导读:本文包含了悬滴培养论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:富勒醇,悬滴培养,脂肪来源的间充质干细胞,成骨诱导分化
悬滴培养论文文献综述
张琪,唐艳婷[1]（2018）在《富勒醇对悬滴培养的脂肪间充质干细胞成骨分化影响的研究》一文中研究指出研究目的:脂肪干细胞可能作为骨组织工程的种子细胞,提高其成骨分化效率,是亟待解决的问题。本研究通过悬滴培养获得较高分化潜能的脂肪干细胞;并研究富勒醇对其成骨分化的影响研究方法:首先培养获得大鼠脂肪来源的间充质干细胞(rADSCs)检测免疫表型和多向分化潜能;对ADSCs进行悬滴培养3d,再进行普通培养,与以普通二维培养的ADSCs进行对照,比较细胞形态、多向诱导分化能力的变化。用1μM的富勒醇添加到成骨诱导培养基中进行成骨诱导,检测ALP活性、矿化结节和OCN/Runx2/ColI基因的表达研究结果:培养的ADSCs定向诱导分化后,显示成脂、成骨细胞分化的能力;悬滴培养与普通培养相比,成骨、成脂的分化潜能提高;1μM富勒醇可促进悬滴培养的ADSCs早期成骨分化及相关成骨基因的表达研究结论:悬滴培养利于促进ADSCs多向分化,富勒醇可提高悬滴培养的ADSCs成骨分化的效率(本文来源于《第十四次中国口腔颌面外科学术会议论文汇编》期刊2018-10-19）
唐艳婷,孙岩峰,李小军,周瑾,郝彤[2]（2016）在《富勒醇对基于悬滴培养的脂肪间充质干细胞成骨分化的影响》一文中研究指出目的探讨富勒醇对基于悬滴培养的大鼠脂肪间充质干细胞(r ADSCs)向成骨细胞分化的影响。方法将rADSCs通过悬滴培养3d形成大鼠脂肪间充质干细胞球,将细胞球用胰酶消化分散成单细胞,对获得的单细胞进行二维贴壁培养24h,然后更换为成骨诱导培养基培养,其中未添加富勒醇组为对照组,添加1.0μmol/L富勒醇组为实验组,诱导分化14d及21d后利用茜素红染色和实时定量PCR检测脂肪干细胞球来源的单细胞向成骨细胞分化的能力。结果悬滴培养3d的rADSCs可形成大小均一的微球结构,经胰酶消化分散可获得细胞球来源的单细胞。与对照组相比,在成骨诱导培养基中添加1.0μmol/L富勒醇可使所获单细胞形成更多的矿化的钙结节,且相关成骨基因Runx2、OCN、ColⅠ的表达增强。结论富勒醇可以显着增强基于悬滴培养获得的rADSCs的成骨分化,有助于提高其成骨诱导的效率。(本文来源于《解放军医学杂志》期刊2016年08期）
林博杰[3]（2016）在《高传代人头皮毛乳头细胞叁维悬滴培养模型的构建及其重建毛囊的研究》一文中研究指出背景毛囊是控制毛发生长的皮肤附属器官,在哺乳动物出生后的生命过程中,毛囊反复经历着生长期(anagen)、退行期(catagen)和静止期(telogen)的循环,通过周期性的生长,毛囊展示出充分的自我更新和再生能力。诸多因素可影响毛囊的周期性循环而导致秃发。秃发性疾病如雄激素性秀发、斑秃等虽然不属于严重疾病,但却给大多数患者造成了严重的心理压力,可影响患者的生活及社交活动。临床上以雄激素性秃发患者最为常见。目前,治疗雄激素性秃发的方法主要包括：一是药物治疗,即采用米诺地尔和非那雄胺,但其仅能暂时延缓脱发进程；二是手术治疗,即自体毛发移植术,但其也仅是将头部非秃发区的毛囊移植至秃发区以实现毛囊的重新分布,并未增加实际的毛发数量,而且对于大面积秃发者还存在着供区毛囊数量不足的缺陷。此外,供区存在瘢痕、移植成活率不稳定和手术效率低等问题也使手术效果受到明显影响。近年来,随着组织工程及再生医学的发展,通过组织工程技术重建毛囊逐渐成为治疗大面积秃发的理想选择。构建组织工程毛囊的前提条件是获得充足的且具备生物学功能的种子细胞。毛囊由表皮成分和真皮成分两部分组成,表皮和真皮间的相互作用决定了毛囊正常的形态发生、周期性循环和重建再生的过程。表皮成分包括毛囊干细胞、毛母质、内外根鞘,而真皮成分则包括毛乳头(dermal papilla, DP)和结缔组织鞘。其中,毛乳头细胞(dermal papilla cell, DPC)对毛囊的形态发生、周期性循环和诱导重建中起到关键作用。人体内正常的DPC呈聚集性生长,细胞间高度紧密连接形成直径为150-250 u m的乳头状叁维结构。在体外常规的二维(2D)培养条件下,尽管DPC依然保留自身特有的一些生物学特性和功能,包括呈聚集性生长的细胞行为,表达多种特异性的细胞标记物和具有诱导毛囊再生的能力。但是随着传代次数的增加,体外培养的DPC会逐渐丧失上述的生物学特性和功能。目前我们尚不清楚高传代的DPC其生物学特性和生物学功能逐渐丧失的具体原因。因此,如何在体外培养条件下使DPC在传代扩增后仍具备生物学特性和功能,是重建人组织工程毛囊的关键。主流的研究表明：叁维培养体系有助于在体外建立细胞培养的仿生微环境。其中,悬滴(hanging drop, HD)培养是较为常用而简便的方法。近年来出现了将传统悬滴培养结合高通量技术的微阵列悬滴培养板(hanging drop plates, HDP),这一革新的叁维培养平台在构建体外细胞的叁维培养模型及微组织上具有明显的优势。因此,我们认为通过建立高传代人DPC的体外叁维悬滴培养模型,进而构建出仿生的DPC微组织,不仅有助于系统地研究DPC的生物学特性和功能,也能为重建人组织工程毛囊提供充足且具有生物学功能的种子细胞。目的1.构建高传代人毛乳头细胞的体外叁维悬滴培养模型,通过该叁维培养模型构建出高传代人毛乳头细胞的仿生叁维微组织2.对高传代人毛乳头细胞体外叁维悬滴培养模型进行相关的检测和评价3.应用高传代人毛乳头细胞仿生叁维微组织进行体内移植后的毛囊诱导重建方法1.高传代人毛乳头细胞叁维悬滴培养模型的构建采用酶消化结合显微解剖法对DPC进行分离和培养,观察DP的形态、贴壁及细胞迁出情况；观察P1-P10各代数DPC的形态学及生长方式变化；通过CCK-8实验检测P1-P10各个代数DPC的增殖活性；利用免疫荧光染色观察DPC相对特异性分子标记物ALP、α-SMA的情况。将培养的第3代DPC分为4组,根据正常毛乳头的直径范围(150-250μm),分别以1×104/40ul/孔、0.5×104/40ul/孔、0.25×104/40ul/孔、0.1×104/40ul/孔的低细胞密度进行接种,每组各接种30个孔,镜下观察并拍照记录各组构建的DPC微组织的形态,并对各组DPC微组织的直径范围和数量进行统计分析,筛选出叁维悬滴培养模型的最佳细胞接种密度。根据筛选出的最佳细胞密度进行接种培养14天,分别在第0、1、4、7、10和14天的不同时间点,于镜下观察悬滴中DPC的聚集程度及微组织形态的变化情况；分别于培养的第7、10和14天取材微组织进行活死染色,以评价微组织内细胞的存活情况；综合上述结果筛选出叁维悬滴培养模型的最佳培养时间。分别取培养的第2代和第8代DPC制成细胞悬液,细胞浓度均调整为6.25×104/ml,将两组DPC分别以前述实验筛选优化出的最佳接种及培养条件随机接种于悬滴培养板中培养,镜下观察对比低传代和高传代DPC的生长方式及微组织构建情况,对两组构建出的正常DP直径范围内的微组织百分比进行分析。2.高传代人毛乳头细胞叁维悬滴培养模型的检测和评价取第8代DPC构建的微组织,采集后用4%多聚甲醛溶液固定,进行常规组织切片的H&E染色、增殖标记物Ki67和凋亡坏死标记物TUNEL的免疫荧光染色；体外再接种培养：将收集到的DPC微组织,使用200μl枪头以注射的方式模拟移植至新培养皿内进行再接种培养,待其自然贴壁并有细胞迁出后,光镜下于接种后第1、3、7天定期观察并拍照记录其自然贴壁和细胞迁出情况,取微组织和迁出细胞的样本进行扫描电镜观察,并与正常人DP接种培养后的情况进行对比。取第2代DPC进行常规二维培养,第8代DPC分别进行二维培养和叁维悬滴培养,以及第3代头皮皮肤真皮成纤维细胞(dermal fibroblast, DF)进行叁维悬滴培养,检测各组中DPC标记物的生物学特性：采用qRT-PCR检测ALP、 a-SMA和NCAM的基因表达水平；采用免疫荧光染色定性检测ALP、α-SMA和NCAM的蛋白表达情况；采用免疫印迹法定量检测ALP、α-SMA和NCAM的蛋白表达水平。3.高传代人毛乳头细胞叁维微组织移植后的体内毛囊重建取第8代人DPC先用CM-Dil进行活体荧光染色标记,以最佳接种培养条件进行叁维微组织的构建；同时,采用酶消化分离获得新生鼠皮肤的表皮细胞(epidermal cells,EPC),按以下分组进行细胞及微组织的注射移植以重建毛囊：(1)表皮细胞1×106个；(2)表皮细胞1×106个+P8-DPC 1×106个；(3)表皮细胞1×106个+P8-DPC微组织60个；于移植后3-4周对移植部位进行组织取材,对移植物进行大体观察、组织切片H&E染色和荧光镜检。结果1.高传代人毛乳头细胞叁维悬滴培养模型的构建采用酶消化结合显微解剖法获得的DP形态完整,呈梨形或卵圆形,接种后可自然贴壁并有细胞迁出；迁出的DPC呈长梭形或不规则多边形,围绕DP组织呈放射状生长团聚；当第1代～第6代的人DPC培养达到融合性生长后,可表现出特有的聚集性生长行为,呈现漩涡状的细胞图案；培养至第6代以后,DPC的漩涡状和聚集性生长特性则变得不甚明显。培养的DPC体积较成纤维细胞略大,小于4代的低传代细胞甚至可观察到球形多细胞聚集体；DPC的聚集性生长随着传代次数的增加而逐渐丧失；至第4代时聚集的细胞团数量已明显减少,第6代以后基本无聚集性生长现象。P1-P10各代数DPC的增殖活性随着培养时间的延长,总体呈一逐渐增加的趋势；但是P1-P10各代数DPC随着细胞传代代数的增加,其增殖活力则逐渐下降。酶消化结合显微解剖法分离培养获得的DPC,其ALP和α-SMA的表达均为阳性。以1.0×104/40ul/孔、0.5×104/40ul/孔、0.25×104/40ul/孔和0.1×104/40ul/孔的不同细胞密度接种于叁维悬滴板内培养7d,结果表明在0.25×104／孔组中形成的介于正常DP直径范围(150-250μm)内的微组织数量最多。DPC以最佳细胞接种密度即0.25×104/孔接种后,当培养至7d时形成的微组织较稳定、形态最好,且微组织内的细胞存活情况最佳。低传代(P2)和高传代(P8)两组DPC分别以最佳细胞接种密度0.25×104/孔接种培养7d后,其形成正常DP直径范围内的微组织在数量上无明显差别,表明叁维悬滴培养模型可用于构建高传代人DPC叁维微组织。2.高传代人毛乳头细胞叁维悬滴培养模型的检测和评价DPC与DF培养情况对比：DPC外观上呈较宽大的长梭形或不规则多边形,可见聚集性生长行为,呈现漩涡状图案；而DF为细长梭形,较DPC体积小,没有聚集性生长行为,呈现编织状图案。微组织的组织学特点：第8代DPC微组织结构较完整规则,细胞排列均匀,细胞间充斥着大量细胞外基质成分,类似于正常的DP组织。微组织的免疫组化特点：第8代DPC微组织内的细胞总体呈现出相对低增殖和低凋亡坏死的状态；经分析约有5.2%的细胞发生增殖,仅有5.93%细胞发生凋亡坏死。第8代DPC微组织具备可移植性,其再接种培养后贴壁和细胞迁出情况与正常DP相类似；微组织内迁出的细胞体积稍小,形态类似于正常的DPC。qRT-PCR、免疫荧光染色和免疫印迹检测结果表明：高传代(P8) DPC在二维培养条件下基本丧失包括ALP、α-SMA和NCAM在内的细胞标记物的基因及蛋白表达；而高传代(P8) DPC经叁维悬滴培养构建出微组织(3D-P8)后则能恢复和维持上述细胞标记物的表达；成纤维细胞(3D-DF)经叁维悬滴培养亦能形成微组织,但其并不表达上述DPC的细胞标记物。3.高传代人毛乳头细胞叁维微组织移植后的体内毛囊重建将表皮细胞与高传代(P8) DPC微组织联合移植可重建出完整的毛囊结构,而将表皮细胞与二维培养的高传代(P8) DPC联合移植或仅单纯表皮细胞移植后,均未能诱导重建出毛囊结构；DPC活体荧光示踪标记证实了重建出的毛囊来源于移植的人源性DPC微组织。结论1.通过酶消化结合显微解剖法可分离获得人头皮毛乳头,该方法具有高收获率、高分离效率、低劳动强度和高贴壁迁出率的优点；该方法并未明显影响DPC在体外原代培养时的细胞形态、生长方式和细胞相对特异性标记物ALP. α-SMA的表达,后期实验均采用该方法分离获得人毛乳头。2.人DPC在体外培养时,随着传代次数的增加而逐渐丧失聚集性生长的特性,高传代细胞(高于第6代)基本没有聚集性生长现象；与低传代细胞(低于第6代)相比,高传代细胞其细胞增殖能力和速度均明显降低。3.应用叁维悬滴培养模型有利于人DPC聚集形成多细胞球状微组织；其最佳接种培养条件为：DPC以0.25×104/40 μl/孔的密度接种于悬滴培养板内,并于37℃含有5% CO2的培养箱中培养7天后,构建出类似于体内正常毛乳头直径范围(150～250μm)内的微组织数量最多,所形成的微组织形态最稳定,而且微组织内的细胞存活情况最佳；后期实验均采用该条件构建高传代人DPC叁维悬滴培养模型。4.通过叁维悬滴培养模型构建的高传代人DPC微组织,其组织学结构特点与正常DP相似；微组织内的细胞基本处于一种相对低水平增殖和凋亡的稳定状态；微组织具备注射性和可移植性,再次接种后其仍具备自然贴壁及细胞迁出的能力,具有与体内正常毛乳头相似的生物学特性。5. qRT-PCR、细胞免疫荧光和蛋白免疫印迹实验结果均证实：通过叁维悬滴培养模型构建的高传代DPC微组织,可以恢复和维持细胞内标记物ALP、α-SMA和NCAM的表达,表明微组织可保留DPC自身所特有的生物学特性。6.通过叁维悬滴培养模型构建的高传代DPC微组织,在细胞生长方式、微组织直径、细胞生物学特性和细胞特有标记物的表达上均与体内正常的毛乳头相似,因而是一种仿生的微组织。7.通过叁维悬滴培养模型构建的高传代人DPC仿生微组织,不仅能恢复和维持高传代细胞的生物学特性和生物学功能,还可用于注射移植进行体内的毛囊重建,具备较大的临床应用前景及价值。(本文来源于《南方医科大学》期刊2016-05-18）
张蕾,王宵燕,左其生,路镇宇,王飞[4]（2015）在《悬滴培养法促进鸡胚胎干细胞形成类胚体》一文中研究指出本研究旨在通过悬浮培养法培养鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs),摸索鸡胚胎干细胞形成类胚体(Embryoid body,EB)的最佳方案,以期提高鸡胚胎干细胞体外诱导效率。将鸡ESCs培养传代至第3代,采用1×104、3×104和6×104 mL-13个细胞浓度,使用悬滴培养后,观察类胚体的形成效率。对悬滴培养形成的类胚体进行形态学观察,qRT-PCR检测干细胞标记基因的表达,免疫细胞化学检测相关蛋白的表达,并进行类胚体自分化检测和核型分析。3×104 mL-1细胞浓度生成的类胚体数量最高,单个视野下可观察到约267个类胚体,且形成的类胚体大小均一,呈圆球状。qRT-PCR检测结果表明,在类胚体形成48h内,干细胞标记基因Nanog、Sox2、Oct4和C-kit仍维持表达。免疫细胞化学检测显示,该方法形成的类胚体表面抗原检测Nanog和SSEA-1呈阳性。自分化检测叁胚层分化标记基因SOX17、SMA和TUJ-1呈阳性。核型分析显示,悬滴培养形成的类胚体具有并保持正常的核型。鸡ESCs悬滴培养形成类胚体的适宜细胞浓度为3×104 mL-1,且形成的类胚体可分化成3个胚层,用于体外定向诱导过程。本研究建立了鸡ESCs体外悬滴培养形成类胚体的培养体系,为后期信号通路的体外验证提供试验基础。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2015年08期）
曹蕊,肖苒,傅歆,严笠[5]（2015）在《悬滴培养法维持瘢痕疙瘩成纤维细胞表面标志CD105的表达及其功能》一文中研究指出目的探讨悬滴培养法对维持体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞表面标志的作用,并初步研究CD105调节细胞功能的作用。方法以耳部瘢痕疙瘩标本3例培养成纤维细胞,将第5代细胞分别常规贴壁培养和悬滴培养1周,对同一患者来源常规培养的第4代(P4)、第5代(P5)以及悬滴培养的第5代细胞(P5HD),采用多色流式细胞仪检测表面标志CD105、CD90、CD73和CD44的表达;并采用Real-time PCR的方法,检测上述表面标志,以及瘢痕疙瘩成纤维细胞相关功能基因CTGF、Col IA1和Col IA2的m RNA表达。结果流式检测显示CD105+和CD73+CD90+CD105+细胞比例在P4和P5HD组均高于P5组,统计学分析显示有显着性差异,但P4和P5HD组之间无差异;而CD73+、CD90+和CD44+各组细胞比例无差异。Real-time PCR结果显示,各组细胞CD105的m RNA表达与流式结果一致;且各组CTGF和Col IA1表达差异与CD105一致。结论悬滴培养法有助于维持体外瘢痕疙瘩成纤维细胞CD105,及其与纤维化和胶原合成相应功能基因的表达,从而保持细胞的生物学功能,但机制有待于进一步的研究。(本文来源于《组织工程与重建外科杂志》期刊2015年04期）
陈婷[6]（2013）在《FSH、hCG对骨髓间充质干细胞悬滴培养形成卵泡样结构和分泌性激素的影响》一文中研究指出目的：本研究采用雌性大鼠骨髓间充质干细胞(female bone marrow mensenchymalstem cells, FBMSCs)悬滴培养再转入平板培养，观察是否能分化为有功能性的卵泡样结构和有否卵母细胞样细胞排出，是否产生性激素，观察影响性腺发育的全反式视黄酸(retinoic acid, RA)、卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone, FSH)及人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotropin, hCG)对其分化效果有否影响，为骨髓移植后部分女性病人恢复生殖功能及FBMSCs移植治疗卵巢早衰、骨质疏松的机理提供实验依据，为人造卵巢研究奠定基础。方法：全骨髓贴壁法分离成年雌性SD大鼠的骨髓干细胞,用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养增殖,传代至第2代,以加入20%胎牛血清的DMEM培养液为基本培液,用悬滴培养3天转平板培养方法，加RA、FSH及hCG诱导分化，倒置显微镜观察细胞的形态学变化，是否出现功能性的卵泡样结构和卵母细胞样细胞排出；放射免疫法（RIA）测定各组培养液的雌二醇、睾酮、孕酮和雄烯二酮浓度变化，分析FBMSCs诱导分化细胞产生雌二醇、睾酮、孕酮和雄烯二酮的能力及对促性腺激素的反应性，判断是否产生有功能的卵泡和卵母细胞样细胞；实时定量PCR方法检测卵母细胞标志物SCP3、ZP3和GDF-9、卵泡膜细胞标志物LHR和P450scc及颗粒细胞标志物FSHR和P450arom等表达，western blot和免疫细胞化学方法检测SCP3、ZP3、LHR和FSHR表达。结果：1、离体培养的第2代雌性大鼠骨髓干细胞，主要表现为大小均一、梭形的贴壁细胞,表达CD44、CD71,不表达CD34、CD45,表明是FBMSCs。2、FBMSCs悬滴培养3天转平板培养,获得能够长期培养不断增殖、分化的细胞团。3、以加入20%胎牛血清的DMEM培养液为基本培液,4周内对照组与加入RA、FSH、hCG处理组的FBMSCs能够增殖、分化并形成细胞团,4周后RA组细胞团和细胞数减少,而FSH、hCG与对照组FBMSCs继续增殖、分化、形成更大细胞团和卵泡样结构,并有卵母细胞样细胞排出(64天)。4、RT-PCR和Real Time PCR结果表明对照组、RA组、FSH组和hCG组FBMSCs均表达Stra8、Oct4、C-kit、Vasa、SCP3、ZP3、GDF-9、FSHR、Follistatin、P450arom、LHR和P450scc；免疫细胞化学结果表明4组FBMSCs均有SCP3、FSHR、LHR、ZP3阳性细胞；Western blot结果表明4组FBMSCs均有SCP3、FSHR、ZP3蛋白质表达,表明FBMSCs能够向卵母细胞样细胞、颗粒细胞样细胞和卵泡膜细胞分化。5、两批次用RIA测定4组培养液中性激素浓度,第一批测0天、悬滴转平板培养后4组1、3、5、7、10、14、18、21、28、37、43天,结果表明雌二醇在21-43天4组都有明显增加,雄烯二酮和睾酮在10-21天、孕酮在5-7天4组都有明显减少,第二批测0天、30、48、64天4组培养液中的性激素浓度,雌二醇在48、64天而雄烯二酮和睾酮在30-64天4组都有明显增加,孕酮无明显变化。结论：悬滴培养转入平板培养的4组FBMSCs均可形成卵泡样结构和有卵母细胞样细胞从中排出，并可合成、分泌性激素，表明FBMSCs可诱导分化为卵母细胞样细胞、颗粒细胞样细胞、卵泡膜细胞，产生有一定功能的卵泡样结构。(本文来源于《南昌大学》期刊2013-06-01）
杨静,张琪[7]（2012）在《悬滴培养对人脂肪间充质干细胞成骨分化的影响》一文中研究指出目的探讨悬滴培养对人脂肪来源间充质干细胞(hADSCs)成骨诱导分化的影响。方法利用酶消化法分离培养hADSCs,采用流式细胞术检测其表面标志的表达。对hADSCs进行悬滴培养,贴壁后添加诱导剂对其进行成骨诱导分化,以平板培养组为对照,诱导分化7d及21d时,利用RT-PCR检测成骨基因Runx2及Osteopontin的表达。结果分离培养的hADSCs表达干细胞表面标志CD44、CD90、CD105,不表达CD34、CD45;悬滴培养3d的hADSCs可形成大小均一的球状叁维结构;RT-PCR结果表明,在成骨诱导分化的不同时间点,hADSCs悬滴培养组的成骨基因Runx2及Osteopontin表达均比平板培养组高,表明悬滴培养可促进hADSCs的成骨诱导分化。结论悬滴培养有利于hADSCs的成骨诱导分化,有助于提高其成骨诱导效率。(本文来源于《解放军医学杂志》期刊2012年06期）
杨静[8]（2012）在《悬滴培养促进人脂肪间充质干细胞的成骨分化》一文中研究指出目的由于外伤、肿瘤及感染等原因造成的骨组织缺损是口腔颌面外科常见的临床问题。组织工程的发展为骨缺损的治疗带来了新的希望。寻找理想的种子细胞一直是骨组织工程基础研究和临床应用所面临的重大挑战之一。本研究通过探讨人脂肪组织使用酶消化法得到具有分化潜能的人脂肪来源间充质干细胞（adipose-derived stem cells, ADSCs）；研究悬滴叁维培养对hADSCs成骨诱导分化的影响，以期在骨组织工程种子细胞方面取得一定突破。方法利用酶消化法分离人体脂肪组织，获得并培养hADSCs，通过相差显微镜观察其形态；流式细胞术检测其干细胞表面标志的表达，并使用不同诱导剂检测其成骨、成脂的多向分化潜能。对hADSCs进行悬滴培养，通过相差显微镜观察hADSCs悬滴培养时叁维球形聚集物的形成过程；使用H&E染色观察球形聚集物结构；对不同细胞量的球形聚集物（10,000、25,000、50,000），悬滴培养24h、72h、96h后进行比较、分析细胞活性（Live/dead染色）和球形聚集物直径；通过流式细胞术检测hADSCs悬滴培养后其干细胞表面标志表达的变化情况，验证hADSCs悬滴培养后成骨、成脂分化的潜能。利用MTT比色法和克隆分析hADSCs叁维悬滴培养与二维平板培养对细胞增殖的影响。在成骨诱导分化的7d、14d、21d，利用荧光实时定量PCR（real time fluorescence quantitativepolymerase chain reaction）检测叁维悬滴培养与二维培养hADSCs的成骨分化标志基因Collagen type I、Osteopontin及Osteocalcin的表达水平，研究悬滴培养对hADSC成骨诱导分化的影响。结果通过酶消化法分离培养的hADSCs，表达干细胞表面标志CD44、CD90、CD105，不表达CD34、CD45，诱导剂诱导后，具有成骨和成脂分化潜能；悬滴培养72h的hADSCs可形成大小均一的球状叁维结构，形成的球形聚集物直径随着时间的延长直径逐渐变小，细胞聚集越紧密，形成的球形聚集物也越致密；细胞活性检测发现，球形聚集物中hADSCs细胞量为25,000，悬滴培养72h时细胞活性最好，随着时间的延长球形聚集物中的细胞活性逐渐降低；通过悬滴培养的hADSCs，在消散后培养的细胞增殖和克隆形成能力均明显较直接二维平板培养高；流式细胞术检测结果表明hADSCs悬滴培养后其干细胞表面标志与二维培养相比无明显差异，且具有成骨、成脂分化能力，表明悬滴培养不影响脂肪间充质干细胞的基本干细胞特性；荧光实时定量PCR结果表明，在成骨诱导分化的不同时间点，hADSCs悬滴培养组的成骨基因Collagen type I,Osteopontin及Osteocalcin表达均比普通二维培养组高，表明悬滴培养可促进hADSCs的成骨诱导分化。结论通过酶消化法可以从脂肪组织中分离培养出状态优良的hADSCs；25,000hADSCs悬滴培养后形成的叁维球状聚集物中的细胞活性最为优良。悬滴培养不影响hADSCs的干细胞特性，且有利于hADSCs的增殖及成骨诱导分化，有助于提高其成骨分化诱导效率。(本文来源于《辽宁医学院》期刊2012-03-01）
倪秀丽[9]（2011）在《雌鼠骨髓干细胞悬滴培养形成卵泡样结构及性激素合成相关基因表达探讨》一文中研究指出目的：研究雌性大鼠骨髓干细胞(female bone marrow stem cells, FBMSCs)在含10%胎牛血清的低糖DMEM离体培养条件下细胞形态的变化,通过悬滴方法,检测能否形成卵泡样结构,分析FBMSCs性激素相关基因表达情况,为卵巢早衰等疾病的治疗提供新的可能途径。方法：全骨髓贴壁法分离成年雌性SD大鼠的骨髓干细胞,用含10%胎牛血清的低糖DMEM培养增殖,传代至第3代,用悬滴方法,加全反式视黄酸(all trans retinoic acid, ATRA)诱导分化,观察细胞的形态学变化；RT-PCR检测各个年龄骨髓细胞中性激素合成相关基因芳香化酶(P450arom)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、调节性激素合成相关基因卵泡刺激素受体(FSHR)、黄体生成素受体(LHR) mRNA的表达；免疫细胞化学检测培养细胞中LHR的表达情况。结果1.离体培养的第3代雌性大鼠骨髓干细胞,主要表现为大小均一、梭形的贴壁细胞。2.低糖DMEM培养基加胎牛血清悬滴培养第3代雌性大鼠骨髓干细胞3天后,转入12孔板培养,加入ATRA能够形成卵泡样结构。免疫细胞化学检测到LHR,阳性细胞呈簇状分布,细胞核呈卵圆形染深蓝色。放射免疫法测定转入12孔板培养后0、1、2、3、4天骨髓干细胞细胞培养上清液的孕激素(P)、睾酮(T)、雌二醇(E2)浓度,各组之间浓度无差异。3.检测2周、4周、8周、16周雌性大鼠新鲜分离骨髓干细胞LHR、FSHR. P450arom、P450scc基因的表达情况,结果显示,在不同年龄组中,LHR、P450scc基因普遍表达,FSHR、P450arom基因在成年16周表达较明显。结论离体的条件下,(?)BMSCs通过悬滴培养能够形成卵泡样的结构；在体情况下,FBMSCs可自发分化为表达性激素合成相关基因和调节性激素合成相关基因的细胞。(本文来源于《南昌大学》期刊2011-06-01）
张齐好,郑炜炜,高丽莲,刘霞,邓新燕[10]（2010）在《悬滴培养诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞》一文中研究指出目的:与平板培养比较,探讨悬滴叁维培养对大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)肝样分化的诱导效应。方法:对rMSCs进行悬滴培养,以肝细胞生长因子(HGF)作为诱导因子,同时设定平板培养诱导和非诱导对照组,在培养第7、14和21d后,通过RT-PCR法和免疫荧光技术检测白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(APF)和角蛋白(CK-18)在mRNA和蛋白水平上的表达情况,并通过ELISA检测培养液上清中ALB的分泌。结果:HGF悬滴培养的rMSCs形成球状叁维结构,内部呈现空囊样结构,大量细胞聚集在球体外侧面;在第7d就出现ALB和CK-18的强阳性表达,而AFP则表达较弱。HGF培养的单层rMSCs直到第14d才出现ALB、AFP和CK-18 mRNA的弱阳性表达,蛋白表达则在第21d才呈现阳性。ELISA检测到HGF悬滴培养后rMSCs能够胞外分泌ALB,与正常和平板培养诱导组比较差异显着(P<0.01)。结论:悬滴培养为rMSCs创造一种球形叁维培养微环境,在HGF的诱导作用下,rMSCs横向分化为肝样细胞。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2010年11期）
悬滴培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨富勒醇对基于悬滴培养的大鼠脂肪间充质干细胞(r ADSCs)向成骨细胞分化的影响。方法将rADSCs通过悬滴培养3d形成大鼠脂肪间充质干细胞球,将细胞球用胰酶消化分散成单细胞,对获得的单细胞进行二维贴壁培养24h,然后更换为成骨诱导培养基培养,其中未添加富勒醇组为对照组,添加1.0μmol/L富勒醇组为实验组,诱导分化14d及21d后利用茜素红染色和实时定量PCR检测脂肪干细胞球来源的单细胞向成骨细胞分化的能力。结果悬滴培养3d的rADSCs可形成大小均一的微球结构,经胰酶消化分散可获得细胞球来源的单细胞。与对照组相比,在成骨诱导培养基中添加1.0μmol/L富勒醇可使所获单细胞形成更多的矿化的钙结节,且相关成骨基因Runx2、OCN、ColⅠ的表达增强。结论富勒醇可以显着增强基于悬滴培养获得的rADSCs的成骨分化,有助于提高其成骨诱导的效率。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
悬滴培养论文参考文献
[1].张琪,唐艳婷.富勒醇对悬滴培养的脂肪间充质干细胞成骨分化影响的研究[C].第十四次中国口腔颌面外科学术会议论文汇编.2018
[2].唐艳婷,孙岩峰,李小军,周瑾,郝彤.富勒醇对基于悬滴培养的脂肪间充质干细胞成骨分化的影响[J].解放军医学杂志.2016
[3].林博杰.高传代人头皮毛乳头细胞叁维悬滴培养模型的构建及其重建毛囊的研究[D].南方医科大学.2016
[4].张蕾,王宵燕,左其生,路镇宇,王飞.悬滴培养法促进鸡胚胎干细胞形成类胚体[J].畜牧兽医学报.2015
[5].曹蕊,肖苒,傅歆,严笠.悬滴培养法维持瘢痕疙瘩成纤维细胞表面标志CD105的表达及其功能[J].组织工程与重建外科杂志.2015
[6].陈婷.FSH、hCG对骨髓间充质干细胞悬滴培养形成卵泡样结构和分泌性激素的影响[D].南昌大学.2013
[7].杨静,张琪.悬滴培养对人脂肪间充质干细胞成骨分化的影响[J].解放军医学杂志.2012
[8].杨静.悬滴培养促进人脂肪间充质干细胞的成骨分化[D].辽宁医学院.2012
[9].倪秀丽.雌鼠骨髓干细胞悬滴培养形成卵泡样结构及性激素合成相关基因表达探讨[D].南昌大学.2011
[10].张齐好,郑炜炜,高丽莲,刘霞,邓新燕.悬滴培养诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞[J].中国病理生理杂志.2010
标签：富勒醇; 悬滴培养; 脂肪来源的间充质干细胞; 成骨诱导分化;