本文主要研究内容
作者吴甜甜（2019）在《传染性法氏囊病病毒感染时宿主蛋白FKBP12的应答检测及其抗病毒作用》一文中研究指出：鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的禽免疫抑制病。IBDV靶向攻击鸡的中枢免疫器官法氏囊,破坏核心免疫细胞B淋巴细胞,不仅直接造成鸡只死亡,耐过鸡还呈现严重免疫抑制,降低机体免疫力,引起严重的并发和继发感染,严重危害养禽业的健康发展。IBDV是一种具有双节段双链RNA基因组(A节段和B节段)的二十面体病毒。B节段编码具有RNA依赖的RNA聚合酶活性(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)的VP1蛋白。A节段包含两个部分重叠的开放阅读框(Open reading frame,ORF),小ORF编码VP5,大ORF编码一个多聚蛋白(Polyprotein,PP)前体pVP2-VP4-VP3,该蛋白可被VP4反式酶解而释放出pVP2和VP3,pVP2进一步成熟为VP2。IBDV感染过程中,宿主天然免疫发挥重要的调控作用。FK506结合蛋白12(FK506 binding protein 12,FKBP12)是FKBPs家族的重要成员,具有肽基脯氨酰顺反异构酶(Peptidyl-proly cis-trans isomerases,PPIase)活性等多种生理功能,也参与几种人源病毒的感染调控。本实验室前期的iTRAQ检测数据提示,宿主FKBP12在IBDV感染时有明显调动。本研究建立了宿主FKBP12荧光定量RT-PCR检测方法,利用不同毒力的多种IBDV参考毒株,以SPF鸡、DT40细胞为感染模型,从体内、外两个层面研究IBDV感染时宿主FKBP12的应答性变化。体、内外检测结果均表明,FKBP12在IBDV强毒感染时下调,弱毒感染时上调。这提示,FKBP12在IBDV感染过程中可能发挥重要调控作用。为证实这一推测,本研究分别运用过表达和siRNA干扰技术上调和下调FKBP12表达,从基因转录水平、蛋白表达水平以及病毒滴度三个层面评估FKBP12对IBDV复制的影响。结果表明,FKBP12上调表达抑制IBDV复制,下调表达促进病毒复制。这证明,FKBP12是IBDV感染的一个宿主限制性因子。为探索宿主FKBP12作为IBDV宿主限制性因子的作用分子细节,本研究进一步通过GST pull down和激光共聚焦试验证实了鸡源FKBP12与IBDV VP4蛋白存在相互作用。鉴于这两个互作蛋白分别具有PPIase活性和丝氨酸蛋白酶活性,我们推测,FKBP12可能会通过影响VP4酶活性进而抑制IBDV的复制。基于IBDV多聚蛋白(PP)被VP4反式酶解的研究模型,研究发现,FKBP12过表达会抑制IBDV VP4蛋白对病毒PP蛋白的反式酶解,具体体现在源自PP酶解的VP2和VP3的下调。这说明,宿主FKBP12对IBDV的VP4反式酶解活性具有抑制作用。本研究从基因转录、蛋白表达、病毒滴度三个层面检测了宿主蛋白FKBP12对IBDV复制的影响,鉴定了FKBP12是IBDV的一个新的宿主限制性因子。建立了宿主FKBP12荧光定量RT-PCR检测方法,检测了FKBP12在IBDV感染时的应答变化:IBDV弱毒感染时,宿主限制性因子FKBP12被(宿主)上调;IBDV强毒感染时,宿主限制性因子FKBP12被(病毒)下调。证明了宿主FKBP12与IBDV VP4蛋白存在相互作用,初步揭示了FKBP12通过抑制VP4反式酶解病毒多聚蛋白的蛋白酶活性进而发挥宿主限制因子的作用。本研究对于探索IBD防控新制剂和新策略具有重要意义。
Abstract
ji chuan ran xing fa shi nang bing (Infectious bursal disease,IBD)shi you chuan ran xing fa shi nang bing bing du (Infectious bursal disease virus,IBDV)yin qi de qin mian yi yi zhi bing 。IBDVba xiang gong ji ji de zhong shu mian yi qi guan fa shi nang ,po huai he xin mian yi xi bao Blin ba xi bao ,bu jin zhi jie zao cheng ji zhi si wang ,nai guo ji hai cheng xian yan chong mian yi yi zhi ,jiang di ji ti mian yi li ,yin qi yan chong de bing fa he ji fa gan ran ,yan chong wei hai yang qin ye de jian kang fa zhan 。IBDVshi yi chong ju you shuang jie duan shuang lian RNAji yin zu (Ajie duan he Bjie duan )de er shi mian ti bing du 。Bjie duan bian ma ju you RNAyi lai de RNAju ge mei huo xing (RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)de VP1dan bai 。Ajie duan bao han liang ge bu fen chong die de kai fang yue dou kuang (Open reading frame,ORF),xiao ORFbian ma VP5,da ORFbian ma yi ge duo ju dan bai (Polyprotein,PP)qian ti pVP2-VP4-VP3,gai dan bai ke bei VP4fan shi mei jie er shi fang chu pVP2he VP3,pVP2jin yi bu cheng shou wei VP2。IBDVgan ran guo cheng zhong ,su zhu tian ran mian yi fa hui chong yao de diao kong zuo yong 。FK506jie ge dan bai 12(FK506 binding protein 12,FKBP12)shi FKBPsjia zu de chong yao cheng yuan ,ju you tai ji fu an xian shun fan yi gou mei (Peptidyl-proly cis-trans isomerases,PPIase)huo xing deng duo chong sheng li gong neng ,ye can yu ji chong ren yuan bing du de gan ran diao kong 。ben shi yan shi qian ji de iTRAQjian ce shu ju di shi ,su zhu FKBP12zai IBDVgan ran shi you ming xian diao dong 。ben yan jiu jian li le su zhu FKBP12ying guang ding liang RT-PCRjian ce fang fa ,li yong bu tong du li de duo chong IBDVcan kao du zhu ,yi SPFji 、DT40xi bao wei gan ran mo xing ,cong ti nei 、wai liang ge ceng mian yan jiu IBDVgan ran shi su zhu FKBP12de ying da xing bian hua 。ti 、nei wai jian ce jie guo jun biao ming ,FKBP12zai IBDVjiang du gan ran shi xia diao ,ruo du gan ran shi shang diao 。zhe di shi ,FKBP12zai IBDVgan ran guo cheng zhong ke neng fa hui chong yao diao kong zuo yong 。wei zheng shi zhe yi tui ce ,ben yan jiu fen bie yun yong guo biao da he siRNAgan rao ji shu shang diao he xia diao FKBP12biao da ,cong ji yin zhuai lu shui ping 、dan bai biao da shui ping yi ji bing du di du san ge ceng mian ping gu FKBP12dui IBDVfu zhi de ying xiang 。jie guo biao ming ,FKBP12shang diao biao da yi zhi IBDVfu zhi ,xia diao biao da cu jin bing du fu zhi 。zhe zheng ming ,FKBP12shi IBDVgan ran de yi ge su zhu xian zhi xing yin zi 。wei tan suo su zhu FKBP12zuo wei IBDVsu zhu xian zhi xing yin zi de zuo yong fen zi xi jie ,ben yan jiu jin yi bu tong guo GST pull downhe ji guang gong ju jiao shi yan zheng shi le ji yuan FKBP12yu IBDV VP4dan bai cun zai xiang hu zuo yong 。jian yu zhe liang ge hu zuo dan bai fen bie ju you PPIasehuo xing he si an suan dan bai mei huo xing ,wo men tui ce ,FKBP12ke neng hui tong guo ying xiang VP4mei huo xing jin er yi zhi IBDVde fu zhi 。ji yu IBDVduo ju dan bai (PP)bei VP4fan shi mei jie de yan jiu mo xing ,yan jiu fa xian ,FKBP12guo biao da hui yi zhi IBDV VP4dan bai dui bing du PPdan bai de fan shi mei jie ,ju ti ti xian zai yuan zi PPmei jie de VP2he VP3de xia diao 。zhe shui ming ,su zhu FKBP12dui IBDVde VP4fan shi mei jie huo xing ju you yi zhi zuo yong 。ben yan jiu cong ji yin zhuai lu 、dan bai biao da 、bing du di du san ge ceng mian jian ce le su zhu dan bai FKBP12dui IBDVfu zhi de ying xiang ,jian ding le FKBP12shi IBDVde yi ge xin de su zhu xian zhi xing yin zi 。jian li le su zhu FKBP12ying guang ding liang RT-PCRjian ce fang fa ,jian ce le FKBP12zai IBDVgan ran shi de ying da bian hua :IBDVruo du gan ran shi ,su zhu xian zhi xing yin zi FKBP12bei (su zhu )shang diao ;IBDVjiang du gan ran shi ,su zhu xian zhi xing yin zi FKBP12bei (bing du )xia diao 。zheng ming le su zhu FKBP12yu IBDV VP4dan bai cun zai xiang hu zuo yong ,chu bu jie shi le FKBP12tong guo yi zhi VP4fan shi mei jie bing du duo ju dan bai de dan bai mei huo xing jin er fa hui su zhu xian zhi yin zi de zuo yong 。ben yan jiu dui yu tan suo IBDfang kong xin zhi ji he xin ce lve ju you chong yao yi yi 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国农业科学院的吴甜甜，发表于刊物中国农业科学院2019-07-05论文，是一篇关于传染性法氏囊病病毒论文,结合蛋白论文,宿主限制性因子论文,检测论文,防控论文,中国农业科学院2019-07-05论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国农业科学院2019-07-05论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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