导读:本文包含了糖氧剥夺模型论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:心肌缺血-再灌注损伤,离体细胞模型,可行性
糖氧剥夺模型论文文献综述
杨桂珍,薛富善,刘亚洋,李慧娴,刘庆[1]（2019）在《乳大鼠心肌细胞糖氧剥夺-营养恢复模型模拟在体缺血/再灌注损伤的可行性研究》一文中研究指出目的乳大鼠心肌细胞糖氧剥夺-营养恢复(OGD-NR)模型是最常用的模拟心肌缺血-再灌注损伤(myocardial ischemiareperfusion injury,MIRI)的离体建模方法之一。但是,至今尚无研究对该模型的可行性进行评估。该实验旨在评价乳大鼠心肌细胞OGD-NR离体心肌细胞模型模拟在体MIRI的可行性。方法将乳大鼠心肌细胞随机分成对照(C)组、模拟缺血(SI)组和模拟缺血再灌注(SIR)组。实验结束时检测细胞形态学、乳酸脱氢酶(LDH)释放情况、叁磷酸腺苷(ATP)水平、活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位(MMP)水平以及炎症因子水平,以评价各组细胞损伤的表型和特点。结果与C组相比,SI组的心肌细胞形态学出现损伤、LDH释放显着增加(P<0.05)、ATP明显降低(P<0.05)、ROS生成增加(P<0.05)、MMP水平降低(P<0.05)。与SI组相比,SIR组的心肌细胞形态学并未进一步恶化,LDH释放明显降低(P<0.05)、ATP水平明显增高(P<0.05)。与SI组相比,相应的SIR组未发生大量ROS生成、MMP坍塌以及过度的炎症反应。结论乳大鼠心肌细胞OGD-NR不能成功模拟在体MIRI的特征,即对发生SI损伤的心肌细胞实施SIR处理后,形态学上未出现进一步的损伤、LDH释放明显降低、ATP明显增高、无大量ROS生成、无MMP坍塌且没有过度炎症反应发生。(本文来源于《中国分子心脏病学杂志》期刊2019年01期）
王毅华[2]（2018）在《柚皮素对神经细胞糖氧剥夺/再灌注模型氧化应激作用影响的实验研究》一文中研究指出目的:为研究柚皮素(NAR)对处于脑缺血再灌注损伤中的神经细胞的保护作用及其可能机制,以SD大鼠为实验对象,采用体外原代大脑皮层神经细胞培养氧糖剥夺/再灌注(oxygen and glucose deprivation/reperfusion,OGD/Rep)模型探索柚皮素干预对处于脑缺血缺氧再灌注损伤的神经细胞在核因子E2相关因子(Nrf2)通路调控的抗氧化应激层面的作用关系,明确柚皮素在脑缺血再灌注损伤的神经保护作用方面的机制。方法:1、将培养好的在对数生长期的大鼠皮层神经元细胞进行免疫荧光染色并进行鉴定。2、将SD大鼠的大脑皮层神经细胞建立OGD/Rep模型。3、用不同浓度NAR干预48h后,检测细胞活性及凋亡情况,检测凋亡相关蛋白Capase-3、bax、bcl-2、CytC在蛋白和基因层面的表达水平。检测各组细胞中ROS、MDA和GSH水平及SOD活性。4、通过转染siRNA-Nrf2、OENrf2干扰Nrf2表达,进行OGD/Rep培养后,给予80μΜ的NAR处理48h后,检测细胞活性及凋亡情况。检测各组细胞ROS、MDA和GSH水平及SOD活性。检测Nrf2蛋白核内转移情况以及Nrf2、Keap1、HO-1和NOQ1蛋白和基因表达水平。结果:1、与正常组比较,模型组神经细胞活性低,凋亡率高(P<0.05),与模型组对比,NAR预处理后,神经细胞的活性提高、凋亡率下降,其中NAR-H组最为显着(P<0.05)。2、与正常组比较,模型组凋亡相关蛋白Capase-3,bax以及CytC的表达上调,而bcl-2表达下调(P<0.05)。与模型组对比,经过NAR预处理后,Capase-3,bax以及CytC的表达下调,而bcl-2表达上调,其中NAR-H组最为显着(P<0.05)。3、经过NAR预处理OGD/Rep模型神经细胞可上调SOD1、GSH水平,下调ROS、MDA水平。4、与模型组比较,NAR组和转染OENrf2组神经细胞活性更高,凋亡率更低(P<0.05);而转染Nrf2-siRNA组则相反(P<0.05)。5、与模型组比较,NAR组和转染OENrf2组SOD、GSH水平升高,ROS、MDA则水平下降(P<0.05);而转染Nrf2-siRNA组则无明显差异(P>0.05)。6、与模型组比较,NAR组和转染OENrf2组的神经细胞胞浆中Nrf2蛋白的表达水平高于细胞核内,(P<0.05);而转染Nrf2-siRNA组则相反(P<0.05)。7、NAR可上调Nrf2通路下游蛋白Nrf2、Keap1、HO-1和NOQ1的表达。结论:柚皮素可通过激活Nrf2介导的抗氧化途径,对培养氧糖剥夺/再灌注模型的神经细胞具有保护作用。(本文来源于《广西中医药大学》期刊2018-03-04）
李钊,程树彬,郭彦芳,李世平,董梅[3]（2017）在《器官型脑片糖氧剥夺模型的建立》一文中研究指出目的在大脑皮质器官型脑片的基础上复制氧糖剥夺模型(OGD),模拟脑缺血损伤病理变化。方法采用膜插件方法制备大脑皮质器官型脑片,将脑片进行OGD干预后复氧复糖。观察不同时间点的碘化丙啶(PI)染色。结果实验组OGD前后PI染色荧光强度值有明显变化,各时间点荧光强度依次增强,与对照组对比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论器官型脑片OGD模型模拟了缺血性脑损伤的病理变化,操作方便,可以作为研究缺血性脑血管病发病机制及治疗的模型。(本文来源于《脑与神经疾病杂志》期刊2017年11期）
孟赞,唐勇,彭彦[4]（2016）在《构建糖氧剥夺模型大鼠少突胶质细胞体外培养与分离纯化》一文中研究指出目的:对原有少突胶质细胞祖细胞培养与分离纯化方法进行改进,以简单、高效获得少突胶质细胞并建立少突胶质细胞糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)模型。方法:取SD乳鼠脑皮质,采用两种不同的细胞增殖法和两种不同的分离纯化法分四组培养,分别为细胞因子增殖联合摇床震荡分离纯化法组,B104CM增殖联合摇床震荡分离纯化法组,细胞因子增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化法组,B104CM增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化法组。倒置显微镜下观察神经细胞形态学变化并进行细胞计数。A2B5和髓鞘碱性蛋白鉴定少突胶质细胞并分析其纯度。纯化后的少突胶质细胞祖细胞分化培养3 d后分四组培养,正常组正常培养,低氧组分叁组,换无糖DMEM培养基,OGD 1、2、3 h。然后采用MTT比色法检测细胞活力;流式细胞术分析细胞的凋亡率。结果:(1)B104CM增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化法较其他3种培养方法收获的少突胶质细胞祖细胞数量多(P<0.05)。(2)A2B5和MBP特异性标记,细胞纯度可达到95%。(3)MTT结果显示:OGD 1 h少突胶质细胞的细胞活力即降低(P<0.05),随着缺氧时间延长细胞活力呈降低的趋势更加明显(P<0.05)。(4)流式细胞测细胞凋亡的结果显示:OGD 1 h、2 h、3 h,细胞的凋亡率分别为14.43%±0.20%,21.99%±0.42%和44.71%±0.20%,均高于正常对照组(6.86%±0.05%,P<0.05)。结论:(1)B104CM增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化培养法与其他叁种方法比较实验操作简单,收获的少突胶质细胞祖细胞数量最多,可用于少突胶质细胞的培养。(2)OGD可致少突胶质细胞损伤,且与OGD持续时间密切相关,实验成功的建立OGD损伤模型。(本文来源于《神经解剖学杂志》期刊2016年05期）
李世平,董梅,郭彦芳,程树彬,张祥建[5]（2016）在《NBP对器官型脑片糖氧剥夺模型中细胞凋亡的影响》一文中研究指出目的观察正丁基苯酞(NBP)对乳大鼠大脑皮质器官型脑片的氧糖剥夺模型(OGD)中细胞凋亡和线粒体电位的影响。方法建立SD乳鼠大脑皮质运动区的器官型脑片,SMI-32染色观察锥体细胞。2 w后,随机分为对照组(C组)和实验组(T组),T组在OGD干预30 min后给予不同剂量NBP,分为T0、T0.01、T0.1、T1、T10组,给NBP前和后1 h观察PI染色;选择T0组、T10组,观察两组在OGD 30 min、NBP 1 h、24 h、72 h、7 d等不同时间点PI染色变化。于NBP后1 h各T组进行JC-1线粒体膜电位检测。结果器官型脑片OGD 30 min给予NBP 1 h后,C组和各T组PI染色可见不同亮度红色荧光,各T组荧光强度均大于C组,荧光强度与NBP浓度(0~10μmol/L范围内)呈负相关,各T之间组及与C组相比差异有显着性(P<0.05);T0组和T10组在OGD 30 min均出现明显细胞凋亡,两组无显着性差异。复氧复糖后随时间延长T0组细胞凋亡增加,T10组逐渐减少,差异显着(P<0.05);C组和各T组JC-1线粒体检测试剂盒染色可见OGD 30 min,复氧复糖1 h后,红色荧光/绿色荧光(R/G)的值明显减小,R/G的值与NBP浓度呈正相关,各T组R/G值均小于C组,差异显着(P<0.05)。结论 OGD模型可模拟缺血性脑损伤的病理变化,重复性良好;NBP对缺血性脑损伤导致的急性和迟发性细胞凋亡均具有保护作用;NBP对脑片损伤后线粒体电位的耗散有阻止作用,且与剂量相关。(本文来源于《中风与神经疾病杂志》期刊2016年01期）
付佩彩,黄珊珊,唐荣华,赵东明[6]（2015）在《大鼠少突胶质前体细胞(OPCs)纯化培养及糖氧剥夺(OGD)模型的建立》一文中研究指出目的建立大鼠脑少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)分离纯化培养及糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)模型。方法出生3d内的SD大鼠乳鼠取脑,经胰蛋白酶消化法培养混合胶质细胞,混合培养10d后,震摇及差速贴壁法分离纯化OPCs,纯化培养3d后鉴定、诱导分化OPCs为少突胶质细胞(oligodendrocyte,OL)及进一步OGD干预。免疫荧光法鉴定OPCs纯度及分化为OL的能力;MTT法检测OGD(37℃,1%O2,5%CO2)干预0.5h、1h、2h及4h时细胞活力改变,Edu染色检测细胞增殖情况。结果免疫荧光显示纯化培养的OPCs 95%以上表达NG2+A2B5,且可分化为MBP阳性的OL。OGD 2h时,MTT显示细胞活力明显下降,Ed U染色阳性率明显降低。结论震摇及差速贴壁法可获得高纯度的OPCs,且细胞具有分化为OL的能力。2h可作为OPCs OGD模型缺血缺氧损伤合适时间。(本文来源于《中国组织化学与细胞化学杂志》期刊2015年05期）
高筱雅,潘速跃,黄建欧,胡亚芳,顾勇[7]（2014）在《体外培养原代皮质神经元糖氧剥夺/复糖复氧模型筛选与亚低温有联合作用的神经保护剂》一文中研究指出保护缺血半暗带区细胞是大面积脑梗死治疗的主要目标。目前的神经保护剂在临床转化方面均遇到了障碍,这是由于一种药物靶点过于单一,不能对复杂的缺血级联产生有效应的结果。治疗性低温用于治疗脑梗死疗效有限,并且还有许多副作用。因此,有必要联合应用有效的神经保护剂和亚低温(HT)以改善脑梗死的疗效。目的筛选与HT有协同作用的神经保护剂,并验证联合(本文来源于《中华医学会第十七次全国神经病学学术会议论文汇编（下）》期刊2014-09-18）
高筱雅[8]（2014）在《体外培养原代皮质神经元重度糖氧剥夺/复糖复氧模型筛选与亚低温有联合作用的神经保护剂的研究》一文中研究指出研究背景中国脑血管病年均发病率为193-779/10万,死亡率81-441/10万不等,已经成为中国第一位的死因和致残原因。缺血性脑血管病——脑梗死占脑血管病的大多数,其中大面积脑梗死的死亡率可高达80%,且绝大部分导致严重残疾。脑血管病的高发病率、高致死率、高致残率,给社会和家庭带来沉重的负担。如何降低大面积脑梗死的致残率和致死率是目前研究的热点和难点。脑缺血后神经细胞的损害是一系列缺血级联效应的后果,包括线粒体功能紊乱、细胞内钙超载、高钠和低K+、ROS和NO生成增加、兴奋性氨基酸毒性、炎性因子及粘附分子释放增加、微血管阻塞、血脑屏障破坏、Caspase蛋白家族的级联激活等。在梗死后几分钟到几天,不同的病理过程在时间上互相重迭并起到推波助澜的作用。脑梗死病变区按缺血的程度可分为缺血核心区和缺血半暗带区。核心区内细胞因完全缺血、过度激活的兴奋性神经递质／受体的毒性等致使细胞在几分钟内死亡。缺血半暗带区的细胞因缺血后周边侧枝循环的再灌注,还有存活的可能。由于再灌注时间窗只有4.5h,许多患者就诊时核心区的细胞已不可逆死亡,因此靶向干预缺血半暗带区是目前实验研究和临床治疗的主要目标。在脑保护治疗中,治疗性低温是目前被临床证明有效的脑保护措施之一。亚低温通常指28～35℃,而临床广泛应用的是33-314℃。亚低温在颅脑外伤、心肺复苏后缺血缺氧性脑病和新生儿窒息的治疗中都取得了卓着的成绩。但是,亚低温在脑梗死治疗方面的应用近年才刚刚起步,实验室及临床的证据尚不充足。我们前期的研究表明,亚低温可以缩小MCAO大鼠的梗死灶面积,但是神经功能评分并没有随之改善,因此需要进一步采取措施提高疗效。此外,亚低温治疗也有许多副作用,如寒战,过度镇静抑制呼吸功能,以及长时间亚低温使肺部感染、下肢深静脉血栓等并发症发生率增加等等。因此,有必要联合应用有协同作用的药物,以进一步改善亚低温治疗的效果,改善脑梗死的预后。目前有报道在体外或体内实验中具有神经保护作用的药物很多,从其作用机制来看,包括谷氨酸受体阻滞剂、Y-氨基丁酸受体激动剂、钙离子拮抗剂、自由基清除剂、抗生素和免疫抑制剂、生长因子类、5-羟色胺受体激动剂、膜成分及其稳定剂、脑代谢剂、神经肽类、抗糖尿病药物、激素类、中成药及各种新药等。但是,这些药物在临床转化方面均遇到了障碍。究其原因,除了动物实验设计缺陷、种族差异、药物疗效不够显着、临床应用时机大多晚于实验研究、副作用过大等之外,还因为脑梗死后的损害涉及到多个相互关联、互相重迭的病理机制,而一种药物仅仅作用于缺血级联的一个或某几个环节,作用靶点过于单一,不能对缺血级联产生有效应的结果。基于脑梗死病理机制的复杂性和多样性,联用多种有协同作用的药物或治疗方法有可能取得突破性的效果,如联合非药物性神经保护手段——治疗性低温。在亚低温与神经保护剂联合应用方面国内外均有所涉猎。国内外和我们前期的研究都证实,某些药物如硫酸镁、脑源性神经生长因子等,在与亚低温联用治疗实验动物脑梗死时表现出协同效应。但是,目前国内外尚未有研究对现有的神经保护剂与亚低温联用的疗效进行过系统的筛选。我们根据神经保护剂的作用机制、可获得性、毒性、易用性等特点选取了26种神经保护剂纳入研究。与动物模型和人体实验相比,体外糖氧剥夺／复糖复氧(OGD/R)模型可在体外模拟不同程度的缺血／再灌注状态,实验条件更一致,并能进行高通量的单药或复合药物筛选,耗时耗资少,具有动物模型及人体实验不可比拟的优越性；而神经元细胞是脑组织中的主要细胞,其预后决定了脑组织的总体预后,因此我们首先建立了原代皮质神经元的重度OGD/R模型,然后利用这一模型对26个神经保护剂与亚低温的联合作用进行了筛选。我们选取了细胞活力和凋亡率作为药物筛选的两个主要指标,前者反映活细胞数目的多少,后者反映细胞受损伤的程度。此外,脑梗死后的缺血级联过程中与神经元细胞有关的几个主要环节包括：细胞内钙超载、线粒体膜电位下降、ROS生成、NO生成、Caspase-3的激活,因此我们进一步验证了筛选出的药物与亚低温联合治疗对这些环节的保护作用。研究目的：(1)利用体外培养原代皮质神经元重度OGD/R细胞模型筛选与亚低温具有协同作用的神经保护剂；(2)在原代皮质神经元的体外重度OGD/R模型中,进一步验证联合应用神经保护剂和亚低温对缺血再灌注级联反应的各个环节的保护作用。研究方法：(1)体外培养原代皮质神经元,免疫组化神经元特异标记物β-Tubulin Ⅲ染色鉴定神经元细胞纯度。(2)建立原代皮质神经元体外重度OGD/R模型,体外模拟重度脑缺血／再灌注状态。体外培养原代皮质神经元随机分成5组：OGD1.5h、OGD3h、 OGD4.51h、OGD6h及正常对照组,每组4瓶细胞。OGD各组分别给予OGD1.5h、OGD3h、OGD4.5h. OGD6h后复糖复氧,正常对照组不予处理,48小时后采用Tunnel法测定细胞凋亡率,根据凋亡率选择适当的糖氧剥夺时间作为模型干预时间。(3)确立原代皮质神经元体外重度OGD/R后的最佳亚低温(HT)治疗方案。体外培养原代皮质神经元随机分成10组：HT33℃1.5h.HT33℃3h. HT33℃4.5h.HT33℃6h.HT34℃1.5h.HT34℃3h.HT34℃4.5h. HT34℃6h、OGD/R对照组及正常对照组,每组4瓶细胞。除正常组外所有组给予OGD4.5h后复糖复氧,然后各治疗组采用不同的亚低温水平和时间进行干预：33℃1.5h、33℃3h、33℃4.5h、33℃6h、34℃1.5h、34℃3h.34℃4.5h、34℃6h,OGD/R对照组不予处理,48小时后采用Tunnel法测定细胞凋亡率,以细胞凋亡率最低的亚低温水平和时间作为最佳亚低温治疗方案。(4)筛选神经保护剂的最佳工作浓度：将原代皮质神经元细胞随机分为3-5组,每组6个复孔,给予OGD/R后采用不同剂量的神经保护剂进行治疗,CCK-8试剂盒检测细胞活力,采用细胞活力改变率(ΔCV%)衡量神经保护剂对神经元的保护作用,选取细胞活力改变率最低的药物浓度作为下一步实验时的工作浓度。(5)筛选与亚低温有联合作用的神经保护剂：将原代皮质神经元细胞随机分为5组,神经保护剂组、HT组、神经保护剂+HT组、OGD/R对照组及正常对照组,每组6个复孔(测细胞活力)或4个瓶(测细胞总凋亡率)。除正常组外各组给予OGD4.5h复糖复氧,然后分别给予神经保护剂、HT、神经保护剂+HT治疗,OGD/R对照组不予任何治疗,正常对照组正常培养,采用CCK-8试剂盒检测细胞活力变化率,Annexin V/PI双染色流式细胞仪检测细胞总凋亡率(早期+晚期凋亡率),筛选出与亚低温联用时对细胞活力变化率和总体凋亡率均有联合保护作用的药物。(6)验证神经保护剂与亚低温对缺血级联的主要环节的联合保护作用：将皮质神经元随机分成5组：神经保护剂组、HT组、神经保护剂+HT组、OGD/R对照组及正常对照组,每组4瓶细胞。除正常组外各组给予OGD4.5h复糖复氧,然后分别给予神经保护剂、HT、神经保护剂+HT治疗,OGD/R对照组不予任何治疗,正常对照组正常培养,JC-1染色流式细胞仪测定线粒体膜电位,DCF-DA染色多功能酶标仪测定线粒体ROS生成,FLUO-3染色流式细胞仪测定细胞内钙离子浓度,DAF-FM DA染色流式细胞仪检测细胞内NO水平,及Western Blot测定Caspase3表达。统计分析采用随机数法进行分组,用均数士标准差(x±S)描述统计值。用IBM SPSS (Version20.0,USA)软件分析。析因设计先采用析因分析来分析两因素间交互作用,并绘出交互作用图,然后采用两独立样本的t检验来分析各因素的单独效应；多组间两两比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),方差齐的数据用LSD-t检验进行多重比较,方差不齐的数据用Games-Howell检验进行多重比较。P<0.05认为有统计学意义。研究结果(1)原代皮质神经元胞浆和突触被anti-β-Tubulin Ⅲ染色呈红色荧光,胞核被DAPI染色呈蓝色荧光,体外培养原代皮质神经元纯度为97.31±0.831%(2)随着糖氧剥夺时间的延长,原代皮质神经元TUNEL染色阳性率逐渐增高,OGD1.5h、3h、4.5h、6h分别为9.048±3.128%、25.383±5.492%、45.217±20.778%和74.524±11.199%。OGD1.5h组凋亡率与正常对照(5.117±4.157)没有差异,其他各组间均有差异(F=79.986,P=0.000)。OGD6h尽管凋亡率高达74.52±11.199%,但总细胞数也明显减少,因此选择OGD4.5h作为体外原代皮质神经元重度OGD/R模型的干预时间。(3)亚低温水平和亚低温时程之间存在交互作用,交互作用对细胞凋亡率有影响(F=4.108,P=0.009); OGD/R后细胞凋亡率较正常对照组显着增高,从2.659±1.613%增加至58.227±9.773%(t=19.433,P=0.000)；在OGD/R后给予亚低温治疗,34℃亚低温4.5h凋亡率最低(15.390±3.343%),与其他各组差异有统计学意义(34℃1.5h:38.886±9.982%,3h:25.253±5.769%,6h:42.938±9.266%;33℃1.5h:40.771±11.723%、3h:35.895±7.122%、4.5h:27.752±7.654%、6h:39.825±12.228%)(F=22.374, P=0.000)(方差不齐,采用单因素ANOVA检验Games-Howell法)。原代皮质神经元重度OGD/R模型最佳亚低温治疗水平为34℃,最佳亚低温时间为4.5h。(4)筛选出26个神经保护剂的最佳工作浓度：白蛋白：5%(F=28.805,P=0.000)；阿托伐他汀：0.1μM(F=9.996,P=0.002);氯苯氨丁酸：10μM(F=128.964, P=0.000); BDNF human:25ng/ml(F=13.812, P=0.000);布美他尼：50μM(F=7.220, P=0.006);胞磷胆碱：100mM(F=108.716, P=0.000); CsA:0.01μM(F=4.383, P=0.032);8-OH-DPAT:100μM(F=96.434, P=0.000);去铁敏：100μM (F=17.072, P=0.000);依达拉奉：100μM(F=85.527, P=0.000);格列苯脲：μM(F=34.426,P=0.000);格列齐特：10μM(F=113.337, P=0.000); GM1:1μM(F=10.804, P=0.001); HUK:0.0015PNA/ml(F=20.374, P=0.000); MgSO4:3mM(F=66.204, P=0.000);米诺环素：0.1μM(F=16.638, P=0.000); MK-801:10μM(F=8.469, P=0.003);甲强龙：10μM(F=11.968, P=0.001); Ngb:50nM(F=16.194, P=0.000);尼莫地平：10μM(F=3.281, P=0.066); NXY-059:250mM(F=5.821, P=0.013);孕酮：0.1pM(F=0.565, P=0.580);利鲁唑：100mM(F=8.506, P=0.003);丙酮酸钠：10μM(F=36.500, P=0.000); α-生育酚：1μM(F=79.606, P=0.000); VAS2870:2μM(F=19.489, P=0.000)=(5) OGD/R后神经元的细胞活力显着降低,随着细胞状态、细胞数的不同,细胞活力下降35-70%不等(t=-64.754～-16.003, P=0.000)0联用亚低温与baclofen(F=8.685, P=0.008)、BUM(F=37.521, P=0.000)、CDPC(F=14.148, P=0.001)、DPAT(F=5.576,P=0.028)、依达拉奉(F=17.712,P=0.000)、格列齐特(F=27.411, P=0.000)、GM1(F=51.121, P=0.000)、MP(F=26.277, P=0.000)、尼莫地平(F=6.404,P=0.020)、丙酮酸(F=10.279,P=0.004)对△CV%有影响。单独效应分析：5个药物：BDNF、格列苯脲、]HUK、MK-801、Ngb与亚低温联用可降低ΔCV%,较单用亚低温(BDNF:t=7.043, P=0.000; GBC:t=2.650, P=0.024; HUK:t=3.600, P=0.009; MK-801:t=5.518, P=0.000; Ngb:t=5.509, P=0.000)或单用药物更佳(BDNF:t=5.507, P=0.000; GBC:t=2.553, P=0.044; HUK:t=3.563, P=0.006; MK-801:t=8.853, P=0.000; Ngb:t=7.282, P=0.000)。(6) OGD/R后细胞总凋亡率从12.138±0.658%增加至26.430±1.706%(t=-15.633, P=0.000),5个药与亚低温均对总凋亡率有交互作用,HUK、NGB、GBC与亚低温的交互作用对总凋亡率有影响(F=47.458,15.572,9.504；P=0.000,0.002,0.002)。单独效应分析：HUK、MK-801和Ngb与亚低温联用时可降低总凋亡率至13.108±1.006%、15.508±0.938%和11.138±0.893%,比单用亚低温(24.933±1.822%)(HUK:F=11.360, P=0.000; MK-801:F=9.196, P=0.000; Ngb:F=13.595, P=0.000)或药物(HUK:26.270±2.055; MK801:18.725±1.292%; Ngb:18.175±1.181%)(HUK: F=11.504, P=0.000; MK801:F=4.031, P=0.008;Ngb:F=9.504, P=0.000)更佳。(7) OGD/R后线粒体膜电位下降的细胞比例从正常16.703±0.546%升高到31.880±1.877%(t=15.531, P=0.000)。 MK-801和Ngb与亚低温有交互作用；MK-801或Ngb与亚低温的交互作用对OGD/R后神经元的MMP有影响(F=42.474,8.188;P=0.000,0.014)。单独效应分析：联用HUK, MK-801,或Ngb和亚低温降低MMP至12.848±0.448%,13.183±0.613%和19.443±0.706%,较单用药物(HUK:18.130±0.717%, MK-801:20.973±0.423%, Ngb:32.198±1.235%)(HUK:F=12.495, P=0.000; MK-801: F=20.911, P=0.000; Ngb:F=17.933, P=0.000)或亚低温(27.165±0.737%)为佳(HUK:F=33.213,P=0.000; MK-801:F=29.176, P=0.000; Ngb:F=15.138,P=0.000)。(8) OGD/R后神经元ROS相关ODs值自正常19.639±2.688升高达201.596±3.939(t=-93.452, P=0.000); MK-801和Ngb与亚低温均对ROS有交互作用；联用HUK、MK-801或Ngb与亚低温对ROS生成皆有影响(F=858.166,285.321,973.659; P=0.000)。单独效应分析：联用HUK. MK-801、Ngb和亚低温显着减少ROS依赖性ODs至29.542±2.604,31.712±3.328和33.270±4.458,优于单用药物(HUK:56.63±7.815, MK-801:89.363±11.731, Ngb:69.022±4.667)(F=8.055,11.581,13.569; P=0.000)或亚低温(48.377±5.279)(F=7.839,6.542,5.356; p=0.000)。(9)正常原代皮质神经元细胞内[Ca2+]i依赖性Fluo-3/AM平均荧光强度为1693.000±23.678, OGD/R后增高达3104.250±90.112(t=-30.294, P=0.000); HUK或Ngb与亚低温有交互作用。联合HUK或Ngb与亚低温对[Ca]i浓度依赖性平均荧光强度有影响(F=18.743,45.911；P=0.001,0.000)。单独效应分析：联用HU、MK-801、Ngb和亚低温显着减少Geo Mean到1817.500±51.157,1794.250±26.837和2212.750±23.908,优于单用药物(HUK:2339.250±47.822,MK-801:2561.000±34.186和Ngb:2576.250±73.781)(F=14.901,35.284,9.374; P=0.000)或亚低温(2330.500±22.986)(F=18.294,30.352,7.101; p=0.000)。(10)正常细胞内NO平均荧光强度(Geo Mean)为1146.500±73.831, OGD/R显着增加细胞内NO的生成达1374.250±110.328(t=-3.431,P=0.017)。叁种药物与亚低温对NO相关平均荧光强度均有交互作用；联用叁种药物与亚低温均对NO相关平均荧光强度无影响(HUK:F=0.310, P=0.588; MK-801: F=1.555, P=0.593; Ngb:F=0.302, P=0.236). Ngb (1253.250±100.590)或者Ngb与亚低温联用(1180.500±76.116)均可降低NO生成,联用较单用亚低温(1352.750±82.140)效果为佳(t=3.076,P=0.022),但并不优于单用Ngb(t=1.153, P=0.296)。其余治疗对NO均无影响(P>0.05)。(11)叁种药物与亚低温联用可增加OGD/R后原代皮质神经元Caspase3的表达,较单用亚低温或单用药物更佳。结论联合应用HUK、Ngb、MK-801与亚低温对体外培养OGD/R后的皮质神经元细胞活力及凋亡率有保护作用,并且抑制线粒体凋亡途径的多个环节：减少ROS生成、细胞内钙超载、线粒体膜电位下降以及Caspase-3的激活。(本文来源于《南方医科大学》期刊2014-05-01）
董梅,李震中,郭书英,吴冰洁,李世平[9]（2014）在《器官型脑片糖氧剥夺模型建立及NBP对模型中细胞凋亡的影响》一文中研究指出目的建立大脑皮层器官型脑片氧糖剥夺模型(OGD),观察丁苯酞(NBP)对细胞凋亡和线粒体电位的影响。方法以出生后7天(P7)SD乳鼠制备器官型脑片,于1、2、3、4w进行SMI-32染色,观察锥体细胞发育。2w后随机分为对照组(C组)和实验组(T组,0、0.01μM、0.1μM、1μM、10μM),更换含PI(1μg/ml)培养液孵育并拍照;T组采用厌氧罐氧剥夺,更换无糖培养液(含PI),OGD(本文来源于《中国脑血管病大会2014论文汇编》期刊2014-03-27）
郭彦芳[10]（2012）在《器官型脑片糖氧剥夺模型的建立及NBP对此模型细胞凋亡的影响》一文中研究指出目的：建立大脑皮层器官型脑片的氧糖剥夺模型（Oxygen andGlucose Deprivation,OGD），并在此基础上观察正丁基苯酞（NBP）对细胞凋亡和线粒体电位的影响。方法：选择出生后5-7天（P5-7）的SD(Sprague Dawley)乳大鼠，制备大脑皮层运动区的器官型脑片，采用膜插件的方法进行体外培养，观察其形态，并分别于1w，2w，3w，4w时间点进行SMI-32染色，观察其中的锥体细胞发育并进行计数。2周后，随机分为对照组（C组）和实验组（T0，T0.01，T0.1，T1，T10组），每组九片，更换含Propidium iodide（PI，1μg/ml）的培养液，孵育20min，倒置荧光显微镜下拍照（4X，曝光时间1.038ms，灵敏度ISO1600）后T组采用厌氧罐氧剥夺，更换无糖培养液（含PI）的方式，进行OGD干预30min，后依次更换含不同剂量NBP（0，0.01，0.1，1，10μM）的正常糖含量培养液（含PI），C组与T组同一时间更换正常培养液。分别在干预前和恢复正常条件1小时后，观察PI染色。并根据实验结果，选择T0组和T10组，分别在不同时间点(OGD30min，NBP1h，24h，72h，7d)同样条件下拍照。另外C组和T组，进行OGD和NBP干预（培养液不添加PI），于1h进行JC-1线粒体检测试剂盒检测线粒体膜电位的变化。结果：1脑片在体外培养存活良好，无明显的坏死区域，镜下观察可见脑片体积逐渐增大，变薄，透光度增加，皮层和皮层下结构分界清晰，1、2、3、4周的脑片，进行SMI-32免疫组化染色，可见SMI-32阳性的细胞排列整齐，每个细胞有一个长的顶树突伸向皮层，并维持稳定的数目；2OGD前后PI染色荧光强度值有明显变化，并在恢复正常糖氧供应条件后，仍有持续增强，在72h和7d时的观察值明显的升高，各时间点之间及与正常对照组相比均存在明显差异，差异具有统计学意义（P<0.05）；3器官型脑片OGD30min后，对照组（C组）和实验组（T0，T0.01，T0.1，T1，T10组），PI染色可见不同亮度的红色荧光，与正常对照组相比，实验组各亚组的荧光强度均大于对照组，各组红色荧光强度依次增强，与NBP浓度（0-10μM范围内）呈负相关，实验组与对照组及实验组各亚组之间差异均有统计学显着性（P<0.05）；4T0组和T10组，分别观察不同时间点（OGD30min，NBP+再灌注1h，24h，72h，7d）PI染色，可见两组在OGD30min后均出现了明显的细胞凋亡，两组无显着性差异。T0组随时间的延长细胞凋亡明显增加，在72h和7d时的观察值明显的升高。然而NBP组随时间的延长，PI染色逐渐减少，各组之间的差异均具有统计学意义（P<0.05）；5对照组（C组）和实验组（T0，T0.01，T0.1，T1，T10组）（培养液不添加PI），JC-1线粒体检测试剂盒染色可见OGD30min，复氧复糖1h后，红色荧光/绿色荧光（R/G）的值明显减小，R/G的值与NBP浓度呈正相关，实验组各亚组的R/G的值均小于对照组，实验组与对照组及实验组各亚组之间差异均有统计学显着性（P<0.05）；结论：1SD大鼠P5-7乳鼠可以作为体外脑片培养的供体；2体外培养的大脑皮层器官型脑片具有与体内类似的细胞结构，锥体细胞分布，可以作为研究外界刺激对皮层神经元影响的各种模型制作的平台；3OGD模型操作方便，能够诱导脑片损伤，出现细胞的急性死亡和迟发性凋亡，模拟了缺血性脑损伤的病理变化，重复性良好；4NBP对缺血性脑损伤导致的急性和迟发性细胞凋亡均具有保护作用，且有明显的量效关系，但不能完全阻断这两种凋亡的发生；5脑片损伤后线粒体电位的耗散在早期已经出现，与迟发性细胞凋亡的发生相关，NBP对线粒体电位的耗散有阻止作用，且与NBP浓度存在量效关系。(本文来源于《河北医科大学》期刊2012-03-01）
糖氧剥夺模型论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:为研究柚皮素(NAR)对处于脑缺血再灌注损伤中的神经细胞的保护作用及其可能机制,以SD大鼠为实验对象,采用体外原代大脑皮层神经细胞培养氧糖剥夺/再灌注(oxygen and glucose deprivation/reperfusion,OGD/Rep)模型探索柚皮素干预对处于脑缺血缺氧再灌注损伤的神经细胞在核因子E2相关因子(Nrf2)通路调控的抗氧化应激层面的作用关系,明确柚皮素在脑缺血再灌注损伤的神经保护作用方面的机制。方法:1、将培养好的在对数生长期的大鼠皮层神经元细胞进行免疫荧光染色并进行鉴定。2、将SD大鼠的大脑皮层神经细胞建立OGD/Rep模型。3、用不同浓度NAR干预48h后,检测细胞活性及凋亡情况,检测凋亡相关蛋白Capase-3、bax、bcl-2、CytC在蛋白和基因层面的表达水平。检测各组细胞中ROS、MDA和GSH水平及SOD活性。4、通过转染siRNA-Nrf2、OENrf2干扰Nrf2表达,进行OGD/Rep培养后,给予80μΜ的NAR处理48h后,检测细胞活性及凋亡情况。检测各组细胞ROS、MDA和GSH水平及SOD活性。检测Nrf2蛋白核内转移情况以及Nrf2、Keap1、HO-1和NOQ1蛋白和基因表达水平。结果:1、与正常组比较,模型组神经细胞活性低,凋亡率高(P<0.05),与模型组对比,NAR预处理后,神经细胞的活性提高、凋亡率下降,其中NAR-H组最为显着(P<0.05)。2、与正常组比较,模型组凋亡相关蛋白Capase-3,bax以及CytC的表达上调,而bcl-2表达下调(P<0.05)。与模型组对比,经过NAR预处理后,Capase-3,bax以及CytC的表达下调,而bcl-2表达上调,其中NAR-H组最为显着(P<0.05)。3、经过NAR预处理OGD/Rep模型神经细胞可上调SOD1、GSH水平,下调ROS、MDA水平。4、与模型组比较,NAR组和转染OENrf2组神经细胞活性更高,凋亡率更低(P<0.05);而转染Nrf2-siRNA组则相反(P<0.05)。5、与模型组比较,NAR组和转染OENrf2组SOD、GSH水平升高,ROS、MDA则水平下降(P<0.05);而转染Nrf2-siRNA组则无明显差异(P>0.05)。6、与模型组比较,NAR组和转染OENrf2组的神经细胞胞浆中Nrf2蛋白的表达水平高于细胞核内,(P<0.05);而转染Nrf2-siRNA组则相反(P<0.05)。7、NAR可上调Nrf2通路下游蛋白Nrf2、Keap1、HO-1和NOQ1的表达。结论:柚皮素可通过激活Nrf2介导的抗氧化途径,对培养氧糖剥夺/再灌注模型的神经细胞具有保护作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
糖氧剥夺模型论文参考文献
[1].杨桂珍,薛富善,刘亚洋,李慧娴,刘庆.乳大鼠心肌细胞糖氧剥夺-营养恢复模型模拟在体缺血/再灌注损伤的可行性研究[J].中国分子心脏病学杂志.2019
[2].王毅华.柚皮素对神经细胞糖氧剥夺/再灌注模型氧化应激作用影响的实验研究[D].广西中医药大学.2018
[3].李钊,程树彬,郭彦芳,李世平,董梅.器官型脑片糖氧剥夺模型的建立[J].脑与神经疾病杂志.2017
[4].孟赞,唐勇,彭彦.构建糖氧剥夺模型大鼠少突胶质细胞体外培养与分离纯化[J].神经解剖学杂志.2016
[5].李世平,董梅,郭彦芳,程树彬,张祥建.NBP对器官型脑片糖氧剥夺模型中细胞凋亡的影响[J].中风与神经疾病杂志.2016
[6].付佩彩,黄珊珊,唐荣华,赵东明.大鼠少突胶质前体细胞(OPCs)纯化培养及糖氧剥夺(OGD)模型的建立[J].中国组织化学与细胞化学杂志.2015
[7].高筱雅,潘速跃,黄建欧,胡亚芳,顾勇.体外培养原代皮质神经元糖氧剥夺/复糖复氧模型筛选与亚低温有联合作用的神经保护剂[C].中华医学会第十七次全国神经病学学术会议论文汇编（下）.2014
[8].高筱雅.体外培养原代皮质神经元重度糖氧剥夺/复糖复氧模型筛选与亚低温有联合作用的神经保护剂的研究[D].南方医科大学.2014
[9].董梅,李震中,郭书英,吴冰洁,李世平.器官型脑片糖氧剥夺模型建立及NBP对模型中细胞凋亡的影响[C].中国脑血管病大会2014论文汇编.2014
[10].郭彦芳.器官型脑片糖氧剥夺模型的建立及NBP对此模型细胞凋亡的影响[D].河北医科大学.2012
标签：心肌缺血-再灌注损伤; 离体细胞模型; 可行性;