30004甘肃省张掖市人民医院病理科甘肃张掖梁芳赵新陈德荣罗荣
［摘要］目的探讨P27和nm23-H1在乳腺癌中的表达及其与临床病理因素的相关性。方法应用免疫组织化学S-P法,检测我院1998~2008年间临床资料完整的女性原发性乳腺癌105例和50例乳腺纤维腺瘤标本(阴性对照组)中P27和nm23～H1的表达，分析2种基因之间的相关性及与转移的关系。结果P27的阳性表达率在乳腺癌组明显低于对照组(P<0.05)。nm23-H1的阳性表达率在阳性组和对照组间比较无显著性差异(P>0.05)。在乳腺癌中，nm23-H1的阳性率在各临床分期组间比较有显著性差异(P<0.01)；P27和nm23-Hl的阳性率在各组织学分级组间比较有显著性差异(P<0.O1)；nm23-H1和P27的阳性表达率在有无淋巴结转移组之间比较有显著性差异(P<0.05)。结论联合检测乳腺癌组织中P27和nm23-H1的表达状况有助于判断预后。
［关键词］乳腺癌；P27；nm23-H1；预后；相关性
[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheexpressionofP27andnm23andtheircorrelationwithclinicalpathologicalfactorsinprimarybreastcarcinoma.MethodsS-PmethodofImmunohistochemiistrywasappliedtodetecttheexpressionsofP27andnm23-H1in100casesofprimarybreastcancerand50casesofbreastfibroadenoma.Thecorrelationsbetweenthetwogenesandtheirrelationswithmetastasisandprognosiswereanalyzed,allthecasesadmittedinourhospitalfrom1998to2008.ResultsThepositiveexpressionrateofP27inbreastcancerwasstatisticallylowerthanthatinfibroadenoma.whilenm23-H1wasalsolowerthaninfibroadenomaandshowednosignificance(P>0.05).ThepositiveexpressionrateofP27andnm23-H1weresignificantlyassociatedwithhistologicalgrading(P<0.01).ThepositiveexpressionrateofP27andnm23-H1weresignificantlyassociatedbetweenbetweengroupswithandwithoutlymphnodemetastasis(P<0.05).Theexpressionofnm23-H1wassignificantlyassociatedwithTNMstage(P<0.01).ConclusionItcouldhelptojudgepatients’prognosisbyjointlydetectingtheexpressionrateofP27andnm23-H1inprimarybreastcarcinoma.
[Keywords]Carcinomaofbreast;P27;nm23-H1;Prognosis;Correlation
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，占我国妇女恶性肿瘤第二位，其发病率有逐年上升及年轻化的趋势。本文应用免疫组化方法对原发性乳腺癌手术标本的石蜡包埋组织中进行P27和nm23-H1表达的检测，是为了进一步探讨癌基因蛋白及细胞增殖活性，观察癌组织中的表达以及之间存在的关系，推测转移率，指导对预后的估计，同时为临床提供治疗依据。
1.资料与方法
1.1临床资料
随机选取本院1998年1月～2008年12月间进行乳腺癌根治术患者105例，均为女性，年龄27～64岁，平均54.6岁。术前均经病理检查确诊，并有详细的随访和预后资料，所有病例在手术时无远处转移。随访期为4～39个月，其中64例随访5年或5年以上，目前存活49例（死亡15例）。临床分期IIa期15例，IIb期43例，Ⅲ-Ⅳ期47例；伴腋窝淋巴结转移阳性50例。病理组织学分类及组织学分级采用2003年乳腺肿瘤WHO组织学分类标准。病理组织学分级：I级46例，Ⅱ级42例，Ⅲ级17例。远处转移判定标准：经B超、CT、全身骨扫描诊断，有明确组织学诊断，有可测量标准。并以远处转移发生率作为反映预后的指标。所有标本均为10%中性福尔马林液固定，常规石蜡包埋、切片，厚度为4um，HE染色和免疫组化检测。乳腺癌全部病例术前均未接受放疗或化疗，术后进行常规化疗。随机选取1998年1月～2008年12月张掖市医院病理科保存的乳腺纤维腺瘤病理标本50例作为病理对照组，年龄27～54岁，平均34.6岁。
1.2试剂与方法
所用试剂P27和nm23-H1均由福州迈新生物技术有限公司提供。采取免疫组化S-P法，PBS冲洗、柠檬酸盐修复液（pH6.0）微波进行修复，DAB显色。用已知乳腺癌阳性片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。免疫组化染色步骤；严格按试剂盒说明书进行。
1.3结果判定
免疫组化染色评估根据肿瘤细胞染色程度及其染色反应的强度，采用高倍视野（40x10）随机取10个不同视野，每个视野计数100个肿瘤细胞中的阳性细胞(阳性细胞呈棕褐色细颗粒状)所占的比例，阴性(-)：未见阳性表达或阳性细胞<5%；弱阳性(+)：阳性细胞数占6~25.9%；中度阳性(++)：阳性细胞占26~50%；强阳性(+++)：阳性细胞≥51%以上；高倍镜下P27阳性信号为棕褐色或棕黄色颗粒主要定位于胞核/胞浆，阳性细胞在组织中分布不一，nm23阳性表达在在细胞浆和胞膜上。
1.4统计学方法
采用SPSS11.0统计软件对所得数据进行统计分析，各项参数值之间的比较运用X2检验，P27、nm23表达相关性分析采用Spearman等级相关分析。
2.结果
2.1免疫组化检测结果
在乳腺癌组和乳腺纤维腺瘤组间比较：P27的表达有显著性差异(P<O.01)，nm23-Hl的表达无显著性差异(P>0.05).
2.2nm23，P27的表达与临床病理学特征的关系
3、讨论：
nm23最早是由美国国立癌症研究所steeg等分离出的一种被认为与肿瘤转移抑制有关的基因[1]，其mRNA在低转移潜能的细胞系中的表达水平是高潜能细胞系的10倍。nm23位于19q21，有5个外显子及24个内含子构成，是一种公认的肿瘤转移表型抑制基因。研究表明[2]，nm23基因的抑瘤作用具有组织特异性，在一些肿瘤，如乳腺癌、肝癌、恶性黑色素瘤、卵巢癌等，nm23的蛋白表达与肿瘤转移及临床预后不良呈负相关，正常乳腺上皮细胞nm23呈高表达，在乳腺癌进展过程中nm23表达水平逐渐降低。近年来的研究表明[3]，nm23蛋白表达水平与乳腺癌患者腋淋巴结转移状况和癌细胞分化程度呈显著相关，对腋淋巴结转移及远处转移起抑制作用[4]。本研究显示nm23在乳腺癌组织中的阳性表达60例，阳性表达率为57.14%，其中高表达（++～+++）55例预后较好。nm23的表达随组织学分级升高而降低(P<0.05)，在淋巴结无转移组明显高于有淋巴结转移组(P<0.05)，并与术后生存年限呈正相关(P<0.05)，提示nm23的高表达抑制了肿瘤转移而相对延长了患者的术后生存期。因此nm23基因可以作为判断转移的标志物，对估计乳腺癌的预后具有重要意义。
P27是一种新型的肿瘤抑制基因，一种新的细胞周期相关因子。有促进细胞凋亡，参与细胞分化调控的作用。作为胞外信号是与细胞周期联系的媒介，有调节肿瘤耐药性、防御炎性损伤等功能[5]。
细胞周期中P27蛋白水平在G0期细胞最高，在S期细胞难以检测到。现已证实，P27在真核细胞周期调控中起至关重要的作用[6]，P27基因外源性高表达可使细胞DNA合成受抑制，细胞停止于G期而停止增殖。Nguyen等[7]研究发现，P27可以独立的促进神经元分化和移行。P27作为G/S的调控点，其活性的改变与细胞凋亡之间存在相关性。Zhang等[8]通过在裸鼠体内构建食道癌模型，发现通过腺病毒载体构建高表达的P27，可以导致存活素(survivin)水平下降，进一步导致食道癌细胞的凋亡。Hsu等[9]的研究还发现蔬菜和水果中富含的查耳酮(chalcone)能上调P27的表达水平，促使细胞周期停滞，诱导人乳腺癌细胞凋亡，对乳腺癌的预防有很好的功效。
P27是一种抑癌基因，它在肿瘤细胞中极少有突变或缺失。目前仅在极少数肿瘤组织中发现基因的改变。它和肿瘤的关系主要体现与其蛋白化学剂量的关系上，即原发性肿瘤及其细胞系中P27的蛋白量远低于正常细胞中的量。本研究发现，P27在乳腺癌中的表达率为41.9%，明显低于乳腺良性病变中的表达（78%）(P<0.01),与张静等观察结果一致[10]。且与乳腺癌组织学分级具有相关性，随着组织学分级的增高，P27蛋白的表达下降，提示P27基因的改变是乳腺癌发生、发展的重要分子事件之一，在乳腺癌进展过程中，随着肿瘤恶性程度的增高，具有抑癌作用的P27表达逐渐下调，从而失去其对细胞周期的负性调控作用，使DNA合成增加，大量细胞进入S期，造成细胞异常增殖，导致肿瘤发生。对乳腺良性病变的恶性转化有一定的预兆性，可用于良、恶性乳腺疾病的鉴别。
本研究中nm23与P27在原发性乳腺癌组织中阳性表达呈正相关(P<0.05)，P27与nm23过表达与乳腺淋巴结转移呈负相关，与患者生存期呈正相关。P27与nm23蛋白低表达的患者预后不良，而nm23与P27阳性患者预后均很好。提示同时检测nm23、P27蛋白有利于更好地评估乳腺癌的生物学行为及判断患者的预后，为临床提供更多的临床治疗依据。
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作者简介
梁芳，女（1963-），主要从事乳腺，消化系统病理学研究