本文主要研究内容
作者张奎,李重阳,苏晶晶,谈娟,徐曼,崔红娟（2019）在《家蚕整合素β2的表达、纯化及其免疫功能》一文中研究指出：【目的】分析家蚕（Bombyx mori）整合素β2的序列和结构特征及其在家蚕感染病原菌后血细胞中的表达变化,检测其重组蛋白对不同病原相关模式分子识别和病原菌的凝聚作用,为进一步探究家蚕整合素β2的蛋白功能打下基础。【方法】利用生物信息学对整合素β2的序列和结构特征进行分析,利用实时荧光定量PCR检测家蚕分别注射大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）后整合素β2在血细胞中的表达变化。通过PCR技术扩增获得整合素β2完整的胞外域片段,构建至pET22b原核表达载体后转化至E.coli Rosetta（DE3）表达菌株。经IPTG诱导获得重组蛋白,利用Ni-NTA亲和层析得到纯化的体外重组蛋白,利用SDS-PAGE和Western blot对纯化获得的体外重组蛋白的纯度和质量进行检测。利用ELISA检测重组蛋白与两种不同病原相关分子模式LPS和PGN的结合情况,运用Western blot检测重组蛋白与不同病原微生物的结合情况,通过凝集试验检测重组蛋白对金黄色葡萄球菌的凝集能力,最后在个体水平探索重组蛋白在体内细菌清理中的作用。【结果】家蚕整合素β2具有典型的β整合素亚基保守结构特征,即由一个较长的胞外域、一个单次跨膜结构域和一个较短的胞内域构成。家蚕整合素β2具有金属离子结合位点MIDAS、EGF结构域、半胱氨酸重复基序和NPxY等整合素典型的结构特征。实时荧光定量PCR检测结果表明家蚕在受到细菌感染后,整合素β2的表达发生显著变化。通过原核表达和蛋白纯化获得纯度较高的重组蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测结果表明纯化的重组蛋白纯度较高,可以用于后续试验。ELISA试验表明重组蛋白对LPS和PGN等病原相关分子模式具有较强的结合能力。细菌结合试验结果显示重组蛋白能够结合多种细菌,但与革兰氏阳性菌的结合能力要高于革兰氏阴性菌。细菌凝聚试验结果显示重组蛋白在Ca2+的存在下对金黄色葡萄球菌具有较强的凝聚作用。细菌清除试验证实重组蛋白可以有效促进机体对外源入侵细菌的清理作用。【结论】整合素β2具有典型的整合素β亚基的结构特征,可能具有识别病原相关分子模式,如LPS和PGN等的能力,通过与细菌的直接结合而实现对入侵病原微生物的凝聚作用,从而增强有机体的免疫能力,推测在家蚕免疫反应中发挥重要作用。
Abstract
【mu de 】fen xi jia can （Bombyx mori）zheng ge su β2de xu lie he jie gou te zheng ji ji zai jia can gan ran bing yuan jun hou xie xi bao zhong de biao da bian hua ,jian ce ji chong zu dan bai dui bu tong bing yuan xiang guan mo shi fen zi shi bie he bing yuan jun de ning ju zuo yong ,wei jin yi bu tan jiu jia can zheng ge su β2de dan bai gong neng da xia ji chu 。【fang fa 】li yong sheng wu xin xi xue dui zheng ge su β2de xu lie he jie gou te zheng jin hang fen xi ,li yong shi shi ying guang ding liang PCRjian ce jia can fen bie zhu she da chang gan jun （Escherichia coli）he jin huang se pu tao qiu jun （Staphylococcus aureus）hou zheng ge su β2zai xie xi bao zhong de biao da bian hua 。tong guo PCRji shu kuo zeng huo de zheng ge su β2wan zheng de bao wai yu pian duan ,gou jian zhi pET22byuan he biao da zai ti hou zhuai hua zhi E.coli Rosetta（DE3）biao da jun zhu 。jing IPTGyou dao huo de chong zu dan bai ,li yong Ni-NTAqin he ceng xi de dao chun hua de ti wai chong zu dan bai ,li yong SDS-PAGEhe Western blotdui chun hua huo de de ti wai chong zu dan bai de chun du he zhi liang jin hang jian ce 。li yong ELISAjian ce chong zu dan bai yu liang chong bu tong bing yuan xiang guan fen zi mo shi LPShe PGNde jie ge qing kuang ,yun yong Western blotjian ce chong zu dan bai yu bu tong bing yuan wei sheng wu de jie ge qing kuang ,tong guo ning ji shi yan jian ce chong zu dan bai dui jin huang se pu tao qiu jun de ning ji neng li ,zui hou zai ge ti shui ping tan suo chong zu dan bai zai ti nei xi jun qing li zhong de zuo yong 。【jie guo 】jia can zheng ge su β2ju you dian xing de βzheng ge su ya ji bao shou jie gou te zheng ,ji you yi ge jiao chang de bao wai yu 、yi ge chan ci kua mo jie gou yu he yi ge jiao duan de bao nei yu gou cheng 。jia can zheng ge su β2ju you jin shu li zi jie ge wei dian MIDAS、EGFjie gou yu 、ban guang an suan chong fu ji xu he NPxYdeng zheng ge su dian xing de jie gou te zheng 。shi shi ying guang ding liang PCRjian ce jie guo biao ming jia can zai shou dao xi jun gan ran hou ,zheng ge su β2de biao da fa sheng xian zhe bian hua 。tong guo yuan he biao da he dan bai chun hua huo de chun du jiao gao de chong zu dan bai ,SDS-PAGEhe Western blotjian ce jie guo biao ming chun hua de chong zu dan bai chun du jiao gao ,ke yi yong yu hou xu shi yan 。ELISAshi yan biao ming chong zu dan bai dui LPShe PGNdeng bing yuan xiang guan fen zi mo shi ju you jiao jiang de jie ge neng li 。xi jun jie ge shi yan jie guo xian shi chong zu dan bai neng gou jie ge duo chong xi jun ,dan yu ge lan shi yang xing jun de jie ge neng li yao gao yu ge lan shi yin xing jun 。xi jun ning ju shi yan jie guo xian shi chong zu dan bai zai Ca2+de cun zai xia dui jin huang se pu tao qiu jun ju you jiao jiang de ning ju zuo yong 。xi jun qing chu shi yan zheng shi chong zu dan bai ke yi you xiao cu jin ji ti dui wai yuan ru qin xi jun de qing li zuo yong 。【jie lun 】zheng ge su β2ju you dian xing de zheng ge su βya ji de jie gou te zheng ,ke neng ju you shi bie bing yuan xiang guan fen zi mo shi ,ru LPShe PGNdeng de neng li ,tong guo yu xi jun de zhi jie jie ge er shi xian dui ru qin bing yuan wei sheng wu de ning ju zuo yong ,cong er zeng jiang you ji ti de mian yi neng li ,tui ce zai jia can mian yi fan ying zhong fa hui chong yao zuo yong 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国农业科学的张奎,李重阳,苏晶晶,谈娟,徐曼,崔红娟，发表于刊物中国农业科学2019年01期论文，是一篇关于家蚕论文,整合素论文,细菌感染论文,原核表达论文,细菌凝聚论文,中国农业科学2019年01期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国农业科学2019年01期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。