导读:本文包含了内皮细胞转化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:c-SKI,细胞增殖,内皮-间充质转化,TGF-β1,Smad信号通路
内皮细胞转化论文文献综述
王娟,幸世峰,吕忠英,李鹏,李红建[1]（2019）在《c-SKI对冠脉内皮细胞增殖及内皮-间充质转化的影响》一文中研究指出目的:探讨核蛋白c-SKI对冠状动脉内皮细胞增殖能力及内皮-间充质转化的影响。方法:使用不同浓度的转化生长因子β1(TGF-β1)作用人冠脉内皮细胞不同时点,Western blot法检测各组细胞中c-SKI、间充质细胞标志物波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及内皮细胞标志物E-钙黏蛋白的表达。使用携带c-ski基因的慢病毒转染冠脉内皮细胞后采用RT-qPCR验证转染效率。将细胞分为4组:对照组、TGF-β1(5μg/L)组、c-ski基因感染+TGF-β1组及对照病毒感染+TGF-β1组。过表达c-SKI后,MTT实验和集落形成实验检测冠脉内皮细胞的增殖能力,Western blot检测波形蛋白、α-SMA、E-钙黏蛋白、Smad2、Smad3、p-Smad2和p-Smad3蛋白的水平。结果:TGF-β1处理冠脉内皮细胞后,c-SKI在冠脉内皮细胞中的表达呈剂量和时间依赖性下降(P<0.01)。MTT及集落形成实验结果显示,过表达c-SKI可显着抑制冠脉内皮细胞增殖(P<0.01)。Western blot检测结果显示,与病毒对照组相比,过表达c-SKI可显着下调冠脉内皮细胞中α-SMA和波形蛋白的表达量(P<0.01),上调E-钙黏蛋白的表达量(P<0.01),同时抑制Smad2和Smad3蛋白的磷酸化(P<0.01),逆转TGF-β1诱导的内皮-间充质转化。结论:内皮-间充质转化过程中c-SKI表达下调,而过表达c-SKI能够抑制冠脉内皮细胞增殖及内皮-间充质转化,其机制可能与调控TGF-β1/Smad信号通路活性有关。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2019年10期）
渠景连,杨邯捷,赵惠亮[2]（2019）在《补阳还五汤含药血清对人肺动脉内皮细胞间质转化的影响》一文中研究指出目的:研究补阳还五汤含药血清对人肺动脉内皮细胞(HPAEC)间质转化(End MT)的调控作用,并从Jagged1/Notch1信号传导进一步分析其作用机制。方法:以53. 36 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量灌胃家兔,制备补阳还五汤含药血清,等容积生理盐水灌胃制备空白血清。体外培养HPAEC细胞,转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导建立End MT模型,设立空白组(10%空白血清),模型组(10%空白血清+TGF-β1),补阳还五汤含药血清高剂量组(10%含药血清+TGF-β1),补阳还五汤含药血清中剂量组(5%含药血清+5%空白血清+TGF-β1)和补阳还五汤含药血清低剂量组(2. 5%含药血清+7. 5%空白血清+TGF-β1) 5组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖能力,transwell和划痕实验检测细胞迁移能力,免疫荧光观察内皮细胞标志物血小板内皮细胞黏附分子1(CD31),血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)和间质细胞标志物成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Notch1,Jagged1及CBF1蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组HPAEC细胞增殖能力、迁移能力均显着增强(P <0. 01),CD31和VE-cadherin表达呈下降趋势,FSP1和α-SMA表达呈上升趋势,Notch1,Jagged1和CBF1表达显着上调(P <0. 01)。补阳还五汤含药血清干预后,与模型组比较,细胞增殖能力、迁移能力均明显减弱(P <0. 05,P <0. 01),且CD31和VE-cadherin表达呈上升趋势,FSP1和α-SMA表达呈下降趋势,Notch1,Jagged1和CBF1表达明显降低(P <0. 05,P <0. 01),随着含药血清浓度的增加,作用越明显。结论:补阳还五汤含药血清可部分抑制人肺动脉内皮细胞发生间质转化,这一过程可能与调控Jagged1/Notch1信号有关。(本文来源于《中国实验方剂学杂志》期刊2019年19期）
杜建奎[3]（2019）在《Kallikrein-8促进内皮细胞间质转化在糖尿病心脏和肾脏间质纤维化中的作用及其机制研究》一文中研究指出组织激肽释放酶相关肽酶(tissue kallikrein-related peptidases,KLKs)是一类具有胰蛋白酶和糜蛋白酶样活性的丝氨酸蛋白酶家族,KLKs可特异性地裂解低分子量激肽原以形成激肽,后者通过选择性地刺激缓激肽B1和B2受体进而发挥广泛的生物学作用。本课题组前期研究指出KLK8上调诱导心肌肥厚以及进展性心功能障碍,并且这一作用是依赖于EGF及PAR1/2信号通路而并非激肽受体信号通路。与此同时,本课题组同样发现KLK8上调诱导心肌间质纤维化,并且内皮细胞功能紊乱触发的内皮间质转化(Endothelial-mesenchymal transition,EndMT)参与KLK8上调介导的心肌间质纤维化的发生。糖尿病是以长期高血糖为主要特征,全身多器官系统病变的代谢紊乱综合征;据统计,2017年全球糖尿病患者人数高达4.35亿;据估计,至2045年,全球糖尿病患者人数将超过6亿,糖尿病正逐渐成为全球性疾病。糖尿病如果不能够及时诊断、治疗将会引发多种并发症,包括糖尿病心肌病、糖尿病肾病等,而后者以器官功能紊乱以及组织纤维化为主要特征。研究指出激肽释放酶-激肽系统(Kallikrein-kinin system,KKS)参与糖尿病及其并发症的病理发生发展,然而其中的机制尚未完全阐明,那么是否KLK8参与糖尿病心肌病以及糖尿病肾病器官功能紊乱以及组织纤维化的发生呢?因此,本研究在整体水平上采用1型糖尿病小鼠模型,细胞水平上高糖处理HCAECs以及HRGECs,拟首先观察KLK8在内皮细胞高糖处理时的表达改变,继而利用KLK8转基因和KLK8基因敲除两种模式动物、通过整体和细胞水平的实验证实KLK8在糖尿病心肌以及肾脏组织EndMT和间质纤维化病理发生发展过程中的关键作用,并阐明其分子机制。主要实验结果如下:第一部分KLK8促进内皮间质转化在糖尿病心肌病心肌间质纤维化中的作用及其机制研究一.高糖显着上调糖尿病小鼠心脏及冠脉内皮细胞KLK8表达1.(1)腹腔注射STZ构建1型糖尿病小鼠,构建成功3/6个月后检测心脏KLK8mRNA表达,糖尿病组KLK8表达显着高于对照组,并表现出明显的时间依赖性;(2)人冠状动脉内皮细胞(Human coronary artery endothelial cells,HCAECs)给与5.5mM、15mM、25mM葡萄糖处理120h,对照组给与mannitol处理;与对照组相比,高糖可显着上调KLK8在mRNA水平表达,并表现出明显的浓度依赖性;二.过表达KLK8诱导人冠状动脉内皮细胞发生EndMT1.HCAECs给与KLK8腺病毒转染72h以过表达KLK8,同空载体组相比,过表达KLK8可显着增加间质细胞标志物α平滑肌肌动蛋白(αSMA)与波形蛋白(vimentin)蛋白表达,降低内皮细胞标志物血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)和内皮细胞钙粘蛋白(VE-cadherin)表达,即诱导EndMT;(2)TGF-β1中和抗体部分阻断过表达KLK8诱导的EndMT,即抑制KLK8诱导的αSMA与vimentin表达上调以及CD31与VE-cadherin表达下调;二.KLK8上调参与高糖诱导的内皮细胞功能紊乱、EndMT以及心脏纤维化应用KLK8 siRNA以敲低内皮细胞KLK8表达,对照组给与等量control siRNA;与对照组相比,KLK8 siRNA可显着逆转高糖诱导的内皮细胞功能紊乱,即内皮细胞损伤标志物vWF,sTM以及E-selectin均显着降低,内皮细胞活力显着升高,而单独转染KLK8 siRNA对内皮细胞功能无影响;此外,KLK8 siRNA可显着逆转高糖诱导的VE-cadherin与CD31蛋白表达下调以及αSMA与vimentin蛋白上调;叁.KLK8缺失可显着减轻糖尿病心脏组织纤维化以及心脏EndMT1.KLK8缺失可显着减轻糖尿病心脏内皮功能紊乱以及心脏功能紊乱;(1)小鼠腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ)以构建1型糖尿病小鼠,模型构建成功后6个月检测血糖水平,同野生型组相比,野生型糖尿病组血糖显着增高,然而KLK8敲除糖尿病组小鼠血糖未见明显降低;(2)同野生型对照组相比,糖尿病小鼠血清vWF,sTM,E-selectin均显着升高,而KLK8缺失组糖尿病小鼠vWF,sTM,E-selectin较野生型组糖尿病小鼠显着降低;2.KLK8缺失可显着减轻糖尿病心脏EndMT;与野生型组相比,糖尿病小鼠心脏组织VE-cadherin和CD31表达显着降低,αSMA和vimentin表达显着升高,KLK8缺失可显着逆转高糖诱导的内皮细胞标志物降低以及间质细胞标志物增高,而单独KLK8缺失小鼠心肌组织内皮细胞以及间质细胞标志物未见明显改变,免疫荧光双染结果同样显示,同对照组相比,野生型糖尿病小鼠心脏CD31表达显着降低而αSMA,vimentin与fsp1表达显着增高,并且存在大量CD31与αSMA,vimentin以及fsp1共染,而KLK8缺失可显着增加心脏CD31表达且αSMA,vimentin与fsp1表达显着降低;3.KLK8缺失可显着减轻糖尿病心脏组织纤维化及心脏功能紊乱;(1)同野生型对照组相比,6个月糖尿病小鼠血压升高、心率降低、心脏收缩功能障碍,KLK8缺失可显着逆转高糖诱导的血压升高、心率降低以及心脏收缩功能障碍,而单独KLK8缺失小鼠血压、心率、心功能未见明显异常;(2)Masson染色结果显示,KLK8缺失同样可显着降低糖尿病心脏组织纤维化;四.KLK8降解VE-cadherin,进而促进γ-catenin发生核转位1.KLK8过表达诱导内皮细胞损伤以及EndMT并非通过激肽B1或B2受体,而是通过其酶的活性(1)应用B1R siRNA与B2R siRNA以下调激肽B1和B2受体表达,MTT结果显示,B1R siRNA与B2R siRNA并不能阻断KLK8腺病毒引起的内皮细胞活力降低,不仅如此,B1R siRNA与B2R siRNA同样不能阻断KLK8上调引起的EndMT;(2)应用两种蛋白酶的抑制剂:antipain与硫酸锌以阻断KLK8的蛋白水解作用,同对照组相比,antipain及硫酸锌可部分阻断KLK8诱导的内皮损伤以及EndMT,即增加内皮细胞活力,上调VE-cadherin和CD31蛋白表达,降低αSMA和vimentin蛋白表达;2.KLK8降解VE-cadherin继而引发γ-catenin发生核转位(1)Western blot结合N-末端测序KLK8可剪切VE-cadherin形成一个约30kDa细胞外片段;(2)腺病毒载体处理的内皮细胞γ-catenin位于细胞膜并且部分与VE-cadherin共定位,而KLK8腺病毒处理组细胞膜γ-catenin与VE-cadherin量显着减少,并且细胞核内存在大量γ-catenin表达;不仅如此,同腺病毒载体相比,KLK8导致内皮细胞胞膜及胞浆中γ-catenin表达降低而细胞核内表达量显着升高,而转染VE-cadherin慢病毒可逆转KLK8诱导的γ-catenin核转位以及胞膜和胞浆γ-catenin表达量;五.γ-catenin参与介导KLK8诱导EndMT,而这一作用是通过与p53相互作用完成1.γ-catenin参与介导KLK8诱导EndMT应用γ-catenin siRNA以下调内皮细胞γ-catenin表达,γ-catenin siRNA可显着逆转KLK8诱导的内皮细胞VE-cadherin与CD31表达降低以及αSMA与vimentin的表达升高;2.γ-catenin参与介导KLK8诱导EndMT的作用是通过与p53相互作用完成(1)Co-IP结果显示,γ-catenin在内皮细胞中与p53和TCF4相互联系,且KLK8过表达可进一步加强γ-catenin与p53和TCF4间的结合作用;(2)p53抑制剂pifithrin-α可逆转KLK8诱导的EndMT,然而,TCF/β-catenin通路抑制剂ICG-001不能逆转KLK8介导的EndMT;3.TGF-β1参与介导KLK8诱导的EndMT和心脏组织纤维化(1)KLK8可显着增加内皮细胞TGF-β1在mRNA的表达,这一作用可以被γ-catenin siRNA以及pifithrin-α部分逆转,然而,ICG-001不能逆转KLK8对TGF-β1的mRNA表达;(2)CHIP结果表明HIF-1α可结合到TGF-β1启动子区的缺氧反应元件,而KLK8可进一步增强这一结合作用,HIF-1α的抑制剂echinomycin不仅能够抑制TGF-β1的基础表达,而且能够阻断KLKL8诱导的TGF-β1在内皮细胞mRNA水平的表达,γ-catenin siRNA与pifithrin-α可显著逆转KLK8诱导的HIF-1α与TGF-β1的结合作用;4.p53-Smad3通路参与介导KLK8诱导的EndMT以及心脏组织纤维化(1)KLK8过表达可显着增加内皮细胞p53与Smad3的结合作用,而这一作用可被γ-catenin siRNA部分阻断;(2)KLK8过表达可显着增加内皮细胞TGF-β1/Smad3通路促纤维化靶基因包括Snail,Slug,Twist,Zeb1,Zeb2在mRNA水平的表达,然而γ-catenin siRNA与pifithrin-α可显著逆转KLK8诱导的促纤维化转录因子表达;六、高葡萄糖促进γ-catenin依赖性的p53与HIF-1α和Smad3相互作用,继而以KLK8依赖性的方式增加TGF-β1/Smad3促纤维化靶基因表达1.KLK8参与高葡萄糖诱导的γ-catenin核转位及TGF-β1依赖性促纤维化通路激活(1)高葡萄糖处理导致内皮细胞胞膜及胞浆中γ-catenin表达显着降低,细胞核中γ-catenin表达明显升高,然而KLK8 siRNA可降低细胞核且增加胞膜和胞浆中γ-catenin含量;(2)高葡萄糖处理导致TGF-β1 mRNA表达及释放显着增加,与此同时TGF-β1/Smad3通路促纤维化靶基因mRNA表达同样明显增加,然而KLK8siRNA与γ-catenin siRNA可以很大程度上逆转高葡萄糖所诱导的TGF-β1/Smad3通路促纤维化靶基因表达。2.KLK8参与介导高糖诱导的γ-catenin依赖性p53与Smad3、HIF-1α的相互作用(1)高葡萄糖可导致内皮细胞γ-catenin与p53间联系明显加强,然而KLK8siRNA可显着逆转γ-catenin与p53间相互联系。不仅如此,KLK8 siRNA与γ-catenin siRNA同样能够逆转高葡萄糖诱导的内皮细胞p53与HIF-1α和Smad3间的相互作用。CHIP结果显示:高葡萄糖能够进一步加强HIF-1α与TGF-β1启动子区缺氧反应元件的结合作用,然而KLK8 siRNA,γ-catenin siRNA及p53抑制剂可显着逆转高糖诱导的HIF-1α与TGF-β1启动子的结合作用;(2)在整体水平上,我们发现STZ诱导的1型糖尿病小鼠在24周时心脏TGF-β1 mRNA与蛋白水平及TGF-β1/Smad3通路促纤维化靶基因表达均显着增加,而KLK8缺失可显着逆转糖尿病心脏TGF-β1 mRNA与蛋白水平及TGF-β1/Smad3通路促纤维化靶基因表达的增加;(3)KLK8缺失可显着逆转糖尿病心脏γ-catenin与p53间相互联系,KLK8缺失同样可以逆转糖尿病心脏p53与HIF-1α和Smad3间的相互作用。整体水平的CHIP结果显示,同野生型组相比,KLK8缺失可显着逆转HIF-1α与TGF-β1启动子区的结合作用。结论:高糖促进心肌组织KLK8表达,进而通过诱导心脏内皮细胞功能紊乱触发的EndMT导致心脏间质纤维化、心脏功能紊乱,而这一作用是依赖于KLK8作用于VE-cadherin-γ-catenin复合体,VE-cadherin被降解,γ-catenin发生核转位,进而激活TGF-β信号通路来完成。第二部分KLK8促进内皮间质转化在糖尿病肾病肾脏间质纤维化中的作用及其机制研究一.转基因KLK8大鼠肾脏组织发生End MT以及纤维化1.KLK8过表达导致肾脏组织纤维化和肾脏损伤Masson染色结果显示:转基因KLK8大鼠肾脏组织较之同龄野生型相比出现明显的胶原堆积,并且表现出明显的时间依赖性,即12周龄转基因KLK8大鼠肾脏组织胶原堆积明显多于6周龄;并且肾脏组织中羟脯氨酸和胶原蛋白及TGF-β1水平较对照组明显升高;尿蛋白检测结果同样显示转基因KLK8大鼠较之同龄野生型相比尿蛋白含量明显增加,并且均表现出明显的时间依赖性;2.KLK8过表达导致肾脏组织发生End MT同野生型大鼠相比,转基因KLK8大鼠肾脏组织vimentin和α-SMA表达显着增加,而VE-cadherin和CD31表达显着降低;进一步免疫荧光双染技术结果表明:较之同龄野生型大鼠相比,12周龄转基因KLK8大鼠肾脏组织内皮细胞标志物CD31表达显着降低,而间质细胞标志物α-SMA、fsp1显着增多,并且存在大量与CD31共染的阳性细胞,共聚焦结果同样证实转基因KLK8大鼠肾脏组织CD31与α-SMA、fsp1存在共定位;3.过表达KLK8导致人肾小球内皮细胞功能紊乱KLK8腺病毒转染人肾小球内皮细胞(Human glomerular endothelial cells,HRGECs)以过表达KLK8,KLK8可导致内皮细胞活力显着下降,并表现出时间和浓度依赖性,不仅如此,内皮损伤的标志物E-selectin,s TM,v WF的释放量明显增加,并且内皮细胞通透性显着增加;4.过表达KLK8诱导HRGECs发生EndMTKLK8可剂量依赖性地增加αSMA与vimentin蛋白表达,降低CD31与VE-cadherin表达;二.KLK8上调参与高糖诱导的内皮细胞功能紊乱、End MT以及肾脏间质纤维化1.KLK8上调参与高糖诱导的内皮细胞功能紊乱应用KLK8 si RNA以敲低内皮细胞KLK8表达,MTT结果表明KLK8 si RNA可显着逆转高糖诱导的内皮细胞功能紊乱,而单独转染KLK8 si RNA对内皮细胞功能无影响;2.KLK8上调参与高糖诱导的End MT同对照组相比,高糖可显着上调αSMA与vimentin蛋白的表达,降低VE-cadherin与CD31蛋白表达,而KLK8 si RNA可降低高糖诱导的αSMA与vimentin上调以及VE-cadherin与CD31下调;叁.γ-catenin参与介导KLK8诱导End MT(1)γ-catenin si RNA可显着逆转KLK8诱导的内皮细胞VE-cadherin与CD31表达降低以及αSMA与vimentin的表达升高;此外,γ-catenin si RNA可同样逆转KLK8诱导的内皮细胞活力降低;(2)KLK8可显着增加内皮细胞TGF-β1在m RNA水平的表达,这一作用可以被γ-catenin si RNA部分逆转;(3)CHIP方法证实HIF-1α可结合到TGF-β1启动子区的缺氧反应元件,而KLK8可进一步增强这一结合作用,且HIF1-α抑制剂可逆转KLK8上调内皮细胞TGF-β1在m RNA水平的表达;结论:高糖促进肾脏组织KLK8表达,进而通过诱导心脏内皮细胞功能紊乱、End MT导致肾脏间质纤维化、肾脏功能紊乱,而这一作用是依赖于KLK8激活TGF-β信号通路来完成。(本文来源于《中国人民解放军海军军医大学》期刊2019-05-01）
杨蕊萍[4]（2019）在《HGF调控Notch信号通路抑制人血管内皮细胞内皮-间充质转化机制的实验研究》一文中研究指出目的:本研究旨在通过TGF-β1诱导人血管内皮细胞内皮-间充质转化模型的建立,探讨HGF抑制人血管内皮细胞内皮-间充质转化的作用,以及Notch信号通路在此过程中可能的作用机制,以期寻找内皮-间充质转化可能的抑制方法,为内皮-间充质转化引起的血管疾病寻求可能的治疗靶点。方法:(1)TGF-β1诱导人脐静脉内皮细胞发生内皮-间充质转化模型的建立:用不同浓度的人TGF-β1蛋白作用于人脐静脉内皮细胞72小时,倒置显微镜观察细胞的形态学变化,提取细胞总RNA,RT-PCR检测内皮细胞标志物(CD31)及间充质细胞标志物(α-SMA、FSP1)的mRNA表达水平,根据结果选用浓度为10ng/ml的人TGF-β1蛋白进行后续实验。(2)c-Met siRNA转染人脐静脉内皮细胞沉默c-Met基因的模型建立:先用不同浓度的荧光标记siRNA转染人脐静脉内皮细胞,作用6小时后于荧光显微镜下观察每个浓度siRNA的转染效率,根据结果选用50nM的siRNA进行后续实验。再用不同片段的siRNA(001、002、003)转染人脐静脉内皮细胞,转染后作用72小时,RT-PCR检测c-Met mRNA表达水平,根据结果选用001号片段的siRNA进行后续实验。(3)实验分组及加样:实验分为4组:空白对照组(Ctr组)、TGF-β1组(T组)、TGF-β1+HGF组(T+H组)和TGF-β1+HGF+c-Met siRNA组(T+H+C/S组)。接种HUVECs于6孔板,完全培养基培养至细胞密度达30-40%,c-Met siRNA转染TGF-β1+HGF+c-Met siRNA组细胞6小时,各组细胞密度达60-70%时,更换为不含生长因子的培养基,并按分组加入相应人TGF-β1蛋白和HGF蛋白,使其终浓度均为10ng/ml,37℃、5%CO2的培养箱中培养72小时,于24、48、72小时倒置显微镜下观察各组细胞形态学变化。(4)Real-time PCR:按照实验各分组的要求完成细胞的相关处理,提取细胞总RNA,测定RNA浓度及纯度,逆转录RNA为cDNA,荧光定量PCR检测各组CD31、α-SMA、FSP1、RBP-J?的mRNA表达水平,结果进行统计分析;(5)Western Blotting实验:按照实验各组要求完成相关模型建立及药物干预,提取细胞总蛋白,BCA法测定蛋白浓度,依次完成制胶、加样、SDS-PAGE电泳、转模、脱脂牛奶封闭、4℃冰箱一抗孵育过夜、二抗孵育、ECL化学法曝光,Image J分析条带灰度值,结果进行统计分析。结果:(1)TGF-β1诱导人脐静脉内皮细胞发生内皮-间充质转化模型的建立:随着TGF-β1浓度的增加,CD31 mRNA的表达水平逐步下降,α-SMA和FSP1的mRNA表达水平逐步上升,其中在TGF-β1浓度为0-10ng/ml时,上述改变较为明显(P<0.05),随着浓度继续增加,各标志物的变化趋势较为缓和(P>0.05);浓度为10ng/ml的人TGF-β1蛋白作用于HUVECs后24小时,镜下未观察到明显的形态学变化,作用后48小时,细胞出现长梭形样的改变,作用72小时,细胞外形呈长梭形或纺锤形,发生形态学改变的细胞达70%以上。(2)c-Met siRNA转染HUVECs可有效抑制c-Met基因的表达,起到基因沉默的效果。(3)RT-PCR检测各组CD31、α-SMA、FSP1、RBP-J?的mRNA表达水平:T组CD31 mRNA的表达低于Ctr组(P<0.01),T+H组CD31 mRNA表达高于T组(P<0.01)和T+H+C/S组(P<0.01);T组α-SMA mRNA的表达高于Ctr组(P<0.05),T+H组α-SMA mRNA表达低于T组(P<0.05)和T+H+C/S组(P<0.01);T组FSP1 mRNA的表达高于Ctr组(P<0.05),T+H组FSP1 mRNA表达低于T组(P<0.01)和T+H+C/S组(P<0.01);T组RBP-J?mRNA的表达高于Ctr组(P<0.05),T+H组RBP-J?mRNA表达低于T组(P<0.05)和T+H+C/S组(P<0.01)。(4)Western Blotting检测CD31、α-SMA、RBP-J?的蛋白表达量:T组CD31蛋白表达低于Ctr组(P<0.01),T+H组CD31蛋白表达高于T组(P<0.01)和T+H+C/S组(P<0.01);T组α-SMA蛋白表达高于Ctr组(P<0.01),T+H组α-SMA蛋白表达低于T组(P<0.01)和T+H+C/S组(P<0.01);T组RBP-J?蛋白表达高于Ctr组(P<0.01),T+H组RBP-J?蛋白表达低于T组(P<0.01)和T+H+C/S组(P<0.01)。结论:(1)TGF-β1能有效诱导人脐静脉内皮细胞发生内皮-间充质转化(EndMT);(2)HGF能抑制TGF-β1诱导的内皮-间充质转化(EndMT);(3)Notch信号通路的激活参与了TGF-β1诱导的内皮-间充质转化的过程,HGF可通过下调Notch信号通路的信号转导来发挥抑制EndMT的作用。(4)该实验为EndMT相关血管疾病的治疗提供了可能的方向。(本文来源于《西南医科大学》期刊2019-02-01）
康伊,张艳,张伟[5]（2018）在《转化生长因子β信号在内皮细胞中通过上调ULK1蛋白抑制细胞周期》一文中研究指出目的探讨转化生长因子β(TGF-β)信号通路在血管内皮细胞中上调ULK1蛋白的作用机制,并观察ULK1对血管内皮细胞细胞周期的影响。方法利用TGF-β配体蛋白刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人微血管内皮细胞(HMEC-1),利用免疫印迹分析检验ULK1蛋白的表达;在HMEC-1细胞系构建稳定敲低ULK1蛋白表达的细胞系,利用流式细胞术检测野生型和敲低型细胞对TGF-β信号的响应和细胞周期的变化。结果 TGF-β信号能够在血管内皮细胞中特异性地上调ULK1蛋白的表达水平,而且是通过促进合成而非抑制降解来实现的;ULK1蛋白在血管内皮细胞中促进细胞周期G1期阻滞,敲低ULK1可导致血管内皮细胞增殖加快。结论 TGF-β信号可在血管内皮细胞中特异性地上调ULK1蛋白的表达水平;ULK1蛋白能抑制血管内皮细胞的细胞周期进展。(本文来源于《中国医科大学学报》期刊2018年09期）
李宁,张克勤,彭侃夫[6]（2018）在《TGF-β/ILK信号通路在甲状旁腺激素诱导血管内皮细胞向间质细胞转化中的作用》一文中研究指出目的探讨尿毒症毒素甲状旁腺激素(PTH)诱导血管内皮细胞发生内皮-间充质转化(EndMT)的分子机制。方法采用全长重组PTH(1×10-8 mol/L)处理人主动脉血管内皮细胞(HAECs),同时利用转化生长因子β(TGF-β)信号通路抑制剂SB431542、Pirfenidone(PFD)和ILK抑制剂Cpd22进行干预。蛋白质印迹法(Western blot)检测HAECs中内皮细胞标志物血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、CD31,以及间充质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白水平。结果在PTH作用下,血管内皮细胞标志分子VE-cadherin和CD31表达降低(P<0.05),间充质细胞标志分子α-SMA的表达明显升高(P<0.05)。使用信号通路抑制剂抑制TGF-β和ILK可以部分逆转PTH诱导HAECs细胞发生间质转化,包括逆转PTH降低内皮细胞标志物和增加纤维化细胞标志物的作用。结论 PTH可能通过TGF-β/ILK通路诱导血管内皮细胞发生EndMT。(本文来源于《重庆医学》期刊2018年16期）
阚敏慧,葛明非,张瑛,范隆,付惠群[7]（2018）在《内皮细胞糖萼层损伤在LPS诱发的系统性炎症向中枢性炎症转化机制中作用的研究进展》一文中研究指出中枢性炎症是指发生在中枢神经系统内的一系列免疫炎性反应,是老年人术后认知功能障碍(post-operative cognitive dysfunction,POCD)的病理基础;而系统性炎症是由于外周炎性刺激引起外周或循环系统发生的免疫反应。目前许多研究认为系统性炎症是中枢性炎症的诱发因素,但其机制尚未阐明。血管内皮细胞糖萼层(endothelial glycocalyx,EGL)是保(本文来源于《北京医学》期刊2018年06期）
王亮,陈云肖,杨琴,何隆淼,黄俊[8]（2018）在《miR-328对高糖诱导人脐静脉内皮细胞间质转化调控作用的研究》一文中研究指出目的探讨miR-328对高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)间质转化的调控作用。方法构建miR-328和antagomiR-328慢病毒,培养HUVECs分为正常对照组(NC)、甘露醇对照组(MT)、高浓度葡萄糖组(HG),miR-328、miR-328阴性组、高浓度葡萄糖+antagomiR-328组、高浓度葡萄糖+antagomiR-328阴性组共7组。免疫荧光鉴定HUVECs间质转化;qRT-PCR检测miR-328;Western blot检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白。结果高糖处理HUVECs呈CD31、α-SMA双阳性;HG组较NC组miR-328表达增高[(2.800±0.175)vs 1,P<0.05];HG组及miR-328组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白较NC组表达增加[(0.414±0.014)vs(0.403±0.016)vs(0.175±0.025),(0.501±0.014)vs(0.474±0.016)vs(0.185±0.014),P<0.05];antagomiR-328组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白较HG组表达减少[(0.227±0.012)vs(0.414±0.014),(0.222±0.015)vs(0.501±0.014),P<0.05]。结论高糖诱导HUVECs间质转化,miR-328表达增加;过表达miR-328诱导HUVECs间质转化,并具有相应分泌功能,而过表达antagomiR-328可抑制这一现象。(本文来源于《中国糖尿病杂志》期刊2018年05期）
张诗翊[9]（2018）在《Chemerin/ChemR23与糖尿病肾病肾小球内皮细胞—间质转化的相关性研究》一文中研究指出背景目前糖尿病的发病率在世界范围内逐年攀升,糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)作为其主要的微血管并发症之一,严重影响患者的生活质量及疾病预后。现已证实,肾小球内皮细胞-间质转化(Endothelial-Mesenchymal Transition,EndMT)是糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)的重要发病机制之一,趋化素(Chemerin)是一种最近几年新发现的细胞因子,和它的主要受体ChemR23结合后具有调节炎症因子与白细胞趋化的作用。近期研究发现,疾病状态下异常升高的Chemerin与EndMT的关键调节因子—转化生长因子β1(Transforming Growth Factorβ1,TGF-β1)可能具有相关性。目的本文主要探讨在糖尿病肾病患者中,Chemerin/Chem R23与肾小球血管内皮细胞发生内皮细胞-间质转化的相关性。方法选择20名确诊2型糖尿病但无肾病的患者作为单纯糖尿病组(DM组),另外选择确诊糖尿病肾病的患者60例(DN组),并按患者的尿白蛋白/尿肌酐(Urinary Albumin/Creatinine Ratio,UACR)及肾小球滤过率(Estimated Glomerular Filtration Rate,eGFR)将其再分为3组,分别为:(1)DN-A组:UACR在30-300mg/g之间,eGFR≥60 ml/(min*1.73m~2)的患者20例;(2)DN-B组:UACR>300mg/g,eGFR≥60 ml/(min*1.73m~2)的患者20例;(3)DN-C组:UACR>300mg/g,eGFR<60 ml/(min*1.73m~2)的患者20例,并以20名同期的健康体检者为对照(NC组),采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测受试者血清中Chemerin、TGF-β1的含量;选取DN患者中行肾穿刺活检术的肾组织样本共8例,并以10例正常肾组织标本作对照,免疫组化法(Immunohistochemistry)检测待测肾组织中Chemerin、ChemR23、α-SMA、CD31及TGF-β1的表达;实时荧光定量PCR法(Quantitative Real Time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)检测待测肾组织中Chemerin、ChemR23、TGF-β1、α-SMA及CD31的mRNA表达。采用SPSS22.0软件对实验得到的数据进行统计学分析。当P<0.05时,认为差异有统计学意义。结果DM组及DN组患者血清中Chemerin、TGF-β1的含量均高于NC组,且二者含量均在DN组最高,Chemerin与TGF-β1在血清中的表达具有正相关性并随DN病情进展而逐渐增加;DN组患者肾组织中Chemerin、ChemR23的表达量明显高于NC组,且成纤维细胞标志蛋白α-SMA及纤维化指标TGF-β1的表达量也明显高于NC组,而内皮细胞标志蛋白CD31的表达量则明显低于NC组。同时,肾脏纤维化程度评分的结果与血清中TGF-β1含量呈正相关。PCR结果发现:DN组Chemerin、ChemR23、TGF-β1、α-SMA的mRNA表达量均高于NC组,而CD31的mRNA水平则低于NC组。结论DN肾脏纤维化程度与血清中的TGF-β1浓度有关,随DN病情进展,内皮细胞向间质表型转化,Chemerin、ChemR23可能通过调节EndMT过程参与了DN肾脏纤维化的发生发展。(本文来源于《郑州大学》期刊2018-05-01）
张姹,张佳幸,熊一凡,鲁路,王明清[10]（2018）在《基于内皮细胞的内皮-间质转化筛选肾康丸活性成分》一文中研究指出目的基于ALK5靶点,通过分子对接技术对肾康丸的有效成分进行筛选,并验证各分子在高糖模型中的作用,从而筛选出肾康丸影响内皮细胞内皮-间质转化活性的有效成分,优化组方配伍。方法对初步筛选的9个分子进行活力测定后选定毛蕊异黄酮、刺芒柄花苷、豆甾醇3个分子;通过设置正常细胞组、高糖损伤组、高糖损伤组+毛蕊异黄酮、高糖损伤组+刺芒柄花苷、高糖损伤组+豆甾醇组,并用实时荧光定量PCR检测3个分子的α-SMA,vimentin的m RNA表达水平;用Western blot法检测SMAD2/3磷酸化情况。结果与正常细胞组活力比较,毛蕊异黄酮、刺芒柄花苷、豆甾醇3个分子细胞毒性弱,与正常细胞组活力比较差异无统计学意义(P>0.05)。其中,高糖加毛蕊异黄酮组的α-SMA、vimentin的m RNA水平显着下降(P<0.05),SMAD2/3磷酸化受到抑制。其他两组差异无统计学意义。结论高糖对内皮细胞会产生损伤,可通过黄芪单体毛蕊异黄酮来抑制α-SMA、vimentin上调,抑制SMAD2/3参与调节内皮细胞内皮-间质转化从而改善糖尿病肾病。(本文来源于《南方医科大学学报》期刊2018年03期）
内皮细胞转化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:研究补阳还五汤含药血清对人肺动脉内皮细胞(HPAEC)间质转化(End MT)的调控作用,并从Jagged1/Notch1信号传导进一步分析其作用机制。方法:以53. 36 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量灌胃家兔,制备补阳还五汤含药血清,等容积生理盐水灌胃制备空白血清。体外培养HPAEC细胞,转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导建立End MT模型,设立空白组(10%空白血清),模型组(10%空白血清+TGF-β1),补阳还五汤含药血清高剂量组(10%含药血清+TGF-β1),补阳还五汤含药血清中剂量组(5%含药血清+5%空白血清+TGF-β1)和补阳还五汤含药血清低剂量组(2. 5%含药血清+7. 5%空白血清+TGF-β1) 5组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖能力,transwell和划痕实验检测细胞迁移能力,免疫荧光观察内皮细胞标志物血小板内皮细胞黏附分子1(CD31),血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)和间质细胞标志物成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Notch1,Jagged1及CBF1蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组HPAEC细胞增殖能力、迁移能力均显着增强(P <0. 01),CD31和VE-cadherin表达呈下降趋势,FSP1和α-SMA表达呈上升趋势,Notch1,Jagged1和CBF1表达显着上调(P <0. 01)。补阳还五汤含药血清干预后,与模型组比较,细胞增殖能力、迁移能力均明显减弱(P <0. 05,P <0. 01),且CD31和VE-cadherin表达呈上升趋势,FSP1和α-SMA表达呈下降趋势,Notch1,Jagged1和CBF1表达明显降低(P <0. 05,P <0. 01),随着含药血清浓度的增加,作用越明显。结论:补阳还五汤含药血清可部分抑制人肺动脉内皮细胞发生间质转化,这一过程可能与调控Jagged1/Notch1信号有关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
内皮细胞转化论文参考文献
[1].王娟,幸世峰,吕忠英,李鹏,李红建.c-SKI对冠脉内皮细胞增殖及内皮-间充质转化的影响[J].中国病理生理杂志.2019
[2].渠景连,杨邯捷,赵惠亮.补阳还五汤含药血清对人肺动脉内皮细胞间质转化的影响[J].中国实验方剂学杂志.2019
[3].杜建奎.Kallikrein-8促进内皮细胞间质转化在糖尿病心脏和肾脏间质纤维化中的作用及其机制研究[D].中国人民解放军海军军医大学.2019
[4].杨蕊萍.HGF调控Notch信号通路抑制人血管内皮细胞内皮-间充质转化机制的实验研究[D].西南医科大学.2019
[5].康伊,张艳,张伟.转化生长因子β信号在内皮细胞中通过上调ULK1蛋白抑制细胞周期[J].中国医科大学学报.2018
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