导读:本文包含了酸化调节论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:Dvl2,磷酸化,PP2A,调节亚基
酸化调节论文文献综述
张妙君,谢建磊,王娟娟,吴畏[1]（2019）在《蛋白磷酸酶PP2A主要通过B’家族调节亚基介导Dishevelled2蛋白的去磷酸化》一文中研究指出Dishevelled2(Dvl2)是Wnt信号通路中的关键蛋白因子且受到剧烈的磷酸化调控。蛋白磷酸酶2A(PP2A)是Dvl2的一种磷酸酶,参与Dvl2的去磷酸化调控。PP2A有多达16种调节亚基,决定着PP2A的底物特异性,但参与调节Dvl2去磷酸化的PP2A调节亚基尚未有全面研究。该文在一种细胞系中,通过siRNA逐一敲低PP2A调节亚基基因表达,分析了所有调节亚基在Dvl2磷酸化调控中的参与程度。结果显示,多种PP2A调节亚基参与Dvl2去磷酸化,其中B’家族全部成员均有参与,起到主要调控作用。细胞共定位和蛋白互作实验结果同样印证PP2A调节亚基B’家族成员参与Dvl2蛋白的磷酸化调控。该研究明确了对Dvl2蛋白去磷酸化起调控作用的PP2A调节亚基,有助于了解PP2A调节亚基的细胞生物学功能以及与底物的关系。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2019年09期）
郭倪君,车琳,黄婧,吴自力,刘琪[2]（2019）在《GPX4Ser2磷酸化位点调节肝癌细胞诱导性铁死亡的功能学作用研究》一文中研究指出目的铁死亡是一种铁依赖性脂质过氧化诱导的非凋亡性调节性细胞死亡(RCD),可参与肿瘤细胞杀伤作用。研究报道半胱氨酸缺乏诱导的铁死亡依赖于线粒体,铁死亡的核心调节因子谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的N端具有线粒体定位序列,且富马酸盐共价修饰GPX4Cys93可抑制其活性促进铁死亡,提示GPX4功能存在翻译后修饰调控。课题组前期预测和筛查了GPX4存在多个潜在(去)磷酸化位点,但其特定位点磷酸化/去磷酸化修饰的功能尚待研究。本研究拟探讨GPX4中N端丝氨酸2位点(GPX4Ser2)磷酸化状态介导线粒体p53质核分布调节及其在诱导肝癌细胞铁死亡中的作用。方法:利用GEO数据库筛选HCC病例进行肝组织中相关基因表达关联性分析;构建GPX4稳定高表达及GPX4的Ser2、Ser112定点突变模拟高磷酸化(S>D)和去磷酸化(S>A)的人肝癌HepG2和Huh-7细胞定点突变细胞株,给予索拉非尼(Sora,10μmol·L~(-1),24 h)处理建立诱导性肝癌细胞铁死亡模型,Ferrostatin-1(Fer-1,1μmol·L~(-1),24 h)干预建立铁死亡抑制模型进行体外试验;免疫印迹实验(WB)检测GPX4蛋白水平;流式细胞术(FCM)检测C11-BODIPY探针标记的脂质过氧化状态;MTS法检测细胞活力;分离胞浆、线粒体组分,采用线粒体免疫共沉淀法(Mito-IP)检测GPX4与p53相互作用;免疫荧光(IF)激光共聚焦显微镜观察p53在线粒体(Mitotracker)和细胞核(DAPI)的定位分布变化。结果①HCC病例数据库中(GSE76427),与癌旁组织(n=52)相比,肝癌组织(n=115)中铁死亡敏感性负调控因子及肿瘤增殖相关的ECAD基因相对表达水平下调、铁死亡相关的GPX4基因相对表达水平上调,且二者呈负相关(P<0.05);②与对照组相比,Sora处理组诱导性铁死亡HepG2与MHCC97H细胞中GPX4水平及细胞活力均下降(P<0.05)、且Fer-1干预组细胞中GPX4水平及细胞活力均升高(P<0.05),但各组Huh-7细胞中未见差异;③与对照细胞相比,GPX4稳定高表达的HepG2-GPX4细胞在Sora处理组未见脂质过氧化指标的明显改变;④与HepG2-GPX4对照细胞相比,模拟GPX4去磷酸化的HepG2-GPX4-S2A细胞中脂质过氧化水平增加(P<0.05),提示GPX4Ser2去磷酸化参与铁死亡的诱导发生;与模拟GPX4高磷酸化的HepG2-GPX4-S2D细胞相比,Sora处理组HepG2-GPX4-S2A细胞中Mito-IP可见GPX4与p53在线粒体上互作减少,IF实验可见p53(绿色)和细胞核(蓝色)的共定位(青色荧光点)增加、p53(绿色)和线粒体(红色)共定位(黄色荧光点)减少,细胞活力下降(P<0.05)、且Fer-1干预组细胞活力升高(P<0.05),提示p53由线粒体逆行转位至细胞核与诱导性铁死亡有关。⑤与Huh-7-GPX4-S2D细胞相比,Sora处理组Huh-7-GPX4-S2A细胞中脂质过氧化水平增加、细胞活力下降(P<0.05)。结论 GPX4Ser2去磷酸化可经由其线粒体分布调控线粒体p53逆行入核信号参与诱导性铁死亡的调节;结果为筛查GPX4功能性(去)磷酸化修饰位点及阐明其蛋白磷酸酶(如PP2A)调控在肝致癌作用中的分子机制和靶向干预介导肝癌细胞铁死亡依赖性肿瘤化学预防提供实验依据。(本文来源于《中国毒理学会第九次全国毒理学大会论文集》期刊2019-09-17）
赵杨,孙波,杜书章[3]（2019）在《芦荟素抑制p65的磷酸化对大鼠脑缺血再灌注诱导的组织损伤和炎症的调节作用》一文中研究指出目的:探讨芦荟素(Aloin)抑制p65的磷酸化对大鼠脑缺血再灌注(CIRI)诱导的组织损伤和炎症的调节作用。方法:将64只SD大鼠随机分为对照组、Aloin组、MCAO组和Aloin-MCAO组各16只,MCAO组和Aloin-MCAO组参照改良Longa法制备动物脑中动脉缺血再灌注(MCAO)模型。Aloin组和Aloin-MCAO组腹腔注射Aloin 50 mg/kg,连续7 d。治疗后,检测10 d内大鼠存活率,对各组大鼠进行神经功能缺损评分,HE染色和TUNEL法检测各组大鼠脑组织损伤,采用免疫组化染色,检测脑组织细胞黏附分子-1(ICAM-1)的表达量; ELISA法测定脑组织中白介素(IL)-6、IL-10水平,Western blot检测NF-κB p65的磷酸化、下游靶基因肿瘤坏死因子(TNF-)α以及凋亡标记分子Caspase-3和Caspase-9的表达。结果:与对照组相比,MCAO组的存活率显着下降(P<0. 05),神经功能缺损评分、细胞凋亡率、ICAM-1、IL-6、p-NF-κBp65/NF-κBp65、TNF-α、Caspase-3和Caspase-9的表达均显着升高(P<0. 05);与MCAO组相比,Aloin-MCAO组的存活率、IL-10显着升高(P<0. 05),神经功能缺损评分、细胞凋亡率、ICAM-1、IL-6、p-NF-κBp65/NF-κBp65、TNF-α、Caspase-3和Caspase-9的表达均显着下降(P<0. 05)。结论:Aloin可能通过抑制NF-κB p65信号通路抑制TNF-α的表达,降低机体炎症因子水平和细胞凋亡率,改善CIRI大鼠神经功能。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2019年17期）
农微,卫智权,莫雪妮,吴林,唐农[4]（2019）在《五脏温阳化瘀汤调节蛋白磷酸酶2A甲基化对Tau蛋白过磷酸化的抑制作用》一文中研究指出目的探讨五脏温阳化瘀汤改善SAMP8小鼠认知能力的蛋白磷酸酶2A甲基化相关脑神经纤维缠结机制。方法 10只SAMR1小鼠为正常组,40只SAMP8小鼠随机分为模型组、多奈哌齐组(0.4 mg·kg~(-1)·d~(-1))与五脏温阳化瘀汤高、低剂量组(5,1.25 g·kg~(-1)·d~(-1)),连续灌胃给药4周。Morris水迷宫测试小鼠定位航行与空间探索能力,蛋白免疫印迹法检测脑神经组织蛋白磷酸酶2A甲基化与Tau蛋白磷酸化水平,透射电子显微镜观察小鼠神经纤维微管超微结构,银染法观察神经纤维缠结。结果与正常组比较,模型组脑神经组织蛋白磷酸酶2A甲基化与Tau蛋白磷酸化水平显着升高,脑神经纤维缠结明显增多,定位航行与空间探索能力明显减弱。与模型组比较,五脏温阳化瘀汤高剂量组脑神经组织蛋白磷酸酶2A甲基化与Tau蛋白磷酸化水平显着降低,脑神经纤维微管超微结构相对完整,脑神经纤维缠结减少,定位航行并空间探索能力明显改善。结论五脏温阳化瘀汤可显着改善SAMP8小鼠认知能力,可能与其抑制蛋白磷酸酶2A甲基化,进而抑制Tau蛋白过磷酸化导致的脑神经纤维缠结减少有关。(本文来源于《时珍国医国药》期刊2019年08期）
崔秀玉,关圆[5]（2019）在《脊髓5-羟色胺耗竭增强蜜蜂毒炎症痛大鼠脊髓N-甲基-D-天冬氨酸受体NR1亚基、细胞外信号调节激酶磷酸化及痛相关行为》一文中研究指出目的脑干下行纤维释放到脊髓的5-羟色胺(HT)在病理性痛中发挥重要的调控作用,其机制尚不清楚。应用蜜蜂毒(BV)炎性痛大鼠模型,探讨脊髓5-HT是否通过脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸受体NR1亚基和细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)的激活发挥调控作用。方法动物随机分为6组:生理盐水对照组(足底注射生理盐水,NS组),BV组(足底注射BV),5, 7-二羟色胺(5, 7-DHT)-BV组(鞘内给予5, 7-DHT后足底注射BV),5, 7-DHT-NS组(鞘内给予5, 7-DHT后足底注射生理盐水),溶剂-NS组(鞘内给予5, 7-DHT溶剂后足底注射生理盐水),溶剂-BV组(鞘内给予5, 7-DHT溶剂后足底注射BV)。大鼠足底注射BV前鞘内连续给予5, 7-DHT预处理4 d,免疫荧光法观察大鼠脊髓NR1亚基、ERK的活化,行为学方法观察痛相关行为学变化。结果溶剂-BV组大鼠注射BV后2 h脊髓背角可见散在的磷酸化(p)-NR1-IR和p-ERK-IR神经元,主要分布于脊髓背角Ⅰ～Ⅱ层,与BV组相似。5, 7-DHT-BV组大鼠脊髓背角浅层p-NR1-IR神经元数目显着高于溶剂-BV组大鼠。鞘内注射5, 7-DHT同样促进了BV诱发的脊髓背角ERK的活化。与溶剂-BV组相比,5, 7-DHT-BV大鼠足底注射BV后出现了严重的痛相关行为:自发缩足反射持续时间从50min增加到120 min,且每5 min自发缩足反射次数也显着增加;热和机械痛敏更加严重。结论在BV炎性刺激下,5-HT可能通过抑制NR1亚基和ERK的激活而发挥部分镇痛作用。(本文来源于《兰州大学学报(医学版)》期刊2019年04期）
陈燕,黄亚洲,陈慧,王丹,李伟[6]（2019）在《长非编码RNA RLM通过影响AMPK的磷酸化调节HepG2细胞中的脂质沉积》一文中研究指出长非编码RNAs(long noncoding RNAs,lncRNAs)是一类长度大于200 nt、不能编码蛋白质的RNA分子,可通过AMPK、胰岛素受体等多种信号通路,调节细胞糖脂代谢。本研究发现,HepG2细胞中一条未报道的长链非编码RNA,命名为lnc-RLM(lnc-regulate lipid metabolism)。通过敲低HepG2细胞中lnc-RLM,检测细胞中甘油叁脂含量及脂质代谢相关调节因子表达量。结果显示,实验组较对照组甘油叁酯含量显着升高(P<0.05);AMPK磷酸化水平显着下调,脂质合成相关因子SREBP 1c和FAS表达量上调;同时,细胞中乙酰辅酶A羧化酶(ACC)活性较对照组显着上调(P<0.05)。在lnc-RLM敲低的HepG2细胞中,利用AMPK激动剂(A-769662)作用细胞24 h,结果显示,降低的AMPK磷酸化水平并不会因AMPK激动剂的作用而显着升高。本研究结果说明,HepG2细胞中敲低lnc-RLM表达量,可通过影响AMPK磷酸化水平,调节HepG2细胞中脂质沉积。这为今后研究AMPK活性调节提供新的可能,也为代谢性疾病的治疗提供了新思路。(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2019年07期）
胡颖,丁晓颖,董维平,马宇航,徐浣白[7]（2019）在《舒林酸调节IKK通路对3T3-L1细胞IRS-1酪氨酸磷酸化的影响》一文中研究指出目的探讨舒林酸通过调节IKK通路对分化成熟3T3-L1细胞胰岛素受体后信号转导蛋白胰岛素受体底物1(IRS-1)蛋白酪氨酸/丝氨酸(Tyr/Ser)残基磷酸化表达的影响。方法用地塞米松、IBMX和胰岛素叁联培养诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,油红O染色观察脂肪细胞形态。诱导分化成熟的脂肪细胞如下分组干预,实时荧光定量PCR检测不同浓度炎症因子IL-1β(0,1,10,100 ng/ml)和(或)不同浓度IKK特异阻断剂舒林酸(0,0.1,1,10 mmol/L)对诱导分化成熟的脂肪细胞IKK通路激活状态的影响。Western Blot检测IL-1β和(或)舒林酸对诱导分化成熟的脂肪细胞IRS-1酪氨酸/丝氨酸残基磷酸化状态的影响。采用单因素方差分析进行统计学分析。结果实时荧光定量PCR和Western Blot结果显示,IL-1β10 ng/ml组诱导成熟脂肪细胞IKKβmRNA较对照组相对表达水平增加,分别为[(2.85±0.16)%,(1.00±0.12)%,P <0.01];而IRS-1酪氨酸的磷酸化相对表达量较对照组下降,分别为[(0.72±0.26)%,(1.00±0.24)%,P <0.01]。进一步予舒林酸(1 mmol/L、10 mmol/L)干预后较对照组显着逆转IL-1β诱导脂肪细胞IRS-1酪氨酸磷酸化的表达水平,分别为[(1.72±0.16)%,(1.90±0.08)%,(1.00±0.13)%,P <0.01],同时下调IRS-1丝氨酸磷酸化的表达水平[(0.79±0.16)%,(0.66±0.08)%,(1.00±0.10)%,P <0.05]。结论IL-1β通过促进诱导分化成熟脂肪细胞IKKβ的表达,激活脂肪细胞IKK炎症通路,抑制脂肪细胞IRS-1酪氨酸残基磷酸化的表达,舒林酸通过调节脂肪细胞IRS-1酪氨酸/丝氨酸残基磷酸化的表达,改善脂肪细胞胰岛素受体后信号转导。(本文来源于《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》期刊2019年03期）
夏诗尧[8]（2019）在《Mios在调节LIM Kinase对cofilin磷酸化中的作用》一文中研究指出肌动蛋白作为一种球状蛋白质,基本存在于所有真核细胞中,并且可以通过聚合形成丝状肌动蛋白(Actin Fliament,F-actin),是细胞骨架及肌肉收缩装置的基本组成成分。在动物细胞中许多必须的生理过程都需要肌动蛋白的动态变化,如细胞迁移,细胞分裂以及细胞的内吞作用等等。过去的数十年中,F-actin的动力学一直是研究的热点,该领域至今仍然充满了争议以及未知。在这篇论文中,我们发现了一个新的肌动蛋白调节因子Mios,遗传研究表明,Mios的敲除会导致F-actin的升高,说明Mios可能会影响肌动蛋白动力学。本文的中心是利用生物化学手段,研究Mios通过影响LIM激酶(LIM Kinase,LIMK)对cofilin磷酸化这一过程进而调控肌动蛋白动力学变化。肌动蛋白解聚因子(cofilin)通过对加速肌动蛋白的解聚进而影响肌动蛋白的动态调节,LIMK可通过磷酸化cofilin进而抑制cofilin的活性,但影响磷酸化调节水平的机制尚未明确。基于肖老师在四川大学的课题组的发现,在外周神经系统中特异性敲除Mios会导致F-actin增加,磷酸化cofilin水平升高的现象,这表明Mios的敲除影响了cofilin的磷酸化水平,进而影响了肌动蛋白动力学,但具体机制尚未清楚。Mios蛋白作为GATOR2复合体的一个亚基,在N端含有一个WD40 Repeat Domain(WDR Domain)和一个在C端的锌带状结构域(Zinc Ribbon Domain)。以往对于Mios的研究主要聚焦于Mios依赖GATOR2复合体对mTORC1信号通路的调控以及Mios在细胞核内调控核基因的功能。本研究中,通过GST pull-down、激酶-底物反应以及肌动蛋白解聚试验,发现了Mios在调控肌动蛋白的动态变化中具有双重作用,一方面可以抑制LIMK对cofilin的磷酸化,另一方面与cofilin结合降低了cofilin解聚肌动蛋白的活性,并且Mios发挥这一功能既不依赖于WDR结构域,也不依赖于锌带状结构域,而是依赖于Mios中间的一段未知结构域。Mios蛋白这种新功能的发现为肌动蛋白动力学调节提供了新的分子模型,对了解肌动蛋白动力学具有重要意义。(本文来源于《哈尔滨工业大学》期刊2019-06-01）
廖林虹[9]（2019）在《NDR磷酸化YAP S94和YAP S127调节TEAD转录活性的机制研究》一文中研究指出YAP是细胞内连接蛋白和转录共激活因子,主要与转录因子TEAD结合,对靶向基因起促进或增强作用,调节转录活性或中止释放,在器官生长、干细胞更新和细胞分化中起重要作用。Hippo通路是肿瘤抑制通路,核心是MST1/2和LATS1/2激酶,NDR激酶是LATS1/2同源体,有肿瘤抑制功能,Hippo激酶级联能对YAP转录共活化子产生抑制。磷酸化YAP S127使小肠上皮YAP胞质存留,限制其转录共活化子功能,从而抑制人结肠癌细胞增殖。在人类肿瘤中Hippo-YAP通路是大多数呈失调状态。破坏YAP-TEAD相互作用的小分子特异性抑制YAP-TEAD相互作用,发挥抗肿瘤作用,为抗癌药物提供新的研究方向。目的:本课题旨在研究NDR对YAP S94等位点的磷酸化作用和对TEAD转录活性的影响,初步探讨其内在机制。方法:1.对纯化的YAP蛋白和NDR蛋白进行磷酸化反应,质谱测序查找NDR对YAP的磷酸化位点。对转染YAP 5SA的细胞进行免疫共沉淀检测NDR对YAP其他位点的磷酸化作用,萤光素酶管家-报告基因检测TEAD的活性;对YAP S94A、YAP-NDR进行萤光素酶管家-报告基因和MTT检测NDR对YAP的磷酸化作用和TEAD活性。2.对转染YAP S94点突变质粒(YAP S94A、YAP S94D、YAP S94E)、YAP WT、YAP-5SA、、YAP-5SA/S94A、、YAP-5SA/S94D、、YAP-5SA/S94E、、YAPWT和YAP S94D/S127D检测TEAD活性。3.检测NDR2对TEAD/YAP/14-3-3相互作用、TEAD/YAP S94A相互作用的影响。对转染上调NDR2质粒细胞进行Western bolt、RT-PCR和泛素化检测TEAD的表达水平和泛素化。结果:1.质谱分析发现,NDR磷酸化YAP有9个位点,其中YAPS94和S127定位可能性分别为100%和24%。磷酸化抗体检测对已报道的5个位点:S61、S109、S127、S164、S397突变为A(YAP-5SA),发现NDR2对YAP仍存在的磷酸化作用;在此基础上进一步将S94突变为A(YAP-5SA-S94A)则NDR2对YAP的磷酸化作用消失。2.YAP WT和YAP-5SA增强TEAD活性,当YAP S94A和YAP-5SA-S94A减弱TEAD活性。同时转染YAP WT-NDR、YAP S94A和NDR或YAP S94A/YAP 5SA和NDR后TEAD转录活性减弱、细胞增殖能力减弱。转染YAP 5SA、YAP5SA-NDR、YAPWT、YAP-5SA、YAP-5SA/S94E时,TEAD转录活性增强。转染YAP-5SA/S94A、YAP-5SA/S94D细胞的TEAD活性增强;转染YAP-5SA/S94A与YAP-5SA/S94E细胞的TEAD活性增强不明显。TEAD在转染YAP-5SA时比转染YAP WT时的活性更强。转染YAP S94D/S127D能竞争性抑制YAP WT活化的细胞增殖能力。3.在NDR2作用下,YAP与TEAD、14-3-3形成复合体,结合能力增强。上调NDR2后,TEAD的mRNA无明显改变,泛素化水解增强,蛋白水平降低。结论1.除了报道的YAP S127位点,NDR还调控YAP S94位点磷酸化。2.YAP S94位点磷酸化调节YAP与TEAD的结合和TEAD的转录活性。3.NDR2通过磷酸化YAP S94与S127,使YAP与TEAD、14-3-3形成复合体,诱导TEAD泛素化水解。4.YAP S94D能模拟真实的YAP磷酸化状态。5.YAP5SA-S94A降低TEAD的转录活性,减弱SW480细胞增殖能力。YAP 5SA-S94D增强TEAD的转录活性,增强SW480细胞增殖能力。(本文来源于《南方医科大学》期刊2019-05-14）
董舒婷,彭娟,沙翔垠,姚达强,戴棐曌[10]（2019）在《翼状胬肉与睑裂斑组织病理结构及磷酸化细胞外信号调节激酶、含IQ模序的GTP酶活化蛋白1表达的对比研究》一文中研究指出目的探讨翼状胬肉与睑裂斑的病理改变差异和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)及含IQ模序的GTP酶活化蛋白1(IQGAP1)的表达,比较其在翼状胬肉、睑裂斑中的差异。方法 8例翼状胬肉、睑裂斑病理及正常结膜组织,HE染色显示组织结构,免疫组化检测各组织中p-ERK和IQGAP1的表达。结果上皮层数比较:翼状胬肉>睑裂斑>结膜。血管数量比较:翼状胬肉>睑裂斑>结膜。翼状胬肉、睑裂斑组织中p-ERK、IQGAP1表达水平明显高于正常结膜。相关分析显示翼状胬肉中p-ERK与IQGAP1表达呈正相关。结论翼状胬肉和睑裂斑中的p-ERK和IQGAP1表达增加,共同参与翼状胬肉、睑裂斑的发病过程。翼状胬肉和睑裂斑的发病机制可能有一定相似性。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2019年09期）
酸化调节论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的铁死亡是一种铁依赖性脂质过氧化诱导的非凋亡性调节性细胞死亡(RCD),可参与肿瘤细胞杀伤作用。研究报道半胱氨酸缺乏诱导的铁死亡依赖于线粒体,铁死亡的核心调节因子谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的N端具有线粒体定位序列,且富马酸盐共价修饰GPX4Cys93可抑制其活性促进铁死亡,提示GPX4功能存在翻译后修饰调控。课题组前期预测和筛查了GPX4存在多个潜在(去)磷酸化位点,但其特定位点磷酸化/去磷酸化修饰的功能尚待研究。本研究拟探讨GPX4中N端丝氨酸2位点(GPX4Ser2)磷酸化状态介导线粒体p53质核分布调节及其在诱导肝癌细胞铁死亡中的作用。方法:利用GEO数据库筛选HCC病例进行肝组织中相关基因表达关联性分析;构建GPX4稳定高表达及GPX4的Ser2、Ser112定点突变模拟高磷酸化(S>D)和去磷酸化(S>A)的人肝癌HepG2和Huh-7细胞定点突变细胞株,给予索拉非尼(Sora,10μmol·L~(-1),24 h)处理建立诱导性肝癌细胞铁死亡模型,Ferrostatin-1(Fer-1,1μmol·L~(-1),24 h)干预建立铁死亡抑制模型进行体外试验;免疫印迹实验(WB)检测GPX4蛋白水平;流式细胞术(FCM)检测C11-BODIPY探针标记的脂质过氧化状态;MTS法检测细胞活力;分离胞浆、线粒体组分,采用线粒体免疫共沉淀法(Mito-IP)检测GPX4与p53相互作用;免疫荧光(IF)激光共聚焦显微镜观察p53在线粒体(Mitotracker)和细胞核(DAPI)的定位分布变化。结果①HCC病例数据库中(GSE76427),与癌旁组织(n=52)相比,肝癌组织(n=115)中铁死亡敏感性负调控因子及肿瘤增殖相关的ECAD基因相对表达水平下调、铁死亡相关的GPX4基因相对表达水平上调,且二者呈负相关(P<0.05);②与对照组相比,Sora处理组诱导性铁死亡HepG2与MHCC97H细胞中GPX4水平及细胞活力均下降(P<0.05)、且Fer-1干预组细胞中GPX4水平及细胞活力均升高(P<0.05),但各组Huh-7细胞中未见差异;③与对照细胞相比,GPX4稳定高表达的HepG2-GPX4细胞在Sora处理组未见脂质过氧化指标的明显改变;④与HepG2-GPX4对照细胞相比,模拟GPX4去磷酸化的HepG2-GPX4-S2A细胞中脂质过氧化水平增加(P<0.05),提示GPX4Ser2去磷酸化参与铁死亡的诱导发生;与模拟GPX4高磷酸化的HepG2-GPX4-S2D细胞相比,Sora处理组HepG2-GPX4-S2A细胞中Mito-IP可见GPX4与p53在线粒体上互作减少,IF实验可见p53(绿色)和细胞核(蓝色)的共定位(青色荧光点)增加、p53(绿色)和线粒体(红色)共定位(黄色荧光点)减少,细胞活力下降(P<0.05)、且Fer-1干预组细胞活力升高(P<0.05),提示p53由线粒体逆行转位至细胞核与诱导性铁死亡有关。⑤与Huh-7-GPX4-S2D细胞相比,Sora处理组Huh-7-GPX4-S2A细胞中脂质过氧化水平增加、细胞活力下降(P<0.05)。结论 GPX4Ser2去磷酸化可经由其线粒体分布调控线粒体p53逆行入核信号参与诱导性铁死亡的调节;结果为筛查GPX4功能性(去)磷酸化修饰位点及阐明其蛋白磷酸酶(如PP2A)调控在肝致癌作用中的分子机制和靶向干预介导肝癌细胞铁死亡依赖性肿瘤化学预防提供实验依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
酸化调节论文参考文献
[1].张妙君,谢建磊,王娟娟,吴畏.蛋白磷酸酶PP2A主要通过B’家族调节亚基介导Dishevelled2蛋白的去磷酸化[J].中国细胞生物学学报.2019
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