导读:本文包含了复合培养细胞模型论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:丝素,胶原,羟基磷灰石,成骨细胞
复合培养细胞模型论文文献综述
宋秀钢[1]（2018）在《动态力学载荷下成骨细胞/3D打印复合支架材料叁维培养模型的研究》一文中研究指出目的:由于临床上对骨修复体的需求量呈现快速增长,利用骨组织工程的方法研究并开发出骨缺损修复体,采用低温叁维打印联合冷冻干燥技术制备丝素/胶原/纳米羟基磷灰石复合支架,构建成骨细胞的叁维培养模型,观察动态力学载荷对低温3D打印联合冷冻干燥法制备的叁维仿生复合支架材料内MC3T3-E1细胞增殖、分化、成骨特异性基因表达的影响,并采用酶解法研究复合支架的降解性能,为骨组织工程支架材料能够运用到临床提供理论依据。方法:1.丝素/I型胶原/纳米羟基磷灰石复合支架的制备:将丝素/胶原/纳米羟基磷灰石按质量比为3:9:2混合,采用低温3D打印联合冷冻干燥技术制备叁维多孔支架,Co60灭菌后-20℃保存备用。2.丝素/I型胶原/纳米羟基磷灰石复合支架理化性能检测:用Micro-CT对复合支架进行扫描,叁维重建后得出复合支架的微观结构参数;用SEM观察复合支架表面的形态;用Instron5865材料力学试验机检测复合支架的力学性能。3.构建成骨细胞的叁维培养模型:将MC3T3-E1成骨细胞接种至复合支架上,采用智能材料-压电陶瓷加载装置对支架材料进行动态力学加载,加载参数为(3500με,1Hz,15min/d)。4.复合支架细胞相容性检测:通过HE染色、SEM观察成骨细胞在复合支架上的生长情况,MTT法检测成骨细胞在复合支架上的增殖情况,Western blot法检测特异蛋白表达,qPCR法检测特异基因表达。5.复合支架的降解性能:将复合材料置于1U/ml的Collagenase-IA缓冲溶液(pH7.4,37℃)中进行体外降解。计算降解率,用SEM观察复合支架降解之后的表面结构变化。结果:1.利用叁维打印技术制备的丝素/胶原/纳米羟基磷灰石复合支架,内部呈现孔隙网状结构,孔隙连通性良好,孔隙率(91.8184±3.48)%,大孔直径为(504.32±17.62)μm,微孔直径为(62.29±16.55)μm,弹性模量为(162.43±18.76)kPa。吸水膨胀率(1341.85±63.35)%,2.复合培养7、14 d,两组HE染色及扫描电镜均见细胞在支架内部生长,主要分布在支架孔壁周围,其中实验组细胞较对照组增多,且细胞由梭形变为扁平状。除200倍镜下14 d时两组细胞计数差异无统计学意义(p>0.05)外,其余不同放大倍数下各时间点组间比较差异均有统计学意义(p<0.05)。3.MTT法检测结果显示力学加载后明显促进成骨细胞在复合支架上的增殖。4.实时荧光定量PCR检测:实验组培养7、14 d时COL-Ⅰ、OCN mRNA相对表达量与对照组比较,差异有统计学意义(p<0.05),但BMP-2 mRNA相对表达量与对照组比较,差异无统计学意义(p>0.05)。Western blot检测,实验组培养7、14 d时COL-Ⅰ、BMP-2、OCN蛋白相对表达量与对照组比较,差异均有统计学意义(p<0.05)。5.复合支架经过8周的降解,降解了77.44%。第1周为46.99%,第2周为49.62%,增长了2.63%,第4、6、8周分别为62.05%、69.91%、77.44%。分别增长了12.43%,7.86%和7.53%。降解速率由快变慢。结论:1.在叁维培养条件下MTT检测及HE染色、SEM结果显示3500με动态压缩载荷明显促进了成骨细胞的增殖。2.通过qPCR及Western-Blot检测BMP-2、COL-I、OCN的mRNA和蛋白表达的结果显示3500με动态压缩载荷促进了成骨细胞在复合支架上的分化3.与二维培养条件相比,叁维培养条件下更接近体内的真实情况,所以叁维培养的结果更可靠。(本文来源于《天津医科大学》期刊2018-05-01）
施维[2]（2008）在《甲状腺相关眼病复合培养细胞模型的建立和调控》一文中研究指出目的建立具有自身免疫特性的甲状腺相关眼病(TAO)体外复合培养的细胞模型,通过动态观察和定量测定其炎性因子的表达,以证明眼眶成纤维细胞(OFs)在T淋巴细胞介导下的炎性病变,再应用特异性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂调控炎性反应,从而探讨甲状腺相关眼病细胞学和分子生物学的发病机制,为临床治疗提供新的思路。方法原代培养10例TAO患者及10例正常人的眼眶成纤维细胞,免疫组化法鉴定其性质;尼龙毛吸附+初期固相包被抗体刺激+细胞培养淘汰法纯化、培养20例TAO患者及20例正常人的外周血T淋巴细胞,流式细胞术鉴定其纯度及性质;复合培养后荧光免疫鉴定其性质,透射电镜观察比较其超微结构;ELISA法比较各组培养细胞模型24h、48h、72h炎性细胞因子IL-1α、IL-1β、IL-2及IL-6的表达;实时荧光定量PCR检测各组炎性基因COX-2的表达;所有非自身T淋巴细胞与OFs复合培养的细胞模型,同自身T淋巴细胞与OFs复合培养的细胞模型相同步骤完成以上实验。MTT法比较不同浓度及不同作用时间塞来昔布对复合培养细胞模型中眼眶成纤维细胞增殖的抑制作用;ELISA法比较塞来昔布对各组复合培养细胞模型炎性细胞因子IL-1α、IL-1β、IL-2及IL-6表达的抑制作用。结果1)体外成功培养了眼眶成纤维细胞及外周血T淋巴细胞,建立了TAO复合培养模型;免疫荧光、电镜等未见OFs与自身T淋巴细胞复合培养的细胞模型和OFs与非自身T淋巴细胞复合培养细胞模型有明显形态结构等差别。2)24h复合培养各实验组的IL-1α、IL-1β、IL-2及IL-6的表达均升高,其中T+T组(甲状腺相关眼病患者的T淋巴细胞与患者的眼眶成纤维细胞复合培养组)的IL-1α、IL-1β、IL-2水平升高的最高,与其他各组之间的差异有统计学意义(P=0.001,0.008,0.012);24h时N+N组(正常人的T淋巴细胞与正常人的眼眶成纤维细胞复合培养组)的IL-6水平最高,至72h时N+T组(正常人的T淋巴细胞与甲状腺相关眼病的眼眶成纤维细胞复合培养组)IL-6水平最高,24h、48h、72h各组之间的IL-6浓度差异有统计学意义(P=0.000,0.004,0.001);无论OFs与自身还是非自身T淋巴细胞复合培养的细胞模型,其四种炎性细胞因子的合成及变化均一致。3)TAO患者的OFs COX-2表达量较正常人的高,复合培养细胞模型中T+T组COX-2表达量最高。4)塞来昔布浓度为1μmol/L、2μmol/L、5μmol/L及10μmol/L时对各组OFs均有不等的增殖抑制作用。在一定范围内,随着浓度增加、时间延长,增殖抑制率也增加。5)浓度为2μmol/L的塞来昔布作用各组复合培养细胞模型12h后,IL-1α、IL-1β、IL-2及IL-6的表达水平均不同程度地下降,随着时间的延长,各组IL-1α、IL-1β、IL-2及IL-6的表达水平不断降低。其中12h、24h、36h T+T组IL-1β、IL-2及IL-6的浓度与其他组的浓度差异均有统计学意义(P=0.001,0.008,0.001;0.000,0.002,0.012:0.006,0.012,0.000)。结论本课题在国内首次尝试建立了具有自身免疫特性的TAO体外复合培养细胞模型。无论是TAO患者还是正常人眼眶成纤维细胞和外周血T淋巴细胞复合培养的细胞模型在光镜水平上形态学无明显差异,但超微结构可见代谢增强的改变,T+T组尤为明显。所有组复合培养的细胞模型上清液中均可检测到炎性因子IL-1α、IL-1β、IL-2及IL-6的表达,细胞模型的OFs均可检测到COX-2 mRNA的表达,除IL-6外,均为T+T组最显着。这些代谢增强,炎性因子及炎性反应基因表达的增高均证明了TAO患者的T淋巴细胞有较强的介导炎症反应的活性,复合培养细胞模型显示了明显的自身免疫特性。作为靶向调控应用选择性COX-2抑制剂塞来昔布后,各组的IL-1α、IL-1β、IL-2及IL-6的表达水平均不同程度下降,除IL-6外均为T+T组最明显,证明了这种自身免疫炎症反应的可调控性。另一方面也说明了复合培养细胞模型不仅对于研究T淋巴细胞与OFs的相互作用有重要意义,而且也提供了TAO的自身免疫疾病发病机制的直接证据,为探讨更广泛的临床治疗途径,特别是抗炎药物、T细胞抑制剂、细胞因子拮抗剂等的治疗开辟了新的思路。(本文来源于《中国协和医科大学》期刊2008-05-01）
复合培养细胞模型论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的建立具有自身免疫特性的甲状腺相关眼病(TAO)体外复合培养的细胞模型,通过动态观察和定量测定其炎性因子的表达,以证明眼眶成纤维细胞(OFs)在T淋巴细胞介导下的炎性病变,再应用特异性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂调控炎性反应,从而探讨甲状腺相关眼病细胞学和分子生物学的发病机制,为临床治疗提供新的思路。方法原代培养10例TAO患者及10例正常人的眼眶成纤维细胞,免疫组化法鉴定其性质;尼龙毛吸附+初期固相包被抗体刺激+细胞培养淘汰法纯化、培养20例TAO患者及20例正常人的外周血T淋巴细胞,流式细胞术鉴定其纯度及性质;复合培养后荧光免疫鉴定其性质,透射电镜观察比较其超微结构;ELISA法比较各组培养细胞模型24h、48h、72h炎性细胞因子IL-1α、IL-1β、IL-2及IL-6的表达;实时荧光定量PCR检测各组炎性基因COX-2的表达;所有非自身T淋巴细胞与OFs复合培养的细胞模型,同自身T淋巴细胞与OFs复合培养的细胞模型相同步骤完成以上实验。MTT法比较不同浓度及不同作用时间塞来昔布对复合培养细胞模型中眼眶成纤维细胞增殖的抑制作用;ELISA法比较塞来昔布对各组复合培养细胞模型炎性细胞因子IL-1α、IL-1β、IL-2及IL-6表达的抑制作用。结果1)体外成功培养了眼眶成纤维细胞及外周血T淋巴细胞,建立了TAO复合培养模型;免疫荧光、电镜等未见OFs与自身T淋巴细胞复合培养的细胞模型和OFs与非自身T淋巴细胞复合培养细胞模型有明显形态结构等差别。2)24h复合培养各实验组的IL-1α、IL-1β、IL-2及IL-6的表达均升高,其中T+T组(甲状腺相关眼病患者的T淋巴细胞与患者的眼眶成纤维细胞复合培养组)的IL-1α、IL-1β、IL-2水平升高的最高,与其他各组之间的差异有统计学意义(P=0.001,0.008,0.012);24h时N+N组(正常人的T淋巴细胞与正常人的眼眶成纤维细胞复合培养组)的IL-6水平最高,至72h时N+T组(正常人的T淋巴细胞与甲状腺相关眼病的眼眶成纤维细胞复合培养组)IL-6水平最高,24h、48h、72h各组之间的IL-6浓度差异有统计学意义(P=0.000,0.004,0.001);无论OFs与自身还是非自身T淋巴细胞复合培养的细胞模型,其四种炎性细胞因子的合成及变化均一致。3)TAO患者的OFs COX-2表达量较正常人的高,复合培养细胞模型中T+T组COX-2表达量最高。4)塞来昔布浓度为1μmol/L、2μmol/L、5μmol/L及10μmol/L时对各组OFs均有不等的增殖抑制作用。在一定范围内,随着浓度增加、时间延长,增殖抑制率也增加。5)浓度为2μmol/L的塞来昔布作用各组复合培养细胞模型12h后,IL-1α、IL-1β、IL-2及IL-6的表达水平均不同程度地下降,随着时间的延长,各组IL-1α、IL-1β、IL-2及IL-6的表达水平不断降低。其中12h、24h、36h T+T组IL-1β、IL-2及IL-6的浓度与其他组的浓度差异均有统计学意义(P=0.001,0.008,0.001;0.000,0.002,0.012:0.006,0.012,0.000)。结论本课题在国内首次尝试建立了具有自身免疫特性的TAO体外复合培养细胞模型。无论是TAO患者还是正常人眼眶成纤维细胞和外周血T淋巴细胞复合培养的细胞模型在光镜水平上形态学无明显差异,但超微结构可见代谢增强的改变,T+T组尤为明显。所有组复合培养的细胞模型上清液中均可检测到炎性因子IL-1α、IL-1β、IL-2及IL-6的表达,细胞模型的OFs均可检测到COX-2 mRNA的表达,除IL-6外,均为T+T组最显着。这些代谢增强,炎性因子及炎性反应基因表达的增高均证明了TAO患者的T淋巴细胞有较强的介导炎症反应的活性,复合培养细胞模型显示了明显的自身免疫特性。作为靶向调控应用选择性COX-2抑制剂塞来昔布后,各组的IL-1α、IL-1β、IL-2及IL-6的表达水平均不同程度下降,除IL-6外均为T+T组最明显,证明了这种自身免疫炎症反应的可调控性。另一方面也说明了复合培养细胞模型不仅对于研究T淋巴细胞与OFs的相互作用有重要意义,而且也提供了TAO的自身免疫疾病发病机制的直接证据,为探讨更广泛的临床治疗途径,特别是抗炎药物、T细胞抑制剂、细胞因子拮抗剂等的治疗开辟了新的思路。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
复合培养细胞模型论文参考文献
[1].宋秀钢.动态力学载荷下成骨细胞/3D打印复合支架材料叁维培养模型的研究[D].天津医科大学.2018
[2].施维.甲状腺相关眼病复合培养细胞模型的建立和调控[D].中国协和医科大学.2008