导读:本文包含了希佩尔林道基因论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:希佩尔林道基因,输卵管,输卵管妊娠,子宫内膜
希佩尔林道基因论文文献综述
徐楗荧[1]（2011）在《希佩尔林道（VHL）基因在人妊娠输卵管及子宫内膜恶变组织中表达的研究》一文中研究指出背景希佩尔林道(Von Hippel-Lindau,VHL)基因是应用位置克隆技术从VHL病家族成员中克隆的一种肿瘤抑制基因,由于VHL基因突变引起的VHL病是一种家族性常染色体显性遗传性肿瘤综合征。VHL基因通过其编码的蛋白质(VHL protein, pVHL)发挥多种生理功能,参与调节细胞周期、细胞分化及凋亡；通过控制血管形成调节胎盘血管发生,并且参与胚胎发育。VHL基因在人体的器官组织中广泛表达,介导多个器官系统的生理功能,其突变及表达异常引起中枢神经系统、肾脏、肾上腺、胰腺及附睾等器官系统的病变。生殖细胞VHL基因突变是VHL病的发病基础。体细胞VHL基因突变及表达异常参与多种非遗传性肿瘤的发生,与乳腺癌、卵巢肿瘤和宫颈癌等女性常见恶性肿瘤的发生、发展有密切联系。子宫内膜癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一,输卵管妊娠是类似肿瘤细胞的滋养细胞植入输卵管的病理性生殖事件,国内外尚未见VHL基因突变及表达异常与子宫内膜癌、输卵管妊娠关系的研究报道。深入研究VHL基因在子宫内膜癌及妊娠输卵管组织中的表达及突变情况,分析其异常表达及突变与子宫内膜癌和输卵管妊娠两种女性生殖系统常见疾病的关系,从基因水平上探讨疾病发生的可能机制,为疾病的临床诊断提供理论依据,并且开辟一条基因治疗疾病的新途径。目的1.以育龄期妇女输卵管和发生输卵管妊娠的输卵管组织标本为研究对象,检测VHL基因在正常输卵管和妊娠输卵管组织中的表达及变化,探讨VHL基因表达变化与输卵管妊娠发生的关系。2.应用自动化测序仪,检测妊娠输卵管组织VHL基因3个外显子PCR扩增产物纯化后的DNA序列,与正常输卵管组织相对应的基因序列比较,从基因水平上探讨输卵管妊娠发生的可能机制。3.以人正常子宫内膜、子宫内膜增生和子宫内膜腺癌组织标本为研究对象,检测VHL基因在正常、增生和腺癌子宫内膜组织中的表达,分析VHL基因表达的变化趋势,探讨VHL基因表达变化与子宫内膜恶变的关系。材料与方法1. VHL mRNA和蛋白在人妊娠输卵管组织中的表达20例未破裂型壶腹部妊娠输卵管组织标本,均包括种植部位(距离妊娠囊5mm以内的部位)和非种植部位(距离妊娠囊10mm以外的部位),分为种植部位组(n=20)和非种植部位组(n=20)。20例分泌期壶腹部输卵管组织标本,取自行输卵管结扎术或者因良性子宫疾病行全子宫加附件切除术的患者,既往月经规律、有正常生育史,作为正常对照组(n=20)。应用免疫组织化学法检测正常输卵管和妊娠输卵管组织石蜡标本中VHL蛋白的表达,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction, Real-time RT-PCR)检测正常输卵管和妊娠输卵管新鲜组织标本中VHL mRNA水平,应用蛋白免疫印迹技术(Western blotting)检测VHL蛋白的表达。2.妊娠输卵管组织中VHL基因DNA序列分析20例妊娠输卵管组织标本取自未破裂型壶腹部妊娠行输卵管切除的患者,既往月经规律,无宫腔内节育器及辅助生育技术干预史,自然受孕后盆腔超声提示附件区包块,无宫内妊娠迹象,孕龄为6-9周,手术前未接受甲氨蝶呤治疗,作为输卵管妊娠组(n=20)。10例分泌期壶腹部输卵管组织标本取自行输卵管结扎术或者因良性子宫疾病行全子宫加附件切除术的患者,既往月经规律、有正常生育史,术前半年未接受外源性激素治疗及化疗,作为正常对照组(n=10)。妊娠输卵管组织VHL基因外显子1、2、3的PCR扩增产物纯化后,应用自动化测序仪进行DNA序列测定,与正常对照组相对应的基因序列进行比较。3. VHL mRNA和蛋白在人正常子宫内膜和子宫内膜增生组织中的表达60例正常子宫内膜组织石蜡标本,按组织学分期分为增生期(n=30)和分泌期(n=30)；90例子宫内膜增生组织石蜡标本,按增生程度分为简单型增生(n=30)、复杂型增生(n=30)和不典型增生(n=30)。子宫内膜新鲜组织标本包括正常子宫内膜(n-40),子宫内膜简单型增生(n=26)、复杂型增生(n=23)和不典型增生(n=20)。标本取自因良性子宫疾病行诊断性刮宫术或者全子宫切除术的患者。应用免疫组织化学法检测子宫内膜石蜡标本中VHL蛋白的表达,应用Real-time RT-PCR和Western blotting技术检测子宫内膜新鲜组织标本中VHL mRNA和蛋白的表达。4. VHL mRNA和蛋白在人子宫内膜腺癌组织中的表达子宫内膜腺癌组织标本包括石蜡标本(n=30)和新鲜标本(n=17),取自因子宫内膜腺癌行全子宫切除术的患者。应用免疫组织化学法检测子宫内膜腺癌组织石蜡标本中VHL蛋白的表达,应用Real-time RT-PCR和Western blotting技术检测子宫内膜腺癌新鲜组织标本中VHL mRNA和蛋白的表达。5.统计学分析计量资料数据以均数±标准差((?)±s)表示,组间比较应用单因素方差分析,应用SPSS13.0统计软件对数据进行分析。免疫组化数据以阳性单位(positive unit, PU)值表示,Real-time RT-PCR数据应用比较Ct值法(2-△△Ct法)进行相对定量分析,Western blotting数据应用目的蛋白条带与内参蛋白条带灰度比值表示目的蛋白相对量,DNA序列应用Bioedit软件进行分析。检验标准取双侧[=0.05,P<0.05认为差异有统计学意义结果1. VHL mRNA和蛋白在人妊娠输卵管组织中的表达免疫组织化学法检测VHL蛋白表达于人输卵管粘膜上皮纤毛细胞和分泌细胞的胞浆,其中纤毛细胞的纤毛亦有表达,间质细胞表达微弱。VHL蛋白在妊娠输卵管种植部位组表达水平强(1.53±0.98),在妊娠输卵管非种植部位组(1.29±0.79)和正常对照组(1.21±0.67)表达水平弱。种植部位组与非种植部位组及正常对照组VHL蛋白表达水平比较均有显着性差异(P<0.01),非种植部位组与正常对照组VHL蛋白表达水平比较无统计学差异(P>0.05)。VHL mRNA表达水平在妊娠输卵管种植部位组(2.79+0.74)高于非种植部位组(2.11+0.52)和正常对照组(2.08+0.69)(P<0.01),妊娠输卵管种植部位组VHL蛋白表达高于非种植部位组和正常对照组(P<0.05),非种植部位组与对照组VHL mRNA和蛋白表达水平比较无统计学差异(P>0.05)。2.妊娠输卵管组织中VHL基因DNA序列分析组织标本提取DNA后PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳均可见清晰的特异性扩增条带,VHL基因外显子1、2、3扩增片段长度分别为409bp、208bp、271bp。PCR扩增产物经纯化后,应用自动化测序仪进行DNA序列测定。测序结果显示,输卵管妊娠组VHL基因外显子1、2、3扩增片段基因序列与正常对照组相对应的基因序列相同,未发现突变。3. VHL mRNA和蛋白在人正常子宫内膜和子宫内膜增生组织中的表达免疫组织化学法检测VHL蛋白表达于人子宫内膜腺上皮细胞的胞浆和间质,表层子宫内膜腺上皮细胞表达水平比基底层细胞强。VHL蛋白在增生期和简单型增生子宫内膜中表达水平强,在分泌期、复杂型增生及不典型增生子宫内膜中表达水平弱。VHL蛋白表达水平在增生期(5.66+1.77)与分泌期子宫内膜(4.86±1.63)比较有显着性差异(P<0.01),与简单型增生子宫内膜(5.56+1.76)比较无统计学差异(P0.05)。VHL蛋白表达水平在简单型增生、复杂型增生(4.74+1.82)及不典型增生子宫内膜(2.61±1.18)逐渐减弱,并且有显着性差异(P<0.01)。VHL mRNA在正常(2.65+0.56)和简单型增生(2.43+0.37)子宫内膜中呈现高表达,在复杂型增生(1.80+0.26)及不典型增生(1.21±0.12)子宫内膜中表达水平降低。VHL mRNA在正常子宫内膜和简单型增生子宫内膜之间表达水平比较无统计学差异(P>0.05),在子宫内膜增生组织中从简单型增生、复杂型增生到不典型增生表达水平依次降低(P<0.01)。VHL蛋白在正常、简单型增生及复杂型增生子宫内膜中呈现高表达,显着高于不典型增生(P<0.01)。4. VHL mRNA和蛋白在人子宫内膜腺癌组织中的表达免疫组织化学法检测子宫内膜腺癌腺上皮细胞中仅有VHL蛋白微弱的表达(2.53+1.27),VHL蛋白表达水平显着低于增生期、分泌期、简单型增生及复杂型增生子宫内膜(P<0.01),与不典型增生子宫内膜表达水平比较无统计学差异(P>0.05)。VHL mRNA和蛋白在子宫内膜腺癌组织中的表达水平略低于不典型增生子宫内膜(P>0.05),显着低于正常子宫内膜、简单型增生子宫内膜及复杂型增生子宫内膜(P<0.01)。结论1. VHL mRNA和蛋白在人正常输卵管和发生输卵管妊娠的输卵管组织中均有表达,在妊娠输卵管种植部位表达水平高于非种植部位及正常输卵管。VHL基因在妊娠输卵管种植部位高表达,调控输卵管局部血管内皮生长因子及纤维结合蛋白的表达,有利于胚胎发育、粘附及植入,发生输卵管妊娠。2.正常输卵管和妊娠输卵管组织VHL基因外显子1、2、3,PCR扩增后均能获得与设计引物长度相同的特异性扩增条带。妊娠输卵管组织VHL基因3个外显子扩增片段基因序列与正常输卵管相对应的基因序列相同,未发现突变。3.人正常子宫内膜和子宫内膜增生组织中均存在VHL mRNA和蛋白,VHL基因在正常子宫内膜中表达水平高,增生期高于分泌期；VHL基因在子宫内膜增生组织中的表达趋势为简单型增生、复杂型增生到不典型增生依次降低。VHL基因能够降调节血管内皮生长因子,增生期子宫内膜及简单型增生子宫内膜中VHL基因表达水平高,提示高水平的VHL基因降低子宫内膜中血管内皮生长因子的表达,抑制血管过度增生。4. VHL mRNA和蛋白在人子宫内膜腺癌组织中呈现低水平表达,并且与不典型增生子宫内膜表达水平无差异,提示VHL基因异常低表达参与从子宫内膜不典型增生进展到子宫内膜腺癌的恶变过程,VHL基因表达水平可以作为子宫内膜腺癌的早期预测指标。(本文来源于《暨南大学》期刊2011-04-20）
路妍妍[2]（2009）在《希佩尔林道（VHL）基因在人子宫内膜和输卵管的表达及甲基化初步研究》一文中研究指出目的1.以育龄妇女子宫内膜组织标本为研究对象,探讨希佩尔林道(vonHippel-Lindau, VHL)基因和蛋白在人类子宫内膜的表达及其变化,分析VHL基因在人类胚胎着床及胚胎植入过程中的可能作用。2.检测育龄妇女子宫内膜组织中乙酰基转移酶P300/CBP(P300 and cAMP responsive element-binding protein binding protein)和VHL基因甲基化的变化,探讨表观遗传学改变在子宫内膜生理功能中的可能作用。3.以育龄妇女子宫内膜组织标本为研究对象,检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1α, HIF-1α)蛋白和基因的表达及变化,分析人类子宫内膜中HIF-1α表达变化的调控机制。4.观察育龄妇女输卵管组织VHL蛋白和基因的表达及其变化,阐明人类输卵管中是否存在VHL基因及其表达状况,分析VHL蛋白在人类输卵管生理功能中的可能作用。材料与方法1.VHL蛋白与VHL mRNA在人子宫内膜组织中的表达30例既往月经规律、有正常生育史的育龄妇女子宫内膜标本,按月经周期分为增生早期组7例,增生中晚期组8例,分泌早期组6例,分泌中晚期组9例。应用激光共聚焦显微镜法(laser cofocal scanning microscopy, LCSM)观察VHL蛋白在子宫内膜组织的表达(n=3)。应用免疫组化法检测人子宫内膜腺上皮细胞中VHL蛋白表达的平均灰度值(n=30)。采用逆转录聚合酶链反应法(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blotting)检测VHL在人子宫内膜组织中的蛋白和基因表达及变化,与内参照蛋白和内参照基因光密度比值表示VHL蛋白和基因的相对量(n=15)。2.P300/CBP蛋白和VHL基因甲基化在人子宫内膜组织中的表达15例既往月经规律、有正常生育史的育龄妇女子宫内膜标本,按月经周期分为增生期组7例,分泌期组8例。采用Western blotting法检测P300/CBP在人子宫内膜组织中的蛋白表达和变化。应用甲基化特异性聚合酶链反应法检测VHL基因在子宫内膜组织中的甲基化状态。3.VHL、P300/CBP与HIF-1α蛋白在人子宫内膜组织中表达的相关性研究30例既往月经规律、有正常生育史的育龄妇女子宫内膜标本,按月经周期分为增生早期组7例,增生中晚期组8例,分泌早期组6例,分泌中晚期组9例,应用免疫组织化学法检测人子宫内膜组织中的蛋白表达变化。采用RT-PCR法和Western blotting法检测人子宫内膜组织中的HIF-1α蛋白和基因的表达及其变化,应用Pearson相关分析进行统计分析VHL、P300/CBP蛋白与HIF-1α在子宫内膜组织中表达的相关性(n=15)。4.VHL蛋白与VHL mRNA在人输卵管组织中的表达27例既往月经规律、有正常生育史的育龄妇女输卵管标本,按月经周期分为增生早期组15例,增生中晚期组8例,分泌早期组4例,分泌中晚期组9例。采用LCSM法观察VHL蛋白的表达部位,RT-PCR法和Western blotting法检测人输卵管组织中VHLmRNA和蛋白的表达(n=3)。免疫组化法半定量分析VHL蛋白在人输卵管组织中的平均灰度值,单位以PU值表示(n=27)。5.统计学分析免疫组化结果以阳性单位PU值表示,RT-PCR和蛋白印迹结果分别以目的基因与内参基因、目的蛋白与内参蛋白的光密度比值表示。实验数据以Mean±SD表示,采用统计软件SPSS11.5进行分析。结果1. VHL mRNA与VHL蛋白在人子宫内膜组织中的表达RT-PCR和Western blotting结果显示人子宫内膜组织中存在VHL mRNA及VHL蛋白的表达。VHL蛋白表达在子宫内膜上皮(包括腺上皮与腔上皮)细胞的胞浆中,呈弥散性分布。内膜间质细胞也可见阳性表达。随月经周期的变化,在增生早期子宫内膜腺上皮细胞中VHL蛋白表达的PU值最高(3.99±1.68),增生中晚期(3.68±1.31),分泌早期(2.29±0.73),分泌中晚期最低(2.02±0.59),增生期表达高于分泌期,差异有统计学意义(P<0.05)。人子宫内膜组织中VHL mRNA表达也随月经周期发生变化,在增生期增高(1.26±0.46),分泌期降低(0.69±0.28),差异有统计学意义(P<0.05)。2.P300/CBP蛋白和VHL基因甲基化在人子宫内膜组织中的表达人子宫内膜组织中P300/CBP蛋白表达随月经周期变化,增生期增高(0.72±0.27),分泌期降低(0.24±0.19),差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜组织中VHL基因呈非甲基化状态,未检测出VHL基因甲基化变化。3. VHL、P300/CBP与HIF-1α蛋白在人子宫内膜组织中表达的相关性研究HIF-1α蛋白表达于子宫内膜上皮(包括腺上皮与腔上皮)细胞的胞浆中,内膜间质中也可见阳性表达。随月经周期的变化,上皮细胞中HIF-1α蛋白表达发生变化：HIF-1α表达增生中晚期最高(3.21±0.86),增生早期(2.81±1.01),分泌早期降低(1.83±0.73),分泌中晚期最低(1.63±0.53),增生期表达高于分泌期,差异有统计学意义(P<0.05)。人子宫内膜组织中HIF-1αmRNA表达也随月经周期发生变化,增生期增高(0.86±0.43),分泌期降低(0.32±0.23),差异有统计学意义(P＜0.05)。VHL蛋白与HIF-1α表达呈正相关(P<0.05)。P300/CBP与HIF-1α表达呈正相关(P<0.05)。4. VHL mRNA与VHL蛋白在人输卵管组织中的表达RT-PCR和Western blotting结果显示人输卵管组织中存在VHL mRNA及VHL蛋白表达。VHL蛋白表达于输卵管上皮细胞和间质细胞的胞浆中,间质细胞表达弱于上皮细胞。在月经周期的增生早期,输卵管峡部、壶腹部、伞部VHL蛋白表达的PU值分别是(5.21±4.17)、(4.27±2.26)、(3.58±1.31),增生中晚期分别是(2.99±1.00)、(2.98±0.83)、(4.26±1.03),分泌早期分别是(3.69±1.80)、(3.87±2.78)、(3.33±1.22),分泌中晚期分别是(3.44±1.66)、(3.84±2.52)、(2.88±1.26)。在月经周期的增生早期、增生中晚期、分泌早期和分泌中晚期,VHL蛋白在输卵管的峡部、壶腹部、伞部的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。在月经周期同一时期,输卵管峡部、壶腹部、伞部的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。结论1.人子宫内膜组织中存在VHL mRNA及VHL蛋白表达,且具有周期性变化,推测VHL基因可能参与调节增生期子宫内膜的血管新生平衡。2.子宫内膜的乙酰基转移酶P300/CBP在月经周期中有周期性变化,可能是雌激素诱导正常子宫内膜效应的基础。子宫内膜VHL基因去甲基化状态,VHL基因转录表达,从而参与子宫内膜正常生理活动的调节。3.人子宫内膜组织中存在HIF-1αmRNA及HIF-1α蛋白表达,且具有周期性变化,HIF-1α可能诱导其下游基因表达以维持子宫内膜基本的生理活动。P300/CBP和VHL蛋白调节子宫内膜中HIF-1α的表达。4.人输卵管组织中存在VHL蛋白及VHL mRNA表达。VHL蛋白在输卵管组织的表达不具有周期性变化,VHL蛋白稳定表达可能参与输卵管上皮细胞之间的相互转化。(本文来源于《暨南大学》期刊2009-05-01）
龚侃,张宁,那熙,吴关,杨新宇[3]（2005）在《散发性肾透明细胞癌组织中希佩尔林道基因突变与缺氧诱导因子1α、2α的测定》一文中研究指出目的 探讨散发性肾透明细胞癌 (CCRCC)组织中希佩尔 林道 (VHL)基因突变、缺氧诱导因子 1α(HIF- 1α)和HIF- 2α的表达及其关系,对肿瘤分期、分级的影响。方法 应用聚合酶链反应(PCR)、PCR产物直接测序和免疫组化等方法,分析 77例散发性CCRCC患者癌组织中VHL基因突变、HIF- 1α和HIF- 2α的表达。其中T1 期 55例(71% ),T2 期 7例 (9% ),T3 期 14例 (18% ),T4 期1例(1% );病理分级,G1 15例(19% ),G2 56例(73% ),G3 6例(8% )。结果 在正常肾组织中无VHL基因突变。散发性CCRCC中VHL基因突变率为 52% ( 40 /77 ),HIF 2α阳性率 81% ( 62 /77 ),高于HIF 1α阳性率 66% (51 /77) (χ2 =23 310, P<0 01);VHL基因突变者中HIF 1α和HIF 2α的阳性率(98%和 93% )均高于无突变者的阳性率 ( 32% 和 68%,χ2 值分别为 36 .386, 7 617,P均 <0 01 );HIF 1α和HIF 2α的表达均与VHL基因突变相关(偏回归系数分别为 4 481, 2. 027,P均 <0 01);未发现VHL基因突变、HIF 1α和HIF 2α表达与肿瘤病理分级、分期有关 (P均 >0. 05 )。结论 在散发性CCRCC患者中VHL基因突变较广泛,在突变组织中HIF -1α和 2α高表达,但VHL基因突变、HIF- 1α和 2α的表达与患者病理分级、分期不相关。(本文来源于《中华外科杂志》期刊2005年06期）
希佩尔林道基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的1.以育龄妇女子宫内膜组织标本为研究对象,探讨希佩尔林道(vonHippel-Lindau, VHL)基因和蛋白在人类子宫内膜的表达及其变化,分析VHL基因在人类胚胎着床及胚胎植入过程中的可能作用。2.检测育龄妇女子宫内膜组织中乙酰基转移酶P300/CBP(P300 and cAMP responsive element-binding protein binding protein)和VHL基因甲基化的变化,探讨表观遗传学改变在子宫内膜生理功能中的可能作用。3.以育龄妇女子宫内膜组织标本为研究对象,检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1α, HIF-1α)蛋白和基因的表达及变化,分析人类子宫内膜中HIF-1α表达变化的调控机制。4.观察育龄妇女输卵管组织VHL蛋白和基因的表达及其变化,阐明人类输卵管中是否存在VHL基因及其表达状况,分析VHL蛋白在人类输卵管生理功能中的可能作用。材料与方法1.VHL蛋白与VHL mRNA在人子宫内膜组织中的表达30例既往月经规律、有正常生育史的育龄妇女子宫内膜标本,按月经周期分为增生早期组7例,增生中晚期组8例,分泌早期组6例,分泌中晚期组9例。应用激光共聚焦显微镜法(laser cofocal scanning microscopy, LCSM)观察VHL蛋白在子宫内膜组织的表达(n=3)。应用免疫组化法检测人子宫内膜腺上皮细胞中VHL蛋白表达的平均灰度值(n=30)。采用逆转录聚合酶链反应法(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blotting)检测VHL在人子宫内膜组织中的蛋白和基因表达及变化,与内参照蛋白和内参照基因光密度比值表示VHL蛋白和基因的相对量(n=15)。2.P300/CBP蛋白和VHL基因甲基化在人子宫内膜组织中的表达15例既往月经规律、有正常生育史的育龄妇女子宫内膜标本,按月经周期分为增生期组7例,分泌期组8例。采用Western blotting法检测P300/CBP在人子宫内膜组织中的蛋白表达和变化。应用甲基化特异性聚合酶链反应法检测VHL基因在子宫内膜组织中的甲基化状态。3.VHL、P300/CBP与HIF-1α蛋白在人子宫内膜组织中表达的相关性研究30例既往月经规律、有正常生育史的育龄妇女子宫内膜标本,按月经周期分为增生早期组7例,增生中晚期组8例,分泌早期组6例,分泌中晚期组9例,应用免疫组织化学法检测人子宫内膜组织中的蛋白表达变化。采用RT-PCR法和Western blotting法检测人子宫内膜组织中的HIF-1α蛋白和基因的表达及其变化,应用Pearson相关分析进行统计分析VHL、P300/CBP蛋白与HIF-1α在子宫内膜组织中表达的相关性(n=15)。4.VHL蛋白与VHL mRNA在人输卵管组织中的表达27例既往月经规律、有正常生育史的育龄妇女输卵管标本,按月经周期分为增生早期组15例,增生中晚期组8例,分泌早期组4例,分泌中晚期组9例。采用LCSM法观察VHL蛋白的表达部位,RT-PCR法和Western blotting法检测人输卵管组织中VHLmRNA和蛋白的表达(n=3)。免疫组化法半定量分析VHL蛋白在人输卵管组织中的平均灰度值,单位以PU值表示(n=27)。5.统计学分析免疫组化结果以阳性单位PU值表示,RT-PCR和蛋白印迹结果分别以目的基因与内参基因、目的蛋白与内参蛋白的光密度比值表示。实验数据以Mean±SD表示,采用统计软件SPSS11.5进行分析。结果1. VHL mRNA与VHL蛋白在人子宫内膜组织中的表达RT-PCR和Western blotting结果显示人子宫内膜组织中存在VHL mRNA及VHL蛋白的表达。VHL蛋白表达在子宫内膜上皮(包括腺上皮与腔上皮)细胞的胞浆中,呈弥散性分布。内膜间质细胞也可见阳性表达。随月经周期的变化,在增生早期子宫内膜腺上皮细胞中VHL蛋白表达的PU值最高(3.99±1.68),增生中晚期(3.68±1.31),分泌早期(2.29±0.73),分泌中晚期最低(2.02±0.59),增生期表达高于分泌期,差异有统计学意义(P<0.05)。人子宫内膜组织中VHL mRNA表达也随月经周期发生变化,在增生期增高(1.26±0.46),分泌期降低(0.69±0.28),差异有统计学意义(P<0.05)。2.P300/CBP蛋白和VHL基因甲基化在人子宫内膜组织中的表达人子宫内膜组织中P300/CBP蛋白表达随月经周期变化,增生期增高(0.72±0.27),分泌期降低(0.24±0.19),差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜组织中VHL基因呈非甲基化状态,未检测出VHL基因甲基化变化。3. VHL、P300/CBP与HIF-1α蛋白在人子宫内膜组织中表达的相关性研究HIF-1α蛋白表达于子宫内膜上皮(包括腺上皮与腔上皮)细胞的胞浆中,内膜间质中也可见阳性表达。随月经周期的变化,上皮细胞中HIF-1α蛋白表达发生变化：HIF-1α表达增生中晚期最高(3.21±0.86),增生早期(2.81±1.01),分泌早期降低(1.83±0.73),分泌中晚期最低(1.63±0.53),增生期表达高于分泌期,差异有统计学意义(P<0.05)。人子宫内膜组织中HIF-1αmRNA表达也随月经周期发生变化,增生期增高(0.86±0.43),分泌期降低(0.32±0.23),差异有统计学意义(P＜0.05)。VHL蛋白与HIF-1α表达呈正相关(P<0.05)。P300/CBP与HIF-1α表达呈正相关(P<0.05)。4. VHL mRNA与VHL蛋白在人输卵管组织中的表达RT-PCR和Western blotting结果显示人输卵管组织中存在VHL mRNA及VHL蛋白表达。VHL蛋白表达于输卵管上皮细胞和间质细胞的胞浆中,间质细胞表达弱于上皮细胞。在月经周期的增生早期,输卵管峡部、壶腹部、伞部VHL蛋白表达的PU值分别是(5.21±4.17)、(4.27±2.26)、(3.58±1.31),增生中晚期分别是(2.99±1.00)、(2.98±0.83)、(4.26±1.03),分泌早期分别是(3.69±1.80)、(3.87±2.78)、(3.33±1.22),分泌中晚期分别是(3.44±1.66)、(3.84±2.52)、(2.88±1.26)。在月经周期的增生早期、增生中晚期、分泌早期和分泌中晚期,VHL蛋白在输卵管的峡部、壶腹部、伞部的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。在月经周期同一时期,输卵管峡部、壶腹部、伞部的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。结论1.人子宫内膜组织中存在VHL mRNA及VHL蛋白表达,且具有周期性变化,推测VHL基因可能参与调节增生期子宫内膜的血管新生平衡。2.子宫内膜的乙酰基转移酶P300/CBP在月经周期中有周期性变化,可能是雌激素诱导正常子宫内膜效应的基础。子宫内膜VHL基因去甲基化状态,VHL基因转录表达,从而参与子宫内膜正常生理活动的调节。3.人子宫内膜组织中存在HIF-1αmRNA及HIF-1α蛋白表达,且具有周期性变化,HIF-1α可能诱导其下游基因表达以维持子宫内膜基本的生理活动。P300/CBP和VHL蛋白调节子宫内膜中HIF-1α的表达。4.人输卵管组织中存在VHL蛋白及VHL mRNA表达。VHL蛋白在输卵管组织的表达不具有周期性变化,VHL蛋白稳定表达可能参与输卵管上皮细胞之间的相互转化。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
希佩尔林道基因论文参考文献
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[2].路妍妍.希佩尔林道（VHL）基因在人子宫内膜和输卵管的表达及甲基化初步研究[D].暨南大学.2009
[3].龚侃,张宁,那熙,吴关,杨新宇.散发性肾透明细胞癌组织中希佩尔林道基因突变与缺氧诱导因子1α、2α的测定[J].中华外科杂志.2005