本文主要研究内容
作者刘艳（2019）在《禽多瘤病毒的分离鉴定及荧光定量PCR检测方法的建立》一文中研究指出：禽多瘤病(Avian polyomavirus disease),又称鹦鹉幼雏病(Budgerigar Fledgling Disease,BFD),是一种由禽多瘤病毒(Avian Polyomavirus,APV)引起的急性传染病,可感染多个品种的鸟,但主要引起鹦鹉幼雏发病,该病能引起鹦鹉幼雏呼吸困难,羽毛发育不全、生长迟缓、消瘦等症状并最终导致死亡。20世纪末传入我国,曾在我国湖北、山东、福建等省份爆发,给当地的鹦鹉养殖企业带来巨大损失。而到目前为止尚无针对禽多瘤病的有效疫苗及治疗方法,因此,开展对APV的相关研究有着重要意义。本实验从疑似禽多瘤病发病鹦鹉的肝脏中分离到一株病毒,基因序列分析和动物回归试验结果表明分离的病毒为禽多瘤病毒。试验建立了一种SYBR Green荧光定量PCR(qPCR)方法以期能够用于禽多瘤病的临床诊断。通过建立的荧光定量PCR方法对APV在鹦鹉胚成纤维细胞上的增殖情况进行了研究,绘制了病毒增殖曲线。具体试验结果如下:1.试验采集了陕西临潼地区的疑似禽多瘤病毒感染的病料,并用15日胚龄的健康鹦鹉胚制备了鹦鹉胚成纤维(BEF)原代细胞,通过将病料悬液接种到BEF细胞分离到了一株病毒,对分离病毒的VP1基因进行序列分析,发现该病毒与NCBI上公布的11株来自世界各地的禽多瘤病毒核苷酸、氨基酸序列同源性达99%以上,其中与我国山东、日本的分离株的同源性达100%。将分离的病毒接种健康的鹦鹉幼雏,其发病症状、病理变化与禽多瘤病的相似,从而证实分离的病毒为禽多瘤病毒。2.试验构建了209 bp的APV阳性标准质粒,通过荧光定量PCR测定经过10倍倍比稀释的标准质粒,得到标准曲线Y=﹣3.255X+40.867,从而建立了一种SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法。对该方法的多个方面进行评估,试验结果表明,以4型禽腺病毒、H9N2型禽流感病毒、新城疫病毒作为模板时,均未检测到有效荧光信号,仅禽多瘤病毒出现了特异性扩增曲线;在灵敏性试验中,建立的荧光定量PCR方法相较于普通PCR其灵敏度高出100倍;在重复性试验中,组内重复试验与组间重复试验变异系数分别小于0.5%、1.5%。用该方法检测临床样品,30份样品检出24份阳性,其检出率高于普通PCR。综上,试验所建立的禽多瘤病毒荧光定量PCR检测方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好的特点。3.利用建立的荧光定量PCR测定了禽多瘤病毒在接种到鹦鹉胚成纤维细胞后不同时间点的病毒拷贝数,并根据测定得出的数据绘制了病毒增殖曲线,发现该病毒接种鹦鹉胚成纤维细胞12 h后开始大量复制,接种后60 h达到最大病毒滴度。这为以后大规模增殖禽多瘤病毒提供了重要的参考。
Abstract
qin duo liu bing (Avian polyomavirus disease),you chen ying wu you chu bing (Budgerigar Fledgling Disease,BFD),shi yi chong you qin duo liu bing du (Avian Polyomavirus,APV)yin qi de ji xing chuan ran bing ,ke gan ran duo ge pin chong de diao ,dan zhu yao yin qi ying wu you chu fa bing ,gai bing neng yin qi ying wu you chu hu xi kun nan ,yu mao fa yo bu quan 、sheng chang chi huan 、xiao shou deng zheng zhuang bing zui zhong dao zhi si wang 。20shi ji mo chuan ru wo guo ,ceng zai wo guo hu bei 、shan dong 、fu jian deng sheng fen bao fa ,gei dang de de ying wu yang shi qi ye dai lai ju da sun shi 。er dao mu qian wei zhi shang mo zhen dui qin duo liu bing de you xiao yi miao ji zhi liao fang fa ,yin ci ,kai zhan dui APVde xiang guan yan jiu you zhao chong yao yi yi 。ben shi yan cong yi shi qin duo liu bing fa bing ying wu de gan zang zhong fen li dao yi zhu bing du ,ji yin xu lie fen xi he dong wu hui gui shi yan jie guo biao ming fen li de bing du wei qin duo liu bing du 。shi yan jian li le yi chong SYBR Greenying guang ding liang PCR(qPCR)fang fa yi ji neng gou yong yu qin duo liu bing de lin chuang zhen duan 。tong guo jian li de ying guang ding liang PCRfang fa dui APVzai ying wu pei cheng qian wei xi bao shang de zeng shi qing kuang jin hang le yan jiu ,hui zhi le bing du zeng shi qu xian 。ju ti shi yan jie guo ru xia :1.shi yan cai ji le shan xi lin tong de ou de yi shi qin duo liu bing du gan ran de bing liao ,bing yong 15ri pei ling de jian kang ying wu pei zhi bei le ying wu pei cheng qian wei (BEF)yuan dai xi bao ,tong guo jiang bing liao xuan ye jie chong dao BEFxi bao fen li dao le yi zhu bing du ,dui fen li bing du de VP1ji yin jin hang xu lie fen xi ,fa xian gai bing du yu NCBIshang gong bu de 11zhu lai zi shi jie ge de de qin duo liu bing du he gan suan 、an ji suan xu lie tong yuan xing da 99%yi shang ,ji zhong yu wo guo shan dong 、ri ben de fen li zhu de tong yuan xing da 100%。jiang fen li de bing du jie chong jian kang de ying wu you chu ,ji fa bing zheng zhuang 、bing li bian hua yu qin duo liu bing de xiang shi ,cong er zheng shi fen li de bing du wei qin duo liu bing du 。2.shi yan gou jian le 209 bpde APVyang xing biao zhun zhi li ,tong guo ying guang ding liang PCRce ding jing guo 10bei bei bi xi shi de biao zhun zhi li ,de dao biao zhun qu xian Y=﹣3.255X+40.867,cong er jian li le yi chong SYBR Greenshi shi ying guang ding liang PCRjian ce fang fa 。dui gai fang fa de duo ge fang mian jin hang ping gu ,shi yan jie guo biao ming ,yi 4xing qin xian bing du 、H9N2xing qin liu gan bing du 、xin cheng yi bing du zuo wei mo ban shi ,jun wei jian ce dao you xiao ying guang xin hao ,jin qin duo liu bing du chu xian le te yi xing kuo zeng qu xian ;zai ling min xing shi yan zhong ,jian li de ying guang ding liang PCRfang fa xiang jiao yu pu tong PCRji ling min du gao chu 100bei ;zai chong fu xing shi yan zhong ,zu nei chong fu shi yan yu zu jian chong fu shi yan bian yi ji shu fen bie xiao yu 0.5%、1.5%。yong gai fang fa jian ce lin chuang yang pin ,30fen yang pin jian chu 24fen yang xing ,ji jian chu lv gao yu pu tong PCR。zeng shang ,shi yan suo jian li de qin duo liu bing du ying guang ding liang PCRjian ce fang fa ju you te yi xing jiang 、ling min du gao 、chong fu xing hao de te dian 。3.li yong jian li de ying guang ding liang PCRce ding le qin duo liu bing du zai jie chong dao ying wu pei cheng qian wei xi bao hou bu tong shi jian dian de bing du kao bei shu ,bing gen ju ce ding de chu de shu ju hui zhi le bing du zeng shi qu xian ,fa xian gai bing du jie chong ying wu pei cheng qian wei xi bao 12 hhou kai shi da liang fu zhi ,jie chong hou 60 hda dao zui da bing du di du 。zhe wei yi hou da gui mo zeng shi qin duo liu bing du di gong le chong yao de can kao 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自西北农林科技大学的刘艳，发表于刊物西北农林科技大学2019-07-11论文，是一篇关于禽多瘤病毒论文,鹦鹉胚成纤维细胞论文,分离鉴定论文,荧光定量论文,病毒增殖论文,西北农林科技大学2019-07-11论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自西北农林科技大学2019-07-11论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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