导读:本文包含了水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:构建,原核表达,水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂
水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂论文文献综述
王森,何韶衡,魏继福[1]（2008）在《水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂表达载体的构建与表达》一文中研究指出目的:构建水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂(leech derived tryptase inhibitor,LDTI)原核表达载体,并在大肠埃希菌[BL21(DE3)]中高效表达重组蛋白。方法:以含有目的核酸序列的质粒为模板,通过PCR技术扩增出LDTI蛋白编码序列,构建含目的片段的T克隆载体以及原核表达载体pET28a-LDTI重组质粒亚克隆,进行限制性内切酶双酶切鉴定和核酸序列分析,然后将该质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导,以Tricine-SDS-PAGE和蛋白质印迹方法分析和鉴定重组蛋白的表达。结果:成功构建了水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂原核表达载体pET28a-LDTI,并获得相应的融合蛋白;本实验证明,LDTI在大肠埃希菌工程菌中高效表达,在温度为33℃,IPTG浓度为0.7 mmol,诱导时间为1 h,所表达的目的蛋白约占菌体总蛋白的15%左右。结论:成功构建了LDTI原核表达载体并使其在原核系统中高效表达,为进一步研究水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂的生化特性和生物学功能奠定了良好的基础。(本文来源于《江苏大学学报(医学版)》期刊2008年05期）
王森[2]（2008）在《水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂基因的克隆与表达》一文中研究指出目的构建水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂(LDTI)原核表达载体,将其转化入大肠杆菌[BL21(DE3)]中优化表达条件,以期获得重组类胰蛋白酶抑制剂的高效表达,并为进一步研究水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂的生化特性,生物学功能及其对于肥大细胞影响和对过敏性疾病的潜在治疗作用奠定基础。方法1.基因克隆①LDTI基因扩增:以含目的基因片段的质粒为模板,运用PCR技术扩增出LDTI基因,通过1.4%琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果。②T克隆载体的构建:将上步所得DNA片段与pMD18-T载体连接,构建含目的片段的T载体克隆,转化入大肠杆菌JM109,扩大培养提取质粒,通过菌落PCR,以及限制性内切酶双酶切和基因测序进行质粒鉴定。③pET28a-LDTI载体的构建:对上述T载体进行双酶切,取目的片段与经过双酶切的pET28a片段连接,构建原核表达载体pET28a-LDTI重组质粒亚克隆,将其转化入大肠杆菌JM109,扩大培养,提取质粒,进行菌落PCR、限制性内切酶双酶切和基因测序鉴定。2.蛋白表达①pET28a-LDTI表达载体转化BL21(DE3)。②IPTG诱导pET28a-LDTI基因表达目的蛋白。经Tricine-SDS-PAGE电泳及抗6×His抗体鉴定融合蛋白。优化诱导表达的时间和IPTG的诱导浓度,诱导重组蛋白快速大量表达。结果1.琼脂糖凝胶电泳图像上在约140bp处可见一条亮带,表明成功扩增了目的基因片段。2.菌落PCR,双酶切以及基因测序结果显示利用基因克隆技术成功构建了T克隆载体。3.菌落PCR,双酶切以及基因测序结果显示利用基因克隆技术成功构建了pET28a-LDTI表达载体。4.pET28a-LDTI重组子可被IPTG诱导表达,并且可以高效表达LDTI,在Tricine-SDS-PAGE电泳图像上约6.8KD处表现为一条粗蛋白带。符合Western-blot鉴定结果。在温度为33℃,IPTG浓度为0.7mM,诱导1h后,所表达的目的蛋白量最大,约占菌体总蛋白的15%左右。结论成功构建LDTI原核表达载体并使其在原核系统中高效表达,为以后进一步研究LDTI蛋白的功能奠定了基础。(本文来源于《汕头大学》期刊2008-05-01）
水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂(LDTI)原核表达载体,将其转化入大肠杆菌[BL21(DE3)]中优化表达条件,以期获得重组类胰蛋白酶抑制剂的高效表达,并为进一步研究水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂的生化特性,生物学功能及其对于肥大细胞影响和对过敏性疾病的潜在治疗作用奠定基础。方法1.基因克隆①LDTI基因扩增:以含目的基因片段的质粒为模板,运用PCR技术扩增出LDTI基因,通过1.4%琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果。②T克隆载体的构建:将上步所得DNA片段与pMD18-T载体连接,构建含目的片段的T载体克隆,转化入大肠杆菌JM109,扩大培养提取质粒,通过菌落PCR,以及限制性内切酶双酶切和基因测序进行质粒鉴定。③pET28a-LDTI载体的构建:对上述T载体进行双酶切,取目的片段与经过双酶切的pET28a片段连接,构建原核表达载体pET28a-LDTI重组质粒亚克隆,将其转化入大肠杆菌JM109,扩大培养,提取质粒,进行菌落PCR、限制性内切酶双酶切和基因测序鉴定。2.蛋白表达①pET28a-LDTI表达载体转化BL21(DE3)。②IPTG诱导pET28a-LDTI基因表达目的蛋白。经Tricine-SDS-PAGE电泳及抗6×His抗体鉴定融合蛋白。优化诱导表达的时间和IPTG的诱导浓度,诱导重组蛋白快速大量表达。结果1.琼脂糖凝胶电泳图像上在约140bp处可见一条亮带,表明成功扩增了目的基因片段。2.菌落PCR,双酶切以及基因测序结果显示利用基因克隆技术成功构建了T克隆载体。3.菌落PCR,双酶切以及基因测序结果显示利用基因克隆技术成功构建了pET28a-LDTI表达载体。4.pET28a-LDTI重组子可被IPTG诱导表达,并且可以高效表达LDTI,在Tricine-SDS-PAGE电泳图像上约6.8KD处表现为一条粗蛋白带。符合Western-blot鉴定结果。在温度为33℃,IPTG浓度为0.7mM,诱导1h后,所表达的目的蛋白量最大,约占菌体总蛋白的15%左右。结论成功构建LDTI原核表达载体并使其在原核系统中高效表达,为以后进一步研究LDTI蛋白的功能奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂论文参考文献
[1].王森,何韶衡,魏继福.水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂表达载体的构建与表达[J].江苏大学学报(医学版).2008
[2].王森.水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂基因的克隆与表达[D].汕头大学.2008
标签：构建; 原核表达; 水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂;