导读:本文包含了重组副肌球蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:牡蛎,原肌球蛋白(Crag,1),重组,表达条件
重组副肌球蛋白论文文献综述
张江涛,李国明,方磊,刘艳,崔欣悦[1]（2019）在《牡蛎主要过敏原原肌球蛋白的重组表达及鉴定》一文中研究指出牡蛎的主要过敏原是Crag 1蛋白(属于一种原肌球蛋白),克隆牡蛎原肌球蛋白Crag 1基因,导入大肠杆菌(BL21)中,然后筛选重组菌株。通过SDS-PAGE探究了重组菌株中Crag 1蛋白的最佳诱导表达条件,15℃下诱导16h。然后通过Western印迹、SDS-PAGE、质谱(MALDI-TOF-MS)、圆二色(CD)光谱等方法从His-tag、相对分子量、肽段比对以及二级结构上综合鉴定了重组Crag 1蛋白的准确性。本实验成功重组表达并鉴定了牡蛎主要过敏原Crag 1蛋白,为接下来的牡蛎脱敏实验以及牡蛎过敏的临床诊断和治疗奠定了良好的生物学基础。(本文来源于《中国食品添加剂》期刊2019年01期）
梅雪娇,刘萌,杨阳,刘红,刘光明[2]（2017）在《拟穴青蟹原肌球蛋白T107A突变及重组表达》一文中研究指出原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)是甲壳类水产动物主要过敏原之一,其抗原表位与致敏作用密切相关,根据本课题组已淘选得到TM 101-111抗原表位中的关键氨基酸,采用基因定点突变技术,用丙氨酸(Ala)替代107位关键氨基酸苏氨酸(Thr),并表达该突变体蛋白,为后续研究单个关键氨基酸的改变对其致敏性的影响奠定基础。本试验首先采用点突变技术扩增拟穴青蟹TM突变基因,构建突变体pET28a-TM_(T107A),将突变体转入大肠杆菌表达宿主BL21(DE3)中,获得突变体重组表达菌株,利用IPTG对其进行诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白进行鉴定。结果成功得到基因全长为855 bp的rTM-T107A突变体,分子量大小约为38 ku的重组蛋白,经鉴定该重组蛋白确实是TM突变体蛋白。本试验构建了TTM_(T107A)突变体,利用大肠杆菌表达系统成功的表达了该突变体蛋白,后续试验可以通过抑制性Elisa等方法检测其IgE结合活性,探究其致敏性的变化。(本文来源于《2017中国食品科学技术学会第十四届年会暨第九届中美食品业高层论坛论文摘要集》期刊2017-11-08）
梅雪娇,杨阳,刘萌,刘红,刘光明[3]（2017）在《拟穴青蟹原肌球蛋白基因定点突变及重组表达》一文中研究指出原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)是甲壳类水产动物主要过敏原之一,其抗原表位与致敏作用密切相关,根据本课题组已淘选得到TM 101-111抗原表位中的关键氨基酸,采用基因定点突变技术,用丙氨酸(Ala)替代107位关键氨基酸苏氨酸(Thr),并表达该突变体蛋白,为后续研究单个关键氨基酸的改变对其致敏性的影响奠定基础。本实验采用基因重组技术对TM进行重组表达,设计带酶切位点的引物,PCR扩增TM全长基因,然后借助大肠杆菌表达载体pET28a将TM基因转入大肠杆菌表达宿主BL21(DE3)中,获得拟穴青蟹野生型TM的表达菌株。然后再以野生型TM的质粒为模板,设计突变引物,采用点突变技术扩增拟穴青蟹TM突变基因,构建突变体pET28a-TM T107A,将突变体转入大肠杆菌表达宿主BL21(DE3)中,获得突变体重组表达菌株,利用IPTG对其进行诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白进行鉴定。结果成功得到基因全长为855bp的rTM-T107A突变体,分子量大小约为38 kDa的重组蛋白,经鉴定该重组蛋白确实是TM突变体蛋白。本实验构建了rTMT107A突变体,利用大肠杆菌表达系统成功的表达了该突变体蛋白,后续实验可以通过抑制性Elisa等方法检测其IgE结合活性,探究其致敏性的变化。(本文来源于《华东地区生物化学与分子生物学学会联合会2017年学术交流会暨安徽省生物化学与分子生物学学会理事会议论文集》期刊2017-10-27）
罗夙医,黄薇,王晶,王玺赟,李劲涛[4]（2016）在《原肌球蛋白4通过慢病毒重组体技术应用于脊髓损伤后的作用及机制研究:随机对照实验方案》一文中研究指出背景:前期研究采用2-DE/MALDI-TOF/MS方法,发现原肌球蛋白4在脊髓表达增加,但迄今为止,有关原肌球蛋白4与脊髓损伤的发病机制和进展的关系仍知之甚少。方法/设计:(1)随机对照动物实验:建立脊髓全横断损伤大鼠模型,通过2-DE双向电泳、氨基酸系列分析、q-PCR和Western-Blot方法明确脊髓横断损伤3-28 d在损伤脊髓头侧原肌球蛋白4的表达变化。(2)基因水平的机制探索实验:用基于体外慢病毒重组体技术敲除原肌球蛋白4,研究其对体外培养的脊髓神经元树突生长长度的作用;并通过BBB评分法评估原肌球蛋白4敲除对脊髓横断损伤大鼠运动功能恢复的作用。讨论:实验结果拟为脊髓横断损伤后促进运动功能恢复的治疗提供一种基于慢病毒重组体为载体携带原肌球蛋白4干扰RNA的、新的、有效的分子治疗策略,并阐明其治疗作用机制,为临床脊髓全横断损伤的基因治疗开辟乐观的应用前景。伦理批准:研究经昆明医科大学医学伦理委员会批准,大鼠的外科操作和术后护理遵循中国实验动物保护和伦理委员会的规定,并与美国国立卫生与健康研究院的指南一致。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2016年37期）
蒋聪利,邬玉兰,幸鹏,杨平常,刘志刚[5]（2014）在《粉尘螨重组过敏原Der f 11(副肌球蛋白)克隆表达、纯化及免疫学鉴定》一文中研究指出目的:克隆粉尘螨过敏原Der f 11基因,表达、纯化该蛋白,并鉴定其免疫活性。方法:人工合成粉尘螨第11组过敏原Der f 11基因,将其连接至pET-32a表达载体,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,通过Ni+亲和层析纯化重组过敏原Der f 11。以粉尘螨过敏患者血清作为一抗,经Western blot方法分析Der f 11的免疫学特性。结果:获得高纯度的重组Der f 11蛋白,SDS-PAGE结果显示表达产物pET-32a(+)-Der f 11分子质量约为118 ku。重组过敏原Der f 11检测15份尘螨过敏性患者血清中特异性IgE,阳性率为20%。结论:获得的Der f 11重组蛋白具有与天然蛋白相似的免疫学活性,为标准化抗原的临床特异性诊断和治疗及进一步的实验研究奠定基础。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2014年06期）
李婵[6]（2013）在《梭子蟹过敏原分析及原肌球蛋白关键抗原表位重组表达》一文中研究指出目的：食物过敏是当今重大的卫生学问题,食物过敏原的鉴定、纯化并制备标准化的过敏原,是食物过敏性疾病诊断和治疗的中心环节。本研究的目的是分别从分析过敏原和分析待检IgE多态性两方面入手,力争解决当前血清特异性IgE检测所存在的问题。首先,以梭子蟹为研究对象,过敏患者血清中的特异性抗体IgE为“探针”,对梭子蟹中的主要过敏原组分进行分析；其次,以蟹过敏患者为研究对象,分析蟹过敏患者血清特异性IgE所针对过敏原的异质性。此外,选择甲壳类动物共同的过敏原-原肌球蛋白中的一段含有3个抗原表位的多肽,为重组表达对象,重组表达此段多肽,采用原核生物(大肠杆菌)作为表达系统,制备原肌球蛋白肽段的多肽片段,为今后进行不同过敏原关键表位的串联体表达提供实验基础。方法：1.梭子蟹过敏原组分的分析：通过去脂、抽提梭子蟹的总蛋白,SDS-PAGE分析蛋白组分,以蟹过敏患者血清中的特异性IgE作为“探针”,经western-blot技术,分析梭子蟹中的主要与特异性IgE结合的组分。2.蟹过敏患者特异性IgE所针对的过敏原异质性分析：选取50例蟹过敏患者血清,经western-blot技术分析不同的患者血清中的特异性IgE抗体多态性,即分析蟹过敏患者血清特异性IgE所针对的过敏原个体间存在的异质性。3.原肌球蛋白中TM32a的重组表达及免疫活性鉴定：选择原肌球蛋白中的一段含有3个抗原表位的多肽(简称为TM32a)。合成TM32a的DNA序列,选择pET42a为载体,EcoRI和Xhol双酶切构建质粒载体,克隆宿主菌Top10扩增重组质粒,利用最常见的原核表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE),以IPTG诱导蛋白表达,并利用载体上的所携带的His标签蛋白,用镍离子纯化柱纯化出单一组分的TM32a蛋白,免疫印迹法鉴定该目的蛋白的免疫活性。结果：1.梭子蟹过敏原组分的分析：梭子蟹的总蛋白粗提液中共观察到9条主要蛋白条带。在以阳性混合血清为探针的印迹中,94kD、74kD、70kD、48kD、43kD、40kD和36kD处均出现了阳性反应条带,但蛋白浓度较高的74kD和70kD的蛋白与混合血清反应并不是最强的,相反,蛋白含量中等的94kD的蛋白与混合血清反应最强。2.蟹过敏患者血清特异性IgE所针对的过敏原的异质性分析：以单例蟹患者血清为研究对象的western-blot实验中,发现不同的患者血清中的特异性IgE存在明显的异质性,即不同人的反应蛋白数量和种类都有所不同,其中：①1种蛋白为主要过敏原；②两种以上蛋白均为主要过敏原；③没有强反应的主要过敏原,而仅有几种较轻反应的过敏原。统计发现,其中以36kD的蛋白反应率最高,可达80%。3.原肌球蛋白中TM32a的重组表达及免疫活性鉴定：合成的原肌球蛋白中的TM32a的DNA序列大小为96bp左右,与pET-42a连接构建质粒载体,大小为6030bp左右,将构建好的质粒转化大肠杆菌BL21(DE),IPTG诱导表达后,获得大小为34kD左右的重组蛋白TM32a,将重组蛋白经镍离子柱纯化柱纯化后,获得单一组分的34kD大小的TM32a,并经免疫印迹法证明其具有免疫活性。结论：1.梭子蟹中有7个主要过敏原组分,其中94kD的过敏原与混合患者血清的反应强度最强。2.蟹过敏患者血清中的特异性IgE抗体所针对的过敏原存在明显的异质性,共确定了3种不同的患者血清中特异性IgE所针对的过敏原类型,分析9种主要过敏原的反应率,其中反应率最高的过敏原蛋白是36kD的蛋白。3.重组表达的原肌球蛋白中的TM32a蛋白,该目的蛋白的分子量大小为34kD左右,免疫印迹法鉴定该重组蛋白具有免疫活性。(本文来源于《天津医科大学》期刊2013-05-01）
张佳,周杰,盛晟,邵康,吴小雪[7]（2011）在《重组脂联素(rAdp)对皖南花猪骨骼肌卫星细胞脂联素及受体和肌球蛋白重链基因表达的影响》一文中研究指出脂联素(Adp)是主要由脂肪组织分泌的细胞因子,其作用受到普遍关注。选择10d皖南花猪半腱肌分离骨骼肌卫星细胞,用不同浓度(0、1、5和10μg∕mL)的重组脂联素(rAdp)分别处理12和24h,采用荧光定量PCR检测骨骼肌细胞中脂联素(Adp)、脂联素受体1(AdpR1)、脂联素受体2(AdpR2)和肌球蛋白重链(MyHC),4种亚型MyHC1、MyHC2a、MyHC2b、MyHC2x,以及AMP激活蛋白激酶(AMPK)、过氧化物增殖剂活化受体α(PPARa)的基因表达。结果显示:(1)1μg/mLrAdp处理后,Adp和AdpR1基因表达量极显着增加,AdpR2的表达量在处理24h极显着增加。而5和10μg/ml组Adp、AdpR1和AdpR2的表达量低于对照组;(2)1μg/mLrAdp处理显着上调MyHC1和MyHC2x的基因表达量,而MyHC2b的表达量则在处理24h极显着下降。5和10μg/mLrAdp处理显着下调MyHC2b的基因表达量,而对MyHC1无显着影响。10μg/mL处理后MyHC2a的表达量极显着下降,5μg/mL处理后MyHC2x的表达量极显着增加;(3)1、5和10μg/mLrAdp处理12h后,AMPK基因表达量极显着高于对照组,但是低剂量组具有较高的基因表达量。1μg/mLrAdp处理12和24h,PPARa基因表达量极显着高于对照组,然而高剂量组没有这种效应。结果提示,Adp作用于骨骼肌,可能是与受体结合后通过AMPK和PPARa两个信号途径,提高MyHC1、MyH2x和降低MyH2b基因表达量,改变肌纤维组成。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2011年02期）
崔颖,谢策,魏晓晴,赵莹,吕广艳[8]（2009）在《重组平滑肌肌球蛋白轻链激酶及ATP结合位点突变体的构建及表达》一文中研究指出目的构建重组全长平滑肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)ATP结合位点突变体,以研究平滑肌MLCK的结构与功能。方法利用试剂盒对MLCKATP结合位点进行定点突变,构建全长平滑肌MLCKATP结合位点突变体重组表达载体pCold/BsMLCK/△ATP,在大肠杆菌中表达;利用SDS-PAGE鉴定表达的重组全长平滑肌MLCKATP结合位点突变体在细胞中的分布;运用亲和层析及凝胶过滤分离纯化重组全长MLCK并利用SDS-PAGE鉴定表达MLCK的纯度。结果重组全长MLCK/△ATP(突变型)在大肠杆菌中以可溶的形式大量表达;在样品的上清和沉淀中均有重组全长MLCK/△ATP表达;经CaM-Sepharose4B和Superose6HR纯化,SDS-PAGE鉴定得到单一的表达条带。结论重组全长MLCK/△ATP(突变型)可以在大肠杆菌中以可溶形式大量表达;SDS-PAGE结果显示重组全长MLCK/△ATP可以通过亲和层析和凝胶过滤纯化得到单一的条带。(本文来源于《医学信息》期刊2009年11期）
古小彬,杨光友,严慧娟,王帅[9]（2009）在《兔疥螨副肌球蛋白核酸疫苗、重组副肌球蛋白及兔疥螨全虫蛋白的小鼠免疫研究》一文中研究指出将120只BALB/c小鼠随机分成DNA疫苗免疫组(Pmy组、Pmy+IL-2组、Pmy+IL-4组、Pmy+IFN组)、全虫蛋白疫苗免疫组[兔疥螨全虫蛋白组(ScTP组)和重组副肌球蛋白组(PmyP组)]、对照组(PBS组、pVAX1组)(共8组)。PBS组:肌肉注射PBS液100μL;pVAX1组:肌肉注射100μgpVAX1质粒;Pmy组:肌肉注射100μgpVAX1-Pmy质粒(兔疥螨副肌球蛋白DNA疫苗);Pmy+IL-2组:肌肉注射质粒(本文来源于《中国动物学会寄生虫学专业委员会第十二次全国学术会议暨第叁次国际寄生虫学学术研讨会论文摘要集》期刊2009-10-23）
杜欣军,张伟伟,孙伟英,王硕[10]（2009）在《凡纳滨对虾原肌球蛋白基因表达模式与重组表达》一文中研究指出根据相近物种的同类基因设计引物,从凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei肌肉组织中克隆获得原肌球蛋白基因(TPMS),长度为901bp,其中包含长度为852bp的完整开放阅读框,编码原肌球蛋白分子量为32.8kDa;RT-PCR结果显示,原肌球蛋白在心、肝胰腺、胃、鳃、肠和肌肉组织中均有表达,在肌肉中表达量最高,在鳃中表达量最低;将原肌球蛋白基因构建原核重组表达载体TPMS-pET30a,转化受体菌株BL21(DE3)并利用IPTG诱导后能够大量表达,蛋白分子量为38.2kDa;经优化,IPTG的最适诱导浓度为0.05mmol/L,最适诱导时间为4h;经过亲和纯化后,能够得到纯度90%以上的重组表达蛋白。(本文来源于《渔业科学进展》期刊2009年04期）
重组副肌球蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)是甲壳类水产动物主要过敏原之一,其抗原表位与致敏作用密切相关,根据本课题组已淘选得到TM 101-111抗原表位中的关键氨基酸,采用基因定点突变技术,用丙氨酸(Ala)替代107位关键氨基酸苏氨酸(Thr),并表达该突变体蛋白,为后续研究单个关键氨基酸的改变对其致敏性的影响奠定基础。本试验首先采用点突变技术扩增拟穴青蟹TM突变基因,构建突变体pET28a-TM_(T107A),将突变体转入大肠杆菌表达宿主BL21(DE3)中,获得突变体重组表达菌株,利用IPTG对其进行诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白进行鉴定。结果成功得到基因全长为855 bp的rTM-T107A突变体,分子量大小约为38 ku的重组蛋白,经鉴定该重组蛋白确实是TM突变体蛋白。本试验构建了TTM_(T107A)突变体,利用大肠杆菌表达系统成功的表达了该突变体蛋白,后续试验可以通过抑制性Elisa等方法检测其IgE结合活性,探究其致敏性的变化。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组副肌球蛋白论文参考文献
[1].张江涛,李国明,方磊,刘艳,崔欣悦.牡蛎主要过敏原原肌球蛋白的重组表达及鉴定[J].中国食品添加剂.2019
[2].梅雪娇,刘萌,杨阳,刘红,刘光明.拟穴青蟹原肌球蛋白T107A突变及重组表达[C].2017中国食品科学技术学会第十四届年会暨第九届中美食品业高层论坛论文摘要集.2017
[3].梅雪娇,杨阳,刘萌,刘红,刘光明.拟穴青蟹原肌球蛋白基因定点突变及重组表达[C].华东地区生物化学与分子生物学学会联合会2017年学术交流会暨安徽省生物化学与分子生物学学会理事会议论文集.2017
[4].罗夙医,黄薇,王晶,王玺赟,李劲涛.原肌球蛋白4通过慢病毒重组体技术应用于脊髓损伤后的作用及机制研究:随机对照实验方案[J].中国组织工程研究.2016
[5].蒋聪利,邬玉兰,幸鹏,杨平常,刘志刚.粉尘螨重组过敏原Derf11(副肌球蛋白)克隆表达、纯化及免疫学鉴定[J].中国免疫学杂志.2014
[6].李婵.梭子蟹过敏原分析及原肌球蛋白关键抗原表位重组表达[D].天津医科大学.2013
[7].张佳,周杰,盛晟,邵康,吴小雪.重组脂联素(rAdp)对皖南花猪骨骼肌卫星细胞脂联素及受体和肌球蛋白重链基因表达的影响[J].农业生物技术学报.2011
[8].崔颖,谢策,魏晓晴,赵莹,吕广艳.重组平滑肌肌球蛋白轻链激酶及ATP结合位点突变体的构建及表达[J].医学信息.2009
[9].古小彬,杨光友,严慧娟,王帅.兔疥螨副肌球蛋白核酸疫苗、重组副肌球蛋白及兔疥螨全虫蛋白的小鼠免疫研究[C].中国动物学会寄生虫学专业委员会第十二次全国学术会议暨第叁次国际寄生虫学学术研讨会论文摘要集.2009
[10].杜欣军,张伟伟,孙伟英,王硕.凡纳滨对虾原肌球蛋白基因表达模式与重组表达[J].渔业科学进展.2009
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