导读:本文包含了脱细胞血管支架论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:丹参酚酸B,Triton-x100,脱细胞血管支架,血液相容性
脱细胞血管支架论文文献综述
赵亮,李霞飞,李成成,闫欢欢,张其清[1]（2019）在《应用Triton-x100加丹参酚酸B制备脱细胞血管支架及其血液相容性研究》一文中研究指出应用传统的Triton-x100法与应用Triton-x100和丹参酚酸B法制备脱细胞血管支架,比较这两种支架的理化性质及其血液相容性,展望应用丹参酚酸B后处理脱细胞血管支架在临床上治疗心脑血管疾病方面的应用前景,以及在组织工程血管材料方面的开发空间。选择SD大鼠16只,雄性,鼠龄7周,体质量250 g左右。解剖大鼠,取腹主动脉;随机分为2组,每组8个。用Triton-x100法(Tx组)、Triton-x100加入丹参酚酸B法(Tx-sal组),加工制成两种脱细胞血管支架。观察脱细胞血管支架的宏观形貌;亲水性实验测定亲水性;体外溶血实验计算体外溶血率;复钙化凝血时间实验测定复钙化凝血时间;血小板黏附实验测定动态凝血时间,以及体外血小板的黏附;补体激活实验测定补体激活程度情况;比较两组脱细胞血管支架的血液相容性。Tx组接触角为76.36°±4.65°,Tx-sal组接触角为71.26°±3.55°,Tx组接触角度数略高于Tx-sal组,差异无显着统计学意义。Tx-sal组溶血率为1.5%,Tx组溶血率为2.1%。Tx组复钙化凝血时间为(212±11.32)s,Tx-sal组复钙化凝血时间为(231±13.53)s,Tx组与Tx-sal组的复钙化凝血时间差异有显着统计学意义。Tx-sal组相比Tx组延缓了凝血时间,抗凝血性更加优良。Tx-sal组黏附的血小板数目低于Tx组的相应数目。Tx-sal组补体激活水平低。与传统的Triton-x100法制备的脱细胞血管支架相比,加入丹参酚酸B后处理的脱细胞血管支架具有更加优良的血液相容性,更适合作为组织工程材料应用于心脑血管疾病的治疗,在临床医学上的应用前景更加广阔。(本文来源于《中国生物医学工程学报》期刊2019年02期）
赵亮,李霞飞,周坤,闫欢欢,张其清[2]（2019）在《Triton-x100与丹参酚酸B制备脱细胞血管支架及其生物力学性能》一文中研究指出背景:脱细胞血管支架具有优良性能,但是在其制备过程中其生物力学性能出现不同程度的降低。目的:观察在组织工程制备脱细胞血管支架中丹参酚酸B的应用前景。方法:经Triton-x100单独处理,Triton-x100-丹参酚酸B联合处理制备脱细胞血管支架,分别设为Tx组和Tx-sal组,对其进行形态学观察、组织厚度测量、孔隙率检测及生物力学特性检测,比较在应用丹参酚酸B后处理之后脱细胞血管支架在形态学等各种指标上的变化。结果与结论:Tx组和Tx-sal组的血管管壁厚度及血管孔隙率差异无显着性意义(P> 0.05),形态学无明显变化。Tx-sal组的脱细胞血管支架可以较完好地保留血管壁的胶原纤维和弹性纤维,抗拉强度、最大变形量、断裂伸长比、爆裂压力及缝合强度均优于Tx组(P <0.05)。结果证实,Triton-x100联合丹参酚酸B处理能够成功制备脱细胞效果良好、生物力学性能优良的脱细胞血管支架。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年06期）
亦桐[3]（2018）在《脂肪细胞的分泌功能影响脱细胞血管支架在动物体内钙化进程的研究》一文中研究指出第一部分异种与同种动脉脱细胞血管材料在大鼠体内的免疫反应及钙化表现目的:先天性心脏病(Congenital Heart Disease,CHD)是最常见的先天性出生缺陷,随着我国放开二胎政策以及产检、手术水平的增加,预计先心病患儿数量逐年增多。CHD常需要应用不同材质、不同口径的血管材料进行手术治疗,然而目前市面上的血管或瓣膜材料都会在患者体内产生炎症反应从而钙化衰败。本研究期望探索有效的脱细胞血管材料的建造方法。通过大鼠皮下模型,来评价同种脱细胞血管材料和异种脱细胞血管材料在动物体内的炎症反应,以及钙化情况,从而初步了解两种材料引起机体免疫反应及钙化的相关性。方法:取供体大鼠的颈动脉材料约5cm,以及猪颈动脉5cm,将血管材料裁剪成0.5×0.5cm的血管片。用胰酶法对血管材料进行脱细胞处理,并且对脱细胞水平进行鉴定。将符合标准的血管材料冻干保存。用胰酶法制作猪颈动脉和大鼠降颈动脉脱细胞血管材料,并且对脱细胞水平进行鉴定。实验组在6周龄SD大鼠皮下植入同种脱细胞血管材料(N=6);对照组6周龄SD大鼠皮下植入猪颈动脉脱细胞血管(N=6),每只四个位点。两组内取材时间分别为血管移植后2周和4周。通过HE染色、天狼星红染色、免疫荧光染色、免疫组化以及Von Kossa硝酸银法检查材料于动物体内移植后的再细胞化及钙化情况是否有差异。结果:(1)脱细胞镜下结果显示,胰酶法脱细胞处理的血管材料没有细胞核残余,血管材料外观形态基本正常。猪脱细胞血管DNA平均光密度值为(4.59±0.49),未经脱细胞血管处理的猪血管DNA光密度值(564.35±26.13)。同种脱细胞血管DNA平均光密度值(5.45±0.24),处理前的同种血管DNA光密度值(497.1±7.12)。表明该处理方法可以有效去除血管组织中的细胞成分。(2)天狼猩红染色显示2h胰酶的处理的血管组织绿色弹性纤维缺失断裂明显,表明血管外膜、中膜弹性纤维有明显损害。胰酶处理1h,Ⅰ、Ⅲ型弹力纤维波浪状结构保存相对完好。0.05%胰酶浓度37℃处理1h的血管材料能够有效去除细胞成分,并且保留较好的血管弹性纤维形态。(3)两周后从大鼠体内取出血管,血管移植物基本保持原有形状外观,没有分解的征象,外边可见包裹的纤维组织。HE染色可见大量的自体细胞渗入脱细胞血管的纤维蛋白支架内。每个时间点两组血管细胞渗入数量均有明显差异(二周P=0.023,四周P=0.019)。宿主细胞通过血管两侧的断裂位置渗入的程度更深,数量更多。在远离断端的靠近血管壁中心的位置,细胞渗入主要发生在内外膜(行进方向为血管横截面方向),渗入速度较血管断端慢。4周的皮下植入,可以见到包裹血管的纤维组织中有滋养血管生长,包裹血管材料周围的纤维组织内也布满自体细胞,自体组织与移植血管组织没有明显界限,需要通过移植组织的弹性纤维条状形态进行区分。(4)细胞免疫荧光染色发现,同种脱细胞血管中引起的巨大多核巨噬细胞的数量少于异种脱细胞血管。二周时同种脱细胞血管镜下的多核巨噬细胞渗入个数为 1.60± 1.70 个/7.6*104μm2,异种脱细胞血管为 2.14±1.64 个/7.6*104μm2,两组没有显着性差异(P=0.055)。四周时,多核巨噬细胞渗入增多,同种材料中6.58±2.72个/7.6*104 μ m2,异种材料中7.85±3.15个/7.6*104 μ m2,两组有显着性差异(P=0.012)。镜下可见,巨大多核的巨噬细胞多出现于血管材料表面,难以渗入血管材料内部。CD68免疫组化染色的巨噬细胞明显聚集于血管内外膜接触表面,提示血管与自体组织接触表面发生着巨噬细胞介导的炎症反应。(5)钙化染色结果发现,4周时,两组的钙化镜下未见明显差异,原子火焰法检测钙化2周时同种脱细胞血管钙化为1.08±0.34μg/mg,异种脱细胞血管钙化为1.23±0.32μg/mg(P=0.44);4周时同种脱细胞血管钙化为1.75±0.34μg/mg,异种脱细胞血管钙化为3.06±0.30μg/mg(P<0.01)。同种脱细胞血管的钙化程度两周、四周时均明显轻于异种血管组。结论:通过0.05%胰酶、SDS、Triton的化学消化法可以制作脱细胞率达99%以上的细胞外基质。同种或异种脱细胞血管支架,虽然去除了 99%以上的细胞成分,在动物体内实验仍然引起以巨噬细胞为主的炎症细胞聚集。同种脱细胞血管支架在动物体内引起多核巨噬细胞的数量明显少于异种脱细胞血管支架。同种脱细胞血管支架在动物体内4周引起的钙化程度明显小于异种脱细胞血管支架。脱细胞血管的钙化反应与巨噬细胞介导的免疫炎症反应明显相关,然而具体机制仍需要进一步探究。第二部分脂肪干细胞体外分化得到的脂肪细胞分泌功能的鉴定目的:种子细胞的应用在血管组织工程里十分普遍,他们可以通过自身分泌的活性因子改变血管材料局部微环境,改善机体细胞对材料的细胞免疫反应,引导材料重塑。正常体内血管周围是存在密集结缔组织和脂肪组织包裹的,血管周围的脂肪细胞分泌功能影响着血管钙化的病理生理过程。然而对于脂肪细胞的培养,没有标准流程,本研究拟从大鼠腹股沟脂肪组织中提取脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),探索其分化为脂肪细胞的条件,并且检测其分泌抗钙化因子的能力。为将来在组织工程血管中的应用提供基础支持。方法:通过Ⅰ型胶原酶消化法提取大鼠腹股沟脂肪干细胞,并在光镜下进行形态学观察,应用流式细胞学对P3代进行表型检验。对P1、P2、P3、P4、P5代均进行成脂分化培养,比较哪一代ADSCs分化为脂肪细胞的效率较高,油红0染色,计数统计成脂分化率。取出P3代ADSCs细胞进行成脂分化培养,免疫酶联染色法检测ADSCs和分化来的脂肪细胞分泌脂联素(Adiponectin,APN)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的能力,设立标准品,做标准曲线,通过曲线计算样品浓度。细胞计数由两人不知道分组的情况下完成。结果中的数据以“均数±标准差”形式表示,两组间比较用T检验。多组间比较用ANOVA单因素方差分析,两两比较用LSD检验。使用SPSS.20.0进行统计分析,P<0.05被认为有统计学差异。结果:提取细胞经过24-48小时后开始贴壁,于5-7天开始形成集落或团簇生长,7天基本达到80%融合,细胞形态均一成长梭型外观,细胞排列紧密形成典型旋涡状结构。传代到P3代对细胞表型进行检测:少于3.6%的细胞表达造血干细胞表面因子CD34;CD29,CD166间质细胞表面标志,均有60%以上的表达;边缘型造血干细胞表面抗体ABCG2表达约为42%,与以往文献报道相符,可以确定提取成功ADSCs。对P3,P4,P5代进行成脂分化7天的平均成脂分化率分别为61.6± 15.4%、57.23±6.7%、55.8±12.96%,均高于55%,然而P1、P2成脂分化率分别为9.06±4.82%、35.6±12.1%,均低于35%(P<0.05)组间具有显着差异。虽然P3,P4,P5代两两无显着性差异,但与镜下可见P4、P5成脂分化出现较多细胞漂浮缺失部位,而P3代细胞贴壁情况良好。表明在第P3代的ADSCs诱导来的脂肪细胞成脂分化效率较好,成脂分化过后,漂浮死亡细胞较少。免疫酶联方法检测结果表明脂肪细胞可以大量分泌APN(67.86±2.36 ng/ml/天)、VEGF(757.91±21.83 pg/ml/天)HGF、(261.8±21.6pg/ml/天)。ADSCs 分泌的 APN(低于 1.56ng/ml/天)、VEGF(214.01±11.61 pg/ml/天)相对脂肪细胞分泌功能较低(P<0.01)。结论:脂肪来源的干细胞可以成功分化为具有分泌大量抗炎症因子APN和血管再生因子VEGF和HGF的脂肪细胞。脂肪干细胞的P3代在分化7天后达到成脂分化率较高。第叁部分分化来的脂肪细胞的分泌功能影响异种脱细胞血管在动物体内的炎症及钙化反应目的:心外科血管移植材料到患者体内后,经历着一系列新细胞的长入以及免疫炎症因子的作用,其中巨噬细胞介导的炎症反应以及磷酸盐沉积与移植血管的钙化密切相关。故对于免疫炎症的干预可能是减轻材料钙化途径。体内外的研究均表明,脂联素(Adiponectin,APN)具有抑制钙化的作用。鉴于脂肪细胞可以分泌大量APN和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),还有肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的能力。本实验希望通过诱导脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)分化为脂肪细胞(Induced Adipocyte Cells,IACs),并且用温度反应性培养皿建立脂肪细胞片(Induced Adipocyte Cell-Sheets,IAC-S),直接粘附于脱细胞血管材料型工程血管材料。检测IAC-S在体内的分泌功能,以及对脱细胞血管材料炎症及钙化的影响。方法:用我们以前的方法建立脱细胞猪颈动脉血管材料,并对脱细胞有效性进行检测,裁剪成1.0×1.0厘米大小的血管片,冻干备用。对实验组大鼠腹股沟脂肪干细胞的提取并且传代培养,并且将P3代细胞种植于温度反应性培养皿上,融合至80%时进行成脂肪细胞分化,建造脂肪细胞片。对脂肪细胞片的分泌APN、VEGF、HGF的分泌功能进行鉴定。应用转移膜将IAC-S完整转移并且粘附在猪脱细胞血管材料外膜,制作成IAC-S处理的脱细胞血管材料。实验组将IAC-S血管(N=6)移植于相应的供体大鼠,对照组移植猪颈动脉脱细胞血管(N=6),1、2、4、8周时,依次取出每个位点移植物。分别做HE染色、免疫荧光染色、Von Kossa硝酸银染色、以及原子火焰法检测材料钙含量检测。连续变量符合正态分布时以均数±标准差表示;不符合正态分布用四分位数表示;采用独立样本T检验方式或非参数检验。比较两组巨噬细胞(Macrophage)渗入数量以及分型(Macrophage 1,M1;Macrophage 2,M2),M1/M2比值,钙化程度。P<0.05表示差异有显着性。统计分析采用SPSS20.0软件。结果:(1)成功通过胰酶法制做出来了脱细胞猪颈动脉材料。(2)大鼠腹股沟脂肪组织能够成功分离、诱导培养出具有分泌功能的脂肪细胞。通过温度反应性培养皿,我们可以建造出完整的IAC-S。通过细胞转移膜,可以把IAC-S转移到脱细胞血管材料表面,构成贴和IAC-S的脱细胞血管材料。(3)免疫酶联染色法可以检测到APN和VEGF分泌量在成脂分化过后明显增高:APN由低于1.56ng/ml/细胞片/天升高到70.25±6.1 ng/细胞片/天(P<0.01);VEGF 由 226.93±40.72 pg/细胞片/天升高到 805±25.92 pg/细胞片/天(P<0.01)。然而 HGF 分泌量由 368.9±31.02 pg/细胞片/天降低到265.39 ± 10.74pg/细胞片/天(P<0.01)。(4)免疫荧光染色表明IAC-S在移植一月后仍具有分泌APN的能力。(5)在第4和8周,单纯脱细胞血管组中,CCR7+细胞(M1)明显高于CD163+细胞(M2)的比例(P<0.001),并且第8周时多核巨噬细胞明显增多。然而,IAC-S处理组的血管材料中,M2型巨噬细胞相对于M1型则占有较大比例(P<0.001)(5)脱细胞血管组的M1/M2均大于1,每个时间点的促炎型M1巨噬细胞均多于M2抗炎巨噬细胞;而IAC-S组M1/M2均小于1,每个时间点的抗炎型M2巨噬细胞均多于M1促炎巨噬细胞。(6)单纯脱细胞血管组的钙化程度明显升高,两组在2、4、8周的取材均有统计学差异性(P<0.05)。结论:温度反应性培养皿可以成功建立具有分泌功能的脂肪细胞片,该脂肪细胞片在体内外均能分泌APN、VEGF、HGF因子。脂肪细胞片覆盖的脱细胞血管支架在动物体内能够引起渗入的巨噬细胞表型的改变,使得M2抗炎型巨噬细胞比例增高,并且钙化程度明显降低。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2018-04-01）
刘俊[4]（2017）在《聚电解质多层膜修饰与纳米APS膜外覆大鼠去细胞血管支架的研究》一文中研究指出目的:在过去的十余年,我国冠心病人数逐年升高。冠脉搭桥术(CABG)是治疗冠心病的重要手段,临床上常规使用大隐静脉(SVG)和或乳内动脉(IMA)作为CABG的桥血管,但自体血管常受到患者自身条件限制。因此使用组织工程制备桥血管具有重要意义,但它又存在诸如血栓形成、血管内膜增生、慢性炎症等诸多问题,且经过脱细胞处理的组织工程血管生物力学性能下降,易导致血管变形和扩张。为解决这些问题,本课题拟采用聚电解质多层膜(PEM)修饰去细胞血管支架,利用含SDF-1α和肝素的聚电解质多层膜,防止去细胞血管支架内血栓形成,同时加速血液中干细胞在去细胞血管支架上的粘附和成熟,促进内膜修复。此外,本课题采用纳米氨基醇聚癸二酸甘油酯(APS)静电纺丝(ES)外覆技术,将脱细胞血管与高分子材料相结合,增强血管支架的机械强度。方法:在第一部分中,我们比较了不同的去污剂组合方法对于大鼠主动脉的脱细胞效果以及保护细胞外基质的能力,并检测脱细胞后DNA含量明确脱细胞效果,利用组织学和扫描电镜检测评估脱细胞后的血管损伤情况。在第二部分中,主要采用肝素与SDF-1α构建聚电解质多层膜(HEP-SDF-1αPEM),并用HEP-SDF-1αPEM修饰去细胞血管支架的表面。采用免疫荧光法明确PEM在血管表面的结合,同时在体外验证其生物相容性。第叁部分实验,我们将肝素-SDF-1α修饰后的大鼠去细胞血管支架移植到同种异体的大鼠腹主动脉,术后应用超声和小动物CT检测移植血管的功能,并采用组织学以及免疫荧光染色观察细胞重构的情况。在第四部分中,使用APS静电纺丝包覆脱细胞小动脉血管支架,并通过力学测试来观察脱细胞过程对血管支架力学性能的影响,及复合组织工程血管支架在生物力学方面的优势。第五部分实验中,我们利用前述实验相似方法用肝素涂层修饰复合血管支架内膜,并将复合组织工程血管移植于动物体内进行功能验证,术后6周应用超声和小动物CT检测移植血管的血流速度和血管形态、结构的变化。结果:大鼠主动脉血管经过TRITON X-100、SD以及SDS联合去细胞处理,细胞成分被完整去除,将去细胞处理对于胶原纤维以及弹力纤维的破坏降低到最低程度。去细胞支架表面用肝素-SDF-1αPEM进行了修饰,而SDF-1α在去细胞支架上的缓释也得到了证实。在体外实验中,PEM修饰的去细胞血管支架具备优良的抗凝性以及血液相容性。肝素-SDF-1αPEM促进了BMSCs(大鼠)在去细胞支架表面的迁移、增殖、粘附,加快了支架表面的再细胞化过程。体内试验则通过血管超声以及CT血管造影证实了,PEM组以及单纯去细胞组血管移植物在术后无狭窄、血栓以及瘤样扩张形成,通畅性良好。移植一个月后的组织学以及荧光免疫组化结果表明,采用肝素-SDF-1αPEM修饰的去细胞血管支架能够促进EPCs在血管上的归巢以及再内皮化。我们成功利用静电纺丝技术将APS纺丝包覆于大鼠脱细胞主动脉外壁,ES-APS包覆改造脱细胞血管明显增强支架的缝合强度和抗爆裂压力,显示出良好的生物力学顺应性。而肝素化的ES-APS包覆支架移植后血管通畅性良好,纳米APS静电纺丝包覆能防止去细胞主动脉扩张和动脉瘤形成,减轻管腔内膜增生。结论:通过用HEP-SDF-1αPEM修饰大鼠脱细胞血管支架表面,并使用ES-APS包覆脱细胞血管支架,成功制备了组织工程血管,提高了血管支架的组织相容性以及抗张强度,为组织工程血管的制备提供了新的基础。组织工程血管在临床应用中具备良好的前景。(本文来源于《苏州大学》期刊2017-05-01）
李晓玉[5]（2017）在《脱细胞血管支架的制备及构建组织工程胆管的研究》一文中研究指出肝外胆管损伤修复是目前临床上肝胆外科面临的难题之一,由于胆管缺乏肌层,所以其自我修复能力较差,其修复主要依靠纤维瘢痕组织增生完成。目前临床治疗方法有限,主要为胆管断端吻合、球囊扩张、胆管支架和胆肠吻合等,但是远期效果较差。另外,临床上由于放弃了远端胆管Oddi氏括约肌抗返流和调节胆汁排泄的功能,近远期有并发逆行性胆道感染、继发性胆汁性肝硬化,甚至胆管癌的风险。因此,寻找一种结构和功能与胆管相似的替代物是目前临床亟待解决的问题。本研究根据前期的血管脱细胞实验结果,利用阴离子去污剂十二烷基硫酸钠和脱氧胆酸钠去除兔子腹主动脉中所含细胞,使用核酸酶来清除基质上残留的DNA和RNA片段,降低其免疫原性,然后利用乙酸或木瓜蛋白酶在脱细胞血管基质支架外表面造孔。通过组织学检测,血管经脱细胞处理前后,胶原纤维和弹性纤维结构保持完整基本无断裂,支架仍然具有良好的力学性能,无明显的细胞残留,只有较少DNA残留(0.116±0.007μg/mg干重),不足以引起机体免疫排斥反应。细胞实验中,脂肪组织来源的间充质干细胞能够很好的在脱细胞血管基质支架上生长、迁移和增殖,利用激光共聚焦扫描显微镜观察发现细胞形态清晰可辨,并可很好的长入该支架管壁。将该支架植入到巴马香猪胆管损伤部位,术后45天取材发现该胆管管腔结构明显,腔内有少量絮状物淤积,管壁部分降解,但仍具有一定弹性。组织学H&E和Masson染色发现,该组织工程胆管管壁内部均匀分布大量细胞,但管壁内部无上皮状细胞生成。通过体内外评价,本研究制备的脱细胞血管基质支架具有良好的孔隙率、可降解性、力学性能、生物相容性,并具有脱细胞组织天然的叁维微观结构和相应的细胞活性成分,为临床上组织工程胆管的制备提供了一种良好的解决方案,也为后期的动物胆管损伤修复实验提供理论基础和实践经验。(本文来源于《河南科技大学》期刊2017-05-01）
徐双悦[6]（2017）在《小口径脱细胞血管支架制备方案的优化、评价及其异种原位移植的初步研究》一文中研究指出血管组织工程(Vascular tissue engineering,VTE)的研究核心是种子细胞、可供细胞进行生命活动的血管支架材料以及种子细胞与血管支架间的相互作用,其中找到合适的血管支架是最关键的步骤。血管支架是种子细胞在体外生长所必须的支撑物,其力学特性可以为体外血管的组织化提供一定的机械强度,是种子细胞生长必不可少的叁维空间架构。血管支架,尤其是生物来源的脱细胞支架含有丰富的生物信息可以促进细胞粘附与生长、增殖,在组织再生过程中亦能为细胞(包括体外培养时的种子细胞和移植体内后的宿主细胞)的生长、迁移、分化,以及新组织的细胞外基质的分泌提供支持,并且参与决定新生组织的基本结构,因此血管支架材料在血管组织工程构建中起到非常重要的作用。目前直径6 mm以上的大口径血管已有大量临床应用而对6 mm以下的小口径血管却仍有许多基础问题亟待解决。天然血管组织经过处理脱除细胞后,保留了其天然的物理支架结构及力学性能,非常符合体内血管的生物学结构需求,并且富含细胞粘附序列及生长因子,生物相容性较好。但从开始制备血管支架脱细胞基质到最后消毒、储存阶段的每一个处理步骤均会对脱细胞基质的微结构、组成成分、力学特性等产生影响,进而影响其生物相容性和移植后宿主可能诱发的免疫反应。因此,本课题选取了兔颈动脉((?)=2 mm)作为小口径血管支架的来源,通过比对羊的血管支架制备过程((?)=3-4 mm),对制备流程进行了细致的优化,包括物理、化学、生物等多种条件的细节处理。并通过表观评价、组织学评价、血管力学评价、组化评价等多方面条件比较,最终确定出一个最优方案,可以使脱细胞后的血管支架具有较低的生物毒性和较高的免疫相容性。并且,通过探索性实验,本文发现利用该脱细胞血管的制备流程获得的血管支架可进行原位移植,初步构建了兔颈动脉-大鼠腹主动脉的异种原位移植模型。从理论和实践上,验证了不种植细胞的血管支架异种原位移植的可行性;兔颈动脉与大鼠腹主动脉直径相仿,吻合度极高,可将其作为小口径天然细胞外基质(Extracellular matric,ECM)构建的组织工程血管的实验室常规模型;手术移植成功率或与大鼠重量和进食量具有相关性,有望通过进一步研究证实。(本文来源于《厦门大学》期刊2017-04-01）
何孟,赵亮,徐艳丽,李敏[7]（2014）在《酶法制备天然脱细胞血管支架》一文中研究指出从不同类型的脱细胞方法中选取了4种有代表性的方法,分别是去垢剂处理法、酶法、去垢剂和酶共同处理法以及快速冻融法.之后分别对制备所得各组支架从HE染色、DAPI染色、DNA残留率和力学性能分析四个方面进行分析.力学性能及DNA残留率均采用平均值±标准差的方式表示,并进行t检验,取P<0.05.结果显示酶法制备脱细胞天然血管支架的方法对细胞的去除效果最显着,同时,产生了有规则的细胞质基质的孔隙以供新的细胞生长迁移,虽然力学性能有一定下降,但是通过进一步的处理,可以形成一种良好的组织工程血管支架.(本文来源于《福建师范大学学报(自然科学版)》期刊2014年06期）
曹程程[8]（2013）在《人脐血内皮祖细胞的分离、培养和鉴定及改良冻融法脱细胞血管支架的建立》一文中研究指出血管疾病是目前全球发病率最高的疾病之一，可由动脉粥样硬化、创伤、血管瘤以及各种先天性异常等因素引起，而主要治疗方法与手段是血管移植术。据统计，在美国每年欲进行移植血管行动脉旁路术就高达10万例以上。因此，如何进一步扩大血管移植物的有效来源已经成为人们高度关注的重要课题。目前，血管移植物的临床来源，主要是异体或自体血管以及人工材料，虽然这些材料可以为诸多的病患进行修复血管提供有利的条件，甚至可以更好地延长病患的生命，但是远期效果却未达到预期的理想程度。由于异体或是自体血管的移植分别存有组织相容性比较差，而自体动脉来源也有一定的限制等问题。而人工材料的应用也存在着一定的问题，小口径(内径小于6mm)的血管移植过程之中血管存在着不同程度的高张力、低血流的特殊状态，在病患进行移植之后，其失败率也较高。与此同时，这些人工血管不具备生长以及自我修复功能。近年来，随着科学技术的迅速发展与进行，组织工程学以分子生物学、生物工程学以及细胞生物学、临床医学为基础，通过生命科学与工程学的基本原理和方法，通过科学、有效的设计、构造、培育以及保养活组织等手段，用以修复或重建病患的相关组织器官的结构，并成为了维持或改善病患组织器官功能的边缘科学。而通过利用该项科学技术，有效地将血管种子细胞与相应的支架材料加以有机结合，则有希望构建出更为理想、有效的组织工程化血管，不但具有较好的与受体组织相容性、还可以维持管腔的长期通畅率，同时还具有良好的自我修复能力以及耐久性、可塑性等优势特性。组织工程血管，通常是利用细胞外基质作为血管支架，充分、有效地运用组织工程技术，将人工培养的血管内皮细胞种植于血管支架上，再通过相关的技术手段，使之黏附、分化以及正常生长，同时分泌出ECM，从而构建出组织相容性较为良好、无免疫原性、更具较好的持久性与可塑性，且不易钙化、感染、避免血栓形成的、具有生命力的血管替代物。Herring[1]等最早地进行了相关人工血管接种血管内皮细胞报道，经过不断的研究也获得了初步成功。然而，由于构建组织工程血管需极大数量的种子细胞，就目前来讲，胚胎干细胞、脂肪干细胞髓干细胞等来源的干细胞均存有不同程度的制约因素，这也促使加强细胞自身的增殖能力，并在较短的时间之内获得更多的种子细胞的问题，也成为了诸多学者所关注的研究课题。尽管，组织工程种子细胞目前主要来自血管壁细胞、内皮祖细胞、骨髓间充质干细胞以及胚胎干细胞，而内皮祖细胞却具有更多的优点，从而被诸多学者认为内皮祖细胞是构建组织工程血管过程中的最佳种子细胞来源。而支架材料的研究是组织工程血管的另一重要组成部分。组织工程血管要求支架必须具有良好的生物相容性、生物降解性，可以保持完整的叁维立体结构，具有一定的机械强度和血管弹性。并且在植入体内后，不与机体发生免疫排斥反应。本文就种子细胞的来源及自体血管支架的建立进行相关研究。旨在进一步探讨和简化内皮祖细胞的来源，为种子细胞的大量获取提供更多方法。而自体脱细胞血管支架的建立，为血管支架的来源提供了又一新的可能性，为血管组织工程应用于临床提供了新的思路和方法。第一部分人脐血内皮祖细胞的分离、培养和鉴定研究目的：从婴儿新鲜脐带血中进行内皮祖细胞的分离，并对其进行科学的培养与鉴定。本文采用6%羟乙基淀粉沉降法和percoll非连续性密度梯度离心法，在新鲜人脐血中进行内皮祖细胞（EPCs）分离，并将分离出的细胞纯化，在体外进行进一步的培养和增殖。采用相关抗原免疫染色对所培养的人脐血内皮祖细胞进行鉴定。以进一步探寻简化的实验步骤，如何获得足量内皮祖细胞的最佳实验方法，并为实验课题提供充足、健康的内皮祖细胞来源，为下一步实验准备充足的细胞来源。同时，深入探讨人脐血中分离并大量培养内皮祖细胞的可行性以及临床应用价值。研究方法：收集蚌埠医学院第一附属医院妇产科足月剖腹产手术胎儿脐带血，无菌条件下放置于含有50U/ml肝素的血清瓶中，放置于4°C冰盒中保存，运送至细胞培养室，采用密度梯度离心法来获取脐带血单个核细胞，将获取的单个核细胞分成两份，加入胎牛血清M199培养基（FCS-M199）及自体血清M199培养基（AS-M199），并分别将其接种于铺设有人纤维连接蛋白（HFN）和未铺设有人纤维连接蛋白的培养皿中（标记为：F(0)、F(1)、A(0)、A(1)）进一步进行体外诱导、分化以及扩增。并观察贴壁细胞在整个诱导分化过程中的形态学变化，结合免疫组化、免疫荧光以及流式细胞仪等相关技术从不同角度对其进行鉴定。研究结果：（1）培养1~2d后，脐血单个核细胞开始出现贴壁。而在3d之后纺锤形状开始出现，此后贴壁细胞数量逐渐增多，且逐渐变成梭形。当培养至一周时，则形成周围为梭形细胞，而在中央是圆形细胞的典型集落。而在细胞培养至14d时，则出现了互相连接的细胞簇逐渐连接并形成网样结构。与此同时，随着培养时间的不断增加，长梭形细胞也开始逐渐缩短，并呈典型铺路石样改变。（2）贴壁细胞培养至一周之后继续观察，在铺设有人纤维连接蛋白的培养基之内的细胞数量明显较没有铺设人纤维连接蛋白的多，而在两种不同培养基的细胞数量上无明显变化。（3）免疫组化：单个核细胞培养至14d之后，贴壁细胞CD31通过FCS-M199培养后其阳性表达率为（88.95±7.23）%；vWF的阳性表达率为（75.01±9.42）%。AS-M199培养的细胞其CD31阳性表达率为(86.79±7.53)%，vWF的阳性表达率为(74.31±7.14)%。（4）免疫荧光染色：细胞培养至第7d，细胞吞噬DiI-acLDL（+），发出红色荧光；结合FITC-UEA-Ⅰ（+），发出绿色荧光；双染（+）则呈黄色荧光。FCS-M199贴壁细胞双染阳性率（86.56±6.81）%，AS-M199的贴壁细胞双染阳性率（84.47±7.25）%。（5）流式细胞仪分析提示：第7天时所测定的贴壁细胞表面标志CD133、CD34以及血管内皮细胞生长因子受体-2(VEGFR-2)分别为：（29.35±6.43）%、（52.79±8.01）%、（80.67±6.82）%；而在20天时的分析显示CD133阳性率为(1.52±0.32)%，CD34以及血管内皮细胞生长因子受体-2(VEGFR-2)表达率则分别为（61.48±7.65）%、（91.28±7.98）%。研究结论：（1）通过密度梯度离心法从脐带血分离单个核细胞，再用VEGF、bFGF等因子诱导培养，以VEGFR-2、CD133及CD34为标志物进行检测，可获得较为纯化的血管内皮祖细胞。（2）加入人纤维连接蛋白之后可以有效促进内皮祖细胞贴壁，其细胞贴壁数量明显多于未加入人纤维连接蛋白组。（3）自体血清M199培养基（AS-M199）可替代胎牛血清M199培养基（FCS-M199）培养EPCs，并取得较佳效果。（4）CD133在第7天时高度表达，在第20天时基本不表达，我们认为此时血管内皮祖细胞向成熟的血管内皮细胞转变。因此，CD133可作为内皮细胞与内皮祖细胞相鉴别的重要标志。第二部分改良冻融法脱细胞血管支架的制备研究目的：改良传统的冻融制备脱细胞血管支架的技术，并用组织学染色和电镜观察等方法分别对两种不同方法制备的血管支架进行比较。以进一步寻找更安全有效的脱细胞的方法，找到一种操作简便、灭菌效果确实、费用低廉、残留低的脱细胞血管支架制备方法。简化实验步骤，并为血管组织工程实验提供充足、健康的血管支架来源。研究方法：收集蚌埠医学院第一附属医院妇产科足月剖腹产手术胎儿脐带，无菌条件下放置于含有PBS液的血清瓶中，放置于4°C冰盒中保存，运送至细胞培养室，剔除脐静脉表面的结缔组织及血管外膜，PBS液清洗后，按下列3种方法制备材料：(1)传统方法：放置15ml塑料冻存管内，置4℃冰箱中预冷1小时，-80℃冰箱冷冻2h，37℃水浴复温30min，上述冻融过程反复进行3次。(2)改良方法：放置15ml塑料冻存管内，置4℃冰箱中预冷1小时，快速浸入-196°C液氮中20min，取出标本放入含50ml无菌蒸馏水100ml的无菌瓶内，置于37℃的气浴恒温振荡箱内，反复振荡，融化30min；同法进行3次，备检测。(3)未处理：直接备检测。研究结果:（1）大体形态观察：未处理组呈乳白色，管壁淡黄色，弹性良好无塌陷，管腔内表面光滑。传统反复冻融法组材料颜色浅白，管壁稍有塌陷，管腔内表面光滑。改良反复冻融法组材料颜色浅白，管壁无明显塌陷，管腔内表面光滑。叁者在大体形态上无明显外观上区别。（2）HE染色：HE染色、观察，未脱细胞血管壁全层细胞丰富，管腔内面内皮细胞呈单层排列，中层平滑肌细胞胞体细长呈极性排列。传统反复冻融法处理后的血管材料内皮细胞及中膜平滑肌细胞明显变形，破碎；可见细胞核变形、浓染、碎裂等现象。改良反复冻融法处理后的血管材料管壁全层和管腔面无明显细胞残留。（3）Masson叁色染色法：未处理组细胞丰富，胶原纤维结构保持完整。传统反复冻融组细胞仍有部分残留。改良反复冻融组细胞成分大部分被脱去，蓝染的胶原纤维结构保持完整。（4）电镜扫描结果：未处理组内膜完整，光滑，内皮细胞覆盖完整。传统反复冻融处理组内皮细胞断裂，连续性中断；内膜下胶原结构保持完好。改良反复冻融法血管表面无内皮细胞覆盖，支架表面粗大的胶原纤维束结构保存完好，材料结构致密。研究结论：采用改良反复冻融脱细胞方法可以在较短的时间内完全除去支架内细胞成份，且对材料的胶原结构无明显影响。相对于传统的反复冻融处理，改良反复冻融脱细胞血管支架为今后脱细胞血管支架的快速高效制备提供一种新的思路和方法。但关于其抗血流冲击力及远期通畅率等情况还需做进一步的检测。(本文来源于《蚌埠医学院》期刊2013-05-01）
刘玉,张玉海,师恩祎,宋来春,谷天祥[9]（2012）在《罗格列酮对CD34修饰脱细胞血管支架体内生长的影响》一文中研究指出背景:早期研制的脱细胞血管基质支架上预载CD34+抗体会促进其再内皮化,但同时会加重支架内血管内膜增生。国内外研究证实过氧化物酶增殖体受体γ激动剂罗格列酮在体外可抑制平滑肌细胞增生及迁移,可减少血管损伤处内膜增生。目的:进一步验证过氧化物酶增殖体受体γ激动剂罗格列酮对CD34抗体修饰脱细胞血管支架体内移植后平滑肌细胞生长及内膜增生的影响。方法:获取新鲜兔颈动脉,应用光化学偶联法将CD34抗体固定到去细胞光氧化的血管支架上,构建抗体修饰的组织工程血管。将制备的血管分别移植于实验兔的颈动脉上,其中对照组予以移植单纯光氧化处理的脱细胞血管,CD34组予以CD34抗体预载的血管,罗格列酮组移植CD34抗体预载的血管并予喂养罗格列酮。结果与结论:移植后10d:对照组移植血管内皮样细胞数量稀少,CD34组和罗格列酮组可见较多的内皮样细胞覆盖;CD34组血管内膜较罗格列酮组厚,α-SMA染色显示CD34组血管平滑肌细胞数量较后者为多,其差异有显着性意义。移植后30d:CD34组和罗格列酮组血管内皮样细胞基本覆盖管腔全层,对照组内皮样细胞数量仍较少;另外,CD34组血管内膜及管壁中可见大量的平滑肌样细胞及细胞外基质沉积,而罗格列酮组血管结构中平滑肌样细胞数量相对较少,内膜增生亦较轻。提示CD34修饰脱细胞血管支架可促进其内皮细胞的增生,罗格列酮可抑制血管支架中平滑肌细胞的增殖,减少内膜增生。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2012年03期）
李春[10]（2010）在《脱细胞组织基质材料构建组织工程血管支架的特点与效应》一文中研究指出目的:评价组织工程血管支架材料的特性和发展前景。方法:以"组织工程,组织工程血管,支架材料"为关键词,采用计算机检索1993-01/2009-10相关文章。纳入与有关生物材料与组织工程血管相关的文章;排除重复研究或Meta分析类文章。以26篇文献为主重点讨论了组织工程血管材料的种类及其性能。结果:血管脱细胞基质可作为一种较理想的支架材料应用于血管组织工程。纤维蛋白制成的支架,不但具有理想的生物相容性、生物降解性和较高的亲和性,而且能促进血管生成、组织修复。明胶无抗原性,生物相容性好,可完全生物降解,可以实现支架自身的"血管化",但机械性强度低。天然生物材料和合成高分子材料都存在一定不足,将两者按照一定的方法组合构建成一种复合基质,发挥两者各自的优势构建出性能良好的组织工程化血管。纳米修饰技术有望被应用于下一代组织工程化血管移植。结论:近年来组织工程血管发展迅速,但到目前为止,还没有发现一种很理想的血管支架材料。天然生物材料成为目前研究的热点,但是物理机械性能并不能很好地符合血管支架要求,这就迫切希望新材料的出现,来更好的满足组织化血管支架的要求,达到修复和重建的目的。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2010年47期）
脱细胞血管支架论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:脱细胞血管支架具有优良性能,但是在其制备过程中其生物力学性能出现不同程度的降低。目的:观察在组织工程制备脱细胞血管支架中丹参酚酸B的应用前景。方法:经Triton-x100单独处理,Triton-x100-丹参酚酸B联合处理制备脱细胞血管支架,分别设为Tx组和Tx-sal组,对其进行形态学观察、组织厚度测量、孔隙率检测及生物力学特性检测,比较在应用丹参酚酸B后处理之后脱细胞血管支架在形态学等各种指标上的变化。结果与结论:Tx组和Tx-sal组的血管管壁厚度及血管孔隙率差异无显着性意义(P> 0.05),形态学无明显变化。Tx-sal组的脱细胞血管支架可以较完好地保留血管壁的胶原纤维和弹性纤维,抗拉强度、最大变形量、断裂伸长比、爆裂压力及缝合强度均优于Tx组(P <0.05)。结果证实,Triton-x100联合丹参酚酸B处理能够成功制备脱细胞效果良好、生物力学性能优良的脱细胞血管支架。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
脱细胞血管支架论文参考文献
[1].赵亮,李霞飞,李成成,闫欢欢,张其清.应用Triton-x100加丹参酚酸B制备脱细胞血管支架及其血液相容性研究[J].中国生物医学工程学报.2019
[2].赵亮,李霞飞,周坤,闫欢欢,张其清.Triton-x100与丹参酚酸B制备脱细胞血管支架及其生物力学性能[J].中国组织工程研究.2019
[3].亦桐.脂肪细胞的分泌功能影响脱细胞血管支架在动物体内钙化进程的研究[D].北京协和医学院.2018
[4].刘俊.聚电解质多层膜修饰与纳米APS膜外覆大鼠去细胞血管支架的研究[D].苏州大学.2017
[5].李晓玉.脱细胞血管支架的制备及构建组织工程胆管的研究[D].河南科技大学.2017
[6].徐双悦.小口径脱细胞血管支架制备方案的优化、评价及其异种原位移植的初步研究[D].厦门大学.2017
[7].何孟,赵亮,徐艳丽,李敏.酶法制备天然脱细胞血管支架[J].福建师范大学学报(自然科学版).2014
[8].曹程程.人脐血内皮祖细胞的分离、培养和鉴定及改良冻融法脱细胞血管支架的建立[D].蚌埠医学院.2013
[9].刘玉,张玉海,师恩祎,宋来春,谷天祥.罗格列酮对CD34修饰脱细胞血管支架体内生长的影响[J].中国组织工程研究.2012
[10].李春.脱细胞组织基质材料构建组织工程血管支架的特点与效应[J].中国组织工程研究与临床康复.2010
标签：丹参酚酸B; Triton-x100; 脱细胞血管支架; 血液相容性;