刘东升1陈靖2吴秀丽*2
（1大连市金州新区向应街道办事处116200)
(2宁夏医科大学药学院<宁夏回药现代化工程技术研究中心>宁夏银川750004）
【中图分类号】R379【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）09-0133-02
【摘要】前期研究结果[1][2]表明有两株菌株可以将人参皂苷Rg1转化为稀有人参皂苷F1；结合真菌转化技术与化学分析方法测定了人参皂苷Rg1及其转化产物人参皂苷F1的糖残基的绝对构型，发现人参皂苷Rg1及其转化产物均为D-型葡萄糖。本实验建立一种将真菌转化技术与化学分析方法结合起来，用以测定不同位置糖的绝对构型及其比例的方法。
【关键词】人参皂苷Rg1人参皂苷F1立体构型生物转化
1材料和方法
1.1材料：9790气相色谱仪（浙江温岭福立分析仪器有限公司），D、L-葡萄糖为Fluka公司产品，L-半胱氨酸甲酯盐酸盐、三甲基硅烷咪唑(TMSI)，美国Sigma公司生产，三氟乙酸(TFA)及其它化学试剂均为国产分析纯。
1.2人参皂苷Rg1及其转化产物水解：具体方法参见文献[3]。
1.3糖噻唑三甲基硅醚的合成：完全水解的产物加1mL吡啶和2mgL-半胱氨酸甲酯盐酸盐，60℃反应2h，用N2吹干产物，再加入三甲基硅烷咪唑0.2mL，60℃反应1h。
1.4后处理：加入1mL水终止反应，用环己烷萃取(3×1mL)，萃取液浓缩至1mL，进行气相色谱(GC)分析。标准糖从“加1mL吡啶和2mgL-半胱氨酸甲酯盐酸盐……”开始操作。
1.5GC条件：毛细管柱：OV-17，30mm×0.32mm×0.5μm；柱温：220℃；气化室：280℃；检测器：FID280℃。
2人参皂苷Rg1及转化产物人参皂苷F1的糖残基立体构型分析
2.1糖噻唑三甲基硅醚反应
Fig.1A:ThechromatogramspectrumofL-glucosederivationandD-glucosederivation；B:ThechromatogramspectrumofD-glucosederivation；C:ThechromatogramspectrumofL-glucosederivation
2.2人参皂苷Rg1及转化产物人参皂苷F1的糖残基立体构型
如图Fig.2可以发现：人参皂苷Rg1及人参皂苷F1的糖残基的三甲基硅醚衍生物气相色谱保留时间与D型葡萄糖的标准品的保留时间接近，说明人参皂苷Rg1及人参皂苷F1连有的葡萄糖的绝对构型均为D型。
Fig.2A,B:ThechromatogramspectrumofGinsenosideF1’sglucoseandGinsenosideRg1’sglucosederivation;C:ThechromatogramspectrumofGinsenosideF1,GinsenosideRg1’sglucosederivationandD-glucosederivation;D:ThechromatogramspectrumofGinsenosideF1,GinsenosideRg1’sglucosederivationandL-glucosederivation
由于真菌转化的机理属于酶催化反应，具有特异性，反应前后的绝对构型不会发生改变。本论文测定了人参皂苷Rg1及其转化产物人参皂苷F1的糖残基的绝对构型，发现人参皂苷Rg1及其转化产物人参皂苷F1均为D-型葡萄糖。虽然如此，本实验建立一种将真菌转化技术与化学分析方法结合起来，用以测定不同位置糖的绝对构型及其比例的方法。
参考文献
[1]吴秀丽，王艳，赵文倩，张仪轩.一种真菌对人参皂苷Rg3的转化[J].微生物学报，2008，48(9):1181-1185.
[2]吴秀丽，张仪轩，赵文倩，王金辉，吴春福，李铣.真菌EST-I及EST-Ⅱ对人参皂苷Rgl定向转化为人参皂苷F1的研究[J].沈阳药科大学学报，2008，25(1):73-76.
[3]CiminoP.,IsolationandNMRcharacterizationofrosacelose,anovelsulfatedpolysaccha-ridefromthespongeMixyllarosacea[J].CarbohydrateResearch2001(334):39-47.