导读:本文包含了猪亲环素论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:猪传染性胃肠炎病毒,亲环素A,荧光定量PCR,一步生长曲线
猪亲环素论文文献综述
代洪波[1]（2013）在《猪亲环素A的原核表达及其对猪传染性胃肠炎病毒体外复制的影响》一文中研究指出动物病毒感染、复制以及致病等过程都离不开宿主细胞的蛋白质参与,宿主细胞的蛋白质可能在病毒感染过程中抑制病毒的生命活动,限制甚至清除病毒感染,也可能被病毒利用,为病毒的繁殖等提供便利。亲环素A (CypA)是一种保守性极强的伴侣蛋白,广泛分布于动物与微生物体内,哺乳动物的亲环素A大多与疾病相关。本实验旨在探索猪CypA在猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)复制过程中的作用,就猪CypA对TGEV体外复制的影响进行以下研究：1.TGEV四川株的分离鉴定与荧光定量RT-PCR检测方法的建立利用PK-15细胞从四川腹泻仔猪样品中分离得到一株病毒,经PCR检测、病毒理化实验与微量中和实验证实该分离株为TGEV,命名为SC-T。根据TGEV的S基因设计合成一对荧光定量RT-PCR检测引物,建立TGEV SYBR Green荧光定量RT-PCR检测方法。构建标准品质粒绘制荧光定量标准曲线,并进行该检测方法的特异性、重复性、灵敏性实验。标准品质粒浓度在5.32×107～5.32×101copies/μL时可以得到较理想的标准曲线,该方法重复性与特异性好,可检测最低浓度为5copies/μL。2.猪CypA的克隆测序与原核表达根据猪CypA基因的cds序列设计合成猪CypA基因扩增引物,分别克隆测序长白猪、杜洛克、梅山猪等不同品种猪的CypA基因,并进行系统发育分析。结果显示不同品种猪和PK-15细胞的CypA基因相似性为100%；猪的CypA基因与牛、犬、猫、人、鼠的相似性分别为96.2%、89.9%、90.1%、94.3%、92.7%。将猪CypA基因克隆至pET30a原核表达质粒,命名为pET30-CypA,测序正确后转化大肠杆菌Rosstta感受态细胞构建重组表达菌,并优化表达条件。以His标签融合蛋白纯化试剂盒进行蛋白纯化,并进行His标签Westemblot鉴定。重组质粒测序结果与预期相符,插入位点正确,pET30-CypA最佳表达条件为37℃0.2mmol/L IPTG诱导重组菌表达4h；重组蛋白以可溶性表达为主。纯化得到猪CypA蛋白纯度与浓度均较高,Wsetemblot可以检测到融合蛋白的His标签。3.猪CypA对TGEV体外复制的影响TGEV SC-T株感染PK-15细胞后,分别以含不同浓度猪CypA蛋白的培养液培养感染细胞并设立对照组,分别于感染后不同时间收集感染细胞和上清,以TGEV荧光定量检测方法对不同样品中的病毒RNA进行定量分析,分别绘制不同处理组TGEV一步生长曲线。不同处理组细胞内外TGEV一步生长曲线规律与对照组相似,感染后2-8h,细胞内病毒RNA含量迅速增长,8-32h细胞内病毒RNA含量变化不大,维持在较高水平。细胞外病毒RNA含量呈“S型”曲线增长,感染后0-6h为潜伏期,病毒RNA含量维持在较低水平；6-28h为突破期,病毒RNA含量呈对数增长；28-32h增长速度减缓,维持在较高水平,逐步进入稳定期。添加猪CypA的叁个组,感染后0-8h细胞内TGEV含量均高于对照组,病毒RNA含量与添加的CypA含量正相关；8-32h各组细胞内病毒RNA无明显差异。感染后6-20h,添加猪CypA蛋白的叁个组细胞外病毒RNA含量均高于对照组。猪CypA蛋白可以促进TGEV体外复制。(本文来源于《四川农业大学》期刊2013-06-01）
马慧,陈琛,王影,宓怀风[2]（2007）在《猪亲环素18的基因克隆与融合蛋白的表达》一文中研究指出亲环素18(CyP18)具有肽脯氨酰顺/反异构酶活性,广泛存在于不同物种中,是一种高度保守的蛋白质.它能和免疫抑制性药物环孢菌素 A 结合,参与免疫抑制;此外,作为分子伴侣,它还加速蛋白质的折迭、组装和分解.从猪肝中提取总 RNA,首次通过 RT-PCR 扩增出 pCyP18,对其基因进行克隆和序列测定,并转入大肠杆菌中进行高效表达,得到纯化的 pCyP18蛋白.(本文来源于《南开大学学报(自然科学版)》期刊2007年05期）
猪亲环素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
亲环素18(CyP18)具有肽脯氨酰顺/反异构酶活性,广泛存在于不同物种中,是一种高度保守的蛋白质.它能和免疫抑制性药物环孢菌素 A 结合,参与免疫抑制;此外,作为分子伴侣,它还加速蛋白质的折迭、组装和分解.从猪肝中提取总 RNA,首次通过 RT-PCR 扩增出 pCyP18,对其基因进行克隆和序列测定,并转入大肠杆菌中进行高效表达,得到纯化的 pCyP18蛋白.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
猪亲环素论文参考文献
[1].代洪波.猪亲环素A的原核表达及其对猪传染性胃肠炎病毒体外复制的影响[D].四川农业大学.2013
[2].马慧,陈琛,王影,宓怀风.猪亲环素18的基因克隆与融合蛋白的表达[J].南开大学学报(自然科学版).2007