本文主要研究内容
作者张守聪（2019）在《狐伪狂犬病间接ELISA检测方法的建立》一文中研究指出：伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的一种危害动物繁殖系统、神经系统的急性传染病。伪狂犬病病毒可感染多种哺乳动物,如猪、鼠、貉、水貂和狐等。2011年,我国多个省份的生猪养殖场暴发了PRV疫情,且此次流行的毒株导致Bartha疫苗株难以对猪群提供全面保护。该毒株不仅使猪群发病,还导致狐等毛皮动物发病。当狐感染PRV后,表现出神经性瘙痒、呼吸困难、精神狂躁或沉郁等临床症状,体温变化多表现为“回归热”,发病的狐多以死亡为转归,给养狐业带来巨大的经济损失。为更好的防控该病,通过对狐PRV的分离鉴定,以gB蛋白的原核表达和HRP酶标二抗的制备为基础,建立狐PRV间接ELISA检测方法,用于狐PRV抗体的检测。采集20172018年间送检的疑似感染PRV的病死狐的脑组织样品30份,经PCR鉴定其中6份样品为PR阳性,阳性率为20%。将阳性的病料进行病毒分离,通过PCR和间接免疫荧光试验对分离的病毒进行验证,超速离心纯化后经透射电镜观察该病毒粒子的形态结构,证实分离株为PRV,命名为HBfox-25。测得病毒的TCID50为10-5.6/0.1 mL,经动物回归试验,狐出现神经异常、皮肤瘙痒并撕咬接种部位等症状,5d后死亡。本研究通过PCR技术扩增出HBfox-25的gB基因,并将目的片段与表达载体pET-32a连接,得到重组质粒pET-32a-gB。再将得到的质粒转化至大肠杆菌BL21,37℃震荡培养,待菌液生长至对数期时用IPTG诱导蛋白表达。最后经紫外分光光度计测得纯化后的蛋白浓度为1 mg/mL。通过棋盘滴定法来确定抗原最佳包被浓度。通过饱和硫酸铵法粗提狐血清中的IgG,过柱纯化。将纯化后的IgG免疫兔获得兔抗狐抗体,通过改良的二步法将纯化后的抗体进行HRP标记。从而建立狐PRV间接ELISA检测方法。经验证,本研究建立的狐PRV间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性。该方法的建立为狐PR的诊断和流行病学调查提供了新的技术支持。
Abstract
wei kuang quan bing （Pseudorabies,PR）shi you wei kuang quan bing bing du （Pseudorabies virus,PRV）yin qi de yi chong wei hai dong wu fan shi ji tong 、shen jing ji tong de ji xing chuan ran bing 。wei kuang quan bing bing du ke gan ran duo chong bu ru dong wu ,ru zhu 、shu 、hao 、shui diao he hu deng 。2011nian ,wo guo duo ge sheng fen de sheng zhu yang shi chang bao fa le PRVyi qing ,ju ci ci liu hang de du zhu dao zhi Barthayi miao zhu nan yi dui zhu qun di gong quan mian bao hu 。gai du zhu bu jin shi zhu qun fa bing ,hai dao zhi hu deng mao pi dong wu fa bing 。dang hu gan ran PRVhou ,biao xian chu shen jing xing sao yang 、hu xi kun nan 、jing shen kuang zao huo chen yu deng lin chuang zheng zhuang ,ti wen bian hua duo biao xian wei “hui gui re ”,fa bing de hu duo yi si wang wei zhuai gui ,gei yang hu ye dai lai ju da de jing ji sun shi 。wei geng hao de fang kong gai bing ,tong guo dui hu PRVde fen li jian ding ,yi gBdan bai de yuan he biao da he HRPmei biao er kang de zhi bei wei ji chu ,jian li hu PRVjian jie ELISAjian ce fang fa ,yong yu hu PRVkang ti de jian ce 。cai ji 20172018nian jian song jian de yi shi gan ran PRVde bing si hu de nao zu zhi yang pin 30fen ,jing PCRjian ding ji zhong 6fen yang pin wei PRyang xing ,yang xing lv wei 20%。jiang yang xing de bing liao jin hang bing du fen li ,tong guo PCRhe jian jie mian yi ying guang shi yan dui fen li de bing du jin hang yan zheng ,chao su li xin chun hua hou jing tou she dian jing guan cha gai bing du li zi de xing tai jie gou ,zheng shi fen li zhu wei PRV,ming ming wei HBfox-25。ce de bing du de TCID50wei 10-5.6/0.1 mL,jing dong wu hui gui shi yan ,hu chu xian shen jing yi chang 、pi fu sao yang bing si yao jie chong bu wei deng zheng zhuang ,5dhou si wang 。ben yan jiu tong guo PCRji shu kuo zeng chu HBfox-25de gBji yin ,bing jiang mu de pian duan yu biao da zai ti pET-32alian jie ,de dao chong zu zhi li pET-32a-gB。zai jiang de dao de zhi li zhuai hua zhi da chang gan jun BL21,37℃zhen dang pei yang ,dai jun ye sheng chang zhi dui shu ji shi yong IPTGyou dao dan bai biao da 。zui hou jing zi wai fen guang guang du ji ce de chun hua hou de dan bai nong du wei 1 mg/mL。tong guo qi pan di ding fa lai que ding kang yuan zui jia bao bei nong du 。tong guo bao he liu suan an fa cu di hu xie qing zhong de IgG,guo zhu chun hua 。jiang chun hua hou de IgGmian yi tu huo de tu kang hu kang ti ,tong guo gai liang de er bu fa jiang chun hua hou de kang ti jin hang HRPbiao ji 。cong er jian li hu PRVjian jie ELISAjian ce fang fa 。jing yan zheng ,ben yan jiu jian li de hu PRVjian jie ELISAjian ce fang fa ju you liang hao de te yi xing 、min gan xing he wen ding xing 。gai fang fa de jian li wei hu PRde zhen duan he liu hang bing xue diao cha di gong le xin de ji shu zhi chi 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自河北科技师范学院的张守聪，发表于刊物河北科技师范学院2019-07-08论文，是一篇关于伪狂犬病病毒论文,病毒分离鉴定论文,蛋白论文,间接论文,河北科技师范学院2019-07-08论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自河北科技师范学院2019-07-08论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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