导读:本文包含了内皮样分化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:脂肪干细胞,外泌体,血管新生,人脐静脉血管内皮细胞
内皮样分化论文文献综述
张静,易阳艳,阳水发,朱元正,胡玄[1]（2018）在《脂肪干细胞来源外泌体对人脐静脉血管内皮细胞增殖、迁移及管样分化的影响》一文中研究指出目的探讨脂肪干细胞来源外泌体(adipose-derived stem cell released exosomes,ADSC-Exos)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、迁移及管样分化的影响。方法取吸脂患者自愿捐赠的脂肪组织,采用酶消化法分离培养获得ADSCs,并行流式细胞检测及成脂诱导鉴定。收集第3代ADSCs上清液提取外泌体,透射电镜观察其形态,Western blot检测其膜表面标志性蛋白Alix和CD63,用纳米颗粒跟踪分析仪NanoSight分析外泌体粒径分布范围。用PKH26荧光标记的ADSC-Exos与HUVECs共培养后,共聚焦显微镜观察ADSC-Exos能否进入HUVECs。将ADSC-Exos与HUVECs共培养1、2、3、4、5 d,CCK-8法检测ADSC-Exos对HUVECs增殖影响;共培养12 h时ELISA法检测细胞上清液VEGF蛋白表达量。采用Transwell迁移实验检测ADSC-Exos对HUVECs迁移能力的影响。通过体外Matrigel基质胶实验,观察ADSCExos对HUVECs管状结构形成的影响;将HUVECs与Matrigel基质胶混合后联合ADSC-Exos注射在BALB/c雄性裸鼠皮下,2周后检测基质胶中新生血管情况,计算平均血管密度(mean blood vessel density,MVD)。上述实验均以等量PBS作为对照。结果经鉴定所培养细胞符合ADSCs的特征。ADSC-Exos为形态一致的圆形或椭圆形膜性囊泡,表达标志性蛋白Alix和CD63,粒径范围30~200 nm。共聚焦显微镜观察示ADSC-Exos可被HUVECs摄取。CCK-8法检测示,各时间点实验组细胞增殖均优于对照组(P<0.05)。Transwell实验结果显示,实验组跨膜迁移细胞数较对照组显着增多(t=9.534,P=0.000)。在体外Matrigel胶成管实验中,实验组管样结构数明显多于对照组(t=15.910,P=0.000);在体内实验中,实验组MVD亦显着高于对照组(t=16.710,P=0.000)。ELISA检测示,实验组细胞上清液VEGF蛋白表达量明显高于对照组(t=21.470,P=0.000)。结论 ADSC-Exos可促进HUVECs增殖、迁移及管样结构形成,提示ADSC-Exos可促进血管新生。(本文来源于《中国修复重建外科杂志》期刊2018年10期）
晋果果,赵继敏,杨艺,刘康栋,刘行凡[2]（2015）在《高、低分化的人食管鳞癌细胞上清通过JAK/STAT3信号转导通路对iDC内皮样分化的影响》一文中研究指出目的:探讨不同分化程度的人食管鳞癌细胞(ESCC)上清对未成熟树突状细胞(iD C)内皮样分化的影响及其机制。方法:收集KYSE450(高分化)和KYSE70(低分化)细胞上清,并诱导iD C;镜下观察诱导后iD C形态的变化;免疫荧光检测内皮细胞标志物vW F、CD144以及JAK、STAT3磷酸化水平的变化;Q-PCR在mRNA水平上检测内皮细胞标志物vW F和CD144的变化,(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2015年10期）
文礼湘,王瑞瑞,熬守良,屈波[3]（2015）在《护心康对内皮细胞髓样分化因子88和肿瘤坏死因子受体相关因子-6基因的影响》一文中研究指出目的:研究护心康对My D88和TRAF6的影响,探讨其抗动脉粥样硬化的机制。方法:采用雄性中国本兔14只,随机分为正常组和护心康组,分别以蒸馏水和护心康连续灌胃7 d,末次灌胃给药2 h后心脏采血分离血清。体外培养人脐静脉内皮细胞,随机分为3组:正常组,模型组,护心康组。用LPS刺激2 h后,模型组给予空白血清,护心康组给予含药血清干预24 h,收集细胞,用荧光定量PCR和Western blot分别测定My D88和TRAF6m RNA的表达。结果:LPS刺激引起My D88和TRAF6基因表达升高(P<0.01);护心康组表达较模型组低(P<0.05)。结论:护心康具有降低内皮细胞My D88和TRAF6基因表达的作用,其抗动脉粥样硬化的作用可能与此有关。(本文来源于《中医药导报》期刊2015年14期）
关海旺[4]（2012）在《成人脂肪间充质干细胞与外周血内皮祖细胞心肌样分化特性比较的实验研究》一文中研究指出目的：分别探讨成人脂肪间充质干细胞（ADMSCs）和成人外周血内皮祖细胞（EPCs）体外分离、培养的方法；证实ADMSCs和EPCs经5-氮胞苷（5-aza）的诱导可分化为心肌样细胞；初步观察心肌特异性转录因子GATA-4和Nkx2.5在诱导过程中表达的变化，并对两种干细胞的心肌样分化特性进行比较，为干细胞移植治疗冠心病时，选择合适的种子细胞提供初步的基础实验支持。方法：（1）①ADMSCs的分离与培养：外科手术中取成人皮下脂肪组织，利用胶原酶Ⅰ消化法及细胞贴壁法体外分离培养。取生长状态较好的第3代细胞，进行CD29，CD44，Ⅷ因子和人类白细胞抗原（HLA-DR）等表面抗原的间接免疫荧光鉴定，同时设立磷酸盐缓冲溶液（PBS）的空白对照。②ADMSCs的体外诱导：用5-aza对生长状态较好的第3代细胞进行诱导，并对诱导后的细胞进行心肌特异表面标志物结蛋白（Desmin）和肌钙蛋白T（cTnT）的间接免疫荧光鉴定。（2）①EPCs的分离与培养：无菌条件下采集成人外周静脉血，利用密度梯度离心法及细胞贴壁法体外分离培养。原代细胞培养至7d时，进行荆豆凝集素（FITC-UEA-Ⅰ）和乙酰化低密度脂蛋白（Dil-ac-LDL）免疫双荧光鉴定；同时以PBS为空白对照，进行CD133，CD34，KDR等表面抗原的免疫细胞化学染色鉴定。②EPCs的体外诱导：原代细胞培养至7d时，用5-aza进行诱导，并对诱导后的细胞进行心肌特异表面标志物Desmin和cTnT的间接免疫荧光鉴定。（3）分别在ADMSCs和EPCs诱导后的第7、14、21d，采用PCR方法检测诱导过程中心肌特异性转录因子GATA-4和Nkx2.5的表达情况，并进行比较。结果：（1）成人脂肪组织中含有长梭形的间充质干细胞，易于在体外分离培养。免疫荧光鉴定CD29，CD44呈阳性表达，Ⅷ因子和HLA-DR呈阴性表达。5-aza诱导ADMSCs后，细胞形态逐渐发生改变，同时增殖速度显着减慢。诱导7d时，细胞呈较为均一的长梭形；诱导至14d时，细胞排列方向逐渐一致，并有聚集成团的倾向；诱导21d时，细胞体积较前增大，呈球形或不规则形，有的有突起伸出，胞浆不均。免疫荧光鉴定Desmin和cTnT呈阳性表达。（2）成人外周血中含有EPCs，可以在体外分离培养。免疫双荧光鉴定呈阳性表达，免疫细胞化学染色鉴定CD133，CD34，KDR呈阳性表达。5-aza诱导EPCs后，细胞形态发生改变，细胞长度增加，逐渐呈均匀一致的长梭形，同时细胞排列方向也渐趋一致；诱导后期有的细胞呈球形或不规则形，有聚集成团倾向。诱导14d时免疫荧光鉴定Desmin和cTnT呈阳性表达。（3）ADMSCs和EPCs诱导后的PCR产物条带可见GATA-4和Nkx2.5基因表达，并且随着诱导时间的逐渐延长，相对表达量增多；同一诱导时间段比较，ADMSCs诱导后的心肌特异基因相对表达显着高于EPCs组(p<0.05)。结论：（1）5-氮胞苷能将体外培养的脂肪间充质干细胞诱导为心肌样细胞；（2）5-氮胞苷能将外周血内皮祖细胞诱导为心肌样细胞，但成功率较低。（3）与内皮祖细胞比较，脂肪间充质干细胞诱导相对容易，诱导后心肌样细胞分化较多，是干细胞移植治疗冠心病时更为理想的种子细胞。(本文来源于《宁波大学》期刊2012-04-12）
姜华,张艳,王辰[5]（2010）在《益气活血复方含药血清对人脐静脉内皮细胞TLR4及其下游髓样分化因子88、肿瘤坏死因子受体相关因子-6表达的影响》一文中研究指出目的研究益气活血复方含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路主要元件髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)表达的影响,从mRNA和蛋白水平探讨益气活血复方含药血清防治动脉粥样硬化的机制。方法选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高、中、低浓度(1.6、0.8、0.4g/mL)组,每组5只。各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7天。末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清。体外培养HUVECs,随机分为6组,即空白对照组、模型组、西药对照组、中药高、中、低浓度组,用LPS刺激后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预24h,收集细胞,用荧光定量PCR方法和Western blotting法分别测定TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA和蛋白的表达。结果用LPS刺激HUVECs后,引起TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA和蛋白的高表达(与空白对照组比较,P<0.01),用益气活血复方含药血清干预以后显着抑制TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA和蛋白的高表达(与模型组比较,P<0.01,P<0.05)。结论益气活血复方可阻断TLR4高表达,同时阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,抑制下游NF-κB以及各种相关基因表达,这可能是其抗动脉粥样硬化的作用机制之一。(本文来源于《中国中西医结合杂志》期刊2010年05期）
廖礼强,张晓刚,史若飞,王丁琼,汤为学[6]（2009）在《微血管内皮细胞诱导骨髓间充质干细胞向心肌样分化及其移植的可行性》一文中研究指出背景:骨髓间充质干细胞通过再生心肌细胞在心肌损伤性疾病治疗方面突显较大潜力,但目前仍未找到一种理想的诱导方式。目的:探讨微血管内皮细胞诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的潜能,并分析其移植的可行性。设计、时间及地点:细胞学体外观察及体内移植实验,于2008-07/2009-02在重庆市神经病学重点实验室完成。材料:清洁级二叁月龄健康雄性SD大鼠16只,购自重庆医科大学实验动物中心方法:孔径0.4μm的transwell小室,置入培养板孔构成双室培养体系。取SD大鼠1只,Ficoll密度梯度+贴壁筛选法分离培养骨髓间充质干细胞,组织块法分离培养微血管内皮细胞。培养瓶中融合至50%生长良好的微血管内皮细胞,每3d更换培养液,收集更换液过滤即制成条件培养液。体外实验分为4组:直接接触组、双室培养组、条件培养液组、培养液对照组,观察各种培养条件对骨髓间充质干细胞的心肌诱导效应。取SD大鼠15只建立心肌梗死模型,冠状动脉结扎后第6天任取1只大鼠明确心肌梗死建模是否成功,其余大鼠随机分为细胞移植组8只、模型对照组6只。造模1周后,细胞移植组将在双室模型中与微血管内皮细胞共培养5d的骨髓间充质干细胞调整浓度为109L-1,通过鼠尾静脉缓慢注入1mL,模型对照组予等量DMEM,观察4周。主要观察指标:体外实验通过免疫荧光染色检测心肌标志物TnI、α-actin的表达;采用心电图、荧光镜检、苏木精-伊红染色等方式评价体内移植的安全性及可行性。结果:直接接触组、双室培养组、条件培养液组部分骨髓间充质干细胞心肌标志物TnI、α-actin阳性表达,荧光镜下胞浆发绿光(或红光),前2组诱导率基本相似(P>0.05),且均明显高于条件培养液组(P<0.05);培养液对照组细胞未向心肌样细胞分化。细胞移植后两组大鼠均存活良好,未出现死亡及恶性心律失常,4周后细胞移植组心脏冰冻切片荧光镜检显示心肌内有少量胞核蓝染的细胞,提示干细胞成功归巢,结合苏木精-伊红染色,归巢细胞位于心肌梗死灶周边区域,呈单个或小团聚集;而模型对照组心肌切片未见胞核蓝染的细胞。结论:微血管内皮细胞能够通过旁分泌途径诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化,经微血管内皮细胞预处理过的骨髓间充质干细胞移植入大鼠体内是安全的,可成功归巢到大鼠心肌梗死灶及周边区。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2009年40期）
白睿华[7]（2009）在《人结肠癌SW620细胞上清作用下树突状细胞内皮样分化的研究》一文中研究指出研究背景:树突状细胞(dendritic cells,DCs)是目前已知的体内抗原呈递功能最强的专职抗原呈递细胞(antigen presenting cells,APCs),是启动、调控、并维持免疫反应的中心环节。在抗肿瘤免疫中发挥着重要作用。然而,许多研究证实在肿瘤患者循环血中和肿瘤周围浸润的树突状细胞的表型及其呈递功能均下降,肿瘤细胞可以分泌多种免疫抑制因子抑制DCs的功能成熟。肿瘤的无限制生长需要血管的供应。传统理论认为肿瘤血管形成是通过血管新生(angiogenesis)即从已存在的微血管上芽生出新的毛细血管的过程,目前研究发现也可以通过血管发生(vasculogenesis)——由内皮前体细胞分化形成新血管的过程。内皮细胞(endothelial cells,ECs)可以来源于骨髓内皮前体细胞(endothelialprogenitors,EPCs)和人外周血中CD34~+细胞群。研究证实多数肿瘤细胞都高表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),VEGF可以通过MAPK/ERK信号途径刺激内皮细胞的增殖和分化,从而促进肿瘤血管生成。MAPK/ERK途径是体内外多种细胞分化的重要信号通路之一。最新研究报道,在小鼠和人卵巢癌组织中发现了一种新的白细胞亚群,同时表达DCs和内皮细胞的标志。另有学者报道在肿瘤条件培养基浸润下的单核细胞能分化发育为肿瘤相关性树突细胞(tumor-associated dendritic cells,TADCs),此类细胞能在血管生成因子如VEGF和致瘤素M的诱导下分化发育为内皮样细胞(endothelial-like cells,ELCs),并且在基质胶上可以形成网状结构。本课题组前期研究发现结肠癌SW620细胞上清能抑制未成熟DCs(immature dendritic cells,iDCs)的生长过程及相关抗原表达,并且未成熟DCs在SW620细胞上清诱导下发生内皮样分化。这些研究揭示在肿瘤相关环境下DCs在抗肿瘤免疫方面受到抑制,部分DCs还发生内皮样分化。国内外近年来关于DCs的研究多集中于如何提高DCs抗肿瘤的免疫功能等方面,而肿瘤微环境下DCs的内皮样分化发生及其机制等还有待于进一步的研究。目的:本实验探讨结肠癌细胞SW620分泌的可溶性细胞因子营造的微环境对人外周血单个核细胞来源的不同时期DCs发生内皮样分化的影响,以及MAPK/ERK信号途径在此过程中的激活情况。实验方法:1.制备结肠癌SW620细胞上清液。2.采集健康志愿者新鲜外周血,密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,RPMI 1640完全培养液调整细胞浓度为3×10~6/ml,接种于24孔培养板中,每孔1 ml,移入二氧化碳孵育箱(5%/CO_2,37℃)静置3 h,去除悬浮细胞,获取贴壁生长的单核细胞,加入含rhGM-CSF(100 ng/ml)、IL-4(5 ng/ml)和10%自体血清的1640培养液,第5d加入LPS(5 ng/ml)。诱导组除加入上述培养液外,分别于第2d(未成熟DCs诱导组)、第7d(成熟DCs诱导组)分组加入SW620细胞上清液。隔天半量换液,各诱导7d。分别于第9d和14d收集诱导组细胞和对照组DCs。培养过程中观察细胞形态并计数;提取各组细胞总蛋白,Western blotting检测内皮细胞特异性标志vWF、VE-cadherin的表达情况;透射电镜观察WP小体;增殖及杀伤实验观察诱导后细胞抗原呈递功能的改变;乙酰化低密度脂蛋白摄取实验(DiL-Ac-LDL uptake assay)了解诱导后细胞是否具有内皮细胞的功能;Westernblotting检测SW620细胞上清液对未成熟DCs刺激后15、30、60 min的ERK1/2水平的影响。使用ERK1/2上游激酶MEK的阻断剂PD98059,观察MAPK/ERK通路阻断后,SW620细胞上清诱导组细胞vWf、VE-cadherin的蛋白表达情况和DiL-Ac-LDL摄取功能。3.胰蛋白酶法配合内皮细胞培养基培养原代脐静脉内皮细胞,作为阳性对照组。采用统计学软件包SPSS 12.0进行结果的统计分析,将所得计量数据以平均数±标准差((?)±s)表示,确定方差齐性后,进行t检验或方差分析,P＜0.05为显着性差异。结果:1.在SW620细胞上清液诱导下,未成熟DCs诱导组细胞生长过程及其状态明显落后于对照组DCs,细胞密度较低,并且形成类管腔样和条索样结构;其对照组DCs则表现典型树突状细胞特征,细胞形态不规则,有粗细不等的毛刺状突起,有悬浮趋势;而成熟DCs诱导组细胞与其对照组DCs无明显差异。2.Western blotting检测结果显示:未成熟DCs经SW620细胞上清液诱导7d后,内皮细胞的特异标记vWF、VE-cadherin与对照组DCs相比,均出现明显表达且两组间的差异有统计学意义。透射电镜结果显示:经SW620细胞上清液诱导的未成熟DCs胞内出现内皮细胞的特异性结构WP小体。DCs方面功能检测:未成熟DCs诱导组细胞的抗原提呈能力下降,而内皮细胞特异的乙酰化低密度脂蛋白摄取功能增强。SW620细胞上清诱导未成熟DCs以时间依赖性方式激活MAPK/ERK信号通路。PD98059阻断后vWF、VE-cadherin的蛋白表达均明显下降,DiL-Ac-LDL摄取功能也显着下降。结论:1.在SW620细胞上清液诱导下,DCs的生长过程和功能受抑制,并且未成熟DCs上调内皮细胞特异性标志和功能,提示其发生内皮样分化。2.SW620细胞上清通过MAPK/ERK信号途径诱导未成熟DCs内皮样分化。使用PD98059阻断剂后可明显阻断其内皮样分化进程。(本文来源于《郑州大学》期刊2009-05-26）
路静[8]（2009）在《人食管鳞状细胞癌微环境下树突状细胞内皮样分化及其机制的研究》一文中研究指出树突状细胞(dendritic cells,DCs)是目前已知抗原呈递功能最强,唯一能激活初始T细胞的专职抗原递呈细胞,是调节免疫反应的中心环节。由DCs激活的T细胞介导的免疫反应在抗肿瘤免疫中起重要作用,DCs数量或功能缺陷是肿瘤免疫逃逸的重要原因,国内外近年来关于DCs的研究多集中于如何提高DCs的抗原递呈功能及制备有效的DCs瘤苗等方面。2004年《Nature Medicine》报道Coukos G等在高分泌血管内皮生长因子A(Vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)的荷瘤鼠和人卵巢癌组织中发现一种新的细胞群,同时表达DCs和内皮细胞标志。VEGF-A是肿瘤细胞分泌的众多因子中一种强力的血管生成因子,是高效的内皮细胞有丝分裂原,可直接作用于内皮细胞,促进肿瘤血管生成。该研究同时发现,体外培养的小鼠骨髓来源的DCs在VEGF-A的作用下也可出现内皮样分化,提示在体内DCs可参与肿瘤血管的形成。肿瘤血管形成是肿瘤迅速生长的重要标志。传统理论认为只有通过血管新生(angiogenesis)即通过预存的内皮细胞发芽从而形成毛细血管,而血管发生(vasculogenesis)主要在胚胎期。但近来研究表明血管发生在成年生物也可实现,肿瘤的血管化作用也包括血管发生,即内皮细胞从不成熟的前体细胞发育而来。2006年Young MR报道小鼠骨髓来源的CD34~+细胞可发育为起抗原递呈功能的DCs,但加入小鼠的Lewis肺癌细胞条件培养液后,使CD34~+细胞分化发生偏移,从树突状细胞途径分化为内皮样细胞。2007年E.Gottfried研究表明肿瘤相关的DCs在VEGF和制瘤素作用下分化成为内皮样细胞,可能是肿瘤血管生成的另一条途径。DCs的内皮样分化是一新现象,具体发生机制有待深入研究。多种生长因子、细胞因子和一些血管活性物质,均可通过细胞信号转导引起细胞分化。MAPK/ERK1/2是多种细胞外刺激信号引起细胞分化、细胞内信息传递的共同通路或交汇点,那么,该通路是否介导了DCs的内皮样分化尚有待探讨。食管癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,有较高的发生率和死亡率。食管鳞癌是最常见的病理类型,侵袭性强,预后差。食管鳞癌组织及其代谢产物是否诱导DCs出现内皮样分化,使食管鳞癌细胞在逃避免疫监视的同时诱导血管内皮细胞的形成,目前未见报道。本研究分别采用食管鳞癌EC9706细胞上清,食管鳞癌组织匀浆上清体外模拟食管鳞癌微环境,研究其对不成熟DCs(immature DCs,iDCs)和成熟DCs(mature DCs,mDCs)内皮样分化细胞形态及功能学方面的影响;通过研究VEGF-A对DCs内皮样分化的影响,VEGF-A在EC9706细胞上清诱导iDCs内皮样分化中的作用,MAPK/ERK1/2/CREB通路在EC9706细胞上清、VEGF-A诱导iDCs内皮样分化中的作用,来探讨食管鳞癌微环境引起iDCs内皮样分化的机制,丰富食管鳞癌细胞免疫逃逸理论,提供阻断iDCs内皮样分化的策略,为DCs瘤苗在食管鳞癌患者更好地应用提供基础。第一部分食管鳞癌微环境对iDCs和mDCs内皮样分化的影响第一章EC9706上清对iDCs和mDCs内皮样分化细胞形态及相关抗原的研究方法1.实验分组对照DCs组:人外周血单核细胞经rhIL-4、rhGM-CSF、LPS联合诱导培养DCs,第9天、14天收获细胞。EC9706上清iDCs诱导组:在DCs培养的2天末(iDCs)加入40%EC9706培养上清诱导7天,第9天收获细胞。EC9706上清mDCs诱导组:在DCs培养的7天末(mDCs)加入40%EC9706培养上清诱导7天,第14天收获细胞。阳性对照人脐静脉内皮细胞组:胰蛋白酶消化配合内皮细胞培养基(endothelial cell medium,ECM)培养人脐静脉内皮细胞(human umbilicalvein endothelial cells,HUVECs)。2.光学显微镜下观察EC9706上清iDCs诱导组、mDCs诱导组细胞形态。3.流式细胞仪检测EC9706上清iDCs诱导组、mDCs诱导组细胞表达DCs特异标志CD86、CD1a及CD11c的情况。4.RT-PCR检测0d单核细胞、iDCs诱导组、mDCs诱导组细胞和对照组细胞DCs标志CD1a、内皮细胞标志CD144和血管假性血友病因子(von Willebrand Factor,vWF,又名八因子相关抗原)的表达。5.免疫荧光法检测EC9706上清iDCs诱导组、mDCs诱导组细胞和对照组细胞vWF的表达。6.Western blotting检测EC9706上清iDCs诱导组、mDCs诱导组细胞和对照组细胞vWF、CD144表达。结果1.对照DCs和HUVECs形态和相关抗原的表达电镜检测显示第7天对照DCs有明显突起,胞浆有大量线粒体、吞饮小泡和微丝;流式细胞术检测诱导前单核细胞相关抗原阳性率均较低,诱导7d后,DCs表面抗原表达明显增高(P＜0.01)。阳性对照HUVECs具有内皮细胞典型的铺路石状、长梭形、漩涡状排列生长、以及管腔样结构。高表达内皮特异性标志vWF、CD144,并具备内皮细胞强的摄取Dil荧光标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-acetylated low-density lipoprotein,Dil-Ac-LDL)的能力。2.EC9706上清诱导对细胞形态学影响第8d,对照DCs逐渐增大变圆,高倍镜下细胞周围可见毛刺状突起,部分细胞悬浮,而EC9706上清iDCs诱导组大圆细胞数目较少,细胞多呈细长形,有类管腔分布趋势,少部分细胞呈条索状排列;mDCs诱导组细胞形态与其对照组无明显区别。3.EC9706上清诱导后DCs抗原CD86、CD1a及CD11c的表达流式结果显示,EC9706上清iDCs诱导组与其对照DCs相比CD86、CD1a及CD11c表达率明显下降(P＜0.05),而mDCs诱导组与其对照DCs各抗原表达率无明显差异(P＞0.05)。4.EC9706上清诱导前、后DC抗原CD1a和内皮细胞抗原CD144与vWF的表达RT-PCR结果显示,DCs诱导前单核细胞CD1a表达很弱,基本不表达CD144、vWF。iDCs诱导组细胞与其对照DCs相比CD1a表达降低,CD144与vWF表达增强;mDCs诱导组细胞与其对照DCs仅有CD1a的表达,而基本不表达CD144、vWF。免疫荧光结果显示:iDCs诱导组细胞胞浆中vWF绿色荧光颗粒表达量强于其对照DCs(P＜0.05),而mDCs诱导组与其对照DCs相比无明显差异(P＞0.05)。Western blotting结果显示:iDCs诱导组vWF、CD144蛋白表达量增加,与对照DCs相比P＜0.01;mDCs诱导组CD144、vWF蛋白均无明显表达。第二章EC9706上清对iDCs和mDCs内皮样分化功能学的研究方法1.检测EC9706上清iDCs诱导组、mDCs诱导组细胞在纤维粘连蛋白上类管腔样结构的形成能力。2.检测PBMCs、EC9706上清iDCs诱导组、mDCs诱导组细胞Dil-Ac-LDL及印度墨汁摄取情况。3.电镜检测EC9706上清iDCs诱导组细胞及其对照细胞形态及WP小体形成情况。4.活细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测EC9706上清iDCs诱导组细胞刺激T细胞增殖,及其特异性CTL对EC9706细胞杀伤效应。结果1.EC9706上清诱导后对相关内皮细胞功能的影响类管腔结构形成能力:iDCs诱导组细胞接种至纤维粘连蛋白包被的培养板上,第1个24 h细胞形态呈现梭形,漩涡状分布趋势,第2个24 h可观察到与HUVECs相似的类管腔样结构形成;而其对照DCs、mDCs诱导组和其对照DCs分布较均匀。摄取能力:单核细胞摄取Dil-Ac-LDL的能力弱,但其摄取墨汁能力强。iDCs诱导组细胞不摄取墨汁,排除诱导后细胞中混有单核细胞、巨噬细胞可能。iDCs诱导组细胞摄取Dil-Ac-LDL能力明显强于其对照DCs,而mDCs诱导组细胞摄取Dil-Ac-LDL能力与其对照DCs无明显差别。WP小体的形成:WP小体是内皮细胞特异的功能性结构单位。电镜结果示:iDCs诱导组细胞中有WP小体和大量的微丝,与HUVECs结构相似,在对照DCs中没有发现WP小体结构。2.EC9706上清诱导后对相关DC功能的影响EC9706上清iDCs诱导组细胞刺激T细胞增殖率、CTL杀伤率均明显低于对照DCs(P＜0.01),显示EC9706上清使iDCs诱导组细胞抗原递呈功能下降。第叁章食管鳞癌组织匀浆上清对iDCs内皮样分化的影响方法1.采集新鲜食管鳞癌及癌旁组织标本各10例,研磨法制备组织匀浆上清。2.实验分组对照DCs组:人外周血单核细胞,rhIL-4、rhGM-CSF、LPS联合诱导培养DCs。食管鳞癌匀浆上清组:在DCs培养的2天末加入40%食管鳞癌组织匀浆上清,诱导7天,第9天收获细胞。癌旁匀浆上清组:在DCs培养的2天末加入40%食管鳞癌癌旁组织匀浆上清,诱导7天。阳性对照HUVECs。3.Western blotting检测食管鳞癌、癌旁匀浆上清组细胞vWF、CD144的表达。4.免疫荧光检测食管鳞癌、癌旁匀浆上清组细胞vWF的表达。5.Dil-Ac-LDL及印度墨汁摄取实验检测食管鳞癌、癌旁匀浆上清组细胞摄取功能。6.CCK-8检测食管鳞癌、癌旁匀浆上清组细胞刺激T细胞增殖、及其特异性CTL对EC9706细胞杀伤效应。结果1.食管鳞癌、癌旁匀浆上清诱导后对iDCs形态的影响培养第8天,正常DCs与癌旁组细胞逐渐增大变圆,细胞周围可见毛刺状突起,部分细胞悬浮;而食管癌匀浆上清组细胞呈现细长梭形,交织在一起。2.食管鳞癌、癌旁匀浆上清诱导后内皮细胞抗原CD144与vWF的表达癌匀浆上清组细胞vWF、CD144蛋白的表达量增加,与癌旁组、对照DCs相比P＜0.01;而癌旁组与对照DCs相比P＞0.05。食管癌匀浆上清组细胞胞浆中vWF绿色荧光颗粒表达量强于其癌旁组和对照DCs(P＜0.05);而癌旁组和对照DCs vWF荧光表达量均较弱(P＞0.05)。3.食管鳞癌、癌旁匀浆上清诱导后对相关内皮细胞功能的影响各诱导组细胞均不摄取墨汁,癌匀浆上清组细胞摄取Dil-Ac-LDL能力明显强于癌旁组和对照DCs。4.食管鳞癌、癌旁匀浆上清诱导后对相关DC功能的影响食管癌匀浆上清组刺激T细胞增殖率及其CTL对EC9706的杀伤率,均明显低于对照DCs组和癌旁组(P＜0.01);而癌旁组与对照DCs刺激T细胞增殖能力与CTL杀伤率差异没有统计学意义(P＞0.05)。第二部分食管鳞癌微环境引起iDCs内皮样分化机制的探讨第一章VEGF-A对DCs内皮样分化的作用方法1.实验分组对照DCs组:分离人外周血单核细胞,rhIL-4、rhGM-CSF、LPS联合诱导培养DCs。VEGF-A iDCs诱导组和mDCs诱导组,分别在DCs培养的2天末和7天末加入20 ng/ml VEGF-A进行诱导7天,收集细胞检测指标。阳性对照HUVECs。2.流式细胞仪检测20 ng/mlVEGF-A iDCs诱导组、mDCs诱导组细胞表型CD86、CD1a及CD11c。3.RT-PCR、Western blotting、免疫荧光法检测VEGF-A iDCs诱导组、mDCs诱导组CD1a、vWF、CD144表达。4.检测VEGF-A iDCs诱导组、mDCs诱导组Dil-Ac-LDL及印度墨汁摄取能力。5.电镜检测VEGF-A iDCs诱导组细胞形态及WP小体形成情况。6.CCK-8检测VEGF-A iDCs诱导组细胞刺激T细胞增殖及其CTL对EC9706细胞杀伤效应。结果1.VEGF-A对诱导组细胞形态学影响VEGF-A iDCs诱导组细胞发育迟缓,第8d,正常DCs逐渐增大变圆,而VEGF-AiDCs诱导组细胞多呈细长梭形,有部分类管腔分布趋势,少部分细胞呈条索状排列;VEGF-A mDCs诱导组细胞形态与其对照DCs无明显区别。2.VEGF-A诱导后DCs抗原CD86、CD1a及CD11c的表达VEGF-A iDCs诱导组与对照DCs相比,各抗原表达率均下降(P＜0.05),而VEGF-A mDCs诱导组与对照DCs相比无明显差异(P＞0.05)。3.VEGF-A诱导后DCs抗原CD1a和内皮细胞抗原CD144与vWF的表达VEGF-A iDCs诱导组细胞CD1a mRNA水平表达下降,同时vWF、CD144mRNA水平和蛋白水平均表达增加(P＜0.05),而VEGF-A mDCs诱导组与对照DCs相比无明显差异(P＞0.05)。4.VEGF-A诱导后对相关内皮细胞功能及相关DC功能的影响摄取能力:VEGF-A iDCs诱导组细胞不摄取墨汁,同时Dil-Ac-LDL摄取能力明显强于其对照DCs;而VEGF-A mDCs诱导组细胞摄取能力与其对照DCs无明显差别。WP小体的形成:VEGF-A iDCs诱导组细胞中发现了WP小体,并且细胞内有成束的微丝,细胞周围有细长的突起,这些结构与HUVECs很相似。VEGF-A iDCs诱导组细胞刺激T细胞增殖率及其CTL对EC9706的杀伤率,均明显低于对照DCs(P＜0.01)。第二章阻断VEGF-A对EC9706上清诱导iDCs内皮样分化的影响方法1.ELISA试剂盒检测EC9706上清及食管鳞癌、癌旁组织匀浆上清VEGF-A含量。2.实验分组对照DCs组:分离人外周血单核细胞,rhIL-4、rhGM-CSF、LPS联合诱导培养DCs。EC9706上清组:在DCs培养的2天末加入40%EC9706上清诱导7天;VEGF-A阻断组:在DCs培养的2天末加入40%EC9706上清,同时加入VEGF-A抗体阻断EC9706上清中的VEGF-A;阳性对照HUVECs。3.免疫荧光法检测VEGF-A阻断后EC9706上清组vWF表达。4.检测VEGF-A阻断后EC9706上清组细胞Dil-Ac-LDL摄取能力。5.Western blotting检测VEGF-A阻断后EC9706上清组细胞vWF、CD144表达。结果1.上清中VEGF-A的含量EC9706上清、食管癌组织匀浆上清中VEGF-A的含量大于癌旁组织匀浆上清(P＜0.05)。2.VEGF-A阻断后细胞形态EC9706上清诱导下,细胞呈现细长梭形,与HUVECs形态相似,而对照DCs呈类圆形,细胞周围有毛刺样突起;VEGF-A阻断组细胞多呈类圆形,极少有细长突起。3.VEGF-A阻断后细胞vWF和CD144的表达VEGF-A阻断组细胞胞浆中vWF绿色荧光颗粒表达量明显弱于EC9706上清组(P＜0.05),与其对照DCs相比无明显差异(P＞0.05)。VEGF-A阻断组细胞vWF、CD144蛋白表达量与EC9706上清组相比明显下降(P＜0.01)。4.VEGF-A阻断后细胞摄取能力VEGF-A阻断组细胞摄取Dil-Ac-LDL能力明显弱于EC9706上清组,而与其对照DCs相比无明显差别。第叁章VEGF-A激活MAPK/ERK1/2/CREB信号通路介导食管鳞癌细胞微环境下iDC内皮样分化的研究方法1.实验分组:EC9706上清诱导组:在培养DCs的基础上于第2d末添加40%EC9706培养上清,分别诱导0 min、15 min、30 min、60 min和7d;VEGF-A诱导组:在培养DCs的基础上于第2d末添加20 ng/ml VEGF-A,分别诱导0 min、15 min、30 min、60 min和7d;PD98059 60min阻断组:PD98059 50μM先作用细胞1 h,再加入40%EC9706上清或20 ng/ml VEGF-A诱导1 h;PD98059 7d阻断组:EC9706上清或VEGF-A诱导7天过程中同时加入PD98059 10μM。2.Western blotting检测EC9706上清、VEGF-A对ERK、CREB的激活,以及PD98059阻断后EC9706上清组、VEGF-A组细胞ERK1/2、CREB磷酸化水平、及vWF、CD144表达情况。3.免疫荧光检测PD98059阻断后EC9706上清组、VEGF-A组细胞vWF的表达。4.检测PD98059阻断后EC9706上清组、VEGF-A组细胞Dil-Ac-LDL摄取能力。5.免疫荧光双染(FITC、PI)检测EC9706上清、VEGF-A激活的p-ERK1/2的核易位,以及PD98059阻断p-ERK1/2的核易位。6.Western blotting检测VEGF-A阻断后EC9706上清组细胞p-ERK1/2、p-CREB水平。7.凝胶滞留实验检测EC9706上清组、VEGF-A组细胞核里活化的CREB与CRE探针结合活性。结果1.iDCs内皮样分化过程中激活MAPK/ERK1/2、CREBEC9706上清、VEGF-A诱导MAPK/ERK1/2、CREB磷酸化均以一种时间依赖的方式。PD98059,是MEK1/2的选择性抑制剂,而MEK1/2是MAPK/ERK1/2磷酸化的上游蛋白激酶。在进行PD98059预处理后,EC9706上清60 min组、VEGF-A 60 min组磷酸化MAPK/ERK1/2、p-CREB水平明显下降(P＜0.01)。2.抑制MAPK/ERK1/2的活化就抑制了iDCs的内皮样分化PD98059处理的EC9706上清、VEGF-A诱导7天的细胞,在抑制MAPK/ERK、CREB的磷酸化的同时,伴随着诱导细胞形态和表型改变,CD144、vWF表达明显下降(P＜0.01),并且Dil-Ac-LDL摄取能力也明显下降。这表明,PD98059抑制了MAPK/ERK1/2的磷酸化,也就从形态和功能上抑制了EC9706上清、VEGF-A对iDCs的内皮样诱导分化。3.磷酸化MAPK/ERK1/2的核转位磷酸化MAPK/ERK1/2的核易位,是引起生存和分化的转录改变所必需的。EC9706上清、VEGF-A诱导iDCs 7天,均显示核(红)里出现磷酸化的MAPK/ERK1/2(绿);PD98059阻断组,EC9706上清、VEGF-A诱导的MAPK/ERK1/2的磷酸化以及核易位都被明显地抑制。4.阻断VEGF-A对EC9706上清激活MAPK/ERK1/2/CREB通路的影响阻断VEGF-A的EC9706上清组细胞中p-REK、p-CREB水平明显下降(P＜0.01)。说明在EC9706上清激活MAPK/ERK1/2/CREB通路中VEGF-A起启动作用。5活化CREB与CRE元件结合活性经EC9706上清、VEGF-A诱导后,激活的CREB具有较高的与CRE元件结合活性。CD144,vWF基因启动子上游含有CRE元件,活化的CREB与CRE元件结合后可指导CD144,vWF转录,引起表达增强。结论1.EC9706培养上清使iDCs从DCs分化途径转向内皮细胞分化途径,形成内皮样细胞,但对mDCs没有明显影响,提示mDCs可以相对安全地用于抗食管鳞癌治疗中。2.食管鳞癌组织匀浆上清也促使iDCs发生内皮样分化,并且癌旁组织匀浆上清没有产生该作用,进一步说明iDCs的内皮样分化由食管鳞癌微环境引起,这也可能是导致食管鳞癌免疫逃逸的机制之一。3.VEGF-A使iDCs表达内皮细胞标志增加,出现内皮细胞形态及功能,同时DCs标志及抗原递呈功能下降,发生内皮样分化,但不能诱导mDCs的内皮样分化。4.EC9706上清、VEGF-A时间依赖方式激活ERK1/2、CREB,并在整个诱导过程中呈持续激活状态,p-ERK1/2核易位活化CREB,可能导致内皮细胞标志CD144、vWF基因转录,表达增加。5.MAPK/ERK1/2/CREB通路介导了EC9706上清、VEGF-A诱导iDCs内皮样分化,阻断MEK,就阻断了该通路以及内皮样分化。6.阻断EC9706上清中的VEGF-A,可阻断iDCs中MAPK/ERK1/2/CREB的活化以及内皮样分化,表明VEGF-A是iDCs出现内皮样分化的主要启动信号分子。这为抑制内皮样分化提供了新策略。(本文来源于《郑州大学》期刊2009-05-01）
廖礼强,张晓刚,史若飞,王丁琼,汤为学[9]（2009）在《微血管内皮细胞诱导骨髓间充质干细胞心肌样分化》一文中研究指出目的探讨微血管内皮细胞诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌分化的潜能,以期寻找一种理想的集特异、高效、安全优势于一体的诱导方式。方法常规分离培养骨髓间充质干细胞,组织块法培养纯化大鼠微血管内皮细胞,transwell小室嵌入培养板孔制备双室培养模型,按微血管内皮细胞的可能作用机制将实验分为直接接触组(Ⅰ)、双室培养组(Ⅱ)、条件培养液组(Ⅲ)、培养液对照组(Ⅳ)(n=6)。诱导期间每日于倒置显微镜下观察各组细胞生长情况及有无搏动的集落,诱导末期行细胞免疫荧光检测骨髓间充质干细胞心肌标志物TnI的表达情况;健康SD大鼠15只建立心肌梗死模型后,随机分为细胞移植组和对照组,将微血管内皮细胞预处理过的DAPI标记的骨髓间充质干细胞经外周血管途径注入心梗大鼠体内,冰冻切片行免疫荧光检测其归巢及心肌标志物TnI和α-actin表达情况。结果各组细胞生长均良好,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组部分骨髓间充质干细胞经诱导后形态变为杆状或不规则状,心肌标志物TnI阳性表达,且Ⅰ、Ⅱ组诱导率(分别为14.52±1.72,13.84±1.08%)高于Ⅲ组(8.18±2.01%),结果有统计学差异(P<0.05),前两者比较无统计学差异,而Ⅳ组骨髓间充质干细胞始终无形态改变和TnI表达,各组均未见搏动的细胞集落。移植后骨髓间充质干细胞能归巢到心脏梗死灶及周边区,荧光显微镜下细胞核呈蓝光并表达TnI和α-actin。结论微血管内皮细胞能通过旁分泌途径诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化,其分泌的细胞因子的持续补偿可增强其心肌诱导分化率,而细胞间直接接触并未发挥明显的诱导优势;经微血管内皮细胞预处理过的骨髓间充质干细胞移植后能归巢到心肌梗死灶及周边区并向心肌样分化。(本文来源于《第11届中国南方国际心血管病学术会议专刊》期刊2009-04-09）
秦珍珠[10]（2008）在《树突状细胞在结肠癌细胞SW620上清液作用下内皮样分化倾向的研究》一文中研究指出研究背景树突状细胞(dendritic cell,DC)是在机体的免疫应答过程中发挥着关键作用的细胞群体,其传统的抗原提呈功能近年来已得到广泛的研究。DC的APC功能即在体内激活T细胞反应。DC不仅提成抗原给未致敏的T细胞诱发其反应,而且还能产生刺激分子使静止的T细胞进入细胞周期并刺激它们的活化。然而,多数研究证实肿瘤浸润性树突状细胞的表型及其递呈功能均下降,肿瘤组织分泌多种免疫因子均能抑制DC的成熟,例如IL-10,VEGF或IL-6和M-CSF等。因此,DC的数量及功能成熟与否与肿瘤的发生发展密切相关。肿瘤血管形成是肿瘤迅速生长重要标志。传统理论认为只有通过血管新生(angiogenesis)即预存的内皮细胞经发芽形成毛细血管;血管发生(vasculogenesis)主要在胚胎期,近来研究表明血管发生在成年生物也可实现,肿瘤的血管化作用也包括血管发生,即内皮细胞从不成熟的前体细胞发育而来。目前认为,bFGF、VEGF、HGF与肿瘤血管形成有关。2004年《Nature Medicine》报道Coukos G等在小鼠及人的卵巢癌上发现了一种新型的共表达DC和血管内皮细胞的标志的白细胞群,接着有学者提出了肿瘤相关DC在肿瘤微环境作用下可能发生内皮样分化。这些研究揭示在肿瘤相关环境下DC在抗肿瘤免疫方面受到抑制,部分DC还可能发生内皮样分化,参与肿瘤血管的形成,促进肿瘤生长。国内外近年来关于DC的研究多集中于如何提高DC抗肿瘤的免疫功能等方面,而肿瘤微环境下DC的内皮样分化倾向发生及其机制以及如何参与肿瘤血管的形成等还有待于进一步的研究。目的本实验探讨结肠癌细胞SW620分泌的可溶性细胞因子营造的微环境对人单个核细胞来源的不同时期树突状细胞(Dendritic cells,DCs)分化发育的影响,以及是否发生内皮样分化的倾向。实验方法1.制备结肠癌细胞SW620培养上清液。2.采集健康志愿者新鲜外周血,密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为3×10~6/ml,接种于24孔培养板中,每孔1ml,移入二氧化碳孵育箱(5%CO_2,37℃)静置3h,去除悬浮细胞,获取贴壁生长的单核细胞,加入含GM-CSF(100 ng/ml)、IL-4(5ng/ml)和10%自体血清的1640培养液培养DC,诱导组除加入上述培养液外,分别于第2d、7d分组加入SW620培养上清液,隔天半量换液,各诱导7d。分别于第10d和14d收集诱导组DC和对照组DC。3.培养过程中观察细胞形态并计数。各组经荧光素标记抗体后,采用流式细胞技术检测其免疫表型CD86,CD1a,CD11c;免疫荧光法检测各组内皮细胞特异性标志vWF的表达情况;采用RT-PCR检测各组特异标记(CD1a、vWF和CD144)的基因表达;显微镜观察铺有纤维粘连蛋白玻片上各组细胞条索样结构形成情况。4.胰蛋白酶法配合内皮细胞培养基培养原代脐静脉内皮细胞,作为阳性对照组。采用统计学软件包SPSS 12.0进行结果的统计分析,将所得计量数据以平均数±标准差((?)±s)表示,确定方差齐性后,进行t检验或方差分析,P＜0.05为显着性差异。结果1.正常DC在培养第3d开始出现突起,第5d时突起更加明显,并且第7d大量突起交织,之后细胞逐渐增大变圆,出现悬浮趋势。SW620培养上清液的2d实验组细胞生长过程及其状态明显落后于正常对照组,并且细胞密度较低;而7d诱导组细胞与DC对照组无明显差别。2.流式检测结果:2d诱导组的未成熟DC经SW620培养上清液诱导7d后,DC的特异标记CD86、CD1a、CD11c与正常对照组DC相比,表达率均明显下降且两组间的差异具有统计学意义。7d诱导组的相对成熟DC诱导7d后,与其相对的正常组比较,DC特异标记表达率未见有明显下降,而二组间也无统计学差异。3.免疫细胞化学法检测内皮细胞特异标志vWF结果:用SW620培养上清液诱导的2d诱导组中存在胞浆着色的阳性细胞,提示有vWF的表达,而7d诱导组和正常对照组胞浆着色不明显,而且2d诱导组的阳性区面积百分比和阳性区平均灰度高于其相应正常对照组,且差异具有统计学意义;7d诱导组与其相应正常对照组相比无统计学意义。4.RT-PCR检测各组特异标记的基因表达结果:早期2d诱导组细胞目的基因条带中有CD144、vWF,而CD1a缺失;其相应的正常对照组有CD1a基因的表达,而CD144、vWF低表达。7d诱导组与其相应的正常组比较均有CD1a的表达,CD144、vWF表达不明显。5.显微镜观察条索样结构:2d诱导组细胞在铺有纤维粘连蛋白的96孔板里形成相似于HUVEC阳性对照组的条索样结构;而正常组DC和7d诱导组细胞均未有明显的索样结构形成。结论:1.SW620上清液能抑制DC的生长过程及相关抗原表达,这可能是肿瘤细胞逃避机体免疫监视的机制之一。2.在SW620上清液诱导下,早期未成熟DC与晚期相对成熟DC比较,较高表达内皮细胞特异性标志CD144、vWF,较易形成内皮细胞特异的条索样结构,出现内皮样分化倾向。(本文来源于《郑州大学》期刊2008-05-01）
内皮样分化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探讨不同分化程度的人食管鳞癌细胞(ESCC)上清对未成熟树突状细胞(iD C)内皮样分化的影响及其机制。方法:收集KYSE450(高分化)和KYSE70(低分化)细胞上清,并诱导iD C;镜下观察诱导后iD C形态的变化;免疫荧光检测内皮细胞标志物vW F、CD144以及JAK、STAT3磷酸化水平的变化;Q-PCR在mRNA水平上检测内皮细胞标志物vW F和CD144的变化,
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
内皮样分化论文参考文献
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[10].秦珍珠.树突状细胞在结肠癌细胞SW620上清液作用下内皮样分化倾向的研究[D].郑州大学.2008
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