本文主要研究内容
作者周继萍,曹瑞敏,米克热木沙依布扎提,蒋志惠,张小莺（2019）在《猪硒蛋白W的原核表达及IgY多克隆抗体制备》一文中研究指出：试验旨在优化硒蛋白W(selenoprotein W,SelW)的原核表达系统,并评估SelW的免疫原性和基于IgY抗体检测猪体内SelW的可行性。将获得的猪SelW基因序列密码子进行优化、合成并连接至pET-32a(+)表达载体中,构建原核表达重组质粒pET32a(+)-SelW,转化E.coli BL21(DE3)宿主菌中,进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定重组猪SelW的表达情况,并免疫产蛋鸡制备抗SelW的IgY多克隆抗体,通过间接ELISA检测IgY抗体滴度,采用Western blotting检测IgY识别抗原的特异性。SDS-PAGE结果显示,SelW基因在原核细胞中成功表达,得到了大小约为33 ku的重组蛋白,IPTG最佳诱导浓度及时间分别为0.5 mmol/L和6 h;可溶性分析结果显示,重组蛋白SelW主要以包涵体形式存在。间接ELISA检测结果显示,免疫后45 d的IgY多克隆抗体的效价可达1∶51 200。Western blotting检测结果显示,重组蛋白具有良好的免疫原性,所制备的IgY抗体与SelW的亲和力较高。本试验成功构建并优化了SelW蛋白的原核表达系统,提高了SelW蛋白的表达量,获得了具有良好免疫原性的SelW蛋白,制备的IgY抗体能特异性识别猪肌肉组织中的SelW,可用于检测猪组织中SelW的表达、预防硒中毒和缺硒性疾病的监测等,为进一步探究SelW的生物学功能奠定基础。
Abstract
shi yan zhi zai you hua xi dan bai W(selenoprotein W,SelW)de yuan he biao da ji tong ,bing ping gu SelWde mian yi yuan xing he ji yu IgYkang ti jian ce zhu ti nei SelWde ke hang xing 。jiang huo de de zhu SelWji yin xu lie mi ma zi jin hang you hua 、ge cheng bing lian jie zhi pET-32a(+)biao da zai ti zhong ,gou jian yuan he biao da chong zu zhi li pET32a(+)-SelW,zhuai hua E.coli BL21(DE3)su zhu jun zhong ,jin hang IPTGyou dao biao da ,SDS-PAGEjian ding chong zu zhu SelWde biao da qing kuang ,bing mian yi chan dan ji zhi bei kang SelWde IgYduo ke long kang ti ,tong guo jian jie ELISAjian ce IgYkang ti di du ,cai yong Western blottingjian ce IgYshi bie kang yuan de te yi xing 。SDS-PAGEjie guo xian shi ,SelWji yin zai yuan he xi bao zhong cheng gong biao da ,de dao le da xiao yao wei 33 kude chong zu dan bai ,IPTGzui jia you dao nong du ji shi jian fen bie wei 0.5 mmol/Lhe 6 h;ke rong xing fen xi jie guo xian shi ,chong zu dan bai SelWzhu yao yi bao han ti xing shi cun zai 。jian jie ELISAjian ce jie guo xian shi ,mian yi hou 45 dde IgYduo ke long kang ti de xiao jia ke da 1∶51 200。Western blottingjian ce jie guo xian shi ,chong zu dan bai ju you liang hao de mian yi yuan xing ,suo zhi bei de IgYkang ti yu SelWde qin he li jiao gao 。ben shi yan cheng gong gou jian bing you hua le SelWdan bai de yuan he biao da ji tong ,di gao le SelWdan bai de biao da liang ,huo de le ju you liang hao mian yi yuan xing de SelWdan bai ,zhi bei de IgYkang ti neng te yi xing shi bie zhu ji rou zu zhi zhong de SelW,ke yong yu jian ce zhu zu zhi zhong SelWde biao da 、yu fang xi zhong du he que xi xing ji bing de jian ce deng ,wei jin yi bu tan jiu SelWde sheng wu xue gong neng dian ding ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国畜牧兽医的周继萍,曹瑞敏,米克热木沙依布扎提,蒋志惠,张小莺，发表于刊物中国畜牧兽医2019年06期论文，是一篇关于硒蛋白论文,原核表达论文,多克隆抗体论文,中国畜牧兽医2019年06期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国畜牧兽医2019年06期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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