microRNAs在前列腺癌组织中的表达

microRNAs在前列腺癌组织中的表达

阳宁

衡阳市南华大学附属第二医院湖南衡阳421001

【摘要】目的:分析microRNAs在前列腺癌组织中的表达。方法:选取我院2014年1月~2015年1月良性前列腺增生手术切除石蜡标本50例、前列腺癌切除石蜡标本50例,检测其中miR-98、let-7d、let-7g的表达情况,探讨用于前列腺癌早期诊断和分类分级的可能性。结果:与良性前列腺增生相比,miR-98、let-7d、let-7g在前列腺癌组织中的表达例数明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。let-7d、let-7g在前列腺癌组织中的表达例数与患者年龄、AJCC/UICC分期、PSA水平无关,差异不具有统计学意义(P>0.05),与患者病理组织分型有关,差异具有统计学意义(P<0.05)。此外,miR-98在前列腺癌组织中的表达例数与患者病理组织分型、AJCC/UICC分期有关,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-98、let-7d、let-7g的表达情况可在一定程度上反映前列腺癌的进展,可能可以作为一项重要指标,用于前列腺癌早期诊断和预后评估。

【关键词】前列腺癌;microRNA;miR-98;let-7d;let-7g

Abstract:Objective:toanalyzetheexpressionofmicroRNAsinprostatecancer.Methods:50casesofbenignprostatichyperplasiaand50casesofprostatecancerwereselectedfromJanuary2014toJanuary2015inourhospital.Theexpressionoflet-7d,let-7gandmiR-98weredetected,andthepossibilityofearlydiagnosisandclassificationofprostatecancerwasdiscussed.Results:theexpressionoflet-7d,miR-182andmiR-96inprostatecancertissueswassignificantlydecreased,andthedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05).Theexpressionoflet-7dandlet-7ginprostatecancertissueshadnostatisticalsignificance(P>0.05),andthedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05).Inaddition,theexpressionofmiR-98inprostatecancertissueswasrelatedtothepathologicaltype,AJCC/UICCstaging,andthedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05).Conclusion:theexpressionoflet-7d,let-7gandmiR-98canreflecttheprogressofprostatecancertoacertainextent,andmaybeusedasanimportantindexforearlydiagnosisandprognosisofprostatecancer.

Keywords:prostatecancer;microRNA;miR-98;let-7d;let-7g

前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤,近年来,其发病率逐渐增高。前列腺癌的发生、发展受多因素多过程的影响[1]。miRNA是一类小分子单链RNA,约18~24个核苷酸,研究显示许多肿瘤发生发展过程中都存在miRNA表达水平的改变[2,3]。本研究采用PCR技术检测BPH和前列腺癌组织中miR-98、let-7d、let-7g的表达情况,并进一步分析前列腺癌组织中6种miRNAs表达的相关性,以期为前列腺癌的早期诊断提供新的参考指标.

1资料与方法

1.1一般资料选取我院2014年1月~2015年1月良性前列腺增生手术切除石蜡标本50例、前列腺癌切除石蜡标本50例。所有标本经l0%的福尔马林固定,石蜡包埋,4μm厚度切片,HE染色。其中,前列腺癌标本组织学类型均为腺癌,石蜡标本均在化疗前采集制作。前列腺癌切除患者年龄52~79岁,平均73.34±4.52岁;体重48~72㎏,平均61.35±6.70㎏。良性前列腺增生手术标本患者年龄53~80岁,平均74.02±5.11岁。体重50~74㎏,平均63.77±6.91㎏。两组一般资料均无无统计学差异(P>0.05),具有可比性。

1.2方法(1)DNA提取:采用大连宝生物工程有限公司生产的石蜡切片DNA提取试剂盒,按照说明书规范操作。操作步骤为:将1~3枚4μm厚度的石蜡包埋组织放入1.5mlMicrotube中,加入颠倒混匀的DEXPAT试剂0.5ml。盖上Microtube盖,100℃加热处理10分钟后,以12,000rpm的离心速度,4℃的离心温度离心10分钟。用移液枪吸取水层,采用紫外分光光度计检测提取与纯化得到的DNA片段的浓度与纯度,检测标准为:RNA在OD260处有显著吸收峰,OD260/OD280比值在1.9-2.1范围内。(2)PCR反应:PCR反应:采用针对miR-98、let-7d、let-7g基因序列的引物,由美国Anderson有限公司合成,见表1。

反应体系包括PCR缓冲液2μl,10.0mmol/LdNTP0.8μl,基因上下游引物各0.4μl,模板DNA1μl,Taq酶0.15μl,加水至总体积20μl。循环条件:先95℃预变性10min,然后以95℃变性15sec,60℃退火延伸60sec的循环条件作40个循环,最后40℃延伸10min。③基因多态性测定:采用适当的限制性内切酶消化PCR产物后进行电泳分析,电泳条件为琼脂糖浓度1%,电压200V,30min,通过观察条带的反应情况确定相关基因多态性。

1.3统计学分析所有数据均采用SPSS19.0统计软件对本研究相关数据进行统计学分析,计数资料用卡方检验,采用Fisher确切概率法,以P<0.05作为差异具有统计学意义的标准。

2.2miRNAs的表达与临床各项参数的关系:见表3。由表中数据可见,let-7d、let-7g在前列腺癌组织中的表达例数与患者年龄、AJCC/UICC分期、PSA水平无关,差异不具有统计学意义(P>0.05),与患者病理组织分型有关,差异具有统计学意义(P<0.05)。此外,miR-98在前列腺癌组织中的表达例数与患者病理组织分型、AJCC/UICC分期有关,差异具有统计学意义(P<0.05)。

3讨论

前列腺癌特异抗原(PSA)作为前列腺癌的早期检测和预后评估的指标广泛应用于临床,但实际操作中发现,其敏感性和特异性并不理想[4]。寻找一种高敏感性、高特异性的评价指标一直是前列腺癌研究的热点。miRNA是一类小分子RNA,通过参与调控基因表达,在细胞生长、分化、凋亡甚至癌变中发挥了重要作用[5-7]。目前已知一半以上的人类miRNA基因位于肿瘤相关基因区域,有研究证明miRNA的表达情况可在一定程度上反映肿瘤进展和分化的状态,并有研究利用miRNA成功培养出低分化肿瘤[8-10]。近年来,人们对存在与前列腺癌和良性前列腺增生组织中的miRNA进行监测,结果提示某些miRNA(如miR-98等)可能可以作为特异性标记物,应用于前列腺癌的鉴别诊断和分类分级[11]。miRNA的检测和功能分析不仅可以辅助前列腺癌的早期诊断,也可以辅助我们理解前列腺癌的发生发展过程。

本研究通过对50例前列腺癌和50例良性前列腺增生组织的石蜡标本进行miR-96、let-7d、let-7d的表达情况检测,探究miR-96、let-7d、let-7d对前列腺癌诊断和预后判断的意义。miR-98、let-7d、let-7g分别位于人类性染色体X、第9号染色体、第3号染色体,隶属于let-7基因家族。而let-7家族编码的miRNAs是第一个被发现的致癌miRNA,通过调节癌基因ras表达发挥作用。本研究结果显示,相比于良性前列腺增生组织,miR-98、let-7d、let-7g在前列腺癌中的表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),与国外相关研究结果相符,提示前列腺癌进展过程中let-7基因家族(如miR-98、let-7d、let-7g等)发挥了抑癌基因的作用。此外,本研究通过进一步分析miR-98、let-7d、let-7g的表达与前列腺癌临床各项指标之间的关系,结果发现miR-98、let-7d、let-7g与病理组织类型均具有相关性。其中,miR-98还与前列腺癌的临床分期具有相关性。这提示miR-98、let-7d、let-7g应用于前列腺癌的鉴别诊断和分类分级具有一定的价值。

综上所述,miR-98、let-7d、let-7g的表达情况可在一定程度上反映前列腺癌的进展,可能可以作为一项重要指标,用于前列腺癌早期诊断和预后评估。

参考文献:

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