本文主要研究内容
作者黄庆霞（2019）在《乙肝病毒感染与复制对宿主磷脂代谢的影响研究》一文中研究指出：乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)慢性感染具有发病率高、致病性强和发病机制不明确等特点。我们先前的研究提示磷脂代谢通路在HBV的复制中有重要作用。然而HBV复制与磷脂代谢物之间究竟有何关系还有待进一步研究。磷脂是组成生物膜的主要成分,还参与信号传导等过程,其生物功能越来越被大众所认知。磷脂结构具有高度复杂性和多样性,而且生物样品中某些重要的磷脂含量非常低。因此,很有必要开发一个具有高通量、高灵敏度且应用广泛的磷脂定量分析方法。本论文以感染HBV的患者血清和细胞模型为研究对象,旨在开发一种基于色谱质谱联用技术的磷脂定性与定量分析方法,并用此方法研究HBV感染后宿主磷脂代谢物水平的变化,再结合分子生物学研究技术综合研究HBV复制与宿主磷脂代谢之间的关系。本论文开发了一种基于超高效液相色谱串联三重四级杆质谱(Ultrahigh-performance liquid chromatography system coupled to a triple-quadrupole mass spectrometer,UHPLC-MS)的磷脂分析方法,在10分钟内对生物样品中主要的10类磷脂进行定量分析。这10类磷脂包括磷脂酸(Phosphatidic acid,PA)、磷脂酰胆碱(Phosphatidylcholine,PC)、磷脂酰乙醇胺(Phosphatidylethanolamine,PE)、磷脂酰甘油(Phosphatidylglycerol,PG)、磷脂酰肌醇(Phosphatidylinositol,PI)、磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)、鞘磷脂(Sphingomyelin,SM)、溶血磷脂酸(Lyso-phosphatidic acid,LPA)、溶血磷脂酰胆碱(Lyso-phosphatidylcholine,LPC)和溶血磷脂酰乙醇胺(Lyso-phosphatidylethanolamine,LPE)。我们开发的磷脂分析方法的检测限(Limit of detection,LOD)和定量限(Limit of quantitation,LOQ)分别为 0.04-33 pmol/mL 和 0.1-110 pmol/mL。而磷脂定性与定量分析通过三步实现,第一步和第二步分别在正离子模式和负离子模式下结合多反应监测模式、Product ion scan模式以及色谱峰的保留时间,尽可能在混合样品中鉴定更多的磷脂分子结构。从而为第三步生物样品定量分析提供有效的磷脂代谢物信息。我们还利用相对响应值对不同酰基链长度的MS响应差异进行定量校正,从而实现更准确的定量。将本研究方法应用于6类不同的生物样品(人血浆、大鼠血浆、A549细胞、16HBE细胞、脂肪细胞和大鼠肝脏)的磷脂分析进行适用性验证,最终在这6类生物样品中共鉴定10类磷脂308种磷脂分子结构,定量295种磷脂分子。因此,我们开发的UHPLC-MS磷脂分析方法具有高效率(尤其适用于大样本分析)、高灵敏度、高通量和广泛适用性。为了阐明HBV感染和复制与宿主磷脂代谢物之间的关系,我们分别分析了感染HBV的患者血清和细胞中的10类主要的磷脂代谢物水平。结果发现与HBsAg阴性(-)患者相比,HBsAg阳性(+)患者的PC、PE和LPA的含量升高,而PS、PG、PI和SM的含量降低。此外,我们在感染HBV并能稳定遗传HBV的细胞模型HepG2.2.15细胞中也证实了HBV感染和复制导致宿主的PC上调,PS、PG和PI下调。受试者特征工作曲线(Receiver operating characteristic,ROC)分析显示与其他磷脂相比,PC的水平变化能够更好的预测HBV感染,这提示PC可能是HBV感染潜在的生物标志物。然后我们进一步评估PC的合成与代谢通路中重要酶的表达水平,结果发现HBV感染后的细胞PC合成的关键酶PCYT1A和LPP1的mRNA和蛋白表达水平均上调。当我们通过转染小干扰 RNA(Small interference RNA,siRNA)进入 HepG2.2.15细胞中下调磷酸胆碱胞苷转移酶(Choline-phosphate cytidylyltransferase 1 A,PCYT1A)和磷脂酸磷脂酶(Lipid phosphate phosphatase 1,LPP1)的表达后,HBV的复制受到抑制。这些结果表明,HBV感染后细胞宿主的PC合成受到PCYT1A和LPP1活性的调控,提示PCYT1 A和LPP1可能成为HBV治疗的新的潜在的靶点。此研究为HBV感染和复制的发病机制提供了新的信息,为治疗HBV感染和复制提供潜在的新线索。综上所述,本文开发了一种基于UHPLC-MS的高效率、高灵敏度、高通量和广泛适用于大样本生物样本分析的磷脂定量分析方法。然后结合UHPLC-MS磷脂定量分析方法和分子生物技术研究HBV感染和复制与宿主磷脂代谢的关系,为研究HBV感染的致病机制和治疗提供了新的线索。
Abstract
yi xing gan yan bing du (Hepatitis B virus,HBV)man xing gan ran ju you fa bing lv gao 、zhi bing xing jiang he fa bing ji zhi bu ming que deng te dian 。wo men xian qian de yan jiu di shi lin zhi dai xie tong lu zai HBVde fu zhi zhong you chong yao zuo yong 。ran er HBVfu zhi yu lin zhi dai xie wu zhi jian jiu jing you he guan ji hai you dai jin yi bu yan jiu 。lin zhi shi zu cheng sheng wu mo de zhu yao cheng fen ,hai can yu xin hao chuan dao deng guo cheng ,ji sheng wu gong neng yue lai yue bei da zhong suo ren zhi 。lin zhi jie gou ju you gao du fu za xing he duo yang xing ,er ju sheng wu yang pin zhong mou xie chong yao de lin zhi han liang fei chang di 。yin ci ,hen you bi yao kai fa yi ge ju you gao tong liang 、gao ling min du ju ying yong an fan de lin zhi ding liang fen xi fang fa 。ben lun wen yi gan ran HBVde huan zhe xie qing he xi bao mo xing wei yan jiu dui xiang ,zhi zai kai fa yi chong ji yu se pu zhi pu lian yong ji shu de lin zhi ding xing yu ding liang fen xi fang fa ,bing yong ci fang fa yan jiu HBVgan ran hou su zhu lin zhi dai xie wu shui ping de bian hua ,zai jie ge fen zi sheng wu xue yan jiu ji shu zeng ge yan jiu HBVfu zhi yu su zhu lin zhi dai xie zhi jian de guan ji 。ben lun wen kai fa le yi chong ji yu chao gao xiao ye xiang se pu chuan lian san chong si ji gan zhi pu (Ultrahigh-performance liquid chromatography system coupled to a triple-quadrupole mass spectrometer,UHPLC-MS)de lin zhi fen xi fang fa ,zai 10fen zhong nei dui sheng wu yang pin zhong zhu yao de 10lei lin zhi jin hang ding liang fen xi 。zhe 10lei lin zhi bao gua lin zhi suan (Phosphatidic acid,PA)、lin zhi xian dan jian (Phosphatidylcholine,PC)、lin zhi xian yi chun an (Phosphatidylethanolamine,PE)、lin zhi xian gan you (Phosphatidylglycerol,PG)、lin zhi xian ji chun (Phosphatidylinositol,PI)、lin zhi xian si an suan (Phosphatidylserine,PS)、qiao lin zhi (Sphingomyelin,SM)、rong xie lin zhi suan (Lyso-phosphatidic acid,LPA)、rong xie lin zhi xian dan jian (Lyso-phosphatidylcholine,LPC)he rong xie lin zhi xian yi chun an (Lyso-phosphatidylethanolamine,LPE)。wo men kai fa de lin zhi fen xi fang fa de jian ce xian (Limit of detection,LOD)he ding liang xian (Limit of quantitation,LOQ)fen bie wei 0.04-33 pmol/mL he 0.1-110 pmol/mL。er lin zhi ding xing yu ding liang fen xi tong guo san bu shi xian ,di yi bu he di er bu fen bie zai zheng li zi mo shi he fu li zi mo shi xia jie ge duo fan ying jian ce mo shi 、Product ion scanmo shi yi ji se pu feng de bao liu shi jian ,jin ke neng zai hun ge yang pin zhong jian ding geng duo de lin zhi fen zi jie gou 。cong er wei di san bu sheng wu yang pin ding liang fen xi di gong you xiao de lin zhi dai xie wu xin xi 。wo men hai li yong xiang dui xiang ying zhi dui bu tong xian ji lian chang du de MSxiang ying cha yi jin hang ding liang jiao zheng ,cong er shi xian geng zhun que de ding liang 。jiang ben yan jiu fang fa ying yong yu 6lei bu tong de sheng wu yang pin (ren xie jiang 、da shu xie jiang 、A549xi bao 、16HBExi bao 、zhi fang xi bao he da shu gan zang )de lin zhi fen xi jin hang kuo yong xing yan zheng ,zui zhong zai zhe 6lei sheng wu yang pin zhong gong jian ding 10lei lin zhi 308chong lin zhi fen zi jie gou ,ding liang 295chong lin zhi fen zi 。yin ci ,wo men kai fa de UHPLC-MSlin zhi fen xi fang fa ju you gao xiao lv (you ji kuo yong yu da yang ben fen xi )、gao ling min du 、gao tong liang he an fan kuo yong xing 。wei le chan ming HBVgan ran he fu zhi yu su zhu lin zhi dai xie wu zhi jian de guan ji ,wo men fen bie fen xi le gan ran HBVde huan zhe xie qing he xi bao zhong de 10lei zhu yao de lin zhi dai xie wu shui ping 。jie guo fa xian yu HBsAgyin xing (-)huan zhe xiang bi ,HBsAgyang xing (+)huan zhe de PC、PEhe LPAde han liang sheng gao ,er PS、PG、PIhe SMde han liang jiang di 。ci wai ,wo men zai gan ran HBVbing neng wen ding wei chuan HBVde xi bao mo xing HepG2.2.15xi bao zhong ye zheng shi le HBVgan ran he fu zhi dao zhi su zhu de PCshang diao ,PS、PGhe PIxia diao 。shou shi zhe te zheng gong zuo qu xian (Receiver operating characteristic,ROC)fen xi xian shi yu ji ta lin zhi xiang bi ,PCde shui ping bian hua neng gou geng hao de yu ce HBVgan ran ,zhe di shi PCke neng shi HBVgan ran qian zai de sheng wu biao zhi wu 。ran hou wo men jin yi bu ping gu PCde ge cheng yu dai xie tong lu zhong chong yao mei de biao da shui ping ,jie guo fa xian HBVgan ran hou de xi bao PCge cheng de guan jian mei PCYT1Ahe LPP1de mRNAhe dan bai biao da shui ping jun shang diao 。dang wo men tong guo zhuai ran xiao gan rao RNA(Small interference RNA,siRNA)jin ru HepG2.2.15xi bao zhong xia diao lin suan dan jian bao gan zhuai yi mei (Choline-phosphate cytidylyltransferase 1 A,PCYT1A)he lin zhi suan lin zhi mei (Lipid phosphate phosphatase 1,LPP1)de biao da hou ,HBVde fu zhi shou dao yi zhi 。zhe xie jie guo biao ming ,HBVgan ran hou xi bao su zhu de PCge cheng shou dao PCYT1Ahe LPP1huo xing de diao kong ,di shi PCYT1 Ahe LPP1ke neng cheng wei HBVzhi liao de xin de qian zai de ba dian 。ci yan jiu wei HBVgan ran he fu zhi de fa bing ji zhi di gong le xin de xin xi ,wei zhi liao HBVgan ran he fu zhi di gong qian zai de xin xian suo 。zeng shang suo shu ,ben wen kai fa le yi chong ji yu UHPLC-MSde gao xiao lv 、gao ling min du 、gao tong liang he an fan kuo yong yu da yang ben sheng wu yang ben fen xi de lin zhi ding liang fen xi fang fa 。ran hou jie ge UHPLC-MSlin zhi ding liang fen xi fang fa he fen zi sheng wu ji shu yan jiu HBVgan ran he fu zhi yu su zhu lin zhi dai xie de guan ji ,wei yan jiu HBVgan ran de zhi bing ji zhi he zhi liao di gong le xin de xian suo 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国科学院大学(中国科学院武汉物理与数学研究所)的黄庆霞，发表于刊物中国科学院大学(中国科学院武汉物理与数学研究所)2019-08-02论文，是一篇关于乙肝病毒论文,磷脂论文,色谱质谱联用论文,中国科学院大学(中国科学院武汉物理与数学研究所)2019-08-02论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国科学院大学(中国科学院武汉物理与数学研究所)2019-08-02论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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