导读:本文包含了乳链菌肽抗性蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:Nisin,抗性蛋白NSR,突变,抗性水平
乳链菌肽抗性蛋白论文文献综述
胡红梅[1]（2010）在《乳链菌肽抗性蛋白突变体的表达对乳链菌肽产量的影响》一文中研究指出乳链菌肽(nisin)是由某些乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)产生的含有34个氨基酸的阳离子抗菌多肽,属于第一类羊毛硫细菌素,可有效抑制包括多种食物腐败菌和病原菌在内的革兰氏阳性菌,并可被人体产生的α-胰凝乳蛋白酶有效降解,对人体安全无毒,是目前唯一大规模商业化应用的高效天然食品防腐剂。在nisin产生菌中,nisin的抗性(免疫)是由nisI编码的脂蛋白(NisI)和nisFEG编码的ABC转运蛋白复合体(NisFEG)共同决定的;然而,在一些不产nisin的L. lactis中,nisin抗性则是由nisin抗性基因(nisin resistance gene, nsr)编码的一个分子量约为35 kDa的nisin抗性蛋白(NSR)决定的。本研究通过基因工程的手段,采用定点突变的方法将nisin抗性基因nsr进行突变,并对突变后的抗性基因编码的蛋白生理功能进行了研究,根据其特有的生理功能又将该突变体蛋白在nisin产生菌中进行克隆与表达。研究取得了如下结果:1) nisin抗性基因nsr的定点突变:对基因nsr编码蛋白NSR的保守结构域进行分析,发现其第236位丝氨酸在所有末端特异性蛋白酶中均保守,可能为其活性中心。因此将NSR第236位丝氨酸突变为丙氨酸(记为NSRS236A)。2)抗性蛋白突变体NSRS236A的生理功能研究:本文构建了表达NSRS236A的L.lactis MG1363重组菌株,用以研究该蛋白的生理功能。Western blot杂交结果显示,和NSR一样,NSRS236A特异性定位于细胞膜上;肽释放实验表明突变体NSRS236A不再具备有降解nisin的功能;表面等离子共振检测表明NSRS236A能与nisin结合。3) NSRS236A的表达对nisin产量的影响:利用nisin抗性蛋白突变体NSRS236A可以结合nisin分子而不会对其行使降解功能的特点,将带有强组成型启动子P59的抗性基因nsrS36A克隆到nisin表达质粒pHJ201上,将重组质粒引入L. lactis NZ9800中,使nsrS36A基因得以表达,比较重组菌株L.lactis NZ9800/pHM582与对照菌株L. lactis NZ9800/pHJ201的生长曲线、对nisin的抗性水平、抑菌活性及nisin产量的差异。结果表明NSRS236A的表达对重组菌的生长速度没有明显的影响,但却能促使重组菌株对nisin的抗性水平提高40%,对指示菌M. flavus NCIB 8166抑菌活性在6h和8h时明显增强,nisin的表达量分别提高1.9倍和27%。本项研究结果突出地表现在:定位于细胞膜上的NSRS236A通过结合细胞表面nisin分子,在细胞表面阻止nisin对自身菌体的破坏,增强了菌体对nisin的抗性水平,提高了nisin的表达量。以上结果说明nisin抗性蛋白突变体NSRS236A的表达可以提高产生菌对nisin的抗性,从而提高nisin产量,为通过基因工程手段提高nisin产量提供了新的途径。(本文来源于《安徽农业大学》期刊2010-06-01）
刘家乐,孙志增,刘一苇,高学玲,钟瑾[2]（2009）在《大肠杆菌重组乳链菌肽抗性蛋白(NSR)的表达纯化及其功能分析》一文中研究指出乳链菌肽(Nisin)是由某些乳酸菌产生的一种阳离子抗菌肽,而Nisin抗性蛋白(Nisin resistance protein,NSR)的表达则使一些非Nisin产生菌获得Nisin抗性。为深入探索NSR的作用机制,本研究在大肠杆菌中表达了去除N末端38个氨基酸残基的NSR(NSRΔ38)与GST的融合蛋白GST-NSRΔ38。通过谷胱甘肽(GSH)亲和层析和GST标签的切除后,得到纯化的NSRΔ38,并测定了该蛋白可能的nisin降解活性。反应产物的抑菌活性测定结果表明被NSRΔ38作用后的Nisin丧失了抑菌活性,而反相高效液相层析(RP-HPLC)分析结果进一步表明这是由NSRΔ38具备Nisin降解活性所造成的。本研究为NSR功能的深入研究奠定了工作基础。(本文来源于《微生物学通报》期刊2009年10期）
刘家乐[3]（2009）在《乳链菌肽抗性蛋白（NSR）突变体在大肠杆菌中的表达纯化及功能研究》一文中研究指出乳链菌肽(Nisin)是某些乳酸菌产生的一种阳离子抗菌肽,而Nisin抗性蛋白(Nisin resistance protein,NSR)的表达则使一些非Nisin产生菌获得Nisin抗性。本实验室前期研究结果表明,作为乳酸乳球菌中第一个被鉴定的末端特异性蛋白酶,NSR是通过降解Nisin使其抑菌活性降低来行使Nisin抗性功能的,其降解位点在Nisin分子的MeLan28(Methyllanthionine,甲基羊毛硫氨酸)和Ser29之间。在此研究基础上,本文进一步对NSR蛋白的结构与功能关系,包括其核心功能区降解Nisin活性及与底物Nisin的结合能力等进行了研究,为深入了解和阐明NSR作为一种末端特异性蛋白酶行使Nisin抗性的作用机制奠定基础。本研究首先是确定NSR行使体外降解Nisin功能的核心功能区域。在对NSR蛋白进行同源序列分析以及二级结构、叁级结构比对的基础上,构建了不同结构域缺失的NSR与谷胱甘肽-S-转移酶(Glutathione-S-transferase, GST)的融合表达载体NSR-TSP、NSR△94、NSR△78、NSR△67、NSR△38,并转化大肠杆菌E. coli BL21。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl 1-thio-β-D-galactopyranoside, IPTG)诱导后,SDS-PAGE分析显示各表达产物均以部分可溶形式存在。经过谷胱甘肽(GSH)亲和柱层析、PreScission蛋白酶切后最终获得电泳纯的NSR不同结构域缺失突变体蛋白。进而通过体外反应系统,检测了各突变体体外降解Nisin的生物功能。反应产物抑菌活性测定结果表明被NSRΔ38作用后的Nisin丧失了抑菌活性,而被NSR-TSP、NSR△94、NSR△78、NSR△67作用后的Nisin没有丧失抑菌活性;反相高效液相层析(RP-HPLC)分析结果进一步表明这是由NSRΔ38具备Nisin降解活性所造成的,而突变体NSR-TSP、NSR△94、NSR△78、NSR△67则不具备Nisin降解活性。为进一步分析NSR不同功能区识别结合底物Nisin的能力,采用相同策略,分别构建了NSR△94、NSR△78、NSR△67、NSR△38第236位丝氨酸突变的截短突变体,并在大肠杆菌中实现了GST融合表达,经过GSH柱层析、PreScission蛋白酶切后获得电泳纯不具降解活性的突变体蛋白。利用表面等离子共振技术(SPR)分别检测了NSRS△27、NSRS△38、NSRS△94突变体在体外对Nisin的结合能力,结果显示NSRS△38、NSRS△94两个突变体结合Nisin的Kd值相同,而NSRS△27结合Nisin的Kd值比NSRS△38及NSRS△94的Kd值高一个数量级,表明了其更强的底物结合能力。(本文来源于《安徽农业大学》期刊2009-06-01）
乳链菌肽抗性蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
乳链菌肽(Nisin)是由某些乳酸菌产生的一种阳离子抗菌肽,而Nisin抗性蛋白(Nisin resistance protein,NSR)的表达则使一些非Nisin产生菌获得Nisin抗性。为深入探索NSR的作用机制,本研究在大肠杆菌中表达了去除N末端38个氨基酸残基的NSR(NSRΔ38)与GST的融合蛋白GST-NSRΔ38。通过谷胱甘肽(GSH)亲和层析和GST标签的切除后,得到纯化的NSRΔ38,并测定了该蛋白可能的nisin降解活性。反应产物的抑菌活性测定结果表明被NSRΔ38作用后的Nisin丧失了抑菌活性,而反相高效液相层析(RP-HPLC)分析结果进一步表明这是由NSRΔ38具备Nisin降解活性所造成的。本研究为NSR功能的深入研究奠定了工作基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
乳链菌肽抗性蛋白论文参考文献
[1].胡红梅.乳链菌肽抗性蛋白突变体的表达对乳链菌肽产量的影响[D].安徽农业大学.2010
[2].刘家乐,孙志增,刘一苇,高学玲,钟瑾.大肠杆菌重组乳链菌肽抗性蛋白(NSR)的表达纯化及其功能分析[J].微生物学通报.2009
[3].刘家乐.乳链菌肽抗性蛋白（NSR）突变体在大肠杆菌中的表达纯化及功能研究[D].安徽农业大学.2009