导读:本文包含了告达庭论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:告达庭,细胞增殖,细胞周期,细胞凋亡
告达庭论文文献综述
金湛,甘椿椿,张欣颖,郑亿,余文富[1]（2018）在《告达庭衍生物抑制人乳腺癌细胞增殖及其作用机制研究》一文中研究指出目的:研究告达庭-3-O-β-D-加拿大麻糖苷(Ca-G)对人乳腺癌细胞的作用及其作用机制。方法:采用MTT法研究Ca-G对人乳腺癌细胞株细胞增殖的影响;通过流式细胞术研究Ca-G对人乳腺癌细胞株细胞周期和细胞凋亡的作用;采用western blotting研究Ca-G对细胞周期和细胞凋亡相关蛋白表达水平的影响。结果:Ca-G能够明显抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7的增殖,并阻滞细胞周期G1期,其机制可能是通过调控G1期关键蛋白cyclin D1发挥作用; Ca-G能通过caspase3/7途径诱导乳腺癌细胞株产生细胞凋亡。结论:Ca-G可有效抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7的增殖。这为告达庭及其衍生物抗肿瘤作用的进一步研究提供了一定的实验基础,也为综合开发C21甾体苷类化合物的临床应用提供一种思路。(本文来源于《中国民族民间医药》期刊2018年23期）
王新志[2]（2018）在《告达庭诱导凋亡和抗血管生成抑制人脑胶质瘤生长机制研究》一文中研究指出胶质瘤源于神经胶质细胞,是中枢神经系统发病率最高的原发性肿瘤。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)将胶质瘤分为WHO Ⅰ～Ⅳ级,以判断肿瘤恶性程度;将Ⅰ级、Ⅱ级胶质瘤划为低级别胶质瘤,Ⅲ级、Ⅳ级胶质瘤划为高级别胶质瘤。流行病学大宗数据显示,胶质瘤约占所有类型中枢神经系统肿瘤的四分之一,占恶性肿瘤的四分之叁。恶性中枢神经系统原发肿瘤中,胶质母细胞瘤(Glioblastoma,GBM,WHO Ⅳ级)发病率最高,约为3/100,000,占比近1/2;弥漫性星形细胞瘤发病率居其次,约0.5/100,000。高级别胶质瘤是高度恶性、高度侵袭性的肿瘤。目前胶质瘤治疗方法主要是最大范围手术切除,体外放射治疗及化疗,但临床治疗效果欠佳,患者预后差,平均生存率只有12-15个月。成人高级别胶质瘤的1年生存率约为30%,5年生存率仅为13%;中位生存时间,间变性胶质瘤约为2至3年,胶质母细胞瘤仅为1年左右。辅助化疗在高级别胶质瘤治疗中的作用已经得到公认,能明显延长患者的生存期;并且,随着研究的进展,辅助化疗在低级别胶质瘤治疗中的作用,也逐渐得到重视和肯定。化疗是胶质瘤综合治疗中必要的的治疗方法。告达庭是一种从白首乌根中分离得到的C-21类固醇,具有抗癌、免疫调节、肝脏保护、抗衰老、抗氧化,抗病毒和神经保护等多种药理功能。告达庭的化学结构已经明晰。目前已经发现,告达庭可以诱导多种类型的肿瘤细胞系细胞凋亡。告达庭可以诱导HepG2人肝癌细胞凋亡,并参与B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)家族的变化以及细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的激活。细胞凋亡失调是许多疾病的一种发病机制。在急慢性退行性疾病、免疫缺陷等疾病中发现加速的细胞凋亡,在肿瘤和自身免疫性疾病中存在延迟或受抑制的凋亡。不同类型的肿瘤细胞有共同的细胞特征,包括生长失控、血管生成和凋亡逃避。细胞凋亡主要功能之一就是预防肿瘤发生和诱导肿瘤消亡。通常,癌症中凋亡被抑制,而且,有广泛的抑制凋亡的途径、手段。凋亡控制的丧失使得癌细胞生存时间得以延长,并给癌细胞更多的时间积累突变以增加肿瘤进展过程中的侵袭性,并刺激血管生成,调节细胞增殖和干扰分化。癌细胞逃避凋亡有许多种方式:caspase功能被抑制或细胞凋亡触发被阻断,抗凋亡BCL-2的上调和BAX和/或BAK的丧失是主要的逃避方法。BCL-2虽然不是一个致癌基因,但其突变增强了肿瘤发病。半数以上的癌症存在BCL-2蛋白的过表达。因此,寻找能够抑制肿瘤逃避凋亡和诱导肿瘤细胞凋亡的药物具有重大意义。我们前期研究发现了告达庭在48h内通过诱导细胞周期停滞而抑制人胶质瘤细胞生长。然而,告达庭诱导凋亡的潜在机制仍不清楚,特别是关于抑制人脑肿瘤细胞生长的分子机制。血管生成,由内皮细胞增殖和迁移引发的新血管的形成,在肿瘤生长过程中不断地为肿瘤提供必需的营养物质,并帮助去除代谢废物。若没有血管床的扩张,肿瘤生长会受到限制、局限在一定大小之内。因此,血管生成是肿瘤生长的关键步骤,抗血管生成已成为治疗癌症的有效方法。血管生成受多种生长因子和细胞因子调节。在这些因素中,由大多数癌细胞和内皮细胞产生的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是参与肿瘤生长的最有效的血管生成因子之一。VEGF通过结合其在内皮细胞上表达的受体酪氨酸激酶来刺激内皮细胞增殖,迁移和管形成。在这些受体酪氨酸激酶中,VEGF受体2(VEGFR2)介导主要功能。VEGFR2的活化导致各种下游信号转导蛋白,包括局部粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK),磷酸肌醇 3-激酶(Phosphotylinosital 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶 B(protein kinase B,PKB/AKT)的激活。抑制 VEGF 活性或/和阻断VEGFR2的功能都被认为是肿瘤治疗中抗血管生成干预的潜在策略。AKT在从生长因子受体和胞内通路信号转导过程中起作用。AKT活化不仅能促进内皮细胞存活,还能调节血管收缩反应。PI3K/AKT过表达可诱导血管生成和调节肿瘤生长。FAK为一种胞浆蛋白质络氨酸激酶,与整合蛋白介导的通路密切相关,在细胞增生,存活与迁移活动内起到关键作用。整合蛋白聚类激活FAK,后者又引起PI3K结合位点Tyr397磷酸化。已有文献证实不论是整合蛋白介导FAK活化,或是生长因子刺激促进了 PI3K/AKT下游途径活化,均会引起癌性转移前蛋白过度表达,例如基质金属蛋白酶与VEGF。肿瘤血管生成可以为肿瘤微环境提供必需的营养和氧气,这对肿瘤的生长、进展和转移起着至关重要的作用。抑制肿瘤血管生成是肿瘤治疗中最有希望的策略之一。关于人脑胶质瘤中告达庭的抗血管生成特性的信息很少。因此本研究同时将告达庭作为血管生成抑制剂评价其在体内外的抗癌作用。并挖掘其潜在分子机制。目的1.体外评价告达庭抑制神经胶质瘤细胞生长的效果和分子机制。2.构建神经胶质瘤裸鼠荷瘤模型,评价告达庭体内抑制肿瘤生长的分子机制。3.体内、外评价告达庭抑制肿瘤血管生成的效果和分子机制。方法1.体外培养U251和U87人神经胶质瘤细胞系,以不同浓度的告达庭处理细胞不同时间,相差显微镜观察细胞形貌的变化;MTT检测细胞活性;流式细胞仪用以检测细胞周期和细胞凋亡;western blotting检测凋亡相关蛋白的表达;利用荧光探针检测细胞内ROS、超氧阴离子、线粒体膜电位的改变(ΔΨm);加入caspase的抑制剂,评价caspase在告达庭诱导胶质瘤细胞凋亡中的作用。2.裸鼠皮下注射神经胶质瘤细胞,构建U251裸鼠荷瘤模型,尾静脉注射告达庭,测量肿瘤体积及质量,蛋白印迹及免疫组化分析检测肿瘤标本中凋亡相关蛋白等的表达。评价告达庭体内抑制神经胶质瘤生长的效果和分子机制。3.体外培养HUVECs人脐静脉内皮细胞,以迁移、侵袭和血管生成实验评价告达庭体外抑制血管生长的效果和机制;蛋白质印迹法测定告达庭对VEGF,VEGFR2等血管生成相关因子,以及FAK、AKT等信号途径蛋白表达的影响。并使用特异的蛋白抑制剂进一步明确告达庭的作用。western blotting和免疫组化方法对移植瘤标本分析检测,评价告达庭体内抗血管生长的效果和分子机制。结果1.告达庭可时间和剂量依赖性抑制U251和U87细胞的生长,表现为细胞皱缩、细胞数量减少,有明显凋亡小体;流式细胞分析结果表明告达庭体外可有效诱导胶质瘤细胞凋亡,表现为Sub-G1峰的增加,PARP切割和caspase-3、caspase-7和caspase-9的激活;告达庭体外可通过影响Bcl-2家族蛋白表达导致线粒体功能的紊乱;告达庭可诱导活性氧自由基的产生,启动氧化应激损伤;活性氧的清除可减弱告达庭诱导的氧化应激损伤、凋亡和细胞生长抑制,提示活性氧自由基是早期诱导凋亡的关键因子;caspase抑制剂的加入可显着抑制告达庭诱导的凋亡,改善细胞活性,提示告达庭诱导胶质瘤细胞凋亡是caspase依赖性的。2.成功构建胶质瘤裸鼠荷瘤模型;告达庭体内给药可显着抑制胶质瘤的生长,表现为肿瘤体积和肿瘤质量的降低;告达庭体内可诱导胶质瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖和血管新生,抗肿瘤机制与体外一致。3.告达庭体外可显着抑制内皮细胞的增殖、迁移、侵袭和血管样的管腔形成;告达庭体外可通过抑制FAK的磷酸化抑制内皮细胞的迁移;告达庭主要是通过抑制VEGF-VEGFR2-AKT/FAK信号轴的表达来抑制细胞的迁移、侵袭和血管生成;告达庭体内可通过抑制肿瘤血管形成抑制肿瘤的生长,表现为VEGF和CD31、CD34表达降低,体内抗肿瘤机制与体外一致。结论1.告达庭体外可通过诱导caspase依赖性的凋亡来抑制胶质瘤细胞的生长。2.告达庭可启动线粒体功能紊乱和ROS介导的氧化应激损伤诱导凋亡。3.告达庭体内可通过诱导凋亡抑制肿瘤生长,机制与体外一致。4.告达庭体内、外可有效抑制血管生成来抑制肿瘤生长。(本文来源于《山东大学》期刊2018-08-30）
陶雪芬,金银秀,马永敏[3]（2016）在《新型告达庭酯苷的合成及其抗肿瘤药效学评价》一文中研究指出目的合成新型的抗肿瘤活性优于告达庭的酯苷。方法以告达庭、阿司匹林为原料,DCCDMAP为脱水剂和缩合剂合成目标化合物;以告达庭为对照,MTT法检测目标化合物对肿瘤细胞增殖的影响。结果目标化合物经~1H-NMR、~(13)C-NMR、DEPT谱和元素分析鉴定为3β-乙酰水杨酸告达庭酯苷。结论经骈合原理设计合成的3β-乙酰水杨酸告达庭酯苷具有较告达庭更强的抑制肿瘤细胞增殖作用,且抑制作用呈时间和剂量依赖性。(本文来源于《现代中药研究与实践》期刊2016年04期）
范方田,卞庆亚,吴红雁[4]（2016）在《告达庭联合吉非替尼逆转HGF诱导的非小细胞肺癌对EGFR-TKI的获得性耐药研究》一文中研究指出目的探讨告达庭联合吉非替尼对肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)诱导的非小细胞肺癌PC-9细胞对吉非替尼耐药的效应及可能机制。方法利用外源性HGF及与MRC-5共培养诱导PC-9细胞对EGFR-TKIs耐药模型;MTT法考察告达庭对HGF诱导的PC-9细胞耐吉非替尼的逆转作用;Western blot检测告达庭联合吉非替尼逆转HGF诱导PC-9细胞耐药的机制。结果外源性HGF和MRC-5均可诱导PC-9对吉非替尼的耐药作用,降低相对抑制率(P<0.05);在HGF存在的情况下,单用告达庭(0~32μM)和吉非替尼(1μM)均不能显着抑制PC-9的增殖,而告达庭联合吉非替尼能剂量依赖性抑制PC-9增殖(P<0.05)。告达庭联合吉非替尼下调Met及PI3K/AKT磷酸化水平(P<0.05)。结论告达庭能逆转HGF诱导的PC-9细胞对吉非替尼的耐药,其机制可能与其抑制Met/PI3K/AKT通路有关。(本文来源于《中国生化药物杂志》期刊2016年06期）
陶雪芬[5]（2016）在《告达庭丙酸酯及丙二酸酯的合成》一文中研究指出以耳叶牛皮消Cynanchum auriculatum Royle ex Wight的块根为原料,经乙醇、氯仿提取,经硅胶柱色谱分离获得告达庭单体,并以其为原料,经半合成获得告达庭丙酸酯和告达庭丙二酸酯,以便进一步对其进行抗肿瘤活性研究。以告达庭为原料,在DCC和少量DAMP的催化下与酸反应成酯。结果表明:合成了告达庭丙酸酯和丙二酸酯,结构经1H NMR和13C NMR鉴定,并开展药理活性实验。通过该实验方法能合成告达庭酯类化合物。(本文来源于《广州化工》期刊2016年02期）
费洪荣[6]（2015）在《白首乌中告达庭的制备及其抗肿瘤活性研究》一文中研究指出目的:从白首乌中分离纯化C21甾体苷元-告达庭,以肝癌细胞系Hep G2和肺癌细胞系A549等肿瘤细胞为实验材料,体外检测告达庭对细胞凋亡的诱导作用;对肿瘤细胞增殖、迁移和血管生成的抑制活性;观察告达庭对Wnt/β-catenin和MAPK信号途径的调控作用,阐明其抗肿瘤活性的可能分子机制。同时将告达庭与靶向生物制剂TRAIL联合应用,探讨告达庭对TRAIL抗肿瘤效应的影响及其内在分子机理。方法:(1)采用分光光度法测定白首乌中的C21甾体类成分含量;利用大孔吸附树脂纯化白首乌中C21甾体成分;正交试验优化白首乌中C21甾体成分的提取工艺、90%乙醇洗脱部位的水解工艺。(2)采用高速逆流色谱从90%乙醇洗脱部位的水解产物中分离得到抗肿瘤成分,并进行结构鉴定。(3)采用MTT法检测大孔吸附树脂不同纯化部位对Hep G2细胞活力的抑制作用,比较90%乙醇洗脱部位酸水解前后抑制率;检测告达庭对肝癌细胞Hep G2、肺癌细胞A549和胶质瘤细胞C6等细胞活力的影响;观察告达庭和TRAIL联用对Hep G2细胞活力的抑制作用。(4)采用流式细胞术检测告达庭对Hep G2细胞和A549细胞和HUVEC等细胞周期的影响。(5)Annexin V-FITC/PI双染法等检测告达庭对肝癌细胞Hep G2、肺癌细胞A549和胶质瘤细胞C6等细胞凋亡的诱导作用;观察告达庭对TRAIL诱导Hep G2细胞凋亡的促进作用。(6)采用免疫印迹实验检测告达庭对肝癌细胞Hep G2、肺癌细胞A549细胞、胶质瘤细胞C6和HUVEC细胞增殖及凋亡相关蛋白因子的调节作用及相关的信号通路。(7)采用划痕实验和Transwell迁移小室实验确定告达庭对C6细胞迁移的抑制作用。(8)体外小管形成实验测定告达庭对肿瘤细胞血管生成的抑制作用;ELISA检测告达庭对A549细胞中VEGF分泌表达的影响。结果:(1)高氯酸显色分光光度测定白首乌中C21甾体,具有稳定性、重现性好的特点;白首乌中C21甾体成分最佳的提取工艺为10倍量95%乙醇回流提取2次(1.5h/次);90%乙醇洗脱部位最佳水解条件为15%醋酸100℃水浴水解6h;采用HPD-100大孔吸附树脂,20%乙醇作为除杂溶剂后,分别用2BV的50%、70%、90%及无水乙醇洗脱获得相应的洗脱部位。MTT实验结果显示90%乙醇洗脱部位能够抑制Hep G2细胞的活力,且水解产物对Hep G2细胞活力的抑制率高于水解前。(2)采用高速逆流色谱从90%乙醇洗脱部位的水解产物中分离得到抗肿瘤成分,经鉴定为告达庭。(3)MTT结果显示告达庭能够抑制Hep G2细胞、A549细胞、C6细胞和HUVECs的细胞活力,增强TRAIL对Hep G2细胞活力的抑制作用。(4)流式细胞术及免疫印迹结果证实告达庭阻滞Hep G2细胞、A549细胞、C6细胞和HUVECs细胞周期于G1期,其分子机制可能与其下调cyclin D1,同时上调p53和p21的表达相关。(5)Annexin V-FITC/PI双染法结果表明告达庭能够诱导Hep G2细胞和A549细胞等发生凋亡;免疫印迹结果显示告达庭促进pro-caspase-9、pro-caspase-3和PARP发生切割;同时抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白水平,上调促凋亡蛋白Bax的表达。(6)告达庭参与调控Wnt/β-catenin信号通路和MAPK信号途径,能够促进β-catenin的磷酸化,抑制细胞内总的β-catenin的表达和GSK3β第9位丝氨酸的磷酸化;通过促进JNK和ERK的磷酸化而激活MAPK信号通路。(7)划痕实验和Transwell小室迁移实验均证明告达庭能够抑制C6细胞的迁移,其机制可能与其抑制C6细胞中β-catenin及其下游因子survivin的表达有关。(8)体外小管生成实验显示告达庭抑制生长因子和A549肿瘤细胞条件培养液诱导的血管生成,其机制与告达庭下调HUVECs中VEGF的蛋白水平和抑制肿瘤细胞分泌表达VEGF密切相关。(9)告达庭能够通过激活caspase家族关键因子的活性切割,抑制survivin的表达而促进TRAIL诱导的Hep G2细胞凋亡;告达庭增强TRAIL的抗肿瘤活性与其促进肿瘤细胞死亡受体DR5的表达相关。结论:告达庭为白首乌中的抗肿瘤活性成分之一,能够通过阻滞细胞于G1期而抑制多种肿瘤细胞增殖;通过激活caspase家族关键蛋白因子的切割,调节Bcl-2家族成员的表达水平而促进肿瘤细胞发生凋亡。此外,告达庭对肿瘤细胞的迁移和血管生成表现出较强的抑制活性。告达庭调控Wnt/β-catenin信号通路和激活MAPK信号途径关键因子的磷酸化可能与其抗肿瘤活性相关。最后,告达庭上调DR5的表达,进而协同促进TRAIL诱导的Hep G2细胞凋亡。(本文来源于《山东中医药大学》期刊2015-04-20）
费洪荣,王桂玲,赵莹,周洪雷[7]（2015）在《告达庭增强TRAIL诱导的HepG2细胞凋亡》一文中研究指出目的:研究C21甾体苷元告达庭对肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的Hep G2肝癌细胞增殖和凋亡的影响,并进一步明确其作用机制。方法:采用MTT法和细胞集落形成实验检测告达庭与TRAIL联合对细胞增殖的影响;TUNEL染色法检测细胞凋亡的变化;免疫印迹实验分析蛋白的表达水平。结果:告达庭与TRAIL联合作用Hep G2细胞24 h后,细胞活力明显下降,细胞增殖受到抑制;同时,两者联用后细胞凋亡数目明显增加,显着高于告达庭和TRAIL单用诱导的细胞凋亡率;与对照相比,告达庭与TRAIL联用促进了caspase-3、caspase-7、caspase-9和PARP的活性切割,而凋亡抑制蛋白survivin的表达则下调。结论:告达庭能够增强TRAIL诱导Hep G2细胞凋亡,其机制可能与激活caspase家族因子的活性切割和抑制survivin的表达相关。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2015年02期）
朱赴东,周霞,陶雪芬,杨波,王一奇[8]（2014）在《告达庭激活Caspase-3诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡》一文中研究指出[目的]评价告达庭体外诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用。[方法]MTT法检测细胞活性;吖啶橙染色观察核形态;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western-blot及比色法检测Caspase-3表达及活性。[结果]告达庭抑制SGC-7901细胞的活性,具有浓度、时间依赖性;告达庭70μM能使SGC-7901细胞出现核染色体浓聚等典型的凋亡形态学改变,告达庭35、70μM使细胞凋亡率升高,并使Caspase-3蛋白表达量和蛋白活性显着升高。[结论]告达庭可能通过激活Caspase-3诱导SGC-7901细胞凋亡。(本文来源于《中国肿瘤》期刊2014年06期）
费洪荣,王桂玲,赵莹,周洪雷[9]（2014）在《告达庭下调β-catenin/survivin抑制神经胶质瘤C6细胞迁移实验研究》一文中研究指出目的观察告达庭对大鼠神经胶质瘤C6细胞增殖和迁移能力的影响,并初步探讨其内在的分子机制。方法 MTT法检测告达庭对C6细胞存活力的影响;流式细胞术检测细胞周期的变化;细胞划痕实验及Transwell迁移小室检测告达庭对C6细胞体外迁移能力的抑制作用;免疫印迹实验检测告达庭对C6细胞内β-catenin、Survivin以及细胞周期相关蛋白CyclinD1和Cdk4蛋白表达的影响。结果告达庭能够剂量依赖性地抑制C6细胞的增殖并阻滞细胞于G1期,其机制与下调细胞周期素CyclinD1和Cdk4的表达相关;告达庭给药后,C6细胞的迁移能力明显受到抑制,同时β-catenin及其下游因子Survivin的表达呈显着下降趋势。结论告达庭具有抑制C6细胞的增殖和体外迁移能力的作用,其机制可能与抑制β-catenin蛋白及Survivin的表达相关。(本文来源于《中草药》期刊2014年10期）
张琳,李晓誉,徐世芳,陈峰阳,叶益萍[10]（2014）在《双波长HPLC测定青阳参中青阳参苷元和告达庭的含量》一文中研究指出目的建立采用双波长HPLC同时测定青阳参中青阳参苷元和告达庭含量的方法。方法采用高效液相色谱法,ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,柱温40℃,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min·1,检测波长为220,260 nm。结果青阳参苷元和告达庭均在2~64μg·mL·1内呈良好的线性关系,r均为1;平均回收率为100.1%和97.9%,RSD值分别为1.34%和1.37%(n=6)。结论该方法快捷简单,精密可靠,重复性好,可为青阳参及其制剂的质量控制提供参考。(本文来源于《中国现代应用药学》期刊2014年03期）
告达庭论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
胶质瘤源于神经胶质细胞,是中枢神经系统发病率最高的原发性肿瘤。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)将胶质瘤分为WHO Ⅰ～Ⅳ级,以判断肿瘤恶性程度;将Ⅰ级、Ⅱ级胶质瘤划为低级别胶质瘤,Ⅲ级、Ⅳ级胶质瘤划为高级别胶质瘤。流行病学大宗数据显示,胶质瘤约占所有类型中枢神经系统肿瘤的四分之一,占恶性肿瘤的四分之叁。恶性中枢神经系统原发肿瘤中,胶质母细胞瘤(Glioblastoma,GBM,WHO Ⅳ级)发病率最高,约为3/100,000,占比近1/2;弥漫性星形细胞瘤发病率居其次,约0.5/100,000。高级别胶质瘤是高度恶性、高度侵袭性的肿瘤。目前胶质瘤治疗方法主要是最大范围手术切除,体外放射治疗及化疗,但临床治疗效果欠佳,患者预后差,平均生存率只有12-15个月。成人高级别胶质瘤的1年生存率约为30%,5年生存率仅为13%;中位生存时间,间变性胶质瘤约为2至3年,胶质母细胞瘤仅为1年左右。辅助化疗在高级别胶质瘤治疗中的作用已经得到公认,能明显延长患者的生存期;并且,随着研究的进展,辅助化疗在低级别胶质瘤治疗中的作用,也逐渐得到重视和肯定。化疗是胶质瘤综合治疗中必要的的治疗方法。告达庭是一种从白首乌根中分离得到的C-21类固醇,具有抗癌、免疫调节、肝脏保护、抗衰老、抗氧化,抗病毒和神经保护等多种药理功能。告达庭的化学结构已经明晰。目前已经发现,告达庭可以诱导多种类型的肿瘤细胞系细胞凋亡。告达庭可以诱导HepG2人肝癌细胞凋亡,并参与B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)家族的变化以及细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的激活。细胞凋亡失调是许多疾病的一种发病机制。在急慢性退行性疾病、免疫缺陷等疾病中发现加速的细胞凋亡,在肿瘤和自身免疫性疾病中存在延迟或受抑制的凋亡。不同类型的肿瘤细胞有共同的细胞特征,包括生长失控、血管生成和凋亡逃避。细胞凋亡主要功能之一就是预防肿瘤发生和诱导肿瘤消亡。通常,癌症中凋亡被抑制,而且,有广泛的抑制凋亡的途径、手段。凋亡控制的丧失使得癌细胞生存时间得以延长,并给癌细胞更多的时间积累突变以增加肿瘤进展过程中的侵袭性,并刺激血管生成,调节细胞增殖和干扰分化。癌细胞逃避凋亡有许多种方式:caspase功能被抑制或细胞凋亡触发被阻断,抗凋亡BCL-2的上调和BAX和/或BAK的丧失是主要的逃避方法。BCL-2虽然不是一个致癌基因,但其突变增强了肿瘤发病。半数以上的癌症存在BCL-2蛋白的过表达。因此,寻找能够抑制肿瘤逃避凋亡和诱导肿瘤细胞凋亡的药物具有重大意义。我们前期研究发现了告达庭在48h内通过诱导细胞周期停滞而抑制人胶质瘤细胞生长。然而,告达庭诱导凋亡的潜在机制仍不清楚,特别是关于抑制人脑肿瘤细胞生长的分子机制。血管生成,由内皮细胞增殖和迁移引发的新血管的形成,在肿瘤生长过程中不断地为肿瘤提供必需的营养物质,并帮助去除代谢废物。若没有血管床的扩张,肿瘤生长会受到限制、局限在一定大小之内。因此,血管生成是肿瘤生长的关键步骤,抗血管生成已成为治疗癌症的有效方法。血管生成受多种生长因子和细胞因子调节。在这些因素中,由大多数癌细胞和内皮细胞产生的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是参与肿瘤生长的最有效的血管生成因子之一。VEGF通过结合其在内皮细胞上表达的受体酪氨酸激酶来刺激内皮细胞增殖,迁移和管形成。在这些受体酪氨酸激酶中,VEGF受体2(VEGFR2)介导主要功能。VEGFR2的活化导致各种下游信号转导蛋白,包括局部粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK),磷酸肌醇 3-激酶(Phosphotylinosital 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶 B(protein kinase B,PKB/AKT)的激活。抑制 VEGF 活性或/和阻断VEGFR2的功能都被认为是肿瘤治疗中抗血管生成干预的潜在策略。AKT在从生长因子受体和胞内通路信号转导过程中起作用。AKT活化不仅能促进内皮细胞存活,还能调节血管收缩反应。PI3K/AKT过表达可诱导血管生成和调节肿瘤生长。FAK为一种胞浆蛋白质络氨酸激酶,与整合蛋白介导的通路密切相关,在细胞增生,存活与迁移活动内起到关键作用。整合蛋白聚类激活FAK,后者又引起PI3K结合位点Tyr397磷酸化。已有文献证实不论是整合蛋白介导FAK活化,或是生长因子刺激促进了 PI3K/AKT下游途径活化,均会引起癌性转移前蛋白过度表达,例如基质金属蛋白酶与VEGF。肿瘤血管生成可以为肿瘤微环境提供必需的营养和氧气,这对肿瘤的生长、进展和转移起着至关重要的作用。抑制肿瘤血管生成是肿瘤治疗中最有希望的策略之一。关于人脑胶质瘤中告达庭的抗血管生成特性的信息很少。因此本研究同时将告达庭作为血管生成抑制剂评价其在体内外的抗癌作用。并挖掘其潜在分子机制。目的1.体外评价告达庭抑制神经胶质瘤细胞生长的效果和分子机制。2.构建神经胶质瘤裸鼠荷瘤模型,评价告达庭体内抑制肿瘤生长的分子机制。3.体内、外评价告达庭抑制肿瘤血管生成的效果和分子机制。方法1.体外培养U251和U87人神经胶质瘤细胞系,以不同浓度的告达庭处理细胞不同时间,相差显微镜观察细胞形貌的变化;MTT检测细胞活性;流式细胞仪用以检测细胞周期和细胞凋亡;western blotting检测凋亡相关蛋白的表达;利用荧光探针检测细胞内ROS、超氧阴离子、线粒体膜电位的改变(ΔΨm);加入caspase的抑制剂,评价caspase在告达庭诱导胶质瘤细胞凋亡中的作用。2.裸鼠皮下注射神经胶质瘤细胞,构建U251裸鼠荷瘤模型,尾静脉注射告达庭,测量肿瘤体积及质量,蛋白印迹及免疫组化分析检测肿瘤标本中凋亡相关蛋白等的表达。评价告达庭体内抑制神经胶质瘤生长的效果和分子机制。3.体外培养HUVECs人脐静脉内皮细胞,以迁移、侵袭和血管生成实验评价告达庭体外抑制血管生长的效果和机制;蛋白质印迹法测定告达庭对VEGF,VEGFR2等血管生成相关因子,以及FAK、AKT等信号途径蛋白表达的影响。并使用特异的蛋白抑制剂进一步明确告达庭的作用。western blotting和免疫组化方法对移植瘤标本分析检测,评价告达庭体内抗血管生长的效果和分子机制。结果1.告达庭可时间和剂量依赖性抑制U251和U87细胞的生长,表现为细胞皱缩、细胞数量减少,有明显凋亡小体;流式细胞分析结果表明告达庭体外可有效诱导胶质瘤细胞凋亡,表现为Sub-G1峰的增加,PARP切割和caspase-3、caspase-7和caspase-9的激活;告达庭体外可通过影响Bcl-2家族蛋白表达导致线粒体功能的紊乱;告达庭可诱导活性氧自由基的产生,启动氧化应激损伤;活性氧的清除可减弱告达庭诱导的氧化应激损伤、凋亡和细胞生长抑制,提示活性氧自由基是早期诱导凋亡的关键因子;caspase抑制剂的加入可显着抑制告达庭诱导的凋亡,改善细胞活性,提示告达庭诱导胶质瘤细胞凋亡是caspase依赖性的。2.成功构建胶质瘤裸鼠荷瘤模型;告达庭体内给药可显着抑制胶质瘤的生长,表现为肿瘤体积和肿瘤质量的降低;告达庭体内可诱导胶质瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖和血管新生,抗肿瘤机制与体外一致。3.告达庭体外可显着抑制内皮细胞的增殖、迁移、侵袭和血管样的管腔形成;告达庭体外可通过抑制FAK的磷酸化抑制内皮细胞的迁移;告达庭主要是通过抑制VEGF-VEGFR2-AKT/FAK信号轴的表达来抑制细胞的迁移、侵袭和血管生成;告达庭体内可通过抑制肿瘤血管形成抑制肿瘤的生长,表现为VEGF和CD31、CD34表达降低,体内抗肿瘤机制与体外一致。结论1.告达庭体外可通过诱导caspase依赖性的凋亡来抑制胶质瘤细胞的生长。2.告达庭可启动线粒体功能紊乱和ROS介导的氧化应激损伤诱导凋亡。3.告达庭体内可通过诱导凋亡抑制肿瘤生长,机制与体外一致。4.告达庭体内、外可有效抑制血管生成来抑制肿瘤生长。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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