导读:本文包含了牛卵丘卵母细胞复合体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:卵丘颗粒细胞复合体,未成熟卵母细胞,卵母细胞体外成熟,胚胎发育
牛卵丘卵母细胞复合体论文文献综述
任文娟,惠董娜,雷鑫,王治平,冯晓琴[1]（2018）在《卵丘颗粒细胞复合体在卵母细胞体外成熟和胚胎发育中的作用》一文中研究指出目的探讨卵丘颗粒细胞复合体在卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)治疗周期中人类未成熟卵母细胞体外成熟和胚胎发育中的作用。方法收集156例不孕不育患者行ICSI治疗周期中获得的305枚未成熟卵[MⅠ期(A):186枚;GV期(B):119枚],随机分为加颗粒细胞组(A1组、B1组)和对照组(A2组、B2组),体外培养24-48h后比较不同时间段两组的成熟情况、受精后胚胎的发育情况以及培养液中雌二醇(E2)和孕酮(P)的分泌水平。结果加入颗粒细胞复合体共培养24-48h后,A1组24h成熟率和48h总成熟率高于A2组(P<0.05&P<0.05),B1组25-48h新增成熟率和48h总成熟率显着高于B2组(P<0.01&P<0.01),成熟后正常受精率、卵裂率、囊胚形成率组间比较均无统计学差异,但是A1组的优质胚胎率高于A2组(P<0.05);加颗粒细胞组的培养液中E2水平明显高于对照组(P<0.01)。结论与卵丘颗粒细胞复合体共培养可以提高ICSI治疗周期中所获未成熟卵的体外成熟率且MⅠ期来源的成熟卵母细胞可以获得更高的优质胚胎率。(本文来源于《中国优生与遗传杂志》期刊2018年11期）
张辉[2]（2018）在《雌激素膜受体GPR30在山羊卵丘卵母细胞复合体间隙连接通讯中的作用及其机制研究》一文中研究指出哺乳动物卵泡主要由卵泡体细胞和生殖细胞组成,颗粒细胞间、卵丘细胞间及卵丘细胞与卵母细胞间存在着间隙连接(gap junction),从而形成了一个功能性合胞体。卵泡发育过程中,卵母细胞周围出现透明带,卵丘细胞与卵母细胞膜间形成跨带突触(transzonal cytoplasmic projections,TZPs),形似丝状伪足,其末端也形成间隙连接;间隙连接为卵母细胞发育输送大量信号物质和能量,也在卵母细胞成熟调控和排卵过程中发挥重要作用。在卵母细胞自发成熟或促性腺激素诱导的卵母细胞成熟过程中,都伴随着卵泡颗粒细胞间隙连接的减少,卵丘细胞与卵母细胞间的间隙连接则逐渐关闭甚至消失。研究发现,促黄体素(luteinizing hormone,LH)可作用于颗粒细胞的隙连接,终止cGMP等减数分裂抑制物质的传输,诱导卵母细胞恢复减数分裂。雌激素在卵泡发育过程中也能调节间隙连接相关蛋白的表达,但雌激素调控卵丘卵母细胞复合体(Cumulus oocyte complex,COCs)间隙连接通讯功能和相关机制尚不明确。本研究通过检测山羊COCs体外成熟培养过程中卵母细胞生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)的发生,研究17β-雌二醇(17β-E_2)对GVBD发生的调节及其作用通路,以及TZPs数量和间隙连接通讯动态变化在卵母细胞核成熟过程中的作用,探讨雌激素对山羊COCs间隙连接通讯和卵母细胞核成熟进程的影响,揭示间隙连接在卵母细胞成熟过程中的功能状态及其调控机制。研究内容和结果如下:(1)采用Hoechst33342对山羊卵母细胞核染色后,进行染色质形态观察,检测17β-E_2在山羊COCs体外培养过程中的作用。山羊COCs在基础培养液或添加1μg/mL17β-E_2处理,体外培养2,4,6 h和8 h,结果表明在17β-E_2处理到4 h和6 h时,卵母细胞GVBD发生率显着高于不添加17β-E_2的对照组;进一步采用雌激素核受体(estrogen recepter,ER)抑制剂ICI182780,雌激素膜受体(G protein coupled receptor30,GPR30)抑制剂G15或激动剂G1,研究雌激素促进山羊卵母细胞核成熟进程的受体通路,结果表明,17β-E_2促进山羊卵母细胞GVBD的发生的作用能被雌激素膜受体GPR30激动剂G1模仿,而能被GPR30抑制剂G15所抑制;核受体抑制剂ICI182780却不能抑制17β-E_2对山羊卵母细胞GVBD发生的促进作用。说明,在山羊COCs体外培养过程中,1μg/mL 17β-E_2能够促进卵母细胞提前发生GVBD,这种促进作用是由其膜受体GPR30介导的。(2)卵母细胞核成熟进程中,TZPs数量和间隙连接通讯功能均会发生动态变化,但这些动态变化是否受雌激素及其受体通路调控,需要进一步验证。利用免疫荧光技术,检测新鲜分离、成熟培养前山羊COCs中GPR30和间隙连接蛋白CX43的表达与定位,结果表明成熟培养前山羊COCs的卵丘细胞和卵母细胞均存在GPR30和CX43表达,并定位于细胞膜上。为了验证TZPs在17β-E_2促进山羊卵母细胞提前发生GVBD中是否发挥作用,在COCs体外培养体系中添加或不添加17β-E_2,分别在COCs体外培养的0,6,24 h检测卵丘细胞和卵母细胞间TZPs的表达数量,发现在体外培养6h和24 h时,所有COCs卵丘细胞和卵母细胞之间TZPs数量均显着下降(P<0.05),其中体外培养6 h时17β-E_2处理组与不添加17β-E_2的对照组相比没有明显差异,而培养24 h时17β-E_2处理组TZPs表达数量与对照组相比显着下降(P<0.05),提示17β-E_2并不是通过影响COCs中TZPs的表达而调控卵母细胞核成熟进程。为了进一步验证间隙连接在17β-E_2促进卵母细胞提前发生GVBD中是否发挥作用,在添加1μg/mL 17β-E_2的培养体系中培养山羊COCs,在培养前及培养到2,4,6,8 h时,采用显微操作系统分别将荧光黄(lucifer yellow,LY)注入到卵母细胞胞质中,根据荧光黄从卵母细胞向卵丘细胞的扩散程度,监测不同培养时间COCs的间隙连接通讯功能,结果显示从卵泡新鲜分离的山羊COCs间隙连接有87.5%处于开放状态,17β-E_2处理4h和6h间隙连接通讯明显下调(P<0.05);向COCs培养体系中分别添加1μg/mL 17β-E_2或雌激素膜受体激动剂G1,或联合添加17β-E_2和雌激素膜受体抑制剂,或联合添加17β-E_2和雌激素核受体抑制剂ICI182780,在COCs体外培养的4 h,将COCs转移到含钙黄绿素乙酰甲基酯(Calcein-AM)的磷酸盐缓冲液中,监测钙黄绿素从卵丘细胞向卵母细胞的转移情况,检测雌激素受体通路对间隙连接通讯活性的影响。结果显示,单独添加17β-E_2或雌激素膜受体激动剂G1均能下调间隙连接活性、显着抑制钙黄绿素从卵丘细胞向卵母细胞的转移(P<0.05);膜受体抑制剂G15的添加阻断了雌激素对间隙连接的抑制作用,而不影响钙黄绿素转移;雌激素核受体抑制剂ICI182780的添加不影响17β-E_2对钙黄绿素转移的抑制作用。说明17β-E_2会下调COCs中卵丘细胞与卵母细胞间间隙连接通讯,这种下调作用是通过雌激素膜受体GPR30介导的。(3)为了研究雌激素对山羊COCs卵丘细胞和卵母细胞间间隙连接通讯影响的机制,利用Western Blotting技术,检测17β-E_2对山羊COCs间隙连接蛋白CX43磷酸化水平的影响。结果显示,在17β-E_2处理的4 h内COCs间隙连接蛋白CX43磷酸化水平没有明显变化,在处理到4 h,6 h和8 h时CX43磷酸化水平均显着升高;进一步研究发现,单独使用17β-E_2或雌激素膜受体GPR30激动剂G1处理COCs 4 h后,COCs中GPR30信号通路关键分子细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular-signal regulated protein kinase1/2,ERK1/2)和CX43 Ser368磷酸化水平显着高于空白对照组和17β-E_2与G15共同处理组;进一步在1μg/mL 17β-E_2基础上,共同添加ERK抑制剂PD98059(50μM),或共同添加GPR30信号通路中另一个关键分子EGFR(ERK上游)的抑制剂AG1478(50μM)时,均能下调ERK1/2和CX43 Ser368的磷酸化水平(P<0.05);而17β-E_2与雌激素核受体抑制剂ICI182780共同处理时,ERK1/2和CX43 Ser368的磷酸化水平与对照组没有显着差异。说明,雌激素通过GPR30介导山羊COCs间隙连接蛋白CX43的磷酸化,且EGFR-ERK1/2信号通路参与了这一过程。(4)为了进一步验证EGFR通路参与了GPR30介导的雌激素对COCs间隙连接蛋白CX43磷酸化调控。利用qRT-PCR技术,检测山羊卵丘细胞EGFR的配体EGF样因子(AREG,EREG,BTC)的表达。结果显示,单独添加17β-E_2或者雌激素膜受体激动剂G1处理4 h,均能增加卵丘细胞中EGF样因子的m RNA表达,且显着高于空白对照组和雌激素膜受体抑制剂G15与17β-E_2共同处理组(P<0.05);而雌激素核受体抑制剂ICI182780与17β-E_2共同处理组与单独添加17β-E_2或者G1处理组没有明显差异,说明并ICI182780不影响17β-E_2诱导的卵丘细胞EGF样因子的表达。说明,17β-E_2通过GPR30介导而促进了EGF样因子mRNA表达。综上所述,17β-E_2通过GPR30促进山羊COCs卵丘细胞EGF样因子的表达,进而激活ERK1/2信号通路,促进COCs的间隙连接蛋白CX43的磷酸化、下调间隙连接通讯,最终促进了卵母细胞核成熟进程。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-05-01）
李海军,于泊洋,段云娇,刘星宇,翁娅政[3]（2017）在《绵羊卵丘-卵母细胞复合体石蜡切片技术的改良》一文中研究指出【目的】在绵羊有腔卵泡发育过程中,多层卵丘细胞紧密包绕着卵母细胞形成卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complex,COCs)特殊结构,存在于卵泡腔内。卵泡成熟后,绵羊COC从卵泡内排出,进入输卵管,等待受精。现有的卵丘-卵母细胞复合体蛋白鉴定技术,或者将包含各级卵泡的卵巢组织直接进行切片处理,或者将COCs从卵泡内分离,在完整卵丘-卵母细胞复合体水平上进行免疫染色。但这两种方法在检测绵羊有腔卵泡COCs中目的蛋白表达时,存在显着缺陷。研究旨在对常规石蜡组织切片技术进行改进,以期满足绵羊COCs蛋白鉴定需求。【方法】首先采用抽吸法从绵羊有腔卵泡内获得COCs,以石蜡包埋方式人为构建了一种可以进行切片处理的"包含多枚绵羊卵丘-卵母细胞复合体的仿组织结构"。然后以该特殊结构与健康绵羊卵巢组织为研究对象,分别采用改良与传统的石蜡组织免疫化学技术流程,检测了目的蛋白,尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)与其受体(urokinase-type plasminogen activator recepter,uPAR),在绵羊COCs中的表达情况,比较了两种技术的免疫染色效果与染色流程差异。【结果】将所构建的绵羊COCs仿组织结构与正常绵羊卵泡组织,进行石蜡组织切片处理,经切片、贴片与脱蜡等步骤,分别形成了散在分布于载玻片上的COCs薄片与包含卵泡的卵巢组织薄层(厚度5μm)。经间接免疫染色处理后,结果显示:①目的蛋白在两种结构COCs中的表达是一致的,即uPAR在绵羊卵丘与卵母细胞上都有表达,而uPA只存在于绵羊卵丘细胞中;②在绵羊COCs薄片结构中,COCs整体形态完好,卵母细胞与外围卵丘细胞层次清晰,蛋白定位清楚,染色效果良好;在卵巢薄层结构中,绵羊卵泡内壁颗粒细胞与COCs等形态结构相对完整,卵母细胞蛋白定位清楚,但是卵丘细胞层次与蛋白表达较不清晰;③与绵羊卵巢组织石蜡切片技术相比较,绵羊COCs仿组织结构石蜡切片技术,在固定、脱水、透明、浸蜡以及脱蜡等步骤的处理时间都大大缩短,例如固定处理由24h缩短为2h;由逐级脱水的10h缩短为两级脱水的1h;透明由30min缩短为10min;软蜡与硬腊浸入由原来的6h缩短为1h;由逐级脱蜡的25min缩短为两级脱蜡的10min等。【结论】改进后的COCs仿组织石蜡切片染色技术,显示更优质的免疫定位与染色效果,不仅具有COCs获得率高、卵母与卵丘细胞形态层次清晰等优点,而且显着缩短了操作时间,简化了操作流程。该技术在保留COCs结构完整的基础上,有效检测了目的蛋白在绵羊卵丘-卵母细胞复合体中的表达模式,对于探明绵羊卵泡发育与卵母细胞成熟机制,具有重要意义。(本文来源于《中国农业科学》期刊2017年08期）
彭灿泉[4]（2016）在《牛卵丘—卵母细胞复合体中uPA和uPAR蛋白表达检测》一文中研究指出尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)与其受体uPAR结合后,能够激活体细胞内多条信号通路,促进细胞有丝分裂,抑制细胞凋亡。但是uPAR是否在牛COCs中表达以及uPA在牛卵泡内表达的意义,尚未见文献报道。为了了解uPA与其特异受体uPAR在牛卵丘一卵母细胞复合体(COCs)中的协同表达情况,本研究以未成熟牛卵丘一卵母细胞复合体为研究对象,运用免疫组化和Western blot技术,分别检测了uPA与uPAR蛋白在牛次级卵泡与卵丘和卵母细胞中的表达情况。免疫组织化学检测结果显示,在卵丘、颗粒和卵泡膜细胞内uPA与uPAR蛋白均有表达,而卵母细胞仅表达uPAR; Western blot检测结果显示,获得的约55kD和43kD大小蛋白条带与uPA与uPAR蛋白预期大小相符,不仅证明了人源两种抗体在牛属细胞上使用的有效性,而且验证了免疫组化技术在牛卵丘与卵母细胞蛋白表达检测的结果。极体排出率统计结果显、示,uPA组卵母细胞第一极体排出率显着升高,而同时添加其受体抗体阻断功能后,卵母细胞第一极体排出率显着降低,推测uPA通过其受体途径能够促进牛卵母细胞的核成熟进程。本研究结果对于深入理解牛卵泡发育与卵母细胞成熟机制有重要意义。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2016-06-01）
彭丽英[5]（2014）在《体内外成熟卵丘—卵母细胞复合体中卵丘细胞蛋白质组学差异的研究》一文中研究指出目前体外受精—胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer, IVF-ET)周期成熟卵母细胞的获得主要有两种方式：体内成熟和体外成熟。卵母细胞体外成熟(in vitro maturation，IVM)是指通过体外培养,使卵泡内的未成熟卵母细胞发育成为成熟的第二次减数分裂中期(metaphasell, MⅡ)卵母细胞。IVM是一项新的辅助生殖技术(Assisted Reproductive Technology,ART),在ART中发挥极其重要的作用。与传统经典的IVF相比,IVM技术具有的优点是减少大量促排卵药诱发的卵巢过度刺激综合征(OHSS)；缩短治疗周期；降低使用外源性促性腺激素的费用；与IVF联合应用,可以增加可移植胚胎和冷冻胚胎的数量,增加累积妊娠率,提高患者助孕成功率。在动物研究方面,IVM成功率相当高,被广泛应用,是人工养殖、胚胎干细胞技术、克隆和转基因动物的重要技术平台。然而,人类IVM仍存在诸多问题：卵母细胞的体外成熟率不高、成熟后卵母细胞的体外受精率和卵裂率较低、胚胎移植后妊娠率较低。自从1991年Cha等报道首例IVM妊娠以来,IVM一直进展缓慢。IVM低成熟率、受精率、妊娠率的关键因素是卵母细胞质量差,胚胎发育不良。卵母细胞质量是女性生殖的关键因素,成熟卵母细胞的生化和分子状态允许卵母细胞受精和发育成胚胎,移植后能健康发育到足月。差的卵母细胞质量导致多精受精或胚胎发育停滞或自然流产。目前研究发现体外培养卵母细胞核成熟几乎不受影响,其胞质成熟不完全可能是其发育能力下降的重要原因。卵泡发育过程中,卵母细胞与卵丘细胞通过缝隙连接和旁分泌方式形成一个很重要的双向调节轴,卵母细胞起主导作用,在卵母细胞生长发育中所释放的分泌因子、生长因子等调控卵丘细胞的分化和功能,反过来卵丘细胞又控制卵母细胞生长环境,影响卵母细胞的发育。卵母细胞与卵丘细胞的这种相互作用使得两者共同发育生长,最终促进了卵母细胞的成熟。卵丘细胞在卵母细胞成熟特别是胞质成熟过程中起重要作用,体外培养中,卵母细胞与卵丘细胞之间信息传递减弱以及细胞生长环境改变引起的应激反应,可能导致卵丘细胞功能改变,进而影响卵母细胞发育。所以,对卵丘细胞功能的研究可能是探讨卵母细胞体外成熟的一条新思路。目前对于IVM卵丘细胞的研究主要集中于-些特定蛋白,未能从整体上系统地分析卵丘细胞的蛋白质群及其作用。因此,本实验通过研究体外与体内成熟卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes, COCs)中卵丘细胞的蛋白质表达的差异,寻找与体外卵母细胞成熟相关的重要蛋白质群,利用卵丘细胞蛋白质组学的研究确定人卵丘细胞不同分子与卵母细胞发育能力的相关性,为预测卵母细胞发育能力确定新的可靠标志物。第一部分体内外成熟卵丘-卵母细胞复合体(COCs)中卵丘细胞蛋白质组的差异表达分析目的：比较体外培养成熟与体内成熟COCs中卵丘细胞的蛋白质表达的差异,寻找与卵母细胞体外成熟相关的重要蛋白质群。方法：1、研究对象选择2012年4-10月在深圳市妇幼保健院生殖中心单纯因男性因素行卵胞浆内单精子注射-胚胎移植(ICSI-ET)治疗的患者20例。2、标本收集及分组20例患者进行常规长方案降调和超排卵,3个以上卵泡平均直径达到16mm,注射HCG,34-36小时内取卵。取卵后,在体视显微镜下将卵冠丘复合体分级：卵冠丘复合体大而松散,放射冠界限清楚者为成熟COCs:卵冠丘复合体小而致密,放射冠紧包绕在透明带周围者为不成熟COCs。(1)体内成熟卵丘细胞的收集：将成熟的COCs孵育4h,ICSI之前,用巴士德吸管吹散COCs周围的卵丘细胞,拆除卵丘细胞后的卵母细胞在倒置显微镜下观察其成熟度,收集成熟卵母细胞周围的卵丘细胞,标为对照组。(2)体外成熟卵丘细胞的收集：将不成熟COCs置于添加了0.075IU/ml HMG的成熟培养液中,于37-C,5%C02,95%湿度培养箱中培养,24-36h后用注射针剥除卵丘细胞,观察卵母细胞是否排出第一极体,收集排出第一极体卵母细胞周围的卵丘细胞,标为实验组。3、实验方法将收集到的两组卵丘细胞进行双向凝胶电泳,用ImageMaster2D platinum5.0软件对凝胶图像进行分析找出差异蛋白质点,并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)进行肽指纹图谱鉴定,通过Mascot软件进行数据库搜索,鉴定出具体的差异蛋白质。结果：1、在20例患者中,共获取116个未成熟卵,平均每患者获得5.8个,经24-36小时体外培养后,成熟85个,体外成熟率为73.28%(85/116)。2、双向凝胶电泳结果双向凝胶电泳所得到的图谱,经ImageMaster2D platinum5.0软件分析后,共找到23个差异蛋白质点。实验组与对照组相比,共有13个蛋白质表达上调(其中7个蛋白质的表达水平在实验组是对照组的3倍以上；6个蛋白质在实验组有表达,而在对照组中无表达),10个蛋白质表达下调(其中2个蛋白质的表达水平,实验组比对照组降低3倍以上；8个蛋白质在实验组无表达,在对照组中有表达)。3、差异蛋白质质谱鉴定结果根据蛋白质的分子量、等电点及差异倍数≥3倍等综合条件,选择10个差异蛋白点进行MALDI-TOF-MS分析,通过Mascot查询软件及搜索NCBInr数据库,结果PRO2044蛋白(ALB)、KIAA1191蛋白(KIAA1191)、乙酰辅酶A酰基转移酶2蛋白(ACAA2)、Ⅱ型角蛋白(KRT2)和ARID2蛋白(ARID2)共五种蛋白质被确定为差异表达蛋白质。结论：1、来自于超排卵周期中的未成熟卵母细胞具有在体外成熟的能力。2、通过蛋白质组学研究技术发现卵丘-卵母细胞复合体在体内成熟与体外成熟存在蛋白质表达差异,这些差异表达蛋白质与清除自由基、抗凋亡、细胞周期调控等生物功能相关,这些蛋白质的表达异常可能是体外成熟卵母细胞质量差的原因之一第二部分应用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)技术分析卵丘细胞差异蛋白表达与卵母细胞及胚胎发育之间的关系目的：观察筛选出的差异蛋白在体内成熟卵丘细胞中的表达与卵母细胞及其后续胚胎发育能力的关系,探讨新的预测卵母细胞发育能力的标志物。方法：1、研究对象选择2012年11月～2013年4月在深圳市妇幼保健院生殖中心单纯因男性因素行ICSI-ET治疗的患者20例。2、标本收集体内成熟卵丘细胞的收集方法同第一部分。3、实验方法3.1实时荧光定量PCR检测：应用RT-qPCR技术检测第一部分研究鉴定出的五种差异蛋白(ALB、KIAA1191、ACAA2、KRT2和ARID2) mRNA在收集到的每例患者卵丘细胞的表达水平。采用Trizol法提取每例患者卵丘细胞的总RNA,并测量其RNA浓度及纯度,A260/A280比值在1.8～2.0范围。将mRNA逆转录成cDNA,用ABI7300型实时荧光定量PCR仪进行PCR扩增,计算出五种蛋白nRNA的表达水平。3.2卵母细胞及后续胚胎发育能力的观察：卵母细胞及后续胚胎发育能力用受精率、卵裂率、优质胚胎形成率和胚胎种植率评价。4、统计学分析采用SPSS13.0软件统计学分析,mRNA表达水平用均数±标准差(x±s)表示。计量资料采用检验；正态分布的双变量资料,采用Pearon相关分析,非正态分布,用Spearman相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。结果：1、RT-qPCR相对定量结果卵丘细胞上五种蛋白nRNA均有表达。所有的溶解曲线峰均为特异的单峰,熔点温度(波峰对应的温度)均在82℃以上,表明五种目的基因和内参基因p-actin的扩增产物均有特异性。ALBmRNA、KIAA1191mRNA、ACAA2mRNA、 KRT2mRNA和ARID2mRNA的相对表达量分别为1.8474±1.1825、1.2122±0.8379、1.3388±1.6907、1.0810±0.6026、1.4712±0.8401。2、五种蛋白nRNA表达量与受精率、卵裂率、优胚率及种植率的相关性ACAA2mRNA和ARID2mRNA相对表达量与优胚率呈正相关(r=0.471,P=0.036;r=0.849,P=0.000),与受精率、卵裂率和种植率无明显相关性((r=0.081,P=0.736; r=-0.075, P=0.754; r=0.283, P=0.240; r=0.194, P=0.413; r=0.184, P=0.436; r=0.201, P=0.394); ALBmRNA、KIAA1191mRNA和KRT2mRNA相对表达量与受精率、卵裂率、优胚率和种植率均无明显相关性；五种蛋白mRNA表达量与获卵数、患者不孕年限、使用促性腺激素天数和总剂量、基础性激素水平等均无相关性。3、妊娠组与未妊娠组五种蛋白mRNA相对表达量的比较妊娠组与未妊娠组比较,卵丘细胞五种蛋白mRNA的相对表达量无显着性差异(P=0.091、0.399、0.411、0.266和0.293)。4、卵丘细胞五种蛋白nRNA之间表达量的相关性ARID2mRNA与ACAA2mRNA表达量呈显着正相关(r=0.504,P=0.024),其余表达量之间无明显相关性。结论：1、五种差异蛋白质mRNA,即ALB、KIAA1191、ACAA2、KRT2和ARID2mRNA在体内成熟卵丘细胞上均有表达,其中ARID2mRNA与ACAA2mRNA表达量呈显着正相关。2、ACAA2mRNA和ARID2mRNA相对表达量与优质胚胎率呈显着正相关。3、ACAA2mRNA及ARID2mRNA在体内成熟卵丘细胞上表达,而其蛋白在体外成熟卵丘细胞未表达,可能是体外成熟卵母细胞发育能力差的重要因素。4、卵丘细ACAA2mRNA和ARID2mRNA定量检测可以作为一种无创、定量的方法预测胚胎发育潜能,是胚胎质量的预测标志物。(本文来源于《南方医科大学》期刊2014-03-01）
戴有金,侯道荣[6]（2013）在《卵丘卵母细胞复合体和裸卵孤雌激活率的比较研究》一文中研究指出卵母细胞的孤雌激活和孤雌胚的发育研究,对于正确认识动物的个体发育、细胞分化,以及核移植和动物克隆具有重要的意义。经孤雌生殖而产生的单倍体和纯合双倍体细胞系在各种遗传学中都具有重要的价值,利用孤雌胚胎体外培养发育到囊胚的内细胞团可建立孤雌胚胎干细胞,可以进一步挖掘优良母畜的遗传资源,加速改良,有助于阐明孤雌生殖与有性生殖的内在联系与差异,进一步认识母源基因在两性生殖中的作用。本文利用7%(本文来源于《中国畜牧兽医文摘》期刊2013年11期）
欧阳效晴,杨淑青,张春强,栗瑞兰,张通[7]（2013）在《生长分化因子9在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中的表达》一文中研究指出旨在探讨牛卵丘卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complex,COCs)体外成熟过程中生长分化因子9(Growth differentiation factor 9,GDF-9)基因表达和卵丘细胞扩展的关系。运用实时荧光定量PCR技术检测GDF-9基因在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中(0、6、12、18、24和28h)的相对表达变化,同时观察了卵丘细胞扩展情况。结果表明,GDF-9mRNA的表达量在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中呈现一定的规律性变化,随着成熟培养的进行,其表达量逐渐增加,在成熟培养12h时表达量最高,但随后又逐渐降低,在成熟培养24h表达量最低;卵丘细胞在IVM 12h开始出现明显的扩散,而且随着成熟时间的延长,卵丘细胞的扩散程度在不断增加。研究结果表明:高水平的GDF-9mRNA表达与卵丘细胞开始扩散的时间一致,揭示GDF-9基因可能在牛卵丘细胞扩散和卵母细胞体外成熟过程中起着重要的作用。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2013年10期）
张伶俐[8]（2013）在《tPA和PAI-1在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟进程中的作用初探》一文中研究指出为了解组织型纤溶酶原激活剂(tissue plasminogen activator, tPA)和纤溶酶原激活剂抑制剂1(plasminogen activator inhibitor, PAI-1)在牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)体外成熟进程中的可能作用；本研究首先运用了实时定量RT-PCR和ELISA技术检测了体外不同成熟时间(0h、8h、16h和24h)卵丘细胞中纤溶酶原(plasminogen)基因相对表达变化和tPA活性变化,然后通过添加不同浓度的tPA(0ng/ml.0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml)、PAI-1(0ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml)观察透明质酸合成酶2(Hyaluronan synthase2,HAS2)基因在体外成熟培养16h牛卵丘细胞中相对表达变化。最后以1ng/ml tPA与10ng/ml PAI做添加组合,在体外成熟培养16h后,统计牛卵丘细胞中HAS2基因相对表达,牛卵母细胞中GDF-9、BMP-15基因相对表达,以及牛COCS的扩散程度。结果如下,1.在COCs体外成熟过程中,牛卵丘细胞Plasminogen mRNA相对表达,在成熟8h和24h显着高于0h和16h(P<0.05)；同时卵丘细胞中的tPA活性在成熟培养8h和24h均高于16h且差异显着(P<0.05)。2.分别添加不同浓度tPA、PAI-1(0ng/ml、0.1ng/m、1ng/m、10ng/ml)体外成熟16h后,HAS2基因在各tPA添加组卵丘细胞中的相对表达水平低于对照组,其中1ng/ml添加组最低,与对照组相比差异显着(P<0.05)；添加不同浓度PAI-1处理后,在1ng/ml和10ng/ml添加组卵丘细胞中的HAS2mRNA相对表达水平显着高于对照组,其中10ng/ml添加组最高3.以1ng/mltPA和10ng/mlPAI-1做添加组合,在体外成熟16h后发现,在PAI-1添加组中,卵丘细胞的HAS2mRNA相对表达水平显着高于其他各处理组(P<0.05)；卵丘层的扩散程度显着高于对照组和tPA添加组(P<0.05)。同时卵母细胞中BMP-15和GDF-9的mRNA相对表达水平在tPA添加组最高,PAI-1添加组最低,俩者差异显着(P<0.05)。综上,tPA在体外成熟早期(8h前后)可能有重要作用。在体外成熟16h,PAI-1在促进牛卵丘细胞表达HAS2基因和扩散发生的同时又下调了卵母细胞中BMP-15和GDF-9基因的表达水平；而tPA的作用与之相反。故此推测,PAI-1应该是卵丘细胞分泌的并促进其在成熟过程中扩散发生的重要调节因子。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2013-06-01）
林嘉鹏,侯敏,白杰,赵云程,汪立芹[9]（2012）在《Gdf9、Zar1、Mater、Dnmt1 mRNA在绵羊卵母细胞复合体、裸卵及卵丘细胞中的表达》一文中研究指出为了探讨卵丘细胞的完整性在支持和促进绵羊卵母细胞成熟过程中发挥的重要作用以及卵丘与卵母细胞互作的分子机理。本研究对具有完整致密卵丘细胞包裹的和无卵丘细胞包裹的绵羊卵母细胞进行了体外成熟培养试验,以不同方式处理卵丘细胞,应用Rael-time PCR技术,检测母源基因Gdf9(生长分化因子9),Zar1(合子阻滞因子1),Mater(胚胎必要的母体抗原),Dnmt1(DNA甲基化酶1)在不同卵母细胞和卵丘细胞中mRNA的含量。结果表明,4个基因的mRNA在GV期的表达量均高于24 h成熟培养的卵母细胞(P<0.05),除Dnmt1外其他3个基因在致密卵丘细胞包裹的卵母细胞的表达量均高于自然裸卵(DOs)(P<0.05),Zar1和Mater在24 h卵丘-卵母细胞复合体的表达量低于24 h裸卵(P<0.05),除Dnmt1外其他3个基因在24 h共成熟卵丘细胞中表达量均高于未培养的卵丘细胞(P<0.05)。结果提示,这4个母源基因对卵母细胞成熟有重要影响,且可能参与了卵丘细胞与卵母细胞间的相互作用,本研究结果为提高卵母细胞的体外成熟效率提供了依据及理论基础。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2012年10期）
崔茂盛,张金龙,张效生,冯建忠[10]（2012）在《绵羊裸卵、卵丘细胞和卵丘-卵母细胞复合体共培养体系对卵子成熟和孤雌发育影响的研究》一文中研究指出引言卵丘细胞对卵母细胞生长、成熟及发育等生理阶段起着重要的支持与保护作用。然而有关绵羊裸卵、卵丘细胞和卵丘-卵母细胞复合体相互作用的研究比较少。在从卵巢上获得卵子过程中会产生大量裸卵,如果能将裸卵利用起来,将对扩大绵羊卵子来源和提高绵羊卵子利用率等方面有着重要意义。本研究探讨绵羊卵丘细胞、卵丘-卵母细胞复合体与裸卵共培养(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集》期刊2012-08-01）
牛卵丘卵母细胞复合体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
哺乳动物卵泡主要由卵泡体细胞和生殖细胞组成,颗粒细胞间、卵丘细胞间及卵丘细胞与卵母细胞间存在着间隙连接(gap junction),从而形成了一个功能性合胞体。卵泡发育过程中,卵母细胞周围出现透明带,卵丘细胞与卵母细胞膜间形成跨带突触(transzonal cytoplasmic projections,TZPs),形似丝状伪足,其末端也形成间隙连接;间隙连接为卵母细胞发育输送大量信号物质和能量,也在卵母细胞成熟调控和排卵过程中发挥重要作用。在卵母细胞自发成熟或促性腺激素诱导的卵母细胞成熟过程中,都伴随着卵泡颗粒细胞间隙连接的减少,卵丘细胞与卵母细胞间的间隙连接则逐渐关闭甚至消失。研究发现,促黄体素(luteinizing hormone,LH)可作用于颗粒细胞的隙连接,终止cGMP等减数分裂抑制物质的传输,诱导卵母细胞恢复减数分裂。雌激素在卵泡发育过程中也能调节间隙连接相关蛋白的表达,但雌激素调控卵丘卵母细胞复合体(Cumulus oocyte complex,COCs)间隙连接通讯功能和相关机制尚不明确。本研究通过检测山羊COCs体外成熟培养过程中卵母细胞生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)的发生,研究17β-雌二醇(17β-E_2)对GVBD发生的调节及其作用通路,以及TZPs数量和间隙连接通讯动态变化在卵母细胞核成熟过程中的作用,探讨雌激素对山羊COCs间隙连接通讯和卵母细胞核成熟进程的影响,揭示间隙连接在卵母细胞成熟过程中的功能状态及其调控机制。研究内容和结果如下:(1)采用Hoechst33342对山羊卵母细胞核染色后,进行染色质形态观察,检测17β-E_2在山羊COCs体外培养过程中的作用。山羊COCs在基础培养液或添加1μg/mL17β-E_2处理,体外培养2,4,6 h和8 h,结果表明在17β-E_2处理到4 h和6 h时,卵母细胞GVBD发生率显着高于不添加17β-E_2的对照组;进一步采用雌激素核受体(estrogen recepter,ER)抑制剂ICI182780,雌激素膜受体(G protein coupled receptor30,GPR30)抑制剂G15或激动剂G1,研究雌激素促进山羊卵母细胞核成熟进程的受体通路,结果表明,17β-E_2促进山羊卵母细胞GVBD的发生的作用能被雌激素膜受体GPR30激动剂G1模仿,而能被GPR30抑制剂G15所抑制;核受体抑制剂ICI182780却不能抑制17β-E_2对山羊卵母细胞GVBD发生的促进作用。说明,在山羊COCs体外培养过程中,1μg/mL 17β-E_2能够促进卵母细胞提前发生GVBD,这种促进作用是由其膜受体GPR30介导的。(2)卵母细胞核成熟进程中,TZPs数量和间隙连接通讯功能均会发生动态变化,但这些动态变化是否受雌激素及其受体通路调控,需要进一步验证。利用免疫荧光技术,检测新鲜分离、成熟培养前山羊COCs中GPR30和间隙连接蛋白CX43的表达与定位,结果表明成熟培养前山羊COCs的卵丘细胞和卵母细胞均存在GPR30和CX43表达,并定位于细胞膜上。为了验证TZPs在17β-E_2促进山羊卵母细胞提前发生GVBD中是否发挥作用,在COCs体外培养体系中添加或不添加17β-E_2,分别在COCs体外培养的0,6,24 h检测卵丘细胞和卵母细胞间TZPs的表达数量,发现在体外培养6h和24 h时,所有COCs卵丘细胞和卵母细胞之间TZPs数量均显着下降(P<0.05),其中体外培养6 h时17β-E_2处理组与不添加17β-E_2的对照组相比没有明显差异,而培养24 h时17β-E_2处理组TZPs表达数量与对照组相比显着下降(P<0.05),提示17β-E_2并不是通过影响COCs中TZPs的表达而调控卵母细胞核成熟进程。为了进一步验证间隙连接在17β-E_2促进卵母细胞提前发生GVBD中是否发挥作用,在添加1μg/mL 17β-E_2的培养体系中培养山羊COCs,在培养前及培养到2,4,6,8 h时,采用显微操作系统分别将荧光黄(lucifer yellow,LY)注入到卵母细胞胞质中,根据荧光黄从卵母细胞向卵丘细胞的扩散程度,监测不同培养时间COCs的间隙连接通讯功能,结果显示从卵泡新鲜分离的山羊COCs间隙连接有87.5%处于开放状态,17β-E_2处理4h和6h间隙连接通讯明显下调(P<0.05);向COCs培养体系中分别添加1μg/mL 17β-E_2或雌激素膜受体激动剂G1,或联合添加17β-E_2和雌激素膜受体抑制剂,或联合添加17β-E_2和雌激素核受体抑制剂ICI182780,在COCs体外培养的4 h,将COCs转移到含钙黄绿素乙酰甲基酯(Calcein-AM)的磷酸盐缓冲液中,监测钙黄绿素从卵丘细胞向卵母细胞的转移情况,检测雌激素受体通路对间隙连接通讯活性的影响。结果显示,单独添加17β-E_2或雌激素膜受体激动剂G1均能下调间隙连接活性、显着抑制钙黄绿素从卵丘细胞向卵母细胞的转移(P<0.05);膜受体抑制剂G15的添加阻断了雌激素对间隙连接的抑制作用,而不影响钙黄绿素转移;雌激素核受体抑制剂ICI182780的添加不影响17β-E_2对钙黄绿素转移的抑制作用。说明17β-E_2会下调COCs中卵丘细胞与卵母细胞间间隙连接通讯,这种下调作用是通过雌激素膜受体GPR30介导的。(3)为了研究雌激素对山羊COCs卵丘细胞和卵母细胞间间隙连接通讯影响的机制,利用Western Blotting技术,检测17β-E_2对山羊COCs间隙连接蛋白CX43磷酸化水平的影响。结果显示,在17β-E_2处理的4 h内COCs间隙连接蛋白CX43磷酸化水平没有明显变化,在处理到4 h,6 h和8 h时CX43磷酸化水平均显着升高;进一步研究发现,单独使用17β-E_2或雌激素膜受体GPR30激动剂G1处理COCs 4 h后,COCs中GPR30信号通路关键分子细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular-signal regulated protein kinase1/2,ERK1/2)和CX43 Ser368磷酸化水平显着高于空白对照组和17β-E_2与G15共同处理组;进一步在1μg/mL 17β-E_2基础上,共同添加ERK抑制剂PD98059(50μM),或共同添加GPR30信号通路中另一个关键分子EGFR(ERK上游)的抑制剂AG1478(50μM)时,均能下调ERK1/2和CX43 Ser368的磷酸化水平(P<0.05);而17β-E_2与雌激素核受体抑制剂ICI182780共同处理时,ERK1/2和CX43 Ser368的磷酸化水平与对照组没有显着差异。说明,雌激素通过GPR30介导山羊COCs间隙连接蛋白CX43的磷酸化,且EGFR-ERK1/2信号通路参与了这一过程。(4)为了进一步验证EGFR通路参与了GPR30介导的雌激素对COCs间隙连接蛋白CX43磷酸化调控。利用qRT-PCR技术,检测山羊卵丘细胞EGFR的配体EGF样因子(AREG,EREG,BTC)的表达。结果显示,单独添加17β-E_2或者雌激素膜受体激动剂G1处理4 h,均能增加卵丘细胞中EGF样因子的m RNA表达,且显着高于空白对照组和雌激素膜受体抑制剂G15与17β-E_2共同处理组(P<0.05);而雌激素核受体抑制剂ICI182780与17β-E_2共同处理组与单独添加17β-E_2或者G1处理组没有明显差异,说明并ICI182780不影响17β-E_2诱导的卵丘细胞EGF样因子的表达。说明,17β-E_2通过GPR30介导而促进了EGF样因子mRNA表达。综上所述,17β-E_2通过GPR30促进山羊COCs卵丘细胞EGF样因子的表达,进而激活ERK1/2信号通路,促进COCs的间隙连接蛋白CX43的磷酸化、下调间隙连接通讯,最终促进了卵母细胞核成熟进程。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
牛卵丘卵母细胞复合体论文参考文献
[1].任文娟,惠董娜,雷鑫,王治平,冯晓琴.卵丘颗粒细胞复合体在卵母细胞体外成熟和胚胎发育中的作用[J].中国优生与遗传杂志.2018
[2].张辉.雌激素膜受体GPR30在山羊卵丘卵母细胞复合体间隙连接通讯中的作用及其机制研究[D].西北农林科技大学.2018
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[4].彭灿泉.牛卵丘—卵母细胞复合体中uPA和uPAR蛋白表达检测[D].内蒙古农业大学.2016
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[10].崔茂盛,张金龙,张效生,冯建忠.绵羊裸卵、卵丘细胞和卵丘-卵母细胞复合体共培养体系对卵子成熟和孤雌发育影响的研究[C].中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集.2012