导读:本文包含了猪链球菌噬菌体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:肺炎链球菌,胆碱结合蛋白,裂解酶,协同作用
猪链球菌噬菌体论文文献综述
王淑娟[1]（2019）在《肺炎链球菌噬菌体裂解酶协同作用的研究》一文中研究指出肺炎链球菌是世界范围内最常见的高发病率和死亡率细菌性病原菌之一,能够导致严重的败血症等侵袭性和非侵袭性疾病,是导致全球5岁以下儿童死亡的重要病原菌。由于疫苗覆盖率不足、疫苗使用后期出现的血清型替代问题以及对传统抗生素耐药性问题的日益严重,目前临床治疗和预防肺炎链球菌感染面临巨大的挑战,因此必须对新的药物和疫苗进行研究。胆碱结合蛋白(Choline binding proteins,CBP)是在肺炎链球菌及相关链球菌属中发现的多肽家族,具有模块化的结构:功能模块(Functional module,FM)和胆碱结合模块(Choline binding module,CBM),其通过非共价作用将蛋白质锚定在细胞壁中存在的胆碱残基上。肺炎链球菌CBP包括细胞壁水解酶,粘附素和其他毒力因子,它们对细菌活力和毒力起着重要的生理作用。噬菌体裂解酶是噬菌体编码的特异水解肽聚糖的水解酶类,通过破坏细胞壁完整性释放子代噬菌体颗粒。肺炎链球菌噬菌体裂解酶都具有模块化结构,即N端催化域和C端细胞壁结合域。肺炎链球菌编码的裂解酶类不具有信号肽序列,其通过holin系统穿过质膜以攻击肽聚糖上底物。本研究对文献已报道的肺炎链球菌裂解酶ClyJ、Cpl-1以及ClyR的协同杀菌效果进行研究,其中ClyJ和Cpl-1具有典型的CBM结构域。通过在体内外的实验,探索不同裂解酶之间催化域、结合域以及催化域和结合域之间的协同作用,为裂解酶的联合应用奠定基础。实验结果表明,肺炎链球菌裂解酶ClyJ与Cpl-1之间存在明显的协同效果,体内体外都具有明显的增强杀菌和提高小鼠保护效果的作用。同时,对具有CBM结构域的裂解酶进行小鼠免疫实验,初步结果显示裂解酶具有较好的免疫保护效果。本研究的结果进一步证实了裂解酶联合应用体内外杀菌的高效性,不仅可以降低细菌耐药的形成,同时可以作为新的抗菌药和候选疫苗。(本文来源于《中国科学院大学(中国科学院武汉病毒研究所)》期刊2019-06-01）
刘洋,王兆飞,孔里程,严亚贤,孙建和[2]（2019）在《猪链球菌9型噬菌体裂解酶Ply5218最小功能域及关键氨基酸位点的鉴定》一文中研究指出为了鉴定猪链球菌9型噬菌体裂解酶Ply5218的最小活性功能域及关键氨基酸位点,利用PCR技术对全长裂解酶Ply5218进行截短并对可能与活性相关的关键氨基酸位点进行定点突变,研究截短与突变后各个蛋白的活性并与全长蛋白活性对比。结果显示,截短片段Ply5218_(1-147)可在平板上形成裂菌圈,仍保持裂菌活性,而比该片段更短的截短片段则失去裂菌活性,推测Ply5218_(1-147)为Ply5218的最小活性相关功能域;第8、58、136和142位点的氨基酸突变后,裂菌活性部分降低,第34和144位点的氨基酸突变后,则彻底失去裂菌活性。研究结果为深入揭示Ply5218的裂菌机制和进一步改造裂解酶提供了基础数据。(本文来源于《上海交通大学学报(农业科学版)》期刊2019年01期）
赵慧莹,李言郡,陈苏,欧凯,王健[3]（2019）在《嗜热链球菌噬菌体与宿主相互作用研究进展》一文中研究指出嗜热链球菌噬菌体对许多发酵乳制品的生产构成了主要威胁。随着乳品发酵中的嗜热链球菌噬菌体不断被分离发现,其生理特性、感染机制等信息正在逐渐被完善。了解这类噬菌体的生物多样性,并确定嗜热链球菌噬菌体与宿主的相互作用,可以为防治乳制品工业环境中的噬菌体提供理论基础。本文从嗜热链球菌噬菌体分类、噬菌体感染宿主的分子机制、吸附受体和受体结合蛋白方面进行综述,以期为其他乳酸菌噬菌体的研究和防治措施提供参考。(本文来源于《乳业科学与技术》期刊2019年01期）
张航[4]（2017）在《猪链球菌溶源性噬菌体裂解酶的挖掘与Ply5218的生物活性研究》一文中研究指出猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)是一类重要的人兽共患病原菌,可导致仔猪患脑膜炎、败血症、关节炎以及人的脑膜炎,对养猪业和公共卫生构成严重威胁。目前对该病菌的防控主要采用抗生素治疗,然而由于抗生素的滥用,细菌耐药问题严重,给该病的防控带来了困难。噬菌体裂解酶(Lysin)因其快速高效的体外杀菌效果,逐渐成为一种有潜力的新型抗菌制剂。因此,挖掘新型裂解酶对于该病的防控颇具研究和应用价值。本论文基于GenBank中收录的猪链球菌基因组信息,挖掘到猪链球菌9型(SS9)菌株5218基因组上前噬菌体编码的裂解酶(命名为Ply5218)分析发现其具有潜在研究价值,本论文将其作为研究对象。采用重组表达技术获得Ply5218蛋白,通过常规克隆技术和测序后,成功获得表达菌株Ply5218-pET28a(+)-BL21,经IPTG在27℃诱导4h后,可获得分子量约为35KDa的目的蛋白。裂解酶Ply5218的体外裂菌特性实验结果显示:其裂菌谱较广,36株被测的猪链球菌中34株可被裂解;浊度递减实验可在15min内使猪链球菌2型(SS2)强毒株HA9801的OD_(600)从1.0下降到0.2,最小抑菌浓度(MIC)为2.0μg/mL,具有高效的杀菌作用;Ply5218的热稳定好,50℃处理30min对酶活无影响,可在4℃保存30天,在﹣80℃保存1年以上;添加浓度为1mM的Ca~(2+)对其酶活发挥有增强作用;此外,裂解酶在牛奶和THB等体系内仍保持较高的酶活,具有高稳定性的特点。本文采用BALB/c小鼠腹腔攻击-腹腔给药治疗模型评价Ply5218的体内抗感染效果。经腹腔注射0.2mL(1.4×10~(10)CFU/mL)复壮的SS2强毒株HA9801,攻击后2h,分两组经腹腔注射0.2mL(1mg/mL)的裂解酶和PBS进行治疗,观察小鼠的存活状态。结果显示治疗后的36h内,Ply5218治疗组小鼠存活率达到90%(9/10),对照组存活率为20%,裂解酶治疗呈现出优异的保护力。综上所述,采用体外重组技术能高效表达可溶性Ply5218,其活性高,可快速、高效杀菌;热稳定性强、在非Buffer体系尤其是牛奶中可以保持很高的活性,具有开发应用前景;采用BALB/c小鼠模型开展治疗保护试验,确认Ply5218可以有效清除猪链球菌2型高致病力菌株HA9801的感染,为采用噬菌体裂解酶防控猪链球菌感染及开展进一步相关研究提供了数据支持。(本文来源于《上海交通大学》期刊2017-01-01）
孙亮,吉文汇,傅强,严亚贤,曾巧英[5]（2016）在《猪链球菌2型噬菌体裂解酶催化域A5的关键氨基酸位点的鉴定》一文中研究指出为了鉴定猪链球菌2型(Streptococcus suis 2)噬菌体裂解酶(Ly ACCG/Ly ACC)催化域A5的关键氨基酸位点,本研究利用NCBI、Pfam和Uniport数据库,对催化域A5的氨基酸序列中的各位点的保守性进行了比对分析;以噬菌体SMP基因组为模板,PCR扩增lyacc基因,测序分析后构建原核表达质粒p SJ2-lyacc;以质粒p SJ2-lyacc为模板,通过PCR扩增的方法将催化域A5中3个高度保守的氨基酸位点(30位的天冬氨酸/D30、53位的苏氨酸/T53和95位的甘氨酸/G95)的密码子分别定点突变为丙氨酸(A)的密码子,经测序确证后将突变体质粒p SJ2-lyacc/D30A、p SJ2-lyacc/T53A和p SJ2-lyacc/G95A分别转化BL21(DE3)感受态细胞,同时将质粒p SJ2-lyacc作为对照平行转化,用IPTG于27℃诱导表达,菌体重悬后超声裂解,上清液过滤,获得的蛋白粗提液经SDS-PAGE分析,表明重组裂解酶Ly ACC及其突变体D30A、T53A和G95A的分子质量均约为30 ku;将重组裂解酶Ly ACC及其突变体D30A、T53A和G95A的蛋白粗提液用于平板裂解试验,结果显示,原核表达的重组Ly ACC的裂菌圈直径为2.2 cm;突变体G95A的裂菌圈直径仅为1.4 cm,裂菌活性部分降低;突变体D30A和T53A的裂菌圈消失,彻底失去裂菌活性。上述结果表明,D30和T53是Ly ACC的关键氨基酸位点。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2016年08期）
孙亮[6]（2016）在《猪链球菌2型噬菌体裂解酶LyACCG的关键结构域及关键氨基酸位点鉴定》一文中研究指出猪链球菌2型(Streptococcus.suis 2,S.suis 2)是重要的人兽共患病原菌,临床分离株普遍耐药,传统的抗生素疗法面临挑战,基于噬菌体裂解酶的抗菌策略再现潜力。噬菌体裂解细菌依赖于侵染后期合成的裂解酶,可特异高效地水解细菌细胞壁。噬菌体SMP是迄今为止国内外分离到的唯一的一株S.suis 2烈性噬菌体,其编码的裂解酶LyACCG(又叫LySMP)由N-端一个amidase-5(A5)催化域、中间两个Cpl-7(C7)结合域及C-端一个glucosaminidase(G)催化域组成,为了鉴定LyACCG的关键结构域及催化域A5的关键氨基酸位点,本研究:(一)LyACCG的关键结构域鉴定。(1)原核表达LyACCG的各结构域片段。以噬菌体SMP基因组为模板,分别PCR扩增编码LyA、LyAC、LyACC、LyG、LyCG、LyCCG和LyACCG(依次对应于LyACCG的第1-145、1-195、1-240、300-410、195-410、150-410和1-481位氨基酸)的基因片段,重组于pSJ2质粒,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,1 mmol/L IPTG 27°C诱导表达,SDS-PAGE分析表明,各结构域片段均为胞内可溶性表达,其分子质量依次约为19 ku、25 ku、30 ku、16 ku、28 ku、32 ku和56 ku,符合预期大小。(2)定性分析各结构域片段的裂菌活性。大量培养收集各转化菌,超声破壁,离心取上清过滤,获蛋白粗提液,平板裂解试验检测显示,LyA、LyAC、LyACC和LyACCG(均含催化域A5)对S.suis 2强毒株HA9801的裂菌圈直径依次为1.2 cm、1.7 cm、2.2 cm和1.3 cm,而LyG、LyCG和LyCCG(均含催化域G,不含催化域A5)均无裂菌活性,说明LyACCG的裂菌活性来自于催化域A5,催化域G无裂菌活性;LyA、LyAC、LyACC和LyACCG均可杀灭猪链球菌2型(12株)和7型,对猪链球菌9型、马链球菌兽疫亚种、金黄色葡萄球菌(5株)、巴氏杆菌、大肠杆菌和沙门菌均无裂解作用,LyA的裂菌谱和LyACCG相同,表明LyACCG作用的细菌种属特异性源自催化域A5,与结合域C7和催化域G无关。(3)定量比较LyA、LyAC、LyACC和LyACCG的裂菌活性。镍离子亲和层析纯化LyA、LyAC、LyACC和LyACCG,以30 min内能够使108 cfu/mL的HA9801浊度下降一半的酶浓度为评价指标(酶活单位/Unit),结果显示,LyA、LyAC、LyACC和LyACCG的浓度依次为8.17μmol/mL、3.29μmol/m L、0.28μmol/m L和1.85μmol/mL;LyACCG的浓度是LyACC的7倍,说明催化域G对酶活性具有抑制作用;LyA和LyAC的浓度分别是LyACC的29和12倍,说明结合域C7对催化域A5的活性有促进作用,但不是决定作用。2μmol/m L的LyACC和LyACCG分别可使生物被膜内的HA9801的细菌密度下降44.23%和14.44%,再证催化域G的存在抑制了酶活性。(4)LyACC裂菌活性的影响因素分析。LyACC的最适反应pH=8.0,Fe2+和Mg2+对其裂菌活性没有影响,Zn2+、Cu2+和高浓度的Ca2+会抑制其裂菌活性。(二)催化域A5的关键氨基酸位点鉴定。(1)催化域A5中各氨基酸位点的保守性分析。用NCBI、Uniport和Pfam数据库,比对分析并计算催化域A5中各氨基酸位点的保守性,选择11个高度保守的氨基酸位点(Y18、D30、C31、S32、G43、T53、G85、G92、G95、H96和I107)和3个保守性较低的氨基酸位点(E70、D73或D75)待突变。(2)高保守性氨基酸位点的突变。以质粒pSJ2-lyacc为模板,将11个保守氨基酸位点的密码子分别定点突变为丙氨酸(A),突变质粒分别转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,1 mmol/L IPTG 27°C诱导表达的各突变依次命名为Y18A、D30A、C31A、S32A、G43A、T53A、G85A、G92A、G95A、H96A和I107A,SDS-PAGE分析表明,各突变体均为胞内可溶性表达,分子质量均约为30 ku,符合预期大小。(3)低保守性氨基酸位点的突变。以质粒pSJ2-lyacc为模板,将3个低保守的氨基酸位点同时定点突变为精氨酸,构建质粒转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,1 mmol/L IPTG 27°C诱导表达的突变体命名为Ly7X,SDSPAGE分析表明,突变体Ly7X为胞内可溶性表达,其分子质量约为30 ku,符合预期大小。(4)各突变体的裂菌活性分析。各突变体的蛋白粗提液经平板裂解试验检测显示,突变体D30A、C31A、S32A、G43A、T53A和H96A的裂菌圈消失,彻底失去裂菌活性,说明D30、C31、S32、G43、T53和H96是LyACC的关键氨基酸位点;突变体Y18A、G85A、G92A、G95A和I107A的裂菌圈直径较LyACC依次减小了0.9 cm、0.8 cm、0.3 cm、0.5 cm和0.3cm,说明Y18、G85、G92、G95和I107对LyACC的裂菌活性有重要作用;突变体Ly7X的裂菌圈直径较LyACC减小了0.8 cm,说明保守性较低的E70、D73和D75对LyACC的裂菌活性也有重要作用。(本文来源于《甘肃农业大学》期刊2016-06-01）
虞莉,陈绵绵,辛思培,王欣桐,杜德超[7]（2016）在《猪链球菌2型前噬菌体基因的检测及其与毒力基因分布的关系》一文中研究指出为了探究猪链球菌(Streptococcus suis,SS)2型菌株中前噬菌体基因与毒力因子分布的关系,利用生物信息学方法预测了19株已全基因测序的SS2中的前噬菌体基因分布,并设计前噬菌体保守基因引物2对,通过PCR检测前噬菌体在101株SS2菌株中的分布,并与毒力因子分布进行比较。结果表明,已全基因测序的猪链球菌2型菌株中,弱毒株含有比强毒株更多的前噬菌体片段。PCR检测显示,14株4种代表性毒力因子(sbp2',mrp,ef,sly)为阴性的菌株中均含有前噬菌体解旋酶基因和末端酶基因,而86株不完全含有这4种代表性毒力因子的菌株中不含有上述前噬菌体基因,说明猪链球菌2型菌株中毒力因子分布与前噬菌体基因分布无明显相关性。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2016年05期）
吉文汇,孙亮,黄庆庆,王恒安,严亚贤[8]（2016）在《猪链球菌7型噬菌体裂解酶Ly7917催化域的裂菌活性》一文中研究指出【目的】揭示链球菌噬菌体裂解酶Ly7917催化域CHAP的核心功能域,为进一步改造裂解酶提供理论依据。【方法】通过表达纯化分别从N端截短的Ly7917及从C端截短的Ly CHAP各蛋白,基于平板裂解试验和浊度递减试验,比较各截短蛋白之间的活性差异,以及添加Ca2+后各蛋白的活性变化。【结果】发现催化域蛋白Ly CHAP与Ly7917全酶的活性差异不显着,Ly CHAP的N端序列对其活性影响较大,不宜截短;而C端依次截短后,活性逐渐降低。C端截短20个氨基酸的Ly CHAP1-130,在添加1 mmol/L Ca2+后活性最强。【结论】Ly7917催化域CHAP的核心功能域为1-130 aa,推测其具有Ca2+结合区域,并发现Ly CHAP1-130在Ca2+参与下裂菌活性可媲美Ly7917全酶。预示着Ly CHAP1-130可以替代全酶应用于之后的临床试验。(本文来源于《微生物学通报》期刊2016年01期）
本刊编辑部[9]（2015）在《重磅消息:秦生巨成功分离出链球菌噬菌体,控制罗非鱼链球菌病指日可待》一文中研究指出2008年以来,整整7年时间,罗非鱼链球菌病一直困扰着罗非鱼养殖,可谓是"高温杀手"。直到现在,对于罗非鱼链球菌病也一直没有一个切实有效的治疗方案。7月22日上午6时,《当代水产》从南京巨豹生物工程有限公司秦生巨老师处获悉喜讯:秦老师已经成功分离出链球菌噬菌体!这就意味着,链球菌病"高温杀手"的"魔咒"即将被打破。以下是本刊第一时间连线秦生巨老师,(本文来源于《当代水产》期刊2015年08期）
[10]（2015）在《秦生巨答链球菌噬菌体六大尖锐问题》一文中研究指出罗非鱼链球菌噬菌体产品上市最快需1年,大量试验正在进行中2015年7月29日,海南海口市,中国蛭弧菌第一人秦生巨老师和他的骨干团队、中国水产科学院广州珠江水产研究所的廖国礼、海南文昌罗非鱼养殖协会会长陈健康以及《当代水产》杂志社的共同见证了秦老师的链球菌噬菌体研究成果通报会。"经过两年多的研究,我们已经(本文来源于《当代水产》期刊2015年08期）
猪链球菌噬菌体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了鉴定猪链球菌9型噬菌体裂解酶Ply5218的最小活性功能域及关键氨基酸位点,利用PCR技术对全长裂解酶Ply5218进行截短并对可能与活性相关的关键氨基酸位点进行定点突变,研究截短与突变后各个蛋白的活性并与全长蛋白活性对比。结果显示,截短片段Ply5218_(1-147)可在平板上形成裂菌圈,仍保持裂菌活性,而比该片段更短的截短片段则失去裂菌活性,推测Ply5218_(1-147)为Ply5218的最小活性相关功能域;第8、58、136和142位点的氨基酸突变后,裂菌活性部分降低,第34和144位点的氨基酸突变后,则彻底失去裂菌活性。研究结果为深入揭示Ply5218的裂菌机制和进一步改造裂解酶提供了基础数据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
猪链球菌噬菌体论文参考文献
[1].王淑娟.肺炎链球菌噬菌体裂解酶协同作用的研究[D].中国科学院大学(中国科学院武汉病毒研究所).2019
[2].刘洋,王兆飞,孔里程,严亚贤,孙建和.猪链球菌9型噬菌体裂解酶Ply5218最小功能域及关键氨基酸位点的鉴定[J].上海交通大学学报(农业科学版).2019
[3].赵慧莹,李言郡,陈苏,欧凯,王健.嗜热链球菌噬菌体与宿主相互作用研究进展[J].乳业科学与技术.2019
[4].张航.猪链球菌溶源性噬菌体裂解酶的挖掘与Ply5218的生物活性研究[D].上海交通大学.2017
[5].孙亮,吉文汇,傅强,严亚贤,曾巧英.猪链球菌2型噬菌体裂解酶催化域A5的关键氨基酸位点的鉴定[J].中国兽医科学.2016
[6].孙亮.猪链球菌2型噬菌体裂解酶LyACCG的关键结构域及关键氨基酸位点鉴定[D].甘肃农业大学.2016
[7].虞莉,陈绵绵,辛思培,王欣桐,杜德超.猪链球菌2型前噬菌体基因的检测及其与毒力基因分布的关系[J].畜牧与兽医.2016
[8].吉文汇,孙亮,黄庆庆,王恒安,严亚贤.猪链球菌7型噬菌体裂解酶Ly7917催化域的裂菌活性[J].微生物学通报.2016
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[10]..秦生巨答链球菌噬菌体六大尖锐问题[J].当代水产.2015