杨霞（复旦大学附属妇产科医院上海200011）
摘要：目的观察及分析不同HE染色细胞核灰染的处理方法得到的效果，为获得更好的HE染色质量重要的依据。方法选择HE染色发灰的胃粘膜、肠息肉、子宫内膜等不同类型的组织作为研究对象，重新实施切片，对于苏木素染色条件进行合理的调整，同时在染色前修复处理组织，通过设立参照组的方式，对于不同处理方法获得的染色成效进行对比观察。结果通过对于苏木素染色条件进行调整，包括水浴加热、增加时间以及微波加热等，能够推动核染色，但是对于灰染的情况没有得到完全的解决掉。以高压和微波修复处理举措应用到PBS、EDTA以及柠檬酸中，能够对于HE染色细胞核灰染现象进行良好的改善，而且效果最理想的就是PBS微波处理法。结论有效处理HE染色细胞核灰染现象的举措就是PBS微波处理法，应用价值巨大。
关键词：HE染色细胞核灰染；处理方法；对比
病理形态学诊断期间，HE染色属于一种普遍应用的举措，为了获得到准确的诊断结果，有赖于HE染色切片是否优质。但是，平时的实际病理制片工作时，很容易由于某些因素受到影响导致HE染色以后产生细胞核灰染问题。细胞核灰染也就是HE染色以后，核内染色质以及细胞的轮廓、核仁具有不清晰的显示，同时具有发灰的问题，比较细胞核以及细胞浆的颜色不明显，无良好的透明度[1-2]。一旦产生HE染色细胞核灰染问题，则能够严重的影响到病理诊断工作。本研究对于HE染色细胞核灰染处理方法进行观察，报告内容如下所示。
1资料与方法
1.1一般资料
研究对象是20例HE染色细胞核灰染的胃粘膜、肠息肉以及子宫内膜等，收集的时间是在2017年1月至12月期间。重新实施切片，切片厚度是0.3um。对于苏木素染色条件进行合理的调整，同时在染色之前展开修复处理好组织，之后实施HE染色，对于处理的效果情况进行观察及对比。
1.2方法
首先，对于苏木素染色条件进行科学的调整，主要的方法总结为：切片脱蜡至水；以分组的方式，对于切片进行处理，设置一组为参照组，应用常规法，即于室温的状态下对切片浸润苏木素，时间控制为5分钟左右。第二组应用增加时间法，设置为A组，在室温的状态中，增加苏木素的染色时间，一直到2小时左右。第三组采取水浴加热法，设置为B组，即在湿盒内部放进切片，之后将其整体置于水浴箱内，温度是在37℃中，进行滴染苏木素半小时时间；第四组采取微波加热法，设置为C组，即在耐高温染色缸中放进切片，之后将其置于格兰仕P70D20TP-C6（W0）微波炉内，设置中低档的状态，进行滴染苏木素时间是1分钟。结束染色以后，按照顺序实施操作，即遵循分化、返蓝、伊红染色、脱水、透明、封片几项步骤，之后进行严密的镜下观察工作。
其次，染色之前进行组织修复处理的举措为：切片脱蜡至水；高压处理法是把切片在PBS以及EDTA、柠檬酸修复液中分别进行浸润，采取高压锅进行隔水加热，持续不断的喷气，在3分钟以后得到自然冷却的状态。水煮法就是在双蒸水内全部浸入切片，进行5分钟时间的加热，一直到沸腾，之后进行自然的冷却。微波处理法即为，PBS和EDTA、柠檬酸修复液完全的浸润切片以后，在中低档微波炉内进行加热，一直到沸腾，时间控制为3分钟，之后自然的冷却；把没有实施处理的切片同进行过处理的切片进行水洗，之后同样的予以染色苏木素，时间为5分钟，之后按照流程进行操作，即包括分化、返蓝、伊红染色、脱水、透明、封片几项内容，最终于镜下实施严密的观察。
2结果
没有实施调整苏木素染色条件的切片，即应用传统常规的举措，具有相对严重的切片灰染情况。具有不良的核染色问题，主要的体现就是腺体部位染色效果较差，不能看清晰组织结构，透明度不高，不能鲜明的体现出红蓝颜色。但是，在采取增加时间法、微波加热法、水浴加热法以后，可以对于和染色具有良好的推动功效，使得苏木素的染色更深刻。但是结果显示，依然不能够理想的观察到清晰的细胞结构，切片部位略灰，而且腺体位置呈现出发白的情况，透明度不是很优质，而且红蓝对比相对较差，离获得阅片诊断标准还具有一定的差距。
尽管采取水煮法举措对于细胞核染色产生一定的推动功效，但是依然没能够良好的处理发灰问题，也能够获得阅片诊断标准需要。在实施PBS以及EDTA、柠檬酸三种修复液并予以高压处理和微波处理方法以后，对于细胞核灰染产生了积极的影响以及改善。并且，在以上的方法内，具有最好成效的就是PBS微波处理法。此种方法可以让组织结构更清晰的展示，鲜明的表达出红蓝比较情况，同时具有良好的透明度，核浆染色效果优质。
3讨论
导致HE染色细胞核灰染的因素较多，主要包括标本在离体之后没有及时的予以固定使得组织细胞自溶、苏木素陈旧降低染色的功效、选取不当的固定液引发固定不充分、组织未彻底的脱水出现发白发软等等[3-4]。处理HE染色细胞核灰染举措较多，包括热处理、加酸处理、延长苏木素染色时间等。本研究对比观察了不同方法得到的处理效果，结果表明，将苏木素染色时间增加、水浴加热法、微波加热法、水煮法均没有获得到良好的成效。分别对于PBS以及EDTA、柠檬酸修复液采取高压、微波处理以后，对细胞核灰染产生不同程度的良好的改善，而且最好效果的就是PBS微波处理法。这种举措的优势较多，例如其能够创建优质的PH适中的缓冲水环境，良好的恢复部分组织细胞内的酸和碱性物质，也可以同原带电荷状态更接近，推动结合于染色基团，进而让核浆染色增加接近原有水平的几率。另外，此举措的温和性高于高压处理，形成的热效应更加均匀，可以增大组织细胞的间隙，进而推动染料分子穿透吸附。
结语：
综上所述，采取苏木素染色条件的合理调整举措，以及实施染色前的组织修复处理方案，可以推动细胞核染色。不同的HE染色细胞核灰染的处理方法效果不尽统一，但是PBS微波处理法的效果更好，值得推广应用。
参考文献
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