宁夏回族自治区食品检测研究院宁夏银川750001
摘要：目的：建立减肥类保健食品中总蒽醌的检测方法，并对测定过程中可能引入的不确定度进行分析评定。方法：式样经测量过程提取测定;建立不确定度评定的数学模型，确定不确定度来源，计算合成不确定度和扩展不确定度。结果：加标回收率范围为95%—105%，线性系数达0.999，在对10份样品进行加标回收，其总蒽醌的含量和扩展不确定度为（2038187.4）mg/100g,包含因子k=2,,相对扩展不确定度为4.6%。结论：该实验方法步骤简单，仪器稳定，灵敏度高，重复性好，满足国家痕量检测的要求;本方法适用于减肥类保健食品中总蒽醌方法的不确定度评定。
关键词：减肥类保健食品中总蒽醌；紫外分光法；不确定度
EvaluationofUncertaintyofDetectionMethodandMethodforTotalAquinoneinHealthFoodswithWeightLoss
DANGYiMiao
NingxiaFoodTestingResearchInstitute,NingxiaYinchuan750001,China
ABSTRACT：Objective:Amethodfordetectingtotalanthraquinoneindietfoodswasestablished,andtheuncertaintythatmightbeintroducedintheprocesswasanalyzedandevaluated.Method:Thepatternisdeterminedbythemeasurementprocess;Themathematicalmodelofuncertaintyevaluationisestablished,thesourceofuncertaintyisdetermined,andtheuncertaintyofsynthesisandexpansioniscalculated.Result:Thestandardrecoveryraterangesfrom95%to105%,withalinearcoefficientof0.999.Intheadditionof10samples,thetotalanthraquinonecontentandexpansionuncertaintyis(2038,187.4)mg/100g,includingthefactorK=2,,Therelativeexpansionuncertaintyis4.6%.Conclusion:Theexperimentalmethodhassimplesteps,stableinstrument,highsensitivityandgoodrepeatability,andmeetstherequirementsoftracedetectioninthecountry.Thismethodissuitablefortheuncertaintyassessmentoftotalanthraquinoneindietfoods.
Keywords：Totalanthraquinoneindiethealthfood;Ultravioletspectrophotometry;Degreeofuncertainty
引言
总蒽醌来源于掌叶大黄(大黄是我国的四大中药之一)的根茎，其颜色形状为棕黑色浸膏或棕色粉状结晶，是游离蒽醌、结合蒽醌、蒽酮、糖、鞣质等混合物，生物合性与大黄原药相同。能让人腹泻，还能促进胰液分泌，也能抑制胰酶活性，具有利胆泻下以及减肥等多种保健作用。被常用于减肥类保健食品中，正是这类物质起着至关重要的保健作用，是必检的主要成分，其含量测定方法有重量法、荧光法、极谱法、高效液相色谱法，超临界流体萃取法等，由于总蒽醌的测定还没有国家标准方法，参照药品检测方法，使用较简单的比色法来测定保健食品中总蒽醌的含量。同时对此方法进行不确定的评定。
1测试原理及测试过程
1.1测试原理
样品经提取分离后，利用羟基蒽醌衍生物与碱液生成红色进行比色。
1.2测试过程
样品测定精密称取样品内容物25mg，至于100mL圆底烧瓶中，加入混合酸溶液6mL混匀，在沸水浴中回流15分钟，放冷，加乙醚30mL提取，提取液通过脱脂棉滤入250mL分液漏斗中，继续用乙醚洗涤残渣两次，每次5mL，样品渣连同脱脂棉倒回圆底烧瓶加混合酸4mL，在沸水浴中回流15分钟，放冷，加入乙醚20mL提取，用乙醚洗涤残渣两次，每次5mL，合并乙醚液。用水30，20mL振摇洗涤两次，弃去水洗液。乙醚液用混合碱液50，20，20mL提取三次，合并碱提取液，置100mL容量瓶中，加混合碱液定容至刻度，混匀，取50mL置100mL锥形瓶中，称重（准确至0.01g），置沸水浴中回流30分钟，取出，迅速冷却至室温，称重，补加10%氨水溶液到原来的重量，混匀，此溶液为样品待测夜。标准曲线，吸取500μg/mL标准溶液0.10、0.20、0.30、0.40、0.60、1.00、1.50mL于50mL比色管中（相当于1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、10.0、15.0μg/mL浓度的标准管），加混合碱至刻度，混匀，于暗处放置30分钟。以混合碱溶液为空白，在525nm波长处，分别测定标准曲线与样品的吸光度。
图1-1总蒽醌含量的测试流程图
2建立数学模型
总蒽醌含量按下述公式计算：
式中：X—样品中总蒽醌（以1,8-二羟基蒽醌计）含量，单位为毫克每一百克（mg/100g）;
C—测定样品总蒽醌的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);
V—提取后样液定容体积，单位为毫升（mL）
m—样品质量，单位为（g）
上述公式是按原理给出的。在评定不确定度时，不能体现各种随机因素对测量结果的影响。在实际评定中，很难分别定量地研究每个影响因素引入的不确定度分量。为此，在测量模型中引入一个数值等于1的重复性系数。该系数的相对标准不确定度就等于在重复性条件下重复测量某个量X所得到一组观测值的相对标准不确定度。这样就合并评定了各种随机影响引入的不确定度分量。于是，评定不确定度的数学模型应写为如下形式：
3不确定度分量的主要来源及其分析
3.1影响总蒽醌含量的随机因素较多，主要来源于分光光度计与天平的变动性、样品均匀性、操作的差异、环境条件的变动等因素。
3.2称量、标准储备液的不确定度及稀释过程、定容体积校准、测定含量重复性(随机)变化及校准曲线引入的不确定度分量。
图1-2六价铬含量测定的不确定度来源因果图
4各分量标准不确定度的评定
4.1标准物质不确定度
4.1.1标准储备液的不确定度
4.1.1.1标准物质纯度引入的不确定度
1，8-二羟基蒽醌对照品，其不确定度为0.005，k=2，假设为均匀分布，则重铬酸钾的标准不确定度
4.1.1.2称量过程中电子天平引入的不确定度
用I级电子天平秤取25.0mg对照品，根据天平检定合格证书0～50g最大允差±0.5mg，属于均匀分布，所以
4.1.1.3标准储备液配置过程中量器校准引入的标准不确定度：
容量瓶体积的不确定度属于B类不确定度评定，所使用经过校正的50mLA级容量瓶，其允差为0.05，属于三角分布。本实验过程中，试验温度与鉴定证书的温度一致，因此唯独引起的容量瓶体积不确定度可忽略。
、、互相独立不相关，故配制标准工作液引入的相对不确定度为
4.1.2稀释过程引入的不确定度
稀释过程：1，8-二羟基蒽醌标准溶液浓度为500µg/mL；再用1mL分度吸量管吸取1，8-二羟基蒽醌标准溶液0.10mL，0.20mL，0.30mL，0.40mL，0.60mL；用2mL分度吸量管吸取1，8-二羟基蒽醌标准溶液1.00mL，1.50mL定容至50ml比色管中，则标准曲线浓度分别为1.0µg/mL、2.0µg/mL、3.0µg/mL、4.0µg/mL、6.0µg/mL、10.0µg/mL、15.0µg/mL。
配制标准溶液系列的过程中使用了一系列玻璃量具，按照《常用玻璃量具检定规程JJG196-2006》的要求，均有相应的最大允差，按照三角分布考虑，，由此估算相对不确定度分量，见表1-1。
表1-1标准系列配制过程中量具校准引起的不确定度
由上述数据合成的相对标准不确定度uCrel：
=0.0419
4.2最小二乘法拟合标准曲线校准得出的样品的质量浓度X时所产生的不确定度。
采用8个浓度水平的六价铬标准溶液，用分光光度计测定得到相应的吸光度y，用最小二乘法进行拟合，得到直线方程y=aX+b(a为斜率，b为截距)和其相关系数r，详见表1-2。
表1-2最小二乘法拟合峰高H结果
本例中对样品测定液进行了10次平行测定，由直线方程求测定液的平均浓度为
X0=5.10μg/mL,则X0的标准不确定度u(X)==0.046
式中s(y)==0.0061,标准溶液的残差的标准差；
==5.10,标准溶液的平均浓度；
S==150.9,标准溶液质量浓度残差的平方和；
n-----标准溶液的测量次数，本例为21；
p-----X的测量次数，本例为10次。
==0.00902
4.3样品制备过程引入的不确定度
4.3.1取样
本实验依照作业指导书《总蒽醌的测定方法》规定，将样品充分混匀后随机取样，可认为样品是均匀的、代表性充分，由此所致的不确定度忽略不计。
4.3.2称重
实验中的称样量为25.0mg，要求使用的天平的最小分度为1mg。JJG1036-2008《电子天平检定规程》规定，该准确级的天平在0.01g～50g称量范围的MPE为±0.5e(e=1)，样品质量是由两次称量(空瓶mtare和样品msamp)所得，天平线性MPE为矩形分布，两次称量天平的MPE导致的不确定度
==0.408
===0.0163
4.4重复性实验相对标准不确定度
在重复性条件下，对总蒽醌的含量进行了10次独立性测试，所得测量数据示于下表：
表1-3对总蒽醌的含量10次独立测试数据
在重复性条件下，重复10次测定六价铬含量，算数平均值为：
==2038
单次测量的标准偏差为：(Y)=S(Y)==19.62
算术平均值的不确定度===6.21
u()==
5不确定度分量列表
在不确定度评定时，已凭经验经将一些不确定度分量去除。现将各不确定度分量列于表1-4。
表1-4总蒽醌的含量不确定度分量表
6合成标准不确定度
(Y)=
=
=93.7mg/100g
7扩展不确定度
取包含因子k=2，
扩展不确定度：=k(Y)=293.7=187.4mg/100g
相对扩展不确定度：=(Y)/2038×100%=4.6%
8结果报告
用紫外分光光度计测定总蒽醌的含量，测定两份样品取其平均值()报告结果，其结果和扩展不确定度为2038±187.4mg/100g，包含因子k=2，相对扩展不确定度为4.6%。
参考文献
[1]王淑美，冯素香，脑脉通有效部分中总生物碱的含量测定[J]，广东药学院学报，2008，24（1）：1-3.
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[5]JJG196-2006,中华人民共和国国家计量检定规程（常用玻璃量具检定规程）[S].