导读:本文包含了内源性凋亡途径论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:小檗碱,Jurkat细胞,凋亡,内源性凋亡途径
内源性凋亡途径论文文献综述
王成艳,胡建达,林艳婷,何宏星,吴克勤[1]（2017）在《小檗碱可通过内源性凋亡途径诱导Jurkat细胞的凋亡》一文中研究指出为观察小檗碱(berberine,BBR)对急性淋巴细胞白血病细胞株Jurkat凋亡的影响以及探讨细胞凋亡的机制,我们采用MTS法检测小檗碱的细胞毒性;软琼脂克隆法检测小檗碱的长期细胞毒性;Annexin V-FITC/PI双染的流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting法检测不同浓度、时间小檗碱处理后caspase-3前体蛋白、激活型caspase-3、caspase-9、PARP的表达水平的变化;Western blotting法检测胞浆中Cyto-C、AIF的变化。结果发现小檗碱能显着抑制Jurkat细胞的增殖,IC_(50)约18.6μg/m L;小檗碱能抑制细胞克隆,并呈量效关系(r=-0.989,p<0.001)。小檗碱诱导Jurkat细胞凋亡,呈浓度依赖性(r=0.928,p<0.001)。小檗碱作用Jurkat细胞后caspase-3前体蛋白、caspase-9前体蛋白、PARP 116 k D表达水平下调;PARP 85 k D、激活型caspase-3以及胞浆中Cyto-C、AIF表达上调,并呈时效关系。本研究发现内源性凋亡途径可能参与小檗碱诱导的Jurkat细胞凋亡过程。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2017年12期）
黄茂杰,马民,张桂娟,马义,别凤杰[2]（2017）在《乳岩内消霜通过内源性caspase途径诱导乳腺癌前病变凋亡作用的机制研究》一文中研究指出目的研究乳岩内消霜诱导乳腺癌前病变细胞凋亡的作用,探寻乳岩内消霜治疗乳腺癌前病变的机制。方法 MTT法观察不同浓度乳岩内消霜透皮液对乳腺癌前MCF-10AT细胞的生长抑制作用;流式细胞术检测MCF-10AT细胞凋亡率;Western blotting检测MCF-10AT细胞中bcl-2和bax蛋白;60只雌性未孕SD大鼠,采用二甲基苯并葱(DMBA)联合雌、孕激素诱导癌前病变模型,同时使用霜剂涂抹大鼠乳房,第10周处死大鼠,进行组织病理学检测;Western blotting分别检测大鼠乳腺组织和MCF-10AT细胞cleaved caspase9、cleaved caspase3蛋白的表达。结果 MTT结果显示,乳岩内消霜透皮液对MCF-10AT细胞增殖有显着抑制作用;1%、2%和4%乳岩内消霜处理MCF-10AT细胞24 h,细胞凋亡率分别为(24.8±4.1)%、(43.2±5.3)%和(65.6±6.8)%;与空白对照组比较,乳岩内消霜和叁苯氧胺干预MCF-10AT细胞后bcl-2表达下降,bax表达上升(P<0.05);与正常对照组比较,大鼠乳腺组织和MCF-10AT细胞中乳岩内消霜及叁苯氧胺干预组cleaved caspase9、cleaved caspase3表达均明显上升(P<0.01)。结论乳岩内消霜有效抑制乳腺癌前病变发展,可能是通过内源性caspase途径诱导乳腺癌前病变细胞凋亡实现的。(本文来源于《中药新药与临床药理》期刊2017年04期）
张洁[3]（2017）在《内源性H_2S通过LXRα/ABCG1途径影响破骨细胞胆固醇流出及凋亡》一文中研究指出背景与目的:胆固醇作为细胞膜上脂筏的重要部分和细胞内物质代谢的重要成员,其在细胞内和细胞膜上的含量变化与细胞凋亡密切相关。破骨细胞内胆固醇流出主要受其细胞膜上叁磷酸腺苷结合盒转运体G1(ATP-binding cassette transporter G1,ABCG1)的介导。肝X受体α(Liver X Receptorα,LXRα)能够调节细胞膜上ABCG1的表达进而调控细胞内胆固醇的流出。硫化氢(Hydrogen sulfide,H_2S)作为第叁种气体信号分子,对多种细胞的凋亡具有调节作用,其在破骨细胞内主要由胱硫醚-γ-裂解酶(Cystathionine-γ-lyase,CSE)催化产生。目前内源性H_2S能否调节破骨细胞胆固醇流出来影响破骨细胞的凋亡尚不清楚。为此,本研究选取RAW264.7单核/巨噬细胞作为破骨前体细胞,以核因子κB受体活化因子配体(Receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand,RANKL)诱导其形成破骨细胞作为研究对象,探讨内源性H_2S对破骨细胞胆固醇流出和凋亡的影响及相关机制。方法:培养离体的破骨细胞前体RAW264.7细胞,加入RANKL诱导其分化形成成熟的破骨细胞后分别使用LXRαsiRNA、ABCG1siRNA、pcDNA 3.1/myc-His(-)-CSE、CSE siRNA、pcDNA 3.1/myc-His(-)–CSE+LXRαsiRNA及pcDNA3.1/myc-His(-)-CSE+ABCG1siRNA处理对数生长期细胞,分成对照组、LXRα沉默组、ABCG1沉默组、CSE过表达组、CSE沉默组、CSE过表达+LXRα沉默组、CSE过表达+ABCG1沉默组。在不同时间段使用抗酒石酸性磷酸酶(TRAP)染色观察各组成熟破骨细胞的数目和细胞核固缩的情况。微板读数器检测各组细胞内源性H_2S的浓度。实时荧光定量PCR检测各组细胞CSE mRNA、LXRαmRNA、ABCG1 mRNA、Caspase3mRNA的表达,蛋白印迹检测各组细胞内CSE、LXRα、ABCG1、Caspase3蛋白的表达水平,使用液体闪烁计数仪对细胞内胆固醇流出进行检测。结果:1)CSE过表达组中的破骨细胞内H_2S的浓度升高,破骨细胞胆固醇流出增加,破骨细胞凋亡数增多;2)CSE过表达组中破骨细胞内LXRα、ABCG1的表达增加;3)经LXRαsiRNA处理后对照组和CSE过表达组中破骨细胞ABCG1的表达下降和胆固醇流出减少;4)在CSE过表达组中使用ABCG1 siRNA处理后破骨细胞胆固醇流出减少。结论:内源性H_2S通过LXRα/ABCG1途径促进破骨细胞胆固醇流出和破骨细胞的凋亡。(本文来源于《南华大学》期刊2017-05-01）
谢海波,刘亚娟,汪典,卢青,罗尧岳[4]（2016）在《活血、破血药对动脉粥样硬化大鼠主动脉组织内源性凋亡途径的影响》一文中研究指出目的探讨活血药(当归、川芎)、破血药(叁棱、莪术)改善动脉粥样硬化的可能作用机制。方法将60只大鼠随机分为空白组、模型组、他汀组、活血组、破血组,空白组8只,其余各组均13只。采用高脂饲料喂饲结合腹腔注射维生素D3法复制动脉粥样硬化大鼠模型。造模成功后,空白组、模型组灌服10 ml/(kg·d)白开水,活血组灌服当归、川芎煎液,破血组灌服叁棱、莪术煎液,他汀组灌服阿托伐他汀钙,给药量均为1.8 g/(kg·d),每天1次,连续4周。取主动脉组织,光镜下观察主动脉组织病理变化,免疫组化法检测主动脉组织细胞色素C(Cyt-C)及细胞凋亡诱导因子(AIF)蛋白的表达,原位杂交法检测主动脉组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)mRNA表达情况。结果与模型组比较,他汀组、活血组及破血组主动脉组织粥样硬化病变均有不同程度减轻,其中他汀组与破血组病变改善最为明显。与空白组比较,模型组主动脉组织Cyt-C、AIF蛋白及Caspase-3 mRNA表达显着增多(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,他汀组、破血组主动脉组织Cyt-C、AIF蛋白及Caspase-3 mRNA表达均减少,活血组Cyt-C蛋白、Caspase-3 mRNA表达均减少(P<0.05或P<0.01);破血组主动脉组织Caspase-3 mRNA表达低于活血组(P<0.05)。结论活血药、破血药均能改善动脉粥样硬化,且破血药效果优于活血药;活血药可能通过抑制Cyt-C表达,降低Caspase-3 mRNA水平,破血药可能通过抑制Cyt-C表达,下调凋亡诱导因子AIF表达及降低Caspase-3 mRNA水平来抗动脉粥样硬化。(本文来源于《中医杂志》期刊2016年16期）
段玉清,许慧,曲文娟,罗孝平,赵彬[5]（2016）在《莲房原花青素通过线粒体介导的内源性Caspase途径诱导HepG2细胞凋亡》一文中研究指出研究莲房原花青素(LSPCs)诱导肝癌Hep G2细胞凋亡的机制。利用MTT法检测LSPCs对肝癌Hep G2细胞的生长抑制作用,Hochest 33258染色观察凋亡细胞的核形态,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,彗星实验用来检测细胞DNA损伤,JC-1染色用来检测线粒体膜电位,Western blotting法检测细胞凋亡蛋白水平的表达。LSPCs作用细胞后,显着抑制Hep G2细胞的增殖;细胞凋亡征象明显,核染色体高度凝聚,细胞核碎裂,核固缩,染色质凝聚的细胞数从3.86%增至42.76%(p<0.01);活细胞率急剧减少,而凋亡率从5.32%增至67.05%(p<0.01);LSPCs诱发细胞产生DNA损伤,线粒体膜电位下降,导致Cytochromec、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达量增加,Bax蛋白的表达量上调,Bcl-2蛋白的表达量下调,Bax/Bcl-2的比值上升。而凋亡抑制剂Z-VAD能够削弱LSPCs对Hep G2细胞增殖的抑制作用,显着下调细胞核聚缩,抑制线粒体损伤及Caspase相关蛋白的表达量,最终阻断LSPCs的致凋亡作用。由此得出结论,LSPCs可通过线粒体介导的内源性Caspase途径诱导人肝癌细胞凋亡。(本文来源于《现代食品科技》期刊2016年09期）
王志学,张晓侠,雷燕,李汝泓,刘新伟[6]（2015）在《内源性途径调控芬太尼与5-氟尿嘧啶联合诱导的MCF-7乳腺癌细胞凋亡》一文中研究指出目的探讨芬太尼与5-氟尿嘧啶(FU)联合应用对MCF-7乳腺癌细胞凋亡的影响及内源性途径的调控机制。方法作用48 h后通过流式细胞技术检测亚二倍体峰细胞凋亡情况,通过Western印迹检测Bcl-2、Bax表达情况。结果 1μmol/L及10μmol/L浓度的芬太尼单独应用均引起凋亡率增加(P<0.01),Bcl-2表达减弱(P<0.01),Bax表达增强(P<0.05,P<0.01);5-FU单独应用后凋亡率亦明显增加(P<0.01),Bcl-2表达减弱(P<0.01),Bax表达增强(P<0.01);叁种浓度芬太尼与5-FU联合应用均具有协同作用(P<0.05,P<0.01)。结论一定浓度的芬太尼、5-FU及联合应用48h对MCF-7乳腺癌细胞有促进凋亡作用,并显着下调Bcl-2表达、上调Bax表达,两药联合应用启动内源性凋亡途径具有协同作用。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2015年14期）
阿茹娜[7]（2014）在《希夫碱派生铜Ⅱ复合体通过激活内源性途径成为结肠癌细胞潜在的细胞凋亡诱导剂》一文中研究指出金属基药物被广泛应用于癌症化疗且具有良好前景。在过去的几十年中,希夫碱及衍生物因其广泛的生物潜能而被广泛知晓。在现在的研究中,Hajrezaie M等评估了铜Ⅱ复合物对结肠癌细胞的抗恶性细胞增殖效果,结果提示,在接受了2.87μg/m L铜Ⅱ复合物治疗72 h后,对HT-29结肠癌细胞具有抗恶性细胞增殖的作用。接受过铜Ⅱ复合物治疗的HT-29细胞经历了细胞凋亡。对染色细胞进行荧光强度检查后发现,6.25μg/m L的铜Ⅱ复合物会显着提高活性氧产物,但会伴随线粒(本文来源于《中国普外基础与临床杂志》期刊2014年11期）
徐宗珍[8]（2014）在《sCLU通过内源性细胞凋亡途径影响肝细胞肝癌对吉西他滨化疗耐药机理的研究》一文中研究指出目的：在世界范围内,肝细胞肝癌的发病率居肿瘤的第六位,在肿瘤致死的癌症中居第叁位,仅次于肺癌与结肠癌。我国肝癌的发病率居世界第四位3,但我国肝细胞肝癌患者的数量居世界首位。近年来,肝细胞肝癌的发病率在西方国家较前有明显升高,由于对肝硬化患者进行普查,使30-60%的病人能够早期发现,并且接受手术治疗4。但多数病人就诊时已经是疾病中晚期并伴有严重的肝硬化,无法接受根治性治疗。即使病人可以接受手术治疗,由于肝细胞肝癌的高复发性、高转移性以及对化疗药物的耐药等,使得肝细胞肝癌的总体治疗效果很差。在恶性肿瘤的系统治疗中,化疗为最常用的治疗方法之一,并且部分肿瘤对化疗具有很好的敏感性,但是传统的化疗药物对于肝细胞肝癌基本无效5。有Ⅱ期临床实验报道单独应用吉西他滨可能对肝细胞肝癌无确切疗效6,但联合奥沙利铂等药物可能会对患者带来一定治疗效果7。因此,寻找一种有效的化疗药物及化疗辅助用药是提高肝细胞肝癌化疗敏感性的一种方法。聚集素(clusterin,CLU)是1983年由Blaschuk等从山羊睾丸组织液中提出的一种异二聚体糖蛋白8,一种以核型存在(nCLU),一种以分泌型存在(sCLU)。在多种恶性肿瘤的晚期或者转移肿瘤中,例如前列腺癌、膀胱癌等9,10,sCLU的表达升高,与肿瘤的发展及凋亡等过程有密切关系。在进行化疗及放疗时,sCLU表达升高,在抵抗化疗、放疗等外界因素导致的细胞凋亡中具有重要作用。sCLU的高表达导致了多种化疗药物的耐药,例如阿霉素、顺铂、依托泊甙、喜树碱等。我们最近的研究表明,sCLU在肝细胞肝癌奥沙利铂耐药机制中具有重要作用,抑制sCLU表达后,肝细胞肝癌对奥沙利铂的化疗敏感性明显增强,并且发现sCLU可能通过线粒体凋亡途径来调节肝细胞肝癌的化疗耐受性。在我们前期研究工作的基础上,本课题对肝细胞肝癌组织的sCLU表达情况以及sCLU与临床病理学指标的关系进行了研究,对sCLU联合吉西他滨对肝细胞肝癌细胞系的治疗效果进行了观察,并对sCLU在吉西他滨化疗中的作用机理进行了初步探讨。方法：1.利用免疫组化方法,检测肝细胞肝癌组织以及癌旁组织中sCLU的表达水平,应用免疫组化半定量计分,分析了sCLU的表达水平与肝细胞肝癌临床病理学指标之间的关系。2.用、Vestern blot方法检测人肝细胞系QSG7701,人肝癌细胞系HepG2、Bel7402、Bel7404、SMMC7721、Huh-7以及SUN739这7种细胞系中sCLU的表达情况,并筛选出sCLU高表达的人肝细胞肝癌细胞系Bel7402、SMMC7721进行下一步实验。3.根据sCLU的基因序列,设计4种干扰片段来封闭sCLU基因的表达,并插入到载体pMAGic7.1中,用RT-PCR进行鉴定,用Western blot筛选出干扰效率最强的载体shRNA CLU-4,并大量扩增,命名为sCLU-shRNA。4.对Bel7402、SMMC7721细胞系应用sCLU-shRNA以及吉西他滨进行干预,设置分组为对照组、sCLU-shRNA组、吉西他滨组、sCLU-shRNA+吉西他滨组,用CCK-8法检测细胞增殖情况,用流式细胞法检测细胞的凋亡情况。5.应用凋亡通路基因芯片(SABioscience)检测sCLU封闭前后Bel7402、 SMMC7721细胞系相关凋亡基因的表达变化,筛选出表达明显改变的基因,并对筛选出的(ADD45a以及Akt进行Western blot验证。6.构建GADD45a的过表达转染载体pcDNA3.1-GADD45a-His,并转染入Bel7402和SMMC7721细胞系,设置分组为GADD45a组、sCLU-shRNA组、吉西他滨组、GADD45a+吉西他滨组、sCLU-shRNA+吉西他滨组,用CCK-8方法检测细胞增殖情况,用流式细胞法检测细胞凋亡情况。7.建立稳定的细胞系Bel7402-sCLU-shRNA和SMMC7721-sCLU-shRNA并进行裸鼠成瘤,腹腔内注射吉西他滨,观察肿瘤体积变化,绘制肿瘤的生长曲线。并且利用TUNEL法对肿瘤组织进行细胞凋亡检测,计算凋亡指数。结果：1.肝细胞肝癌组织的sCLU表达明显升高,主要是胞浆表达,表达强度为高表达或者中度表达,癌旁组织中sCLU的表达水平则是低表达或者不表达。sCLU的表达水平与肝细胞肝癌的组织学分级及术前有否TACE有关。肿瘤细胞分化程度越差,sCLU表达水平越高,术前行TACE治疗者,sCLU的表达水平增高。2.sCLU在Bel7402细胞系中的表达水平最高,其次是SMMC7721、HepG2和Huh-7细胞系。筛选Bel7402、SMMC7721细胞系作为sCLU阳性表达肝细胞肝癌细胞系进行下一步实验。3.针对sCLU基因序列,设计4种基因片段来封闭sCLU的表达。对干扰基因片段经过、Western blot鉴定,发现CLU-4shRNA(sCLU-shRNA)具有最好的抑制效果,并且这种抑制效果呈现时间依赖性。在Bel7402及SMMC7721细胞系中发现,sCLU-shRNA作用48小时的抑制效果最好。4.空壳质粒及sCLU-shRNA对肝细胞肝癌细胞系的细胞活力无影响。吉西他滨对细胞活力的影响呈现剂量依赖关系。对照组、吉西他滨组、sCLU-shRNA组以及吉西他滨+sCLU-shRNA组,经过CCK-8检测发现,单独应用吉西他滨可以抑制Bel7402和SMMC7721细胞系的细胞生长(P<0.05),吉西他滨+sCLU-shRNA能够更加明显的抑制细胞的生长,结果具有显着差异(P<0.01)。流式细胞法检测结果与细胞活力检测结果基本一致,吉西他滨+sCLU-shRNA组细胞凋亡最多,吉西他滨组其次,并发现sCLU-shRNA组较对照组细胞凋亡增加(P<0.05)。5.应用人类凋亡特定通路基因芯片(SABioscience)检测发现,抑制sCLU表达后的细胞与对照组比较,有14种基因表达上调,除NOL3基因外,其余13种均为促凋亡基因(BAK1、Bcl2L1、BIK、BNIP1、Casp1、GADD45a、LTBR、 TNF、TNFRSF10A、TNFRSF25、TRADD、HRK、LTA)。基因下调者有4种,分别为Bag1、NAIP、Akt1、FASLG,其中前叁种基因对凋亡具有抑制作用。进一步的Western blot分析证实,抑制sCLU表达后,GADD45a高表达,而磷酸化的Akt表达降低。6.应用CCK-8及流式细胞法检测发现,单独应用GADD45a和sCLU-shRNA对细胞生长基本无影响,两组之间未有差异。单用吉西他滨会抑制细胞生长,使凋亡增加,GADD45a+吉西他滨组及sCLU-shRNA+吉西他滨组均发现细胞生长受到明显抑制(P<0.01),凋亡细胞明显增加,并且在GADD45a+吉西他滨组,细胞生长受抑制最明显,细胞凋亡最多。7.裸鼠成瘤后,腹腔注射吉西他滨,测量肿瘤体积发现sCLU-shRNA+吉西他滨组肿瘤体积最小,吉西他滨组其次,两者与对照组之间有明显差异(P＜0.01),而单独应用sCLU-shRNA和对照组肿瘤体积最大,两者之间未有差异。应用TUNEL凋亡检测发现,sCLU-shRNA+吉西他滨组凋亡指数最大,吉西他滨组其次,两者之间有统计学差异(P<0.05),两组与对照组以及sCLU-shRNA组之间有明显差异(P<0.01)。结论：1.sCLU在肝细胞肝癌组织中呈高水平表达。肿瘤分化越差,sCLU表达水平越高,术前行TACE者,sCLU表达水平高。其表达水平与其他临床病理学指标无关。2.sCLU在肝细胞肝癌的化疗耐药中具有重要作用,抑制sCLU的表达可以增加肝细胞肝癌对吉西他滨化疗的敏感性。3.sCLU表达水平改变可以引起大量的凋亡相关基因的改变,推测sCLU在肿瘤细胞的凋亡过程中具有重要作用。4.sCLU表达的变化可以引起GADD45a以及pAkt表达的变化,并且GADD45a对于增加肝细胞肝癌对吉西他滨化疗敏感性具有重要作用。5.体内外研究显示,抑制sCLU可增强肝细胞肝癌化疗的敏感性,sCLU可能是研究肝细胞肝癌化疗的靶点之一。意义：1.研究了sCLU在肝细胞肝癌中的表达以及与临床病理学指标的关系。2.证实了抑制sCLU表达可以提高肝细胞肝癌对吉西他滨化疗的敏感性。3.发现了sCLU可能引起的凋亡通路中相关蛋白的改变,提示sCLU在细胞凋亡过程中可能具有重要意义。4.sCLU作为一个重要分子,对多种化疗药物起重要调节作用,为肝细胞肝癌的化疗研究提供新的靶点。(本文来源于《山东大学》期刊2014-09-26）
户艳芬[9]（2014）在《活性氧诱导家蚕细胞凋亡的内源性线粒体途径的研究》一文中研究指出细胞凋亡,由基因控制并能够自主有序的死亡,具有一系列的形态学及生化特征,在细胞发育、分化、增殖及压力应激等生命历程上起着关键作用。氧压能够调节和控制细胞生存,由活性氧介导的高氧压可以诱导细胞凋亡。家蚕作为鳞翅目昆虫的模式生物,逐渐成为研究热点,但对氧压诱导家蚕细胞凋亡的研究尚处于初级阶段,其相应的凋亡途径的研究目前还不清楚。本研究基于已报道的家蚕凋亡相关基因,与具有较强抗氧化防御系统的鳞翅目典型代表草地贪夜蛾细胞相比较,论证了活性氧介导的高氧压诱导家蚕细胞凋亡有线粒体信号通路的参与,这将为进一步解析家蚕细胞凋亡的机制奠定基础。本文主要研究结果如下：1.活性氧诱导家蚕BmN-SWU1细胞凋亡模型的建立用0.1μM、1μM、5μM及10μM H2O2分别处理BmN-SWU1与sf9细胞0-24h、0-12h,,采用MTT分析、DAPI染色、流式分析及TUNEL染色的方法分别检测细胞的活力、形态、凋亡率及DNA断裂。结果发现：用1μM H2O2分别处理两种细胞24h、12h时,细胞致死率接近50%,且DNA发生了断裂。随着处理时间的延长,细胞呈现一系列的凋亡特征：细胞皱缩、胞质凝聚、凋亡小体出现,且细胞凋亡的发生对H202呈时间依赖性。综上,1μMH2O2分别处理BmN-SWU1与sf9细胞24h、12h,是诱导两种昆虫细胞凋亡的最佳条件。2.活性氧诱导家蚕BmN-SWUl细胞凋亡的内源性线粒体途径的研究1μM H2O2分别处理BmN-SWU1与sf9细胞不同时间,随着时间延长,线粒体分布逐渐由均匀分布向簇状、弥散状分布转化,表明H202影响两种昆虫细胞内的线粒体分布；同时检测到线粒体膜电位呈时间依赖性下降,流式结果还显示在BmN-SWU1细胞中,8h与0h时的线粒体膜电位相比,无显着性差异。与此同时,与H202诱导前相比,诱导后的细胞胞质内ROS与Ca2+水平也逐渐升高。qPCR分析表明：H202可通过上调BmDronc、Bmapaf-1、BmICE,BmEndoG、BmP53、 BmDredd和下调BmBuffy,BmIAP基因的表达,诱导BmN-SWU1细胞凋亡。免疫荧光和western-blot结果表明：H202可以促进细胞色素C的表达,并从线粒体向胞质释放,除此之外,还可上调P53和下调Bc1-2蛋白的表达。Caspase-9与3/7酶活性检测结果显示：H202处理BmN-SWU1与sf9细胞不同时间后,其Caspase-9与Caspase-3/7酶活性升高。综上,本研究论证了H202介导的氧压诱导家蚕BmN-SWU1细胞凋亡有线粒体途径的参与。(本文来源于《西南大学》期刊2014-04-28）
潘春[10]（2014）在《Bmbuffy基因在家蚕细胞内源性线粒体凋亡途径与细胞自噬中的功能研究》一文中研究指出凋亡(Apoptosis)是一个生理性的由基因调控的高度保守的死亡过程,它在维持机体内环境的稳定和防御外在伤害等方面起着重要作用。细胞凋亡对机体的生长、发育及维持正常生理功能都有着重要意义。在昆虫细胞中,对凋亡调控机制的研究近些年虽取得了一些进展,但无论从深度或广度来说都还远远不够,这还需要不断探索与研究。家蚕作为鳞翅目昆虫的代表,同时也作为一种经济昆虫,其研究应用价值逐渐提高。家蚕是一种完全变态的昆虫,在其每次变态和蜕皮生长发育过程中细胞凋亡起到至关重要的作用,细胞凋亡的正常调控成为了其正常发育机制的基础。然而,家蚕凋亡机制的研究目前尚处于初级探索阶段,如何着手深入探究和揭示家蚕细胞凋亡的基本机制成为现阶段迫切需要解决的问题。细胞凋亡途径主要有叁种通路：线粒体通路、内质网通路和死亡受体通路,而且各种通路之间相互联系,共同介导细胞凋亡,其中线粒体通路起到决定性作用。因此,研究线粒体通路是了解凋亡调控机制的关键。在线粒体凋亡途径中,Bcl-2蛋白家族行使着重要的功能,它们之间相互作用或与其它蛋白相互作用,共同对线粒体通路进行调控。在家蚕中,Bmbuffy是目前已鉴定的Bcl-2家族同源基因,但其具体功能还完全未知。鉴于此,本文对Bmbuffy基因在线粒体内源性凋亡途径中的功能进行了研究。作为Ⅱ型程序性细胞死亡方式,细胞自噬在机体生长发育、清除自身多余物质完成代谢更新、抵抗外界压力及有害微生物侵袭,以及维持内环境稳定性方面具有重要作用。近些年,细胞自噬已成为研究热点。自噬与凋亡之间既相互独立又相互联系：一方面,自噬可先于凋亡发生,并向凋亡转换；另一方面,自噬可抑制凋亡,维持细胞存活。自噬过程涉及到许多相关分子的参与,其中,与凋亡相关的Bcl-2蛋白家族也在自噬过程中发挥作用。Bmbuffy作为Bc1-2家族的同源基因,是否在家蚕细胞自噬过程中发挥作用,这成为本文的另一研究重点。本文所得研究结果如下：1.羟基喜树碱(HCPT)介导家蚕BmN-SWU1细胞线粒体凋亡通路研究HCPT处理细胞一定时间后,细胞核呈现了凋亡特征、核内DNA发生片段化、细胞活力逐渐降低、细胞凋亡率升高,由此证明HCPT能够诱导家蚕BmN-SWU1细胞凋亡。接着本研究对HCPT引起家蚕细胞凋亡的内源性通路进行了探讨。通过检测线粒体分布及线粒体膜电位变化、细胞色素c的释放,发现HCPT能使线粒体的分布从均匀集中变为凌乱散在,并导致线粒体膜电位的下降及细胞色素c的释放。利用环孢菌素A (CsA)及Bax五肽抑制剂(Bip-V5)处理细胞后,发现细胞色素c的释放与细胞凋亡率受到抑制,表明细胞色素c的释放依赖于通透性转换孔(MPTP)的打开及线粒体外膜通透性(MOMP)的增加。通过检测Caspase酶活性变化,发现HCPT能促进Caspase-9与-3的活性,当加入Apaf-1抑制剂后,Caspase-3的活性受到抑制,由此表明,Pro-Caspase-3活性的激活依赖于凋亡复合体的形成。据此得出结论：HCPT通过内源性线粒体凋亡途径诱导家蚕细胞凋亡2. Bmbuffy基因在家蚕细胞内源性线粒体凋亡途径中的功能研究对Bmbuffy在家蚕细胞中的定位研究发现：Bmbuffy定位于线粒体与内质网外膜上,而缺失掉C末端疏水结构域的Bmbuffy-△TM则散在分布于细胞质与核中,表明C末端疏水结构域能将Bmbuffy锚定在线粒体与内质网外膜上。检测Bmbuffy基因对家蚕细胞凋亡的影响,结果显示：在HCPT诱导的家蚕细胞中,过表达Bmbuffy基因能抑制细胞色素c的释放、Caspase-3酶活性及细胞凋亡率,同时对细胞增殖活力具有促进作用,表明Bmbuffy对家蚕细胞凋亡具有抑制作用,而缺失掉C末端疏水结构域的Bmbuffy却没有此功能,表明Bmbuffy的C末端跨膜疏水结构域对其功能的行使具有重要作用。进一步研究发现：当HCPT诱导家蚕细胞后,Bmp53从核内逐渐转位到线粒体上,与位于线粒体外膜上的Bmbuffy相互作用,抑制Bmbuffy的抑凋亡功能,从而促进细胞凋亡。过表达Bmbuffy基因能抑制Bmp53基因的促凋亡效应,说明Bmbuffy与Bmp53之间存在相互拮抗的关系。3. Bmbuffy基因在家蚕细胞自噬中的功能研究用昆虫细胞平衡缓冲液(IBSS)处理BmN-SWU1细胞一定时间后,通过MDA染色发现,细胞出现了自噬现象,表明经IBSS处理的细胞受到了饥饿诱导,从而发生自噬。过表达Bmbuffy基因能够抑制IBSS介导的细胞自噬,说明Bmbuffy对家蚕细胞自噬具有抑制作用。通过研究Bmbuffy与BmAtg6相互作用发现：正常细胞中,Bmbuffy与BmAtg6相互作用,抑制自噬的发生；当细胞发生自噬时,Bmbuffy与BmAtg6相互解离。经定点突变实验证明：Bmbuffy通过BH结构域与BmAtg6相互作用,且位于其145位的苯丙氨酸(F)在Bmbuffy与BmAtg6相互结合中起关键作用。通过构建PIZ-Bmbuffy-ActA-TM-dsRed与PIZ-Bmbuffy-cb5-TM-dsRed载体,将Bmbuffy分别定向锚定在线粒体外膜与内质网外膜上,结果显示：只有定位于内质网外膜上的Bmbuffy对细胞自噬有抑制作用,推测在家蚕细胞自噬过程中,Bmbuffy与BmAtg6相互作用的部位在内质网外膜上。综上所述,Bmbuffy在家蚕细胞线粒体凋亡途径及自噬过程中都发挥重要功能,是调控凋亡与自噬的关键基因。因此,对Bmbuffy基因功能的研究将有助于了解家蚕细胞中凋亡与自噬的相互关系,并为后续相关研究提供理论基础,为鳞翅目昆虫生长发育调控机制的研究提供理论参考。(本文来源于《西南大学》期刊2014-04-12）
内源性凋亡途径论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的研究乳岩内消霜诱导乳腺癌前病变细胞凋亡的作用,探寻乳岩内消霜治疗乳腺癌前病变的机制。方法 MTT法观察不同浓度乳岩内消霜透皮液对乳腺癌前MCF-10AT细胞的生长抑制作用;流式细胞术检测MCF-10AT细胞凋亡率;Western blotting检测MCF-10AT细胞中bcl-2和bax蛋白;60只雌性未孕SD大鼠,采用二甲基苯并葱(DMBA)联合雌、孕激素诱导癌前病变模型,同时使用霜剂涂抹大鼠乳房,第10周处死大鼠,进行组织病理学检测;Western blotting分别检测大鼠乳腺组织和MCF-10AT细胞cleaved caspase9、cleaved caspase3蛋白的表达。结果 MTT结果显示,乳岩内消霜透皮液对MCF-10AT细胞增殖有显着抑制作用;1%、2%和4%乳岩内消霜处理MCF-10AT细胞24 h,细胞凋亡率分别为(24.8±4.1)%、(43.2±5.3)%和(65.6±6.8)%;与空白对照组比较,乳岩内消霜和叁苯氧胺干预MCF-10AT细胞后bcl-2表达下降,bax表达上升(P<0.05);与正常对照组比较,大鼠乳腺组织和MCF-10AT细胞中乳岩内消霜及叁苯氧胺干预组cleaved caspase9、cleaved caspase3表达均明显上升(P<0.01)。结论乳岩内消霜有效抑制乳腺癌前病变发展,可能是通过内源性caspase途径诱导乳腺癌前病变细胞凋亡实现的。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
内源性凋亡途径论文参考文献
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[8].徐宗珍.sCLU通过内源性细胞凋亡途径影响肝细胞肝癌对吉西他滨化疗耐药机理的研究[D].山东大学.2014
[9].户艳芬.活性氧诱导家蚕细胞凋亡的内源性线粒体途径的研究[D].西南大学.2014
[10].潘春.Bmbuffy基因在家蚕细胞内源性线粒体凋亡途径与细胞自噬中的功能研究[D].西南大学.2014