导读:本文包含了眼镜蛇毒细胞毒素论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:细胞毒素-1,肝纤维化,增殖,凋亡
眼镜蛇毒细胞毒素论文文献综述
张学荣,王秀男,廖明,宋天麟,农君[1]（2019）在《眼镜蛇毒细胞毒素-1选择性抑制HSC-LX2细胞的研究》一文中研究指出目的通过层析法从眼镜蛇毒中分离高纯度高生物活性细胞毒素-1 (CTX-1),以人肝正常细胞(HL7702)为对照探索CTX-1对人肝星状细胞(HSC-LX2)的选择性抑制作用及其作用机制。方法依次应用DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换层析、Spehadex G-50凝胶层析和Macro-prep HighS阳离子交换层析来对眼镜蛇毒进行分离纯化以获得CTX-1。以人肝正常细胞(HL7702)为对照,采用CCK-8法检测CTX-1对HSC-LX2细胞增殖的影响;采用流式细胞技术检测CTX-1对HSC-LX2细胞周期分布的影响与CTX-1诱导HSC-LX2细胞凋亡的作用;采用透射电镜观察CTX-1对HSC-LX2细胞超微结构的影响;采用Western Blot检测CTX-1作用于HSC-LX2细胞不同时间后AKT信号通路中AKT和p-AKT蛋白表达量的变化,及CTX-1和PI3K/Akt通路抑制剂LY294002对HSC-LX2细胞中Akt蛋白磷酸化水平的影响。结果眼镜蛇毒粗毒冻干粉经叁步层析,分离纯化获得电泳纯的CTX-1,分子量为9.498KDa。CTX-1对两种细胞的增殖有抑制作用,呈剂量依赖性,CTX-1抑制HSC-LX2细胞增殖的IC50为2.50μg/ml;抑制HL7702细胞增殖的IC50达到18.97μg/ml。不同浓度CTX-1干预LX2细胞24h后,随着药物浓度增加,S期百分比升高,G1、G2期百分比均下降,细胞阻滞于S期。CTX-1诱导HSC-LX2凋亡的最小有效浓度为2μg/ml;诱导HL7702凋亡的最小有效浓度为4μg/ml。通过透射电镜可见,空白对照组中的LX2细胞形态结构正常,无明显凋亡表现;CTX-1干预组细胞数量减少,可见胞质空泡化,染色质凝聚、边集,细胞核裂解,出现凋亡小体等细胞凋亡的特征性形态学改变。CTX-1作用于LX2细胞不同时间后,AKT蛋白表达量没有显着差异,p-AKT蛋白的表达量随作用时间的延长而减少。CTX-1和抑制剂LY294002都可以抑制磷酸化Akt蛋白的表达量,两者联用效果最佳。结论与HL7702相比CTX-1对HSCLX2的细胞毒性更强,具有选择性抑制作用,增殖抑制作用呈剂量依赖性。CTX-1可能是通过使细胞阻滞在S期而影响细胞增殖。CTX-1对HSC-LX2细胞有更强的诱导凋亡作用,并可抑制Akt信号通路中p-AKT的表达,说明CTX-1可能通过抑制AKT信号通路的激活而促进细胞凋亡。(本文来源于《第十四届生物毒素毒理学术大会暨第一届生物毒素——从生存适应到转化医学专题学术会议会刊》期刊2019-08-16）
王秀男[2]（2019）在《眼镜蛇毒细胞毒素的分离纯化及细胞毒素-1选择性抑制HSC-LX2细胞的研究》一文中研究指出目的:通过层析法从眼镜蛇毒中分离高纯度高生物活性的细胞毒素-1(CTX-1)和细胞毒素-2(CTX-2),以人肝正常细胞(HL7702)为对照探索CTX-1和CTX-2对人肝星状细胞(HSC-LX2)是否有选择性抑制作用及CTX-1对HSC-LX2细胞周期、细胞形态及超微结构、PI3K/AKT信号通路的影响,从而阐明CTX-1通过阻滞细胞周期抑制HSC-LX2细胞增殖并通过PI3K/AKT信号通路诱导HSC-LX2细胞凋亡的机制。方法:依次应用DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换层析、Spehadex G-50凝胶层析和Macro-prep High S阳离子交换层析来对眼镜蛇毒细胞毒素进行分离纯化。用SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度并采用NanoLC-ESI-MS/MS蛋白质谱法鉴定蛋白质成分及其分子量大小。采用CCK-8法检测不同浓度的CTX-1和CTX-2对HSC-LX2和HL7702细胞增殖的影响。采用流式细胞术检测CTX-1干预后HSC-LX2细胞周期的变化与CTX-1对HSC-LX2和HL7702细胞凋亡的影响。通过透射电镜观察CTX-1干预后HSC-LX2细胞形态与超微结构的变化。采用Western blot技术检测CTX-1作用于HSC-LX2细胞不同时间后(0、3、6、9、12 h),PI3K/AKT信号通路中AKT蛋白磷酸化水平的变化;以及最小有效浓度的CTX-1、PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002(50μmol/L)、CTX-1联合LY294002分别作用HSC-LX2细胞后AKT蛋白磷酸化水平的变化。结果:眼镜蛇毒粗毒经DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换层析、Spehadex G-50凝胶层析和Macro-prep High S阳离子交换层析分离纯化后得到电泳纯且具有高生物活性的蛋白质,经NanoLC-ESI-MS/MS蛋白质谱鉴定分别为CTX-1和CTX-2。CTX-1分子量约为9.499 KDa,得率为1.76%,CTX-2分子量约为9.548 KDa,得率为3.73%。CCK-8结果显示,不同浓度的细胞毒素作用24 h后,对HSC-LX2和HL7702两种细胞均有增殖抑制作用,增殖抑制率都随浓度增加而增大,呈剂量-效应关系。CTX-1抑制HSC-LX2增殖的最小有效浓度为0.5μg/ml,IC50为2.50μg/ml;CTX-1抑制HL7702增殖的最小有效浓度为8μg/ml,IC50为18.97μg/ml。CTX-2抑制HSC-LX2增殖的最小有效浓度为0.5μg/ml,IC50为1.213μg/ml;CTX-2抑制HL7702增殖的最小有效浓度为0.5μg/ml,IC50为1.253μg/ml。流式细胞术结果显示,CTX-1作用HSC-LX2细胞24 h后,随着药物浓度增加,S期百分比升高,G1、G2期百分比均下降。CTX-1对HSC-LX2和HL7702两种细胞均具有诱导凋亡作用,凋亡率随浓度增加而升高,呈剂量-效应关系。CTX-1诱导HSC-LX2凋亡的最小有效浓度为2μg/ml;诱导HL7702凋亡的最小有效浓度为4μg/ml。通过透射电镜观察发现阴性对照组中HSC-LX2细胞形态结构正常,无明显凋亡表现;CTX-1干预组中HSC-LX2细胞数量减少,可见胞质空泡化,染色质凝聚、边集,细胞核碎裂,出现凋亡小体等细胞凋亡的特征性形态学改变。2μg/ml的CTX-1作用于HSC-LX2不同时间后,各时间点的AKT蛋白表达量没有明显变化,磷酸化AKT蛋白的表达量则随作用时间的延长而降低。50μmol/L的LY294002、2μg/ml的CTX-1作用于HSC-LX2细胞后,AKT蛋白表达量没有明显变化,磷酸化AKT蛋白的表达则被显着抑制,两者联用的效果最佳。结论:眼镜蛇毒粗毒经层析分离获得电泳纯且具有高生物活性的细胞毒素。与HL7702细胞相比CTX-1对HSC-LX2细胞的细胞毒性更强,选择性地抑制HSC-LX2细胞增殖并诱导其凋亡。CTX-1可将HSC-LX2细胞阻滞于S期从而抑制其增殖,并通过降低磷酸化AKT蛋白的表达,抑制PI3K/AKT信号通路的激活而诱导HSC-LX2细胞凋亡。(本文来源于《广西医科大学》期刊2019-05-01）
王秀男,张学荣,廖明,班建东,农君[3]（2019）在《广西眼镜蛇毒细胞毒素-2的分离纯化及其对大鼠肝星状细胞HSC-T6的作用》一文中研究指出目的通过层析法从广西眼镜蛇毒中分离得到电泳纯的细胞毒素-2(CTX-2),探索CTX-2对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的增殖抑制作用。方法采用DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换层析、Spehadex G-50凝胶层析和Macro-prep High S阳离子交换层析结合的方法分离眼镜蛇毒粗毒;经SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度;NanoLC-ESI-MS/MS质谱方法鉴定其组分并测定分子量;CCK-8法检测CTX-2对HSC-T6的增殖抑制作用,确定其最小有效浓度。结果眼镜蛇毒粗毒经分离纯化获得电泳纯的CTX-2,其分子量约为9.548 kD;不同浓度CTX-2作用于HSC-T6细胞24 h后,其增殖抑制作用随浓度增加而增大,呈量效关系,抑制增殖的最小有效浓度为8 mg/L,IC_(50)为11.52 mg/L。结论广西眼镜蛇毒粗毒经叁步分离法得到电泳纯且具有高生物活性的CTX-2;广西眼镜蛇毒CTX-2可抑制HSC-T6细胞增殖,抑制作用呈量效关系。(本文来源于《蛇志》期刊2019年01期）
王秀男,陶慧娟,陈荣芳,班建东,农君[4]（2019）在《广西眼镜蛇毒细胞毒素-1对人肝星状细胞LX2的选择性抑制作用》一文中研究指出肝纤维化是肝硬化、肝癌和肝功能衰竭的共同病理基础和必经阶段,特征是肝内细胞外基质(extracellular matrix,ECM)过度沉积。肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是合成ECM的关键细胞,因此抑制其增殖并诱导其凋亡是抗肝纤维化的关键~[1]。细胞毒素(cytotoxin,CTX)是眼镜蛇毒的主要(本文来源于《中国药理学通报》期刊2019年03期）
孙林[5]（2017）在《广西眼镜蛇毒细胞毒素-4N的分离纯化及其对HSC-T6细胞ERK信号通路的影响》一文中研究指出目的:为了获得高纯度的眼镜蛇毒细胞毒素-4N(Cytotoxin-4N,CTX-4N),探索眼镜蛇毒中细胞毒素-4N对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC-T6)的增殖抑制作用和CTX-4N通过ERK信号通路对HSC-T6细胞凋亡的影响,从而阐明CTX-4N通过ERK信号通路诱导肝星状细胞凋亡的机制。方法:采用DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换柱、SpehadexG-50凝胶层析柱、Macro-prep High S阳离子交换柱结合的方法对眼镜蛇毒蛋白进行分离纯化。采用HSC-T6增殖抑制实验对每一步分离后的各峰蛋白CTX-4N进行活性检测。收集活性最强的蛋白峰,在用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其纯度。采用蛋白质谱法鉴定其成分及分子量大小。用CCK-8方法检测不同浓度的CTX-4N对HSC-T6的增殖抑制作用。采用流式细胞术检测CTX-4N对HSC-T6细胞凋亡的影响。采用Western-Blot检测CTX4-N作用HSC-T6细胞不同时间后,ERK信号通路中ERK1/2的磷酸化水平的变化;以及在加入抑制剂PD98059处理HSC-T6细胞后,ERK信号通路中ERK1/2磷酸化水平的变化。抑制剂实验分组:空白对照组、CTX-4N组、抑制剂组和CTX-4N+抑制剂组。结果:通过DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换柱、SpehadexG-50凝胶层析柱、Macro-prep High S阳离子交换柱分离纯化后得到一个电泳纯度的蛋白,蛋白质谱鉴定为CTX-4N,分子量约为9.605 KDa。不同浓度的CTX-4N对HSC-T6细胞具有增殖抑制作用,随着浓度的增加而增强,最小抑制浓度为2μg/mL,呈剂量-效应关系,IC50为(12.836±0.045)μg/mL。不同浓度的CTX-4N对HSC-T6细胞的凋亡作用随着浓度的增加而增强,且诱导HSC-T6凋亡的最小浓度为4μg/mL。以4μg/mL的CTX-4N作用HSC-T6不同时间后,各时间点的ERK1/2蛋白表达没有变化,而磷酸化ERK1/2蛋白的表达一开始是随着作用时间的延长而表达增加,作用10min后磷酸化ERK1/2表达水平最高,随后就开始降低,到60min后其表达低于对照组(P﹤0.05)。以10μmol/L的PD98059和4μg/mL的CTX-4N作用HSC-T6细胞后,ERK1/2蛋白的表达没有发生改变,而可以显着的抑制磷酸化ERK1/2的表达。结论:广西眼镜蛇毒通过DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换柱、SpehadexG-50凝胶层析柱、Macro-prep High S阳离子交换柱分离纯化获得电泳纯度的CTX-4N。CTX-4N能使HSC-T6细胞发生凋亡作用,对ERK信号通路中的磷酸化ERK1/2表达具有抑制作用,因此,CTX-4N可能通过ERK信号通路诱导HSC-T6凋亡,来干预肝纤维化的发生和发展。(本文来源于《广西医科大学》期刊2017-05-01）
张锦宏,曾军,谢天炽,郭芝刚[6]（2012）在《眼镜蛇毒细胞毒素对S180荷瘤小鼠抗肿瘤作用的研究》一文中研究指出目的:探讨眼镜蛇毒细胞毒素(Cytotoxin,CTX)对S180荷瘤小鼠的抗肿瘤作用。方法:采用昆明小鼠S180实体瘤模型,通过腹腔注射CTX,观察CTX对S180小鼠的肿瘤重量、亚显微结构、凋亡率和pro-caspase-3表达量的变化。结果:CTX对S180肿瘤细胞的生长表现出明显抑制作用。0.2、0.4、0.8mg/kgCTX剂量组的抑瘤率分别为23.8%、54.1%、63.2%;透射电子显微镜和流式细胞仪检测显示S180肿瘤细胞发生凋亡;免疫印迹结果显示pro-caspase-3蛋白表达降低,提示caspase-3被激活。结论:CTX通过诱导细胞凋亡来抑制S180肿瘤细胞的生长。(本文来源于《中国医学创新》期刊2012年20期）
王丽军,王剑松,马晓波,李克功,孙洵[7]（2011）在《眼镜蛇毒细胞毒素-12联合射线对裸鼠移植瘤的作用》一文中研究指出目的探讨中华眼镜蛇毒细胞毒素-12(CTX-12)联合射线处理,对Balb/c裸鼠皮下移植膀胱肿瘤的生长抑制作用。方法建立40只Balb/c雌性裸鼠皮下移植瘤的动物模型,待肿瘤体积达到(0.60±0.09)cm3时,随机将动物按处理方法的不同分成CTX-12+放射组、单纯CTX-12组、单纯放射组和空白对照组,观察并比较各组的抑瘤率,并以流式细胞术、TUNEL系统检测肿瘤细胞凋亡情况。结果单纯放射组、单纯CTX-12组、CTX-12+放射组的抑瘤率分别为18.2%、46.7%、77.9%;与对照组比较,叁组动物的皮下移植肿瘤都受到抑制(P<0.05);但CTX-12+放射组肿瘤受抑制程度明显高于单纯CTX-12组(P<0.05)和单纯放疗组(P<0.01);肿瘤细胞凋亡率及凋亡指数亦然。结论 CTX-12联合射线处理能显着抑制Balb/c裸小鼠皮下移植膀胱肿瘤的生长。CTX-12联合生理剂量射线主要是通过诱导肿瘤细胞凋亡而达到明显抗膀胱肿瘤作用。(本文来源于《现代泌尿生殖肿瘤杂志》期刊2011年06期）
王艳,林礼务,陈志奎,薛恩生,杨菁[8]（2011）在《眼镜蛇毒细胞毒素对人肝癌细胞增殖抑制活性及作用机制的研究》一文中研究指出目的研究眼镜蛇毒细胞毒素(CTX)在体外诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡作用及其可能机制。方法不同浓度CTX作用于人肝癌BEL-7404细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测肿瘤细胞增殖情况;TUNEL法和透射电镜观察检测肿瘤细胞凋亡;并对caspase-3、-9活性、细胞色素C分布变化进行检测。结果眼镜蛇毒细胞毒素对人肝癌BEL-7404细胞具有明显的抑制增殖作用,12、24和48 h的IC50分别为2.56、1.94和1.35 mg·L-1,TUNEL法和透射电镜均观察到肿瘤细胞的凋亡;caspase-3,-9酶活性增高,Western blot检测到caspase-3,-9酶的表达增强,线粒体内Cytochrome C表达减少,而细胞质内Cytochrome C表达增强。结论 CTX首先通过线粒体细胞色素C释放到细胞质内,进一步诱导效应性caspase-3,-9酶激活,可能是其诱导人肝癌细胞凋亡而产生抗肿瘤作用的机制之一。(本文来源于《中国药理学通报》期刊2011年10期）
崔超伟,李春霞,董伟华,孔天翰[9]（2010）在《眼镜蛇毒细胞毒素CTXn的致死毒性及药物依赖性研究》一文中研究指出目的研究眼镜蛇毒细胞毒素CTXn的致死毒性和药物依赖性,评价其安全性。方法检测CTXn的LD50和对肝细胞色素P450含量的影响,采用大鼠催促戒断模型、自然戒断模型及大鼠条件性位置偏爱模型检测CTXn的药物依赖性。结果 CTXn的LD50为19.61 mg/kg,长期给药对肝细胞色素P450含量无影响。在催促戒断试验中,大鼠连续腹腔注射不同剂量CTXn(0.5、1.0、2.0 mg/kg)10天后经纳洛酮催促,未出现戒断症状及体重下降现象;在大鼠自然戒断试验中,CTXn连续给药21天,停药后大鼠没有出现戒断反应及体重下降现象;在大鼠条件性位置偏爱试验中,CTXn不同剂量组分别连续用药15天后,大鼠在伴药盒的逗留时间均无明显延长,不形成条件性位置偏爱。结论 CTXn毒性较小,长期给药对肝脏药物代谢功能无影响。且不具有身体依赖性及精神依赖性,有潜在的药物开发价值。(本文来源于《蛇志》期刊2010年02期）
崔超伟[10]（2010）在《舟山眼镜蛇毒细胞毒素CTXn的分离纯化及其镇痛作用研究》一文中研究指出背景:蛇毒是由多种蛋白质、多肽、酶类和其他小分子物质组成的混合物。细胞毒素(cytotoxins,CTXs)和神经毒素(neurotoxin,NT)和PLA2是其主要毒性成分。细胞毒素由60--63个氨基酸组成,空间结构呈叁指结构,因其分子中由致密的内核伸展出3个指状肽链环而得名。蛇毒的成分复杂多样,种属之间变异很大。同一种属,由于性别、年龄、或地域的不同,成分也会有所差别. Mukherjee AK研究发现,印度相邻叁个地区的同种眼镜蛇毒,排除年龄,性别,季节的影响,其成分和生物活性仍存在很大差别。舟山眼镜蛇主要分布于华南,台湾、越南北部和老挝北部地区,明确其成分的地域性差异,对蛇毒的分离纯化和蛇伤急救有实际应用价值。神经病理性疼痛常由外周或中枢的神经损伤或功能紊乱引起。临床主要表现为:痛反应增强(hyperalgesia)、痛阈下降( allodynia)和自发性疼痛( spontaneous pain)。目前临床上对神经病理性疼痛还缺乏有效的药物治疗,常用的镇痛药物主要是NSAIDs和阿片类药物,但药效的局限和不可避免的副作用限制了其应用。因此,有必要寻找和开发新的有效减缓神经病理性疼痛的药物。外周神经损伤的动物模型如,SNI,CCI,SNL等,能够模拟神经病理性疼痛的一些症状,对研究神经病理性疼痛的机制和药物开发提供了工具和载体。蛇毒镇痛的研究与应用已有很久的历史。在上世纪初,已有报道从眼镜蛇毒中分离出的神经毒素cobrotoxin具有镇痛作用。从响尾蛇毒中分离出的crotalphine,通过κ-opioid受体,对CCI模型引起的痛敏,痛超敏和自发痛具有抑制作用。从响尾蛇毒中分离出的crotoxin,通过中枢烟碱受体和5-HT受体,对坐骨神经瘤疼痛模型引起的神经病理性疼痛具有镇痛作用。细胞毒素的作用,则主要集中在心脏毒性,细胞凋亡,抗肿瘤,细胞毒性和抗血小板聚集。近期Dexian Donga和Jiang WJ报道了细胞毒素的镇痛作用。相对于神经毒素,细胞毒素由于其低毒性,显示了广阔的应用前景。研究细胞毒素的镇痛及其作用机制已成为蛇毒镇痛研究的新的方向。本实验拟探讨蛇毒细胞毒素CTXn的镇痛作用,为镇痛药物开发提供实验支持。目的:运用RP-HPLC比较大陆中南地区六省区的舟山眼镜蛇毒的成分差异,选取CTX含量丰富的江西宜春地区的舟山眼镜蛇蛇毒进行分离纯化和镇痛组分初筛。经过生化鉴定后,运用急性疼痛模型和神经病理性疼痛模型进行镇痛作用的评价,同时运用微透析联合RP-HPLC技术对其镇痛作用机制作一初步探讨。方法:一、舟山眼镜蛇毒细胞毒素的分离纯化及鉴定1.中南地区蛇毒样品的RP-HPLC分析收集中南地区六个省区的舟山眼镜蛇毒样本,经采集处理后,运用RP-HPLC技术进行蛇毒成分的含量的地域性差异分析。2.舟山眼镜蛇毒的分离纯化及成分鉴定舟山眼镜蛇蛇毒的分离纯化采用Sephadex G-75层析和离子交换层析两步法进行。将分离后的蛇毒各组分进行镇痛作用初筛。选取有效成分作进一步纯度分析和MALDI-TOF质谱及蛋白质序列测定。二.CTXn的毒性及镇痛活性测定1.毒理学实验Bliss法检测其LD_(50)毒性,运用药物耐受性模型、间接ELISA检测和条件性位置偏爱(CPP)实验、大鼠催促戒断实验和自然戒断实验测定CTXn的药物耐受性和依赖性。2.急性疼痛实验运用热板实验和醋酸扭体实验测定CTXn对生理性疼痛的镇痛作用。3.神经病理性疼痛实验运用大鼠脊神经结扎(SNL)模型测定CTXn对机械刺激痛敏和热刺激痛敏的抑制作用;并用非特异性阿片受体拮抗剂纳洛酮和胆碱能受体拮抗剂阿托品测定其对CTXn镇痛作用的影响。4.动物自主活动测试旷场实验检测CTXn对动物自主活动的影响。叁.微透析技术检测CTXn对脊髓水平单胺类神经递质的调控1.采用脊髓微透析技术联合HPLC-ECD技术实时动态采集脊髓背角部位的单胺类神经递质去甲肾上腺素(NA)和5-羟色胺(5-HT)进行定量分析,测定其NA和5-HT的含量变化及CTXn对其含量的影响。2.测定纳洛酮和阿托品干预对CTXn引起NA和5-HT含量变化的影响。四.统计分析采用t检验、χ~2检验,SPSS软件等统计分析实验数据。结果:1.运用RP-HPLC比较中南六省区的舟山眼镜蛇毒成分差别,结果发现各地蛇毒样品中所含主要成分相同,但各成分的含量存在很大差异。CTXn在江西宜春地区的含量最高,在广西元宝山地区则没有发现这种成分。2.运用Sephadex G-75层析和离子交换层析两步法对舟山眼镜蛇蛇毒进行分离纯化。分离效果良好,分离组分的纯度可达95%以上。3.蛇毒成分的镇痛初筛和理化性质鉴定结果发现,所分离出的成分中,CTXn的镇痛效果较好,治疗指数高。4. CTXn的小鼠腹腔注射的LD_(50)为19.61±2.05mg/kg. CTXn长期腹腔给药易导致药物耐受,腹腔给药期间ELISA检测有抗体产生。CTXn鞘内给药不存在药物耐受。条件性位置偏爱(CPP)实验、大鼠催促戒断实验和自然戒断实验结果说明长期给予CTXn不会产生药物依赖性。5.热板实验和醋酸扭体实验测定,不同剂量的CTXn(0.50mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/ kg.ip.)对生理性疼痛有良好镇痛作用,且具剂量依赖性。6.神经病理性疼痛实验测定,CTXn(0.50mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/ kg.ip.)对SNL引起的机械刺激痛敏和热刺激痛敏有抑制作用;其镇痛作用可被纳洛酮翻转,但阿托品对此无影响。7.旷场实验检测,结果表明实验剂量的CTXn对动物自主活动无影响。8.脊髓微透析联合HPLC-ECD技术检测发现,CTXn可促进SNL模型动物脊髓背角去甲肾上腺素(NA)和5-羟色胺(5-HT)的分泌增加。纳洛酮可逆转此作用。结论:1.中南六省区的舟山眼镜蛇毒成分存在地域性差异。地域相近的蛇毒成分含量较为接近。2.运用Sephadex G-75层析和离子交换层析两步法分离纯化眼镜蛇蛇毒,分离效果好,纯度高。3. CTXn长期系统给药,易导致药物耐受,可能与抗体的产生及中和作用有关。CTXn长期应用不会产生依赖性。4. CTXn对生理性疼痛和神经病理性疼痛模型都有镇痛作用;中枢阿片系统参与其镇痛作用,其作用可能是通过激活阿片系统,进一步诱导脑干下行抑制系统的NA和5-HT神经递质释放到脊髓背角,从而发挥镇痛作用。胆碱能系统对此无影响。(本文来源于《广州医学院》期刊2010-06-01）
眼镜蛇毒细胞毒素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:通过层析法从眼镜蛇毒中分离高纯度高生物活性的细胞毒素-1(CTX-1)和细胞毒素-2(CTX-2),以人肝正常细胞(HL7702)为对照探索CTX-1和CTX-2对人肝星状细胞(HSC-LX2)是否有选择性抑制作用及CTX-1对HSC-LX2细胞周期、细胞形态及超微结构、PI3K/AKT信号通路的影响,从而阐明CTX-1通过阻滞细胞周期抑制HSC-LX2细胞增殖并通过PI3K/AKT信号通路诱导HSC-LX2细胞凋亡的机制。方法:依次应用DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换层析、Spehadex G-50凝胶层析和Macro-prep High S阳离子交换层析来对眼镜蛇毒细胞毒素进行分离纯化。用SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度并采用NanoLC-ESI-MS/MS蛋白质谱法鉴定蛋白质成分及其分子量大小。采用CCK-8法检测不同浓度的CTX-1和CTX-2对HSC-LX2和HL7702细胞增殖的影响。采用流式细胞术检测CTX-1干预后HSC-LX2细胞周期的变化与CTX-1对HSC-LX2和HL7702细胞凋亡的影响。通过透射电镜观察CTX-1干预后HSC-LX2细胞形态与超微结构的变化。采用Western blot技术检测CTX-1作用于HSC-LX2细胞不同时间后(0、3、6、9、12 h),PI3K/AKT信号通路中AKT蛋白磷酸化水平的变化;以及最小有效浓度的CTX-1、PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002(50μmol/L)、CTX-1联合LY294002分别作用HSC-LX2细胞后AKT蛋白磷酸化水平的变化。结果:眼镜蛇毒粗毒经DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换层析、Spehadex G-50凝胶层析和Macro-prep High S阳离子交换层析分离纯化后得到电泳纯且具有高生物活性的蛋白质,经NanoLC-ESI-MS/MS蛋白质谱鉴定分别为CTX-1和CTX-2。CTX-1分子量约为9.499 KDa,得率为1.76%,CTX-2分子量约为9.548 KDa,得率为3.73%。CCK-8结果显示,不同浓度的细胞毒素作用24 h后,对HSC-LX2和HL7702两种细胞均有增殖抑制作用,增殖抑制率都随浓度增加而增大,呈剂量-效应关系。CTX-1抑制HSC-LX2增殖的最小有效浓度为0.5μg/ml,IC50为2.50μg/ml;CTX-1抑制HL7702增殖的最小有效浓度为8μg/ml,IC50为18.97μg/ml。CTX-2抑制HSC-LX2增殖的最小有效浓度为0.5μg/ml,IC50为1.213μg/ml;CTX-2抑制HL7702增殖的最小有效浓度为0.5μg/ml,IC50为1.253μg/ml。流式细胞术结果显示,CTX-1作用HSC-LX2细胞24 h后,随着药物浓度增加,S期百分比升高,G1、G2期百分比均下降。CTX-1对HSC-LX2和HL7702两种细胞均具有诱导凋亡作用,凋亡率随浓度增加而升高,呈剂量-效应关系。CTX-1诱导HSC-LX2凋亡的最小有效浓度为2μg/ml;诱导HL7702凋亡的最小有效浓度为4μg/ml。通过透射电镜观察发现阴性对照组中HSC-LX2细胞形态结构正常,无明显凋亡表现;CTX-1干预组中HSC-LX2细胞数量减少,可见胞质空泡化,染色质凝聚、边集,细胞核碎裂,出现凋亡小体等细胞凋亡的特征性形态学改变。2μg/ml的CTX-1作用于HSC-LX2不同时间后,各时间点的AKT蛋白表达量没有明显变化,磷酸化AKT蛋白的表达量则随作用时间的延长而降低。50μmol/L的LY294002、2μg/ml的CTX-1作用于HSC-LX2细胞后,AKT蛋白表达量没有明显变化,磷酸化AKT蛋白的表达则被显着抑制,两者联用的效果最佳。结论:眼镜蛇毒粗毒经层析分离获得电泳纯且具有高生物活性的细胞毒素。与HL7702细胞相比CTX-1对HSC-LX2细胞的细胞毒性更强,选择性地抑制HSC-LX2细胞增殖并诱导其凋亡。CTX-1可将HSC-LX2细胞阻滞于S期从而抑制其增殖,并通过降低磷酸化AKT蛋白的表达,抑制PI3K/AKT信号通路的激活而诱导HSC-LX2细胞凋亡。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
眼镜蛇毒细胞毒素论文参考文献
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