导读:本文包含了表达和鉴定论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:草莓,SnRK2基因家族,进化分析,qRT-PCR
表达和鉴定论文文献综述
刘涛,王萍萍,何红红,梁国平,高雪琴[1]（2019）在《草莓SnRK2基因家族的鉴定与表达分析》一文中研究指出蔗糖非酵解相关蛋白激酶(sucrose non-fermenting-1-related protein kinase, SnRK)是一类植物特有的丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)类蛋白激酶,在植物抗逆研究中扮演着重要的角色。为探究草莓(Fragaria vesca)中SnRK2基因家族的数量、结构以及响应非生物胁迫表达的差异性,以拟南芥(Arabidopsis thaliala)和水稻(Oryza sativa) SnRK2基因保守序列为基础,使用生物信息学工具,对草莓SnRK2基因家族成员进行同源比对,对其基因结构、系统进化、保守基序、蛋白理化性质、蛋白二级结构和顺式作用元件等进行分析,并采用qRT-PCR对基因在模拟逆境胁迫下的表达情况进行分析。结果显示,从草莓基因组数据库中鉴定得到10个SnRK2基因家族成员,分为3个亚族,编码氨基酸数为258～364个,分子量为29 469.75～41 481.68 D,理论等电点介于4.68～9.10之间,分布于草莓4条染色体上。基因结构和motif分析表明,多数基因有9个外显子;同一亚族的motif分布情况基本相似。亚细胞定位预测结果表明,FvSnRK2基因家族主要在细胞质中表达。蛋白二级结构主要以α-螺旋和不规则卷曲为主。上游2 kb顺式作用元件分析显示,FvSnRK2基因家族所有成员均含有MYB和MYC转录因子应答元件。qRT-PCR分析表明,FvSnRK2基因家族成员中,有5个基因在10%PEG6000处理后12 h时相对表达量最高,FvSnRK2.4响应最明显,为0 h的15倍;100μmol/L脱落酸(abscisic acid, ABA)处理后有6个基因相对表达量在24 h时最高,2个基因在12 h时最高,且FvSnRK2.5和FvSnRK2.9响应强烈,分别为0 h时的16.2倍和42.4倍;7个基因在200 mmol/L NaCl处理后相对表达量在2 h时最高,FvSnRK2.10响应强烈,为0 h时的65.2倍,FvSnRK2.5在12 h时最高,为0 h时的94.7倍。FvSnRK2.5和FvSnRK2.10在ABA和NaCl处理后响应强烈,在草莓抗逆境信号调节中有重要的调节作用。本研究为草莓SnRK2基因功能验证及育种工作提供了理论参考。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年12期）
龙英,卯升全,陈国演,杜娟秀,陈千权[2]（2019）在《四纹豆象DNA甲基化相关基因的鉴定及表达量分析》一文中研究指出为了揭示四纹豆象(Callosobruchus maculatus)DNA甲基化相关基因表达量对种群密度的响应,试验分析了四纹豆象转录组数据,对甲基化相关基因进行了鉴定,并分析了种群密度与相关基因表达量之间的关系。结果表明:从四纹豆象转录组数据中鉴定到DNA甲基转移酶1(DNMT1)、甲基转移酶4(METTL4)、去甲基化酶(TET)、甲基化的CpG岛结合域蛋白2(MBD2)各1个,其中MBD2的保守性最高,其次是DNMT1,而METTL4与TET保守性最低;MBD2表达量最高,其次是DNMT1和METTL4, TET表达量最低;种群密度对DNMT1、METTL4和TET的表达量无显着调控作用(P>0.05),而MBD2在高种群密度个体中极显着上调(P<0.01)。说明MBD2可能参与调控四纹豆象行为和繁殖策略的可塑性。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年23期）
迟超[3]（2019）在《小豆-锈菌（Uromyces vignae）互作的转录组分析及差异表达基因鉴定》一文中研究指出小豆是我国传统的杂粮作物,是部分地区农民增收的重要来源,且在农业种植业结构调整的大背景下,小豆等杂粮作物的种植面积呈逐年增加趋势,黑龙江省是我国小豆种植面积最大的区域。然而,由豇豆单胞锈菌引起的小豆锈病在我国各小豆种植区普遍发生,课题组近年来的调查发现,黑龙江西部小豆产物该病害发生严重,已成为威胁小豆优质高产的重要因素之一。选育和利用抗病品种是防治作物锈病最为经济有效的措施之一,然而,有关小豆抗锈病基因及小豆抗锈病机理方面的研究相对滞后,致使缺少成熟的理论和技术成果用于小豆锈病的防治实践。因此,本研究拟利用RNA-Seq测序技术挖掘小豆抗锈病相关基因,筛选适宜于小豆基因表达分析的内参基因及qRT-PCR技术体系,在此基础上对候选的小豆抗锈病相关基因在病菌侵染不同阶段的表达模式进行分析,初步明确参与小豆抗锈病的基因,并对抗病相关基因VaEG45的功能进行初步分析,为深入探索小豆抗锈病分子机理及病害防控奠定基础。研究取得以下重要结果:1.利用转录组测序技术,分析了小豆抗病品种‘庆红1号’(QH1)在豇豆单胞锈菌接种后不同时间(24 h和48 h)的全转录组,以接种无菌水为对照,4个处理3次生物学重复计12个测序样本,共获得0.38-0.54 Gb不等的clean reads,经基因组mapping后进行差异表达基因分析,结果表明,接种后24 h共鉴定差异表达基因2973个,接种后48 h共鉴定差异表达基因856个,表明在病菌入侵早期即可显着诱导小豆产生防卫反应。差异表达基因的功能注释表明,接种后24 h,多个PR蛋白呈显着上调表达趋势。GO和KEGG富集分析发现,受病菌侵染后,小豆乙烯生物合成及乙烯信号通路的多个关键基因(ACS和ACO)及相关转录因子(ERF096、ERF1b、ERF110、ERF113、EBF1)被激活,表明锈菌侵染可能引起了小豆内源乙烯含量的改变,进而激活了乙烯抗病信号通路,这可能是小豆品种QH1高抗锈病的重要因素。2.为构建适宜小豆基因表达的qRT-PCR技术体系及稳定内参,选取了9个常用的管家基因为候选内参,对候选内参基因在不同试验条件下表达稳定性进行了分析,试验结果表明,在不同小豆品种中,可选择ACT或PTB作为内参基因;在同一品种不同组织器官中,可选择EF或UBN作为内参;在接种锈菌和干旱胁迫条件下,ACT或ZMPP可作为内参基因;在盐碱胁迫条件下,可选择UBC或Fbox作为内参;在淹水胁迫条件下,可选择PTB或Fbox作为内参基因。为进一步确定本研究筛选的内参基因的可靠性,分别以ACT、基因组合UNC+UBN、UBC+UBN+EF以及PP2A为内参,对抗病相关基因CAT、CHI及GLU在小豆响应锈菌侵染过程中的表达模式进行了分析,结果表明,接种锈菌条件下以ACT为内参可准确评估候选3个抗病相关基因的表达水平,说明经本研究筛选获得的内参基因较为可靠,可用于小豆基因在相应试验条件下的表达分析。3.应用前文建立的小豆qRT-PCR分析体系及筛选获得的最适内参,以抗、感不同品种接种锈菌后不同时间的叶片为材料,对转录组测序鉴定的于接种后显着差异表达的2个抗病相关基因(VaNATA1和VaEG45)的表达模式进行了分析,结果表明,与感病品种相比,VaNATA1和VaEG45在抗病品种中受病菌侵染后被显着诱导表达,其中VaNATA1在病菌侵染早期(接种后12 h-24 h)和后期(120 h)显着上调表达,而VaEG45主要在病菌侵染后期(接种后48 h-120 h)显着上调,表明VaNATA1参与了对病菌入侵和扩展的抑制作用,而VaEG45只参与了对病菌扩展的抑制。上述结果表明,以转录组测序为依据,结合qRT-PCR分析初步明确了VaNATA1和VaEG45的表达水平与小豆抗锈病呈正相关。4.采用RT-PCR技术,克隆了抗病相关基因VaEG45,对其氨基酸序列分析的结果表明,VaEG45属于植物利钠肽家族基因,包含一个DPBB_1功能域,是一个分泌型胞外蛋白。在烟草中瞬时表达后发现,瞬时表达VaEG45的烟草叶片的病斑直径显着降低,比对照降低了近40%,表明该基因显着提高了烟草对灰霉菌侵染的抗性。进一步应用胼胝质染色技术分析发现,VaEG45基因瞬时表达,可诱发烟草叶肉细胞出现胼胝质沉积,推测VaEG45可能通过增强细胞壁的机械强度从而提高烟草对灰霉菌的抗性。(本文来源于《黑龙江八一农垦大学》期刊2019-12-01）
王义杰,张绍杰,赖艳,胡永峰[4]（2019）在《水稻糖代谢相关酶和糖类转运蛋白编码基因的鉴定和表达分析》一文中研究指出水稻(Oryza sativa L.)子粒淀粉的积累是产量形成的基础,灌浆期叶片通过光合作用合成蔗糖,并运输到子粒为淀粉合成提供原料,该过程中所涉及的代谢相关酶和运输相关蛋白已有研究报道。对卡尔文循环、蔗糖合成与降解、淀粉合成与降解等糖代谢相关的酶以及糖类转运蛋白编码基因进行了系统分析,共发现糖代谢相关蛋白编码基因148个和糖类转运蛋白编码基因102个,其中有228个基因已有文献报道,新鉴定基因22个。表达谱分析发现其中的部分基因表达具有组织特异性,与其功能有密切的关系。同时还发现许多基因受逆境胁迫影响表达发生变化,表明这些基因可能在水稻抗逆境胁迫中具有重要的作用。(本文来源于《湖北农业科学》期刊2019年22期）
宁清,刘迪,靳翔,弓亚杰,薛智权[5]（2019）在《磷矿区高效解磷菌的分离鉴定及其碱性磷酸酶的克隆表达》一文中研究指出为了从磷矿区土壤分离高效溶磷菌,为开发施用于矿区复垦的高效微生物解磷菌肥提供试验基础,利用磷酸钙培养平板筛选磷矿区土壤中的解磷菌,采用PCR法扩增16S rDNA序列进行鉴定,探讨不同碳源、氮源、起始pH值和温度下菌株的生长情况,另外还进一步克隆表达该菌株的碱性磷酸酶。结果显示,经筛选得到1株高活性的解磷菌,16S rDNA鉴定其为成团泛生菌(Pantoea agglomerans);该菌株最佳碳源为甘油、氮源为NH4Cl类无机氮,起始pH值为9,培养温度为33℃;在最适培养条件下,有效溶磷量达到了287.48 mg/L;成功克隆了该菌株中的碱性磷酸酶基因,并在大肠杆菌中实现了异源表达,重组菌裂解液活性为原始菌株裂解液的32.77倍。分离得到的菌株及重组表达的碱性磷酸酶在矿区复垦、农业种植和工业上均具有广泛的应用前景。(本文来源于《山西农业科学》期刊2019年11期）
韦钦钦,朱传凤,马超,傅生芳,高雪军[6]（2019）在《人呼吸道合胞病毒核蛋白、磷蛋白和M2-1蛋白的表达及鉴定》一文中研究指出目的构建含有人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,hRSV)核蛋白(nucleoprotein,N)、磷蛋白(phosphoprotein,P)和转录延长/终止抑制因子(transcription elongation/antitermination factor M2-1,M2-1)蛋白编码基因的表达载体,并转染BSR T7/5细胞,鉴定蛋白的表达。方法根据hRSV兰州株(LZ01/09)的N、P和M2-1基因序列设计3对特异性引物,以pcDNA-N、pcDNA-P和pcDNA-M2-1质粒为模板,PCR扩增N、P和M2-1基因片段,与pGEM-T载体连接,构建亚克隆载体;再通过体外酶切连接将内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)序列克隆至p RSV7载体T7启动子表达盒基因的上游,构建基本表达载体p7IK;通过酶切连接构建表达载体p7IK-N、p7IK-P和p7IK-M2-1,转染BSR T7/5细胞,采用Western blot法鉴定蛋白的表达。结果亚克隆载体、基本表达载体和表达载体经酶切及测序验证均构建正确;Western blot可检测到N、P和M2-1蛋白的特异性条带。结论成功构建了含有N、P和M2-1编码基因的表达载体,经BSR T7/5细胞鉴定3种蛋白成功表达,为进一步应用反向遗传学技术拯救RSV及研发RSV减毒活疫苗奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年11期）
韩斐,赵睿骁,王刚,江明锋[7]（2019）在《定点突变的猪源性胰高血糖素样肽-2融合蛋白的原核表达与鉴定》一文中研究指出为提高胰高血糖素样肽-2(GLP-2)生产效率以适应畜牧生产应用的需求,本试验利用基因工程技术表达出定点诱变的p[Gly2]GLP-2。用甘氨酸取代GLP-2氨基末端第2位的丙氨酸后,再根据大肠杆菌的偏好性对p[Gly2]GLP-2序列进行优化并在目标肽序列N-端添加肠激酶识别位点,合成基因序列,通过KpnⅠ和XhoⅠ双酶切位点连接到pET-40b(+)构建原核重组表达载体p[Gly2]GLP-2-pET-40b(+),重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达重组蛋白。优化后最适表达条件为:菌液D_(600 nm)值为0.6时,用0.2 mmol/L IPTG在37℃诱导培养5 h;最终得到p[Gly2]GLP-2重组蛋白表达量较高的基因工程菌株。通过镍离子亲和层析柱纯化及分梯度洗脱获得纯度较高的p[Gly2]GLP-2融合蛋白,本结果为后续p[Gly2]GLP-2功能性的研究及其在畜牧生产的应用奠定了基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年11期）
朱利利,庆军,杜庆鑫,何凤,杜红岩[8]（2019）在《杜仲脂氧合酶基因家族全基因组鉴定及其表达特性研究》一文中研究指出LOX(脂氧合酶)是动、植物中普遍存在的一种氧合酶,在植物的生长发育和逆境胁迫中发挥重要作用。本研究在杜仲基因组范围内,利用生物信息学方法对LOX基因家族进行全面鉴定,并分析了其基因结构、定位及其所编码蛋白质的理化性质、结构特征、分类和功能等。结果显示:杜仲LOX基因家族有23条LOX基因序列,分别定位于细胞质或叶绿体中,分为9-LOX和13-LOX两个亚家族,其中9-LOX类型仅包含一个,13-LOX类型包含22个; 23个LOX基因非平均分布于12条scaffolds上,一些基因发生串联分布; RNA-Seq表达结果显示6个13-LOX类型基因在杜仲叶、果、树皮和种仁中几乎没有表达,而其他17个LOX基因表达具有组织和时空表达特异性。研究结果为揭示杜仲LOX基因家族成员的功能提供重要线索,为进一步研究LOX基因家族提供理论基础。(本文来源于《植物研究》期刊2019年06期）
王琪,许志茹,陈瑾元,张双,黄佳欢[9]（2019）在《杨树重金属相关异戊二烯化植物蛋白(HIPPs)基因的鉴定及表达分析》一文中研究指出金属伴侣在植物的生理活动中发挥关键作用,负责结合金属离子并将其转运至靶蛋白以维持细胞的金属离子稳态。目前关于HIPP(heavy metal-associated isoprenylated plant protein)金属伴侣蛋白的特性和功能分析多集中于模式植物拟南芥。本研究在毛果杨(Populus trichocarpa)中鉴定了14个Pt HIPPs蛋白,均具有两个保守的金属离子结合基序MXCXXC,氨基末端可以形成βαββαβ二级结构,羧基末端具有保守的异戊二烯化基序;一些Pt HIPPs还具有赖氨酸和/或甘氨酸富集区。根据基因结构、蛋白质的保守基序和进化树分析,Pt HIPPs蛋白可分为3个亚组。Plant Gen IE的组织特异性表达数据及荧光定量PCR鉴定结果显示,毛果杨Pt HIPPs基因及小黑杨(Populus simonii×Populus nigra) Pn HIPPs基因具有特定的组织表达特异性且存在差异。此外,利用缺铜及过量铜离子处理小黑杨植株不同时间后,不同组织部位中Pn HIPPs基因的表达模式发生改变。本研究为鉴定木本模式植物杨树HIPPs蛋白在维持铜离子稳态过程中发挥的作用提供了参考依据。(本文来源于《植物研究》期刊2019年06期）
张树东,周建,田壮,刘长振,姚琦[10]（2019）在《骨质疏松疫苗载体:Qβ病毒样颗粒的表达、鉴定和纯化》一文中研究指出目的优化表达和纯化方式,制备出具有正确空间结构且纯度和产量较高的骨质疏松疫苗载体Qβ病毒样颗粒(Qβvirus-like particles,Qβ-VLPs)。方法在基因合成时删除A1基因序列中Qβ衣壳蛋白终止密码子之后的序列,只合成Qβ衣壳蛋白的基因序列。将Qβ衣壳蛋白基因序列克隆到p ET30a载体质粒上,用BL21(DE3)、BL21(DE3) p Lys S、Rosetta(DE3)叁种不同菌株进行蛋白表达,然后用SDS-PAGE和透射电镜验证是否表达出Qβ-VLPs的正确结构。设置2个蛋白表达诱导剂IPTG(Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)浓度和3种菌体破碎方式,分别优化蛋白表达条件和菌体破碎方案,然后将得到的Qβ-VLPs上清液通过硫酸铵聚沉、高速离心和分子筛分选进行Qβ-VLPs的纯化。结果仅BL21(DE3) p Lys S菌株可以表达出SDS-PAGE中呈现5-6聚体、透射电镜下呈现25～30 nm球形结构的Qβ-VLPs。使用0. 5 m M浓度的IPTG表达的Qβ-VLPs产量较0. 2 m M时高2. 8倍,使用超声破碎菌体的方式可以获得较高的蛋白分离效率。将Qβ-VLPs上清液通过本实验过程中的方案进行纯化后纯度可达90%左右。结论该实验探索出具有正确空间结构、组成单一且纯度较高的Qβ-VLPs的制备方案,为相关疫苗制备和研究奠定基础。(本文来源于《武警医学》期刊2019年11期）
表达和鉴定论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了揭示四纹豆象(Callosobruchus maculatus)DNA甲基化相关基因表达量对种群密度的响应,试验分析了四纹豆象转录组数据,对甲基化相关基因进行了鉴定,并分析了种群密度与相关基因表达量之间的关系。结果表明:从四纹豆象转录组数据中鉴定到DNA甲基转移酶1(DNMT1)、甲基转移酶4(METTL4)、去甲基化酶(TET)、甲基化的CpG岛结合域蛋白2(MBD2)各1个,其中MBD2的保守性最高,其次是DNMT1,而METTL4与TET保守性最低;MBD2表达量最高,其次是DNMT1和METTL4, TET表达量最低;种群密度对DNMT1、METTL4和TET的表达量无显着调控作用(P>0.05),而MBD2在高种群密度个体中极显着上调(P<0.01)。说明MBD2可能参与调控四纹豆象行为和繁殖策略的可塑性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
表达和鉴定论文参考文献
[1].刘涛,王萍萍,何红红,梁国平,高雪琴.草莓SnRK2基因家族的鉴定与表达分析[J].农业生物技术学报.2019
[2].龙英,卯升全,陈国演,杜娟秀,陈千权.四纹豆象DNA甲基化相关基因的鉴定及表达量分析[J].黑龙江畜牧兽医.2019
[3].迟超.小豆-锈菌（Uromycesvignae）互作的转录组分析及差异表达基因鉴定[D].黑龙江八一农垦大学.2019
[4].王义杰,张绍杰,赖艳,胡永峰.水稻糖代谢相关酶和糖类转运蛋白编码基因的鉴定和表达分析[J].湖北农业科学.2019
[5].宁清,刘迪,靳翔,弓亚杰,薛智权.磷矿区高效解磷菌的分离鉴定及其碱性磷酸酶的克隆表达[J].山西农业科学.2019
[6].韦钦钦,朱传凤,马超,傅生芳,高雪军.人呼吸道合胞病毒核蛋白、磷蛋白和M2-1蛋白的表达及鉴定[J].中国生物制品学杂志.2019
[7].韩斐,赵睿骁,王刚,江明锋.定点突变的猪源性胰高血糖素样肽-2融合蛋白的原核表达与鉴定[J].中国畜牧兽医.2019
[8].朱利利,庆军,杜庆鑫,何凤,杜红岩.杜仲脂氧合酶基因家族全基因组鉴定及其表达特性研究[J].植物研究.2019
[9].王琪,许志茹,陈瑾元,张双,黄佳欢.杨树重金属相关异戊二烯化植物蛋白(HIPPs)基因的鉴定及表达分析[J].植物研究.2019
[10].张树东,周建,田壮,刘长振,姚琦.骨质疏松疫苗载体:Qβ病毒样颗粒的表达、鉴定和纯化[J].武警医学.2019