导读:本文包含了巯基蛋白酶抑制剂论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:沙冬青,AmPI,大肠杆菌,融合蛋白
巯基蛋白酶抑制剂论文文献综述
刘瑞玲,刘美芹,史军娜,陈玉珍,卢存福[1]（2010）在《过量表达沙冬青巯基蛋白酶抑制剂基因AmPI提高大肠杆菌低温与热胁迫抗性》一文中研究指出沙冬青是我国北方内蒙古荒漠地区特有的常绿阔叶灌木,具有很强的抗低温、干旱、盐碱能力,是重要的抗逆基因资源植物.将从低温诱导的沙冬青幼苗中克隆获得的巯基蛋白酶抑制剂基因AmPI亚克隆后构建到原核表达载体pTWIN1上,得到重组表达载体pT-PI,双酶切及测序结果证明pT-PI已经构建成功.将pT-PI转入大肠杆菌ER2566中,经异丙基β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,SDS-PAGE电泳检测发现有Mr35×103的目的融合蛋白表达,与预测结果一致,其中以在37℃诱导3～4h条件下表达量最高,表明目的基因AmPI在大肠杆菌中得到了成功表达.分别测定了低温(0℃)和热胁迫(50℃)条件下AmPI宿主菌的生存能力,结果表明AmPI的表达能提高宿主菌的存活率,可能是AmPI对细胞具有保护功能.(本文来源于《应用与环境生物学报》期刊2010年03期）
张星耀,覃庆锋,贺伟,梁军,刘会香[2]（2007）在《毛白杨巯基蛋白酶抑制剂基因cDNA的克隆及序列分析》一文中研究指出为了发掘我国乡土树种毛白杨巯基蛋白酶抑制剂(CPI)基因资源,该研究在对已知植物巯基蛋白酶抑制剂氨基酸序列保守性和杨树表达序列标签(EST)序列分析的基础上,设计了1对简并引物和1对杨树特异性CPI引物,应用RT-PCR技术在毛白杨形成层中扩增出了一个696 bp的cDNA片段,将此片段连接到pGEM-T Easy载体上并测序.结果表明,该片段含有一个417 bp的开放阅读框,编码138个氨基酸残基.进一步对氨基酸序列分析表明,该氨基酸具有典型植物巯基蛋白酶抑制剂的保守区段,即靠近氨基端具有甘氨酸(G)残基和[LVI]-[AGT]-[RKE]-[FY]-[AS]-[VI]-x-[EDQV]-[HYFQ]序列,羧基端具有与酶活性有关的QXVXG结构和PW残基,说明毛白杨形成层中存在CPI基因并能够有效表达.氨基酸序列同源性分析表明,该基因与其他林木CPI的同源性在47%~68%之间.(本文来源于《北京林业大学学报》期刊2007年06期）
张星耀,刘会香,梁军,吕全,贾秀贞[3]（2007）在《河北毛白杨巯基蛋白酶抑制剂基因cDNA的克隆及序列分析》一文中研究指出植物巯基蛋白酶抑制剂(cysteine proteinase inhibitor,CPI)在林木的抗虫基因工程中发挥着越来越重要的作用,分离和克隆植物CPI基因进而研究该基因的功能是CPI基因工程研究的热点。本文应用PCR技术从我国乡土抗天牛树种河北毛白杨形成层中分离和克隆到了一个710bp大小的cDNA片段,同时对序列进行测定和分析。测序和分析结果表明,该cDNA片段含有一个429bp的完整开放阅读框,其编码143个氨基酸残基,具有LARFAVDEHN、QXVXG和YEAKVWVKPW~抑制剂基因家族的高保守区段,同时在GenBank中进行了注册,核苷酸注册号为DQ020096,氨基酸注册号为AAY41807。氨基酸序列同源性分析表明,该基因与其他林木中的巯基蛋白酶抑制剂的同源性差异较大,同源性在48%~97%之间,其中与欧洲山杨的同源性最高,达到97%,与猕猴桃的同源性最低为48%。说明河北毛白杨形成层中存在CPI基因并能够有效表达,这为进一步研究该基因的抗虫功能奠定了良好的基础。(本文来源于《分子植物育种》期刊2007年01期）
王朝霞,江昌俊,余有本,房婉平[4]（2006）在《茶树巯基蛋白酶抑制剂基因cDNA在大肠杆菌中的表达》一文中研究指出通过RT-PCR法扩增出茶树中巯基蛋白酶抑制剂基因(Tea cystatin,TC)cDNA编码区序列,定向克隆到表达载体pET 32 a(+)上,得到重组质粒pET-TC,在表达宿主菌BL21 trxB(DE3)中高效表达,产生分子量约为31.8 kD a的特异融合蛋白。实验表明:随着诱导时间的延长,表达的融合蛋白Trx-TC的产量逐渐增加,特异蛋白的表达量最高可占菌体总蛋白的35.4%;在15℃、25℃、30℃和37℃四个不同诱导温度下,均能诱导产生融合蛋白;IPTG终浓度在0.5 mm ol/L~5 mm ol/L范围内均能诱导产生融合蛋白,表达的产物主要以可溶性蛋白形式存在。另外,体外酶促反应表明表达的融合蛋白Trx-TC对木瓜蛋白酶有明显的抑制活性。(本文来源于《激光生物学报》期刊2006年06期）
刘会香[5]（2006）在《河北杨巯基蛋白酶抑制剂基因的分离和功能鉴定》一文中研究指出基因控制技术是森林有害生物综合治理(IPM)控制策略的核心技术之一，发现具有自主知识产权的功能基因是实现这一技术的关键和基础，巯基蛋白酶抑制剂(Cysteine proteinase inhibtor，CPI)是一类广泛存在于动植物和微生物体内的一个超级族，由于CPI能够有效地抑制昆虫中肠的巯基蛋白酶的水解作用而达到杀虫的目的，因此，巯基蛋白酶抑制剂已被广泛地应用于抗虫基因工程中。天牛类害虫作为我国林业上重大的森林有害生物，危害极其严重。天牛属于鞘翅目害虫，主要利用消化道内的巯基蛋白酶来进行消化，所以分离和克隆植物巯基蛋白酶抑制剂(Phytocystatins，PhyCys)基因并将其应用到天牛的抗虫基因工程中，将是一种有效的控制天牛措施。本研究选用我国抗天牛的乡土树种河北杨为研究对象，首次应用RT-PCR方法从河北杨形成层中分离和克隆了CPI基因，通过真核表达载体的构建和诱导表达，获得了经亲和层析和Western方法检测的真核表达重组蛋白，在此基础上对该基因进行了抗虫性的功能鉴定，主要研究结果如下： 1．应用RT-PCR技术从河北杨形成层中分离和克隆了CPI cDNA编码区段。序列分析表明该基因编码区长为710bp，包括一个429bp完整的开放阅读框，编码143个氨基酸残基，此序列具有典型的植物巯基蛋白酶抑制剂的保守序列。在此基础上，为获得更长的CPI cDNA，本研究应用了RT-PCR的方法获得了759bp的3'端河北杨CPI cDNA。 2．分析和预测了河北杨CPI cDNA基因所编码的蛋白质的相关特性。表明河北杨CPI是一种酸性(pI 6.51)的小分子量的多肽(15-20KDa)；亲／疏水性、蛋白质活性位点和保守区段、亚细胞定位、跨膜区域和结构功能域分析表明：该基因所编码的蛋白具有一个疏水性区域和信号肽区域(MISSSF ISPLLTLAVVLTVTI TPLISA)，具有典型的cystatins保守区段和蛋白质活性位点(EQVVAGTMHHLTIE)，属于一种细胞外蛋白并具有一个跨膜区域(LLTLAVVLAVTITPLISASGGFC)，蛋白结构功能域分析表明，河北杨CPI也属于一种单结构域(GGVHDSQSSQ NSAEIDSLA RFAV)的小分子多肽。 3．应用PCR方法获得了795bp的河北杨CPI基因，其基因中包含一个内含子和两个外显子，具有典型的GT／AG法则。其启动子序列从上游第4个碱基-到第54个碱基，是一种来自于林木上的单结构域的植物CPI，不能归于Margis所进行的分类范畴，属于一种新的植物CPI。 4．应用CLUSTAL(1.83)软件比对了河北杨与其它43种植物CPI的氨基酸序列同源性，结果表明，河北杨和大多数植物CPI具有相同的保守区域，说明了河北杨CPI在进化上比较保守；应用MEGA3.1对上述植物CPI的系统发育分析表明，植物CPI可(本文来源于《中国林业科学研究院》期刊2006-06-10）
王友华,卢孟柱,覃庆锋,李召虎,翟志席[6]（2006）在《陆地棉巯基蛋白酶抑制剂基因克隆及其氨基酸序列分析》一文中研究指出通过对植物中已知巯基蛋白酶抑制剂(cystatin)的保守性分析,设计1对简并引物,从陆地棉栽培种中棉所29(GossypiumhirsutumL.cv.Zhongmiansuo29)cDNA中克隆出1条巯基蛋白酶抑制剂基因片断,经测序和对测序结果在有关数据库中检索分析,发现该片段与1条中棉(G.arboreumL.)EST及1条雷蒙德氏棉(G.raimondiiL.)cDNA同源性高达96%。叁者编码蛋白的氨基酸同源性达100%,且完全符合CPI的特征;所克隆基因片段的氨基酸序列与NBCI蛋白质数据库中登录的豇豆、向日葵、玉米、水稻中CPI均有高度同源性,表明该片段包含编码陆地棉CPI的完整序列。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2006年01期）
王朝霞,李叶云,江昌俊,余有本[7]（2005）在《茶树巯基蛋白酶抑制剂基因的cDNA克隆与序列分析(英文)》一文中研究指出对多种已知植物巯基蛋白酶抑制剂(cystatin)基因的氨基酸序列进行比对分析,根据其高度保守的氨基酸序列设计一对简并引物,并从茶树品种龙井43鲜叶中提取总RNA,用RT-PCR法扩增出一204bp的cDNA特异片段,然后通过3’/5’RACE的方法,分别扩增出3’端和5’端的序列,从而获得茶树巯基蛋白酶抑制剂基因的cDNA全长序列,所得序列全长627bp,编码101个氨基酸,分子量约11.062KDa。该基因在推测的氨基酸序列中含有巯基蛋白酶抑制剂家族中高度保守的、与其活性有关的QXVXG结构,且经Blast分析表明,该基因序列与其他植物巯基蛋白酶抑制剂基因的氨基酸序列同源性为54%~77%。(本文来源于《茶叶科学》期刊2005年03期）
王友华,卢孟柱,覃庆锋,李召虎,翟志席[8]（2005）在《陆地棉巯基蛋白酶抑制剂基因片段克隆及氨基酸序列分析》一文中研究指出通过对植物中已知巯基蛋白酶抑制剂(Cystatin)的保守性分析,设计一对简并引物,从陆地棉栽培种中棉所29cDNA中克隆出一条巯基蛋白酶抑制剂基因片段,经测序和对测序结果在有关数据库中检索分析,发现该片段与一条中棉EST及一条雷蒙德氏棉cDNA同源性高达96%。叁者所编码蛋白的氨基酸同源性达100%。在此基础上对EST阅读框进行了搜索并分析了棉巯基蛋白酶抑制剂氨基酸的全序列及其与其他几种巯基蛋白酶抑制剂的同源性。(本文来源于《中国棉花学会2005年年会暨青年棉花学术研讨会论文汇编》期刊2005-08-01）
覃庆锋[9]（2005）在《毛白杨巯基蛋白酶抑制剂基因克隆研究》一文中研究指出基因控制技术是森林有害生物可持续控制策略实现的技术体系之一,发现自主产权的功能基因资源可以为我国森林保护工作者更好地利用这一控制技术打下良好的基础。巯基蛋白酶抑制剂(cysteine proteinase inhibitor(cystatin),CPI)是一类广泛存在于动植物和微生物体内的蛋白超家族。根据它的蛋白特性植物CPI已经被归入一个新的CPI家族(Phytocystatin)。由于CPI可以通过抑制昆虫中肠中作为消化酶的巯基蛋白水解酶作用达到杀虫目的,它作为一种重要的抗虫因子已经被广泛用于转基因工程。本研究主要在毛白杨CPI基因的克隆、测序、鉴定以及其基因序列分析方面开展了一些工作。取得的初步成果有: 1.根据生物信息学相关原理,通过分析软件,获得毛白杨CPI的氨基酸保守序列区段,根据此保守区段首先设计合成了用于CPI保守序列区段扩增的正向及反向简并引物,通过对毛白杨形成层RNA的特异RT-PCR扩增,获得大小为165bp的单一片段条带,鉴定为毛白杨CPI基因的保守序列区段。 2.利用RT-PCR技术从毛白杨形成层提取的RNA中扩增出一个大小为696bp的的单一片段条带。将其克隆到pGEM-T Easy载体上,获得了重组质粒。通过对该重组质粒进行PCR扩增鉴定以及序列测序分析,证明插入到载体上的片段即是毛白杨CPI基因cDNA序列片段,包含完整的开放阅读框(ORF)。 3.通过相同的引物利用PCR技术从毛白杨形成层提取的基因组DNA中扩增出一个大小为1950bp的单一片段条带,将其克隆到pGEM-T Easy载体上,通过对该重组质粒进行了PCR扩增以及测序分析,证明插入到载体上的片段即是毛白杨CPI基因DNA片段。通过和毛白杨CPI基因cDNA片段的比较进行基因分析,获得基因编码区中内含子和外显子具体定位。(本文来源于《北京林业大学》期刊2005-05-23）
荣艳珍,赵曦,常丽青,高顺,李宜瑾[10]（2005）在《水稻巯基蛋白酶抑制剂的圆二色谱研究》一文中研究指出水稻巯基蛋白酶抑制剂(CPI)圆二色性谱(CD)显示206nm和222nm处的双负峰,CPI分子以α 螺旋构象为主;当CPI与木瓜蛋白酶等摩尔结合后,CPI完全丧失抑制活性,复合物CD谱发生显着变化,α 螺旋含量降低.CPI具有较高的结构稳定性,但在100℃处理时间延长以及pH向酸碱两极变化时,其CD谱发生较大改变,α 螺旋含量减少;而抑制活性仅在pH>9时逐渐下降,在酸性条件下保持不变.用不同试剂修饰CPI分子中的巯基和二硫键,CPI的活性不受影响;DTT、PCMB修饰CPI,其CD谱发生显着变化,NEM修饰CPI,其CD谱变化甚微.4mol/L的脲中,CD谱仅显示206nm负峰、214nm和225～235nm处新的负肩,并在240～250nm之间出现新的负峰,分子中无规卷曲增加,CPI活性未受影响;经NBS修饰,CPI分子中α 螺旋减少,无规卷曲增加较多,CPI完全丧失抑制活性.(本文来源于《四川大学学报(自然科学版)》期刊2005年01期）
巯基蛋白酶抑制剂论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了发掘我国乡土树种毛白杨巯基蛋白酶抑制剂(CPI)基因资源,该研究在对已知植物巯基蛋白酶抑制剂氨基酸序列保守性和杨树表达序列标签(EST)序列分析的基础上,设计了1对简并引物和1对杨树特异性CPI引物,应用RT-PCR技术在毛白杨形成层中扩增出了一个696 bp的cDNA片段,将此片段连接到pGEM-T Easy载体上并测序.结果表明,该片段含有一个417 bp的开放阅读框,编码138个氨基酸残基.进一步对氨基酸序列分析表明,该氨基酸具有典型植物巯基蛋白酶抑制剂的保守区段,即靠近氨基端具有甘氨酸(G)残基和[LVI]-[AGT]-[RKE]-[FY]-[AS]-[VI]-x-[EDQV]-[HYFQ]序列,羧基端具有与酶活性有关的QXVXG结构和PW残基,说明毛白杨形成层中存在CPI基因并能够有效表达.氨基酸序列同源性分析表明,该基因与其他林木CPI的同源性在47%~68%之间.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
巯基蛋白酶抑制剂论文参考文献
[1].刘瑞玲,刘美芹,史军娜,陈玉珍,卢存福.过量表达沙冬青巯基蛋白酶抑制剂基因AmPI提高大肠杆菌低温与热胁迫抗性[J].应用与环境生物学报.2010
[2].张星耀,覃庆锋,贺伟,梁军,刘会香.毛白杨巯基蛋白酶抑制剂基因cDNA的克隆及序列分析[J].北京林业大学学报.2007
[3].张星耀,刘会香,梁军,吕全,贾秀贞.河北毛白杨巯基蛋白酶抑制剂基因cDNA的克隆及序列分析[J].分子植物育种.2007
[4].王朝霞,江昌俊,余有本,房婉平.茶树巯基蛋白酶抑制剂基因cDNA在大肠杆菌中的表达[J].激光生物学报.2006
[5].刘会香.河北杨巯基蛋白酶抑制剂基因的分离和功能鉴定[D].中国林业科学研究院.2006
[6].王友华,卢孟柱,覃庆锋,李召虎,翟志席.陆地棉巯基蛋白酶抑制剂基因克隆及其氨基酸序列分析[J].农业生物技术学报.2006
[7].王朝霞,李叶云,江昌俊,余有本.茶树巯基蛋白酶抑制剂基因的cDNA克隆与序列分析(英文)[J].茶叶科学.2005
[8].王友华,卢孟柱,覃庆锋,李召虎,翟志席.陆地棉巯基蛋白酶抑制剂基因片段克隆及氨基酸序列分析[C].中国棉花学会2005年年会暨青年棉花学术研讨会论文汇编.2005
[9].覃庆锋.毛白杨巯基蛋白酶抑制剂基因克隆研究[D].北京林业大学.2005
[10].荣艳珍,赵曦,常丽青,高顺,李宜瑾.水稻巯基蛋白酶抑制剂的圆二色谱研究[J].四川大学学报(自然科学版).2005