长,细胞学观察表明AIP1过量表达和RNA干扰均引起水稻节间细胞伸长受阻,表明AIP1调控细胞伸长。同时发现AIP1过量表达和RNA干扰也引起根毛顶端生长受阻。进一步的结果发现AIP1 RNA干扰引起根毛中微丝含量增加,而AIP1过表达则引起根毛中微丝含量降低。花粉粒中的微丝骨架观察发现过表达花粉粒中微丝含量的下降程度与AIP1转录本含量增加程度成正相关;而RNA干扰花粉粒中微丝含量与AIP1转录本含量成反比,这些结果表明AIP1作为微丝聚合的抑制因子发挥功能。体外分析表明AIP1虽然与微丝结合但它本身对微丝聚合并没有影响,但它促进ADF引起的微丝解聚。在ADF存在的情况下,AIP1也与微丝正端结合,阻止肌动蛋白在正端的解离和添加。进一步的观察发现AIP1促进ADF引起的微丝切割和负端肌动蛋白亚基的脱离。体外重组实验表明AIP1作为其中一个重要的成分在ADF和profilin引起的微丝解聚过程中扮演重要角色。进一步的微丝单根动态行为观察发现,在可聚合肌动蛋白浓度很高的情况下,AIP1与ADF协作也能切割微丝并使微丝快速解聚消失,这一结果在原生质体内得到了进一步的验证,这为解释植物细胞内周质微丝持续被切割以及快速消失的现象提供了分子基础。以上数据表明AIP1通过与ADF协作促进微丝动态变化,进而调控细胞伸长和水稻生长发育。(本文来源于《从植物科学到农业发展——2012全国植物生物学大会论文集》期刊2012-10-11）
刘宗琳,骞爱荣,商澎[10]（2012）在《微管微丝交联因子1与细胞骨架》一文中研究指出微管微丝交联因子1(MACF1)是一种在哺乳细胞中普遍表达的细胞骨架蛋白,既能与微管交联,又能与微丝交联。MACF1在细胞极化、细胞迁移、信号转导以及维持组织的完整性中发挥着重要作用。本文基于MACF1能够与微丝微管交联的特点,就其通过细胞骨架间的相互作用对细胞生理功能的调节做一综述。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2012年02期）
细胞骨架微丝论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
重力是重要的地球环境因素之一,植物在长期的进化中形成了特有的重力感知和响应机制来调控植物发育和形态建成(如根的向地性生长和地上部的背地性直立生长),保障了植物可以有效地利用营养、水分和光能。已有较多的研究结果表明,微丝细胞骨架在植物响应重力变化中起到重要作用;但是由于以往研究中所用的微丝抑制剂、研究材料、植物器官的不同,至今仍没有明确的有关微丝细
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细胞骨架微丝论文参考文献
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[2]..中国科学院植物研究所乐捷研究组揭示植物微丝细胞骨架相关蛋白ARP3参与重力响应机制[J].蔬菜.2016
[3].邹俊杰,郑中玉,薛陕,李瀚海,王育人.微丝细胞骨架参与植物重力感知和响应的机制研究[C].2016年全国植物生物学大会摘要集.2016
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[9].黄善金.AIP1调控微丝细胞骨架动态和水稻生长发育[C].从植物科学到农业发展——2012全国植物生物学大会论文集.2012
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