辽宁省瓦房店妇婴医院116300
摘要：目的探讨P16，Ki-67免疫组化诊断宫颈上皮内瘤变中的应用。方法收集我院正常宫颈鳞状上皮标本30例，宫颈上皮内瘤变100例，采用免疫组化S-P法，对宫颈CIN病变中P16和Ki-67的研究。
结果P16蛋白在CIN中表达高于正常宫颈上皮（P＜0.01），Ki-67在CIN中表达高于正常宫颈上皮（P＜0.01）。结论P16和Ki-67蛋白阳性细胞数及分布层次与宫颈CIN分级密切相关
关键词：宫颈；免疫组化；P16；Ki-67
宫颈癌是妇科常见恶性肿瘤，发病率居妇科肿瘤第二位，从宫颈上皮内瘤变（CIN）到浸润癌为一个连续发展过程，早期筛查在宫颈癌防治上尤为重要，然而在实际工作中鳞状上皮化生，诊断宫颈上皮内瘤变和分级存在一定困难，级别判定缺少客观依据，本研究将P16，Ki-67免疫组化应用宫颈病变组织中的病理诊断，探讨其应用价值.
1.材料与方法
1.1材料收集瓦房店妇婴医院2010年---2014年宫颈活检及手术标本共计100例，30例因子宫肌瘤全切子宫患者标本作为对照组，含正常/增生/化生鳞状上皮。CINI42例，CINII36例，CINIII22例。年龄26-58岁，中位年龄42岁。
1.2方法标本经4%中性甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，4微米连续切片，分别HE染色和P16，Ki-67蛋白免疫组化染色。免疫组化采用MaxVision法，所用一抗P16，Ki-67及免疫组化试剂盒购于福州迈新生物技术有限公司。
1.3结果判定P16阳性细胞定位于细胞核/细胞质。Ki-67阳性细胞定位于细胞核。
2结果
2.1对照组及各CIN组P16，Ki-67表达：
（1）对照组30例，P16（—）25例，P16（+）5例，阳性率16.7%；Ki-67（—）26例，Ki-67（+）4例，阳性率13.3%。
（2）CINI组计42例，P16（—）7例，P16（+）35例，阳性率83.3%；Ki-67（—）6例，Ki-67（+）36例，阳性率85.7%.
（3）CINII组计36例，P16（—）3例，P16（+）33例，阳性率91.7%；Ki-67（—）2例，Ki-67（+）34例，阳性率94.4%
（4）CINIII组计22例，P16（—）2例，P16（+）20例，阳性率90.9%；Ki-67（—）3例，Ki-67（+）19例，阳性率86.3%。
统计学处理：采用X2检验，P＜0.05为差异，有统计学意义。
2.2对照组中鳞状上皮P16，Ki-67染色多为阴性。P16在CINI中为83.3%，在CINII，CINIII中91.7%和90.9%，差异显著（P＜0.05）。同时阳性表达有分层现象。CINI中大部分P16阳性细胞局限于宫颈鳞状上皮下1/3，在CINII中累及上皮下2/3，而CINIII多超过上皮2/3或全层弥漫阳性。部分病例CIN病变与正常鳞状上皮相延续。Ki-67阳性率在CIN中明显增加，CINI为85.7%，CINII，III为94.4%和86.3%表达。各组与对照组相比差异显著（P＜0.05）。同时阳性表达有分层现象，在CINI中大部分阳性细胞局限于宫颈鳞状上皮下1/3，在CINII中累及上皮下2/3，而CINIII多超过上皮下2/3或全层。
3讨论
试验结果显示，P16蛋白在CIN病变中阳性率显著增加尚有明显分层现象。P16蛋白是一种重要的抑癌基因。特异性结合CDK4，抑制其活性，从而抑制细胞由G1期进入S期，对Rb基因控制的细胞增殖周期起负调节作用。用于各种恶性肿瘤研究。目前研究表明在高级别宫颈上皮内肿瘤和高危型HPV感染的肿瘤高表达。阳性定位于细胞核/细胞质。低级别CIN中阳性细胞局限于中下层，高级别CIN超过上皮层下2/3或全层。根据其表达强度和累及层次，有助于对CIN病变进行准确分级。
Ki-67阳性细胞数及分布层次与CIN分级相关。Ki-67用于判断细胞增殖活性，表达在所有活动的细胞周期（G1，S，G2和有丝分裂期）中，而在G0期不表达。其增殖指数高低与许多肿瘤分化程度，浸润转移以及预后密切相关，因此也是恶性肿瘤预后重要参考指标之一。阳性定位于细胞核。在非肿瘤性宫颈鳞状上皮局限于基底层，低级别病变阳性细胞分布中层，高级别分布全层。
综上P16，Ki-67表达随着宫颈CIN级别升高而升高，在诊断宫颈高级别病变中具有很高灵敏性与特异性，可以明确CIN级别，结果直观，对比明显，易于判读，故P16，Ki-67可以作为一种增加宫颈上皮内瘤变病理诊断准确性的有效检测方法。