导读:本文包含了抗原表位区论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:A型口蹄疫病毒,表位疫苗,体液免疫,细胞免疫
抗原表位区论文文献综述
汪肖肖,孙普,贾怀杰,李冬,付元芳[1]（2019）在《A型口蹄疫病毒衣壳蛋白主要抗原表位区的原核表达及免疫效果分析》一文中研究指出为了探索更有效的A型口蹄疫(FMD)表位疫苗,根据已鉴定的A型口蹄疫病毒(FMDV)主要抗原位点,结合基因序列比对分析,选择了A型FMDV流行毒株的主要抗原位点区进行表位蛋白分子的设计表达。所用表位序列包括A/QH/CHA/2013的VP2 70～81位、118～140位,VP1 G-H环131～157位、C末端188～212位,A/WH/CHA/09 VP1 43～48位、VP3 55～72位,以及非结构蛋白3A中的T细胞表位和通用性T细胞表位,构建免疫原蛋白分子命名为ANX2和ANX3,其中ANX2采用了表位序列反向串联的方式进行设计,用大肠杆菌表达免疫原基因,纯化表位蛋白免疫小鼠和猪,分析特异性体液免疫和细胞免疫应答水平,并对免疫猪进行了攻毒保护试验,评价表位疫苗的保护效果。结果显示,ANX2、ANX3重组蛋白以包涵体表达为主,蛋白大小约为41 ku和39 ku,均能与A型FMDV阳性血清发生特异性反应;免疫小鼠和猪后都能产生抗A型FMDV特异性抗体;用表位蛋白刺激免疫小鼠脾淋巴细胞,细胞因子IFN-γ和IL-4均有明显的升高;攻毒后对猪有一定的保护作用,ANX2的免疫效果略优于ANX3,证明表位序列反向串联更有利于抗原表位的展示,从而增强其免疫效果。本研究为A型FMDV表位疫苗的研究积累了经验。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年10期）
汪肖肖[2]（2019）在《A型口蹄疫病毒衣壳蛋白主要抗原表位区的原核表达及免疫效果分析》一文中研究指出口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的急性高度接触性动物传染病,主要感染猪、牛与羊等偶蹄动物,造成了严重的经济损失和社会影响。防控FMD仍然是每年我国动物防疫工作的首要任务。目前,我国对FMD主要采取疫苗免疫为主的综合性防控措施,其中灭活疫苗应用最为广泛,但灭活疫苗在生产与使用过程中存在病毒逃逸的安全风险,需要开发新型疫苗来应对未来FMD的防控问题。其中表位疫苗是最具有潜力的FMD新型疫苗之一。2013年A型FMDV SEA/97-G2亚型毒株传入我国后,造成了巨大的经济损失,为了进一步探明当前A型FMDV衣壳蛋白的主要抗原表位区及其免疫原性,原核表达了A型FMDV衣壳蛋白的主要抗原表位区并进行了免疫效果评价,以期为A型FMDV表位疫苗的研究提供线索。根据已鉴定的FMDV A型毒株的主要抗原位点,结合基因序列比对结果,选择了当前A型FMDV流行毒株的主要抗原位点区:包括A/QH/CHA/2013的VP2 70~81位、118~140位,VP1G-H环131~157位、C末端188~212位;A/WH/CHA/09 FMDV VP1 43~48位,VP3 55~72位;以及非结构蛋白3A中的T细胞表位和通用性T细胞表位,用于构建免疫原分子。通过柔性Linker将各表位基因串联,在串联基因的3'端融合了6个His标签,构建了含多个抗原表位基因的原核表达载体pET28a-ANX2和pET28a-ANX3,其中pET28a-ANX2采用了氨基酸反向串联的方式;通过SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定目的蛋白ANX2和ANX3的表达。将ANX2和ANX3表位蛋白大量表达和纯化后,与CpG-ODNs和ISA201乳化后免疫小鼠和猪,对目的蛋白诱导宿主体液免疫和细胞免疫应答水平进行了鉴定,并在免疫后28日用流行毒株对免疫猪进行了攻毒试验,评价疫苗的保护效力。研究结果表明,表位重组蛋白ANX2和ANX3表达形成包涵体,蛋白分子质量分别约为41kDa和39 kDa,Western blot鉴定均能与A型FMDV阳性血清特异性反应;免疫小鼠和猪后能产生抗A型FMDV抗体,细胞因子IFN-γ和IL-4也有明显升高,攻毒后对猪有一定的保护作用;ANX2的免疫原性略高于ANX3,证明氨基酸反向串联方式的串联更有利于重组蛋白展示抗原表位,从而增强其免疫效果。本研究为A型FMDV表位疫苗的研究积累了数据。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2019-05-01）
王幸,张建楼,霍珊珊,仲飞,张辉[3]（2019）在《利用E.coli表达系统制备猪细小病毒NS1抗原表位区蛋白的研究》一文中研究指出为通过E.coli表达系统制备猪细小病毒NS1抗原表位区蛋白,本试验利用DNAstar软件确定含有抗原表位的NS1蛋白片段,然后运用PCR方法从含有NS1基因的载体中扩增NS1抗原表位区基因片段,并将该基因片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建成与GST标签融合的NS1抗原表位基因的表达载体pGEX-GST-NS1,将表达载体转化BL21大肠杆菌筛选出工程菌。经IPTG诱导表达NS1融合蛋白,经GST-琼脂糖凝胶磁珠分离纯化,制备出与GST融合的NS1抗原表位蛋白。经SDS-PAGE以及Western blot鉴定,制备的NS1融合蛋白分子量和预期一致,并且可以和抗GST标签抗体进行特异反应,表明NS1抗原蛋白已成功制备,为下一步NS1抗体的研制提供了必要的条件。(本文来源于《河北农业大学学报》期刊2019年01期）
周如月,刘琪,冯晓声,贾爱卿,王贵平[4]（2018）在《猪流行性腹泻病毒纤突蛋白S1主要抗原表位区原核表达及其抗血清中和活性鉴定》一文中研究指出本研究利用生物信息学软件预测了猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1蛋白的1个B细胞中和线性表位。为了验证S1蛋白中该表位的存在,并鉴定其中和活性,构建含有该B细胞线性表位截短S1基因的重组质粒pGEX-4T-S1,通过蛋白电泳和Western blot确定该重组质粒可以在原核细胞中表达。将该重组蛋白纯化,免疫BALB/c小鼠,3次免疫后,眼眶静脉采血进行间接免疫荧光及中和试验。结果表明,截短S1蛋白能够引起机体的体液免疫反应,该免疫血清能有效中和PEDV,中和效价为1∶64。该研究结果对PEDV免疫机制和新型疫苗的研究具有重要的借鉴意义。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2018年06期）
周小愿,张星朗,贾秋红,韩亚慧,高宏伟[5]（2016）在《大鲵虹彩病毒主要衣壳蛋白主要抗原表位区的原核表达及抗血清制备》一文中研究指出目的表达大鲵虹彩病毒(CGSIV)主要衣壳蛋白(MCP)主要抗原表位区蛋白,并制备兔抗血清。方法以大鲵虹彩病毒略阳株(CGSIV-LY)基因组为模板,PCR扩增MCP基因,然后克隆到p ET-21a(+)表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot法检测重组蛋白的表达和免疫活性,用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白。以纯化的重组蛋白为免疫原免疫兔制备抗血清,采用Western blot法和ELISA检测抗血清的免疫特异性并测定效价,利用间接免疫荧光法检测鲤鱼上皮瘤(EPC)细胞CGSIV。结果表达了相对分子质量(Mr)为29 000的重组蛋白。制备的兔抗MCP血清具有良好的特异性和高滴度,间接免疫荧光法检测结果显示制备的多抗血清能识别EPC细胞中的CGSIV。结论成功表达了大鲵虹彩病毒MCP主要抗原表位区蛋白,并制备高滴度和良好特异性的兔抗血清。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2016年10期）
李书光,吴清民,肖跃强,李峰,张娜[6]（2015）在《鹅细小病毒结构蛋白VP3优势抗原表位区的原核表达及其表达产物免疫原性的研究》一文中研究指出为了构建鹅细小病毒亚单位疫苗候选菌株,通过软件优化分析预测鹅细小病毒结构蛋白VP3的抗原表位分布,并设计抗原表位富集区的引物,PCR扩增获得目的片段,双酶切定向连接于pET-30a表达载体,转化BL21表达菌株诱导表达,获得目的蛋白,使用该蛋白免疫SPF鸡,制备抗血清,使用鹅胚成纤维细胞原代细胞进行中和效价的测定。结果显示,成功构建了原核表达载体pET-30a-VP3,通过条件优化蛋白以可溶性形式存在,免疫制备的抗血清中和效价能够达到-2.608。结论:本研究以可溶性形式成功表达了鹅细小病毒结构蛋白VP3优势抗原表位区,且该蛋白作为免疫原具有很好的产生中和抗体的能力。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2015年10期）
王广操,崔鹏超,何玉,张梦岩,苑文涛[7]（2015）在《猪细小病毒3型VP2蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立》一文中研究指出为建立检测猪细小病毒3型(PPV3)的间接ELISA方法,本研究选取PPV3 VP2多表位亲水区序列设计引物,扩增并原核表达该基因片段,以表达的重组蛋白作为包被抗原建立了PPV3间接ELISA抗体检测方法。结果显示,该检测方法仅对PPV3血清检测为阳性,与PPV1、PPV2、猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒和猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒等的标准阳性血清均无交叉反应,具有较强的特异性;批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,具有良好的重复性。本研究为临床上PPV3的检测提供了血清学检测手段。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2015年10期）
华耀,王玮,李郁,孙裴,魏建忠[8]（2016）在《猪流行性腹泻病毒S蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA检测方法的建立》一文中研究指出【目的】建立一种快速、特异、敏感的检测血清中猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗体的方法。【方法】利用生物学软件对PEDV S蛋白进行抗原位点分析,选择S蛋白的主要抗原表位区进行原核表达。采用SDS-PAGE和Western-blot对重组蛋白进行鉴定及抗原性分析。用纯化的重组蛋白作为包被抗原,经过条件优化、特异性和重复性试验,建立一种针对血清中PEDV抗体的间接ELISA检测方法。【结果】表达了重组S蛋白,重组的S蛋白能与PEDV阳性血清发生特异性反应,并建立一种基于重组S蛋白的间接ELISA检测方法。组内及组间变异系数均小于10%,重复性较好。建立的间接ELISA检测方法分别与商品化PEDV抗体检测试剂盒和Western-blot鉴定结果相比,两者符合率分别为86.67%和88.89%。【结论】建立的间接ELISA方法可以用于PEDV抗体的检测。(本文来源于《微生物学通报》期刊2016年02期）
华耀,王玮,李郁,孙裴,魏建忠[9]（2015）在《猪流行性腹泻病毒S蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA检测方法的建立》一文中研究指出引言猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种以腹泻、呕吐、脱水和哺乳仔猪高致死率为主要特征的高度接触性肠道传染病。自2010年10月以来,PED在我国的流行广泛并呈现新的特点,感染PEDV后,哺乳仔猪死亡率达80%~100%,而繁殖母猪和公猪则很少表现出临床症状。建立快速、可靠的PEDV抗体检测方法,进行PED流行病学的监测以及猪群免疫过PED疫苗后抗体水平的检测,对于本病的预防具有重要意义。PEDVS蛋白是病毒主要的结构蛋白,可诱导机体产生中和抗体,且产生的抗体水平持续时间长,因此S蛋白可作为可靠的检测抗原。本研究以表达的S蛋白为包被抗原建立间接ELISA检测方法,为PEDV抗体检测试剂盒的研发和应用奠定基础。材料与方法利用生物学软件对PEDV S蛋白进行抗原位点分析,选择S蛋白的主要抗原表位区,利用RT-PCR扩增S基因,然后重组至表达载体pET-32a(+)中,构建重组pET(+)-32a-S原核表达质粒,进行S蛋白的诱导表达和纯化并采用SDS-PAGE和Western-blot对重组蛋白进行鉴定及抗原性分析。用纯化的重组S蛋白作为包被抗原,摸索间接ELISA检测方法的抗原包被浓度、一抗的稀释倍数、一抗的作用时间、封闭液的种类、二抗的稀释倍数、二抗的作用时间及显色时间。并通过特异性试验、重复性试验以及与商品化PEDV抗体检测试剂盒和Western-blot对比试验进一步确定所建立间接ELISA检测方法的可行性。结果与讨论成功表达了重组S蛋白,重组的S蛋白能与PEDV阳性血清发生特异性反应,并成功建立一种基于重组S蛋白的间接ELISA检测方法,优化的反应条件为:蛋白包被浓度为8mg/L,一抗的稀释倍数为1:40,一抗的作用时间是30min,最佳的封闭液时2%BSA,二抗的最佳稀释度为1:1500,的作用时间是45 min,显色时间是10 min。组内及组间变异系数均小于10%,重复性较好。建立的间接ELISA方法与商品化的ELISA抗体检测盒对比试验显示两者符合率为86.67%,敏感性为89.83%,特异性为82.62%;建立的间接ELISA方法Western-blot对比试验显示两者符合率为88.89%,敏感性为90.20%,特异性为83.33%。本研究的建立基于PEDV S蛋白的间接ELISA方法,具有良好的重复性,特异性,敏感性,并可能在临床上成为检测猪群中PEDV抗体水平及监测PED流行情况的有效方法。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会论文集》期刊2015-09-03）
吴植,曹斌,贺生中,戴建华,吴迪[10]（2015）在《犬细小病毒VP2基因编码主要抗原表位区的核酸免疫及其免疫原性研究》一文中研究指出为评价犬细小病毒(CPV)VP2主要抗原表位的免疫原性,本研究对CPV YZ株VP2的氨基酸序列进行分析,确定了主要抗原表位区域(VP2-228),通过PCR扩增相应的表位编码区域基因片段(700 bp),将其克隆于真核表达载体p VAX1中构建重组真核表达质粒p VAX1-VP2-228。Western blot结果显示VP2-228能够在COS-7细胞中正确表达。将该重组质粒免疫小鼠,利用血凝抑制试验检测不同时期的抗体水平,以MTT法检测免疫35 d时淋巴细胞的增殖活性。结果表明p VAX1-VP2-228能够诱导小鼠产生较高的抗体水平;淋巴细胞增殖试验表明免疫小鼠的淋巴细胞刺激指数显着高于对照组(p<0.05)。本研究为开展CPV DNA疫苗的研究提供了实验依据。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2015年06期）
抗原表位区论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的急性高度接触性动物传染病,主要感染猪、牛与羊等偶蹄动物,造成了严重的经济损失和社会影响。防控FMD仍然是每年我国动物防疫工作的首要任务。目前,我国对FMD主要采取疫苗免疫为主的综合性防控措施,其中灭活疫苗应用最为广泛,但灭活疫苗在生产与使用过程中存在病毒逃逸的安全风险,需要开发新型疫苗来应对未来FMD的防控问题。其中表位疫苗是最具有潜力的FMD新型疫苗之一。2013年A型FMDV SEA/97-G2亚型毒株传入我国后,造成了巨大的经济损失,为了进一步探明当前A型FMDV衣壳蛋白的主要抗原表位区及其免疫原性,原核表达了A型FMDV衣壳蛋白的主要抗原表位区并进行了免疫效果评价,以期为A型FMDV表位疫苗的研究提供线索。根据已鉴定的FMDV A型毒株的主要抗原位点,结合基因序列比对结果,选择了当前A型FMDV流行毒株的主要抗原位点区:包括A/QH/CHA/2013的VP2 70~81位、118~140位,VP1G-H环131~157位、C末端188~212位;A/WH/CHA/09 FMDV VP1 43~48位,VP3 55~72位;以及非结构蛋白3A中的T细胞表位和通用性T细胞表位,用于构建免疫原分子。通过柔性Linker将各表位基因串联,在串联基因的3'端融合了6个His标签,构建了含多个抗原表位基因的原核表达载体pET28a-ANX2和pET28a-ANX3,其中pET28a-ANX2采用了氨基酸反向串联的方式;通过SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定目的蛋白ANX2和ANX3的表达。将ANX2和ANX3表位蛋白大量表达和纯化后,与CpG-ODNs和ISA201乳化后免疫小鼠和猪,对目的蛋白诱导宿主体液免疫和细胞免疫应答水平进行了鉴定,并在免疫后28日用流行毒株对免疫猪进行了攻毒试验,评价疫苗的保护效力。研究结果表明,表位重组蛋白ANX2和ANX3表达形成包涵体,蛋白分子质量分别约为41kDa和39 kDa,Western blot鉴定均能与A型FMDV阳性血清特异性反应;免疫小鼠和猪后能产生抗A型FMDV抗体,细胞因子IFN-γ和IL-4也有明显升高,攻毒后对猪有一定的保护作用;ANX2的免疫原性略高于ANX3,证明氨基酸反向串联方式的串联更有利于重组蛋白展示抗原表位,从而增强其免疫效果。本研究为A型FMDV表位疫苗的研究积累了数据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗原表位区论文参考文献
[1].汪肖肖,孙普,贾怀杰,李冬,付元芳.A型口蹄疫病毒衣壳蛋白主要抗原表位区的原核表达及免疫效果分析[J].中国兽医科学.2019
[2].汪肖肖.A型口蹄疫病毒衣壳蛋白主要抗原表位区的原核表达及免疫效果分析[D].中国农业科学院.2019
[3].王幸,张建楼,霍珊珊,仲飞,张辉.利用E.coli表达系统制备猪细小病毒NS1抗原表位区蛋白的研究[J].河北农业大学学报.2019
[4].周如月,刘琪,冯晓声,贾爱卿,王贵平.猪流行性腹泻病毒纤突蛋白S1主要抗原表位区原核表达及其抗血清中和活性鉴定[J].中国兽医学报.2018
[5].周小愿,张星朗,贾秋红,韩亚慧,高宏伟.大鲵虹彩病毒主要衣壳蛋白主要抗原表位区的原核表达及抗血清制备[J].细胞与分子免疫学杂志.2016
[6].李书光,吴清民,肖跃强,李峰,张娜.鹅细小病毒结构蛋白VP3优势抗原表位区的原核表达及其表达产物免疫原性的研究[J].中国兽医科学.2015
[7].王广操,崔鹏超,何玉,张梦岩,苑文涛.猪细小病毒3型VP2蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立[J].中国预防兽医学报.2015
[8].华耀,王玮,李郁,孙裴,魏建忠.猪流行性腹泻病毒S蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA检测方法的建立[J].微生物学通报.2016
[9].华耀,王玮,李郁,孙裴,魏建忠.猪流行性腹泻病毒S蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA检测方法的建立[C].中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会论文集.2015
[10].吴植,曹斌,贺生中,戴建华,吴迪.犬细小病毒VP2基因编码主要抗原表位区的核酸免疫及其免疫原性研究[J].中国预防兽医学报.2015