导读:本文包含了新型流感病毒疫苗论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:流感病毒,改良型痘苗病毒安卡拉株,病毒载体疫苗
新型流感病毒疫苗论文文献综述
尹元,王伟灵[1]（2017）在《基于改良型痘苗病毒安卡拉株载体的新型流感疫苗研究进展》一文中研究指出流感是由流感病毒引起的一种严重危害公众健康的呼吸道传染病,已引起全球的高度关注,接种疫苗是预防流感最有效的措施。当前,建立快速流感疫苗研发生产平台对于流感的预防与控制至关重要。以病毒为载体的活疫苗为感染性疾病的防控提供了新的手段。改良型痘苗病毒安卡拉株(Modified Vaccinia virus Ankara,MVA)是一种复制缺陷型病毒载体。MVA能够同时容纳并表达多个外源抗原、诱导较好的体液和细胞免疫应答并具备良好的安全性,具有成为理想疫苗载体的潜力。本文就MVA载体在流感疫苗研究中的应用做一综述。(本文来源于《中国人兽共患病学报》期刊2017年03期）
陈济铛[2]（2016）在《广东省猪群和执业人群流感病毒血清学调查及新型PICV载体流感疫苗免疫保护效果评价》一文中研究指出A型流感病毒宿主范围广泛,如:人、猪、禽、犬等。由于猪呼吸道上皮细胞的受体分布特性,猪可以被禽类和人类流感病毒感染,而猪流感病毒也可感染人。因此,猪被认为是人、猪、禽流感病毒的天然“混合器”,猪流感病毒的常规监测具有重要的公共卫生安全学意义。目前抵抗流感病毒侵袭的最好方法是进行疫苗免疫。但由于流感病毒基因组特征,病毒基因极不稳定,进化频繁。疫苗形式及免疫策略有限,这使有效预防流感病毒的传染和传播变得困难。为评估广东地区猪群、执业人群感染多种亚型流感病毒的风险,从2013年3月至2014年3月,分别从广东省6个不同城市的生猪养殖场和活禽市场中分别采集猪群血清样本,共6510份。其中,生猪养殖场样本4910份,活禽市场样本1600份。通过血凝抑制(HI)检测血清中抗人类、猪和禽流感病毒抗体的水平,同时分析各采样城市地理位置、生长阶段(或活禽市场中存留时间)、季节等因素对血清阳性率影响。通过单因素分析法,计算各因素对猪群感染不同流感病毒风险的影响。结果显示,影响猪群不同亚型流感病毒感染的主要因素为生长阶段(或活禽市场内存留时间)和季节因素。在活禽市场中存留时间较长的猪只,感染禽流感的风险显着高于养殖场的猪。广东各地猪群在秋季感染流感病毒风险较其他季节高。此外与禽类有密切接触是猪群感染禽流感(及类禽猪流感)的主要风险因素。由2013年12月起至2014年1月,在广东省各地选取符合条件的猪场工人,禽场工人,活禽市场工作人员以及宠物医院兽医进行血清样本采集,同时采集无长期动物接触史的志愿者血清作为对照。利用HI试验检测志愿者血清中抗人类、猪、禽和犬流感病毒抗体的水平。运用单因素分析方法计算不同因素(如,年龄、性别、工作种类以及动物接触情况等)对人类血清抗体阳性率的影响。通过分析发现猪场工人感染经典猪流感和欧亚类禽猪流感的风险显着高于对照组。而禽场工人感染禽流感病毒AV/H7和AV/H9的风险则显着高于非禽类接触人群。活禽市场工作人员感染AV/H5、AV/H7和AV/H9的风险高于其他执业人群。活禽市场工作人员感染猪流感病毒的风险也高于对照组人群。该结果提示活禽市场工作人员同时面临两种不同宿主的流感病毒感染风险。Pichinde病毒(PICV)属于沙粒病毒科,沙粒病毒属成员,是双义编码RNA病毒。在感染初期主要攻击巨噬细胞和树突状细胞,并引起高水平的T细胞免疫反应。本研究将流感病毒PR8毒株的HA和NP基因同时嵌合到PICV载体上,构建成重组表达载体rP18tri-HA/NP。重组PICV嵌合表达流感的HA和NP蛋白。通过免疫小鼠,发现载体疫苗能有效诱导小鼠机体产生HA蛋白特异性中和抗体和NP蛋白特异性杀伤性T细胞免疫反应(CTLs)。利用MHC四聚体染色法(MHC Tetramer stain)检测特异性CTLs数量,结果显示首免后,小鼠CTL反应水平显着提高,并在二免后,该类型细胞数量仍能维持较高水平。不同分支或亚型流感毒株进行攻毒保护试验,结果显示免疫小鼠均能获得较好的交叉保护作用。评价机体抗载体免疫反应对疫苗免疫效果的影响,结果显示抗载体免疫反应会抑制疫苗诱导机体产生CTL免疫反应。评价嵌合不同亚型流感HA基因的疫苗交替免疫效果,经交替免疫嵌合H1和H3亚型流感病毒HA蛋白的载体疫苗后,小鼠能抵抗非免疫原流感病毒的侵袭。综上所述,该新型PICV载体疫苗能够有效地诱导机体产生体液和细胞免疫反应。为广谱流感疫苗的研制奠定基础。(本文来源于《华南农业大学》期刊2016-01-01）
王祥[3]（2014）在《基于腺病毒载体的新型流感疫苗研究及人群中腺病毒、肠病毒的血清流行病学调查》一文中研究指出流感病毒是引起流行性感冒的主要病原体。血凝素是流感病毒表面免疫原性最强的抗原成分，刺激机体产生保护性中和抗体，因此血凝素作为免疫原被应用于新型通用型流感疫苗的研究。重组腺病毒作为一种重要的基因表达载体，具有高表达、可同时诱导特异性体液免疫和细胞免疫、安全性好、易于制备等优点。人5型腺病毒(humanadenovirustype5，AdHu5）曾被广泛应用于各种疫苗研究，但人群中普遍存在AdHu5的预存中和抗体，使AdHu5作为疫苗载体的临床应用受限。为克服预存中和抗体的影响，稀有人血清型或来自于其它种属的腺病毒被发展为新型疫苗载体。源于黑猩猩的腺病毒在人群中的血清阳性率较低，免疫原性强，被证明是一种理想的疫苗载体。本研究中我们以腺病毒黑猩猩血清型68（chimpanzee adenovirus type68，AdC68）载体为平台，将多种不同亚型的流感病毒HA基因克隆至该腺病毒载体，构建成表达不同HA的重组腺病毒库，以此作为新型流感疫苗，并研究其免疫反应及免疫保护效果。通过分子克隆手段，我们将H1N1、H2N2、H3N2、H4N2、H5N1、H6N6、H7N2、H9N2及H7N9等流感病毒的HA基因分别克隆至AdC68载体，并获得相应的重组腺病毒。表达H7N9HA的重组腺病毒免疫小鼠后显示，该疫苗成功诱导小鼠产生血凝抑制抗体和针对H7N9HA的特异性抗体；分型抗体检测显示可诱导高滴度的IgG2b。因此基于重组腺病毒载体的流感疫苗可刺激小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫。近年来，手足口病（Hand, foot and mouthdisease，HFMD）成为严重的公共卫生问题。肠病毒71（Enterovirus71，EV71）和柯萨奇病毒16(Coxsackievirus16，CA16)是引起手足口病的主要病原体。这两种病毒主要感染7岁以下儿童，但也有成人感染而致病。另外，在有些地方腺病毒和肠病毒共感染成为手足口病另一致病因素。因此，我们调查中国健康成人血清中针对肠病毒和腺病毒的中和抗体的流行情况，以探讨这些病毒的流行趋势以及人群的免疫力。我们共收集了391份健康成人血清，通过微量中和试验检测血清中针对EV71、CA16、人腺病毒5型（adenovirus humanserotype5，AdHu5）和黑猩猩腺病毒7型（chimpanzee adenoviruspan7，AdC7）病毒的中和抗体滴度。结果显示EV71、CA16、AdHu5叁种病毒在人群中的阳性率较高，分别为85.7%、58.8%和74.2%。叁种病毒都为阳性的血清阳性率为39.4%（154/391），其中各病毒中和抗体滴度的中位数分别为：80、40和640。分析发现EV71中和抗体效价与CA16、AdHu5有一定的相关性。AdC7在人群中的血清阳性率较低，为11.8%。由于人群中针对AdC7的预存免疫较低，提示AdC7可以作为一种理想的疫苗载体。(本文来源于《苏州大学》期刊2014-04-01）
杜洁茹[4]（2013）在《新型H7N9禽流感病毒疫苗的研制工作已启动——河北省农业厅总兽医师冯雪领答本刊问》一文中研究指出北方牧业:冯总您好,感谢您接受我们此次采访。据了解,H7N9型禽流感是全球首次发现的新亚型流感病毒,于2013年3月底在上海和安徽两地率先发现。那从上海活禽市场鸽子、鸡环境样品中检测到的H7N9禽流感病毒有哪些特点?冯雪领:国家禽流感参考实验室最新研究显示,这次分离到的H7N9禽流感病毒,是一种全新病毒,此前在国内从未分离到;目前(本文来源于《北方牧业》期刊2013年09期）
韩晓杰[5]（2012）在《德国开发出新型禽流感疫苗保护鸡免受H5病毒的攻击》一文中研究指出德国研究人员开发出一种新型禽流感疫苗,首批试验结果显示,疫苗可以加强鸡的免疫保护能力,也能保护鸡免受H5亚型禽流感病毒的攻击。德国联邦动物健康研究所15日说,新型疫苗使用了减弱了的家禽疱疹病毒,这样的病毒不再会使家禽患病。研究人员在这一病毒中人工添加了一种禽流感基因,这样接种疫苗的家禽不仅(本文来源于《当代畜禽养殖业》期刊2012年12期）
王浩[6]（2011）在《新型甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白人源化中和单抗和多肽表位疫苗研究》一文中研究指出流感病毒作为最主要人类感染病毒之一,对人类的危害巨大。曾在上个世纪引起了叁次全球性的流感大流行,造成数千万人的死亡。进入新世纪以来,在2009年爆发了全球性的流感大流行,给世界的社会与经济发展造成了一定程度的负面影响。尽管已经研发出灭活流感疫苗,较好的控制了该病毒株的持续流行和毒性加剧。但是,目前针对新型甲型H1N1流感病毒的免疫学及其致病机理仍了解不多。血凝素(haemegglutinin, HA),作为最主要的参与病毒感染的表面抗原之一,对于H1N1病毒的研究具有重要意义。本研究利用杆状病毒昆虫表达系统表达了具有生物学活性的新型甲型H1N1 HA蛋白和NA蛋白,以此为基础,开展了如下两方面研究：首先,开展了新型甲型H1N1 HA蛋白人中和单克隆抗体的制备。利用EBV转化记忆性B细胞,在CpG和饲养细胞的存在下,培养转化B细胞；经有限稀释后筛选能分泌HA蛋白特异性抗体的细胞克隆,共筛选96U孔板135块包含12960株B细胞样品；最终,经多次筛选获得45株阳性克隆细胞。这些阳性细胞克隆中有36株阳性细胞克隆在随后1-2月中死亡,提示EBV转化的B细胞中绝大部分是短寿命的,而仅有少数才能长期存活(>2月)。为避免阳性克隆细胞进一步丢失,我们将阳性细胞与K6H6/B5细胞系进行PEG融合以获得永生的阳性细胞。然而经多次实验,但却无法筛选到杂交瘤细胞。在不能获得永生阳性细胞的情况下,本研究改变研究策略,通过单细胞克隆团5'-RACE方法获得4对阳性细胞轻、重链可变区cDNA基因,进而利用杆状病毒昆虫细胞表达该基因工程抗体。结果表明,昆虫细胞不是基因工程抗体表达的合适宿主细胞,尽管本研究在采用昆虫表达时也有文献支持。下一步研究中需要使用更合适的CHO细胞表达上述HA特异性人基因工程抗体。其次,本课题进行了新型甲型流感病毒HA表位肽疫苗研究。流感病毒利用连续点突变和基因重组导致不断变异,进而逃避机体的记忆免疫应答。目前的疫苗往往只是针对某一特定的病毒株或亚型,不能保护机体不被其他病毒株感染。而针对表位疫苗的设计,通常利用的是线性表位,无论是B细胞表位,还是T细胞表位。本部分课题通过设计能模拟构象表位的肽疫苗,进而免疫小鼠,利用ELISA、血凝抑制实验、中和实验以及肽阻断ELISA实验,评价其是否能够引起抗体免疫应答。结果显示,该HA肽疫苗免疫接种的小鼠血清能够结合肽、重组H1N1 HA蛋白、重组H5N1 HA蛋白以及H1N1灭活疫苗；能够抑制血凝实验,同时还能够中和非同种流感病毒亚型的H1N1和H5N1病毒。上述结果表明,新型HA肽疫苗能够诱导机体产生相应的体液免疫应答,并且具有交叉保护作用。综上所述,本研究取得了以下主要成果：1、利用杆状病毒表达系统成功表达出具有生物学活性的HA蛋白和NA蛋白,对BaculoGold system和Bac-to-Bac system这两种杆状病毒昆虫表达系统进行比较,结果表明后者更适合表达HA蛋白。2、EBV转化B细胞,筛选到9株能够分泌HA特异性抗体的B细胞,进一步获得4对阳性细胞轻、重链可变区cDNA基因,为进一步制备基因工程抗体打下了基础。3、首次改进了国外文献中报道的单细胞5'-RACE获取轻、重链可变区cDNA的方法,使用挑取单细胞克隆团进行5'-RACE,提高了效率的同时降低了操作的难度。4、新型流感HA肽疫苗能够诱导机体产生保护性抗体免疫应答,对不同流感病毒亚型(H1N1和H5N1)具有交叉保护性。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2011-05-01）
王希[7]（2011）在《新型流感病毒样颗粒疫苗在老龄小鼠中免疫原性研究》一文中研究指出目的:流感病毒是一类具有高度传染性的呼吸道病毒,每年全球有25-50万人因感染流感病毒致病或死亡。老龄人群由于免疫衰老对包括流感病毒在内的传染性疾病的发病率和死亡率均高于成年人。预防流感最有效的方法为疫苗接种,但研究表明传统流感疫苗在老龄人口中的有效性只有不足50%,而在成年人中有效性可达90%。随着世界人口老龄化日益严重,研发针对老龄人群安全有效的新型流感疫苗意义重大。为此,我们分别用整合免疫佐剂和改变免疫途径两种方法,探讨流感病毒VLPs在老龄小鼠中的免疫原性,希望为研发针对老龄人群的高效新型流感疫苗提供实验室依据,从而启示其他老年性疾病疫苗的开发和应用。方法:整合了免疫佐剂的新型流感病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗,通过不同免疫途径,探讨以H1N1流感病毒A/Perto Rico/8/34(PR8)为基础的VLPs在老龄小鼠中的免疫原性。(1)利用昆虫重组杆状病毒(Recombinant baculovirus,rBVs)表达系统,将整合有免疫佐剂-细菌鞭毛蛋白flagellin的PR8流感病毒血凝素蛋白HA及野生型流感病毒HA分别与神经氨酸酶(Neuraminidase, NA)和基质蛋白(Matrix proteins,M1)共表达,在体外组装成新型流感病毒样颗粒,分别命名为Flic-PR8 VLPs和PR8 VLPs。用电镜观察VLPs的形态,Western Blot方法检测flagellin、HA和M1的含量,血凝实验检测HA活性,定量ELISA方法计算每微克VLPs中的HA实际含量,并用制备的VLPs刺激骨髓来源的树突状细胞,采用Cytokine ELISA方法测定VLPs体外生物学活性。(2) HA含量和活性相同的Flic-PR8 VLPs和PR8 VLPs分别通过肌肉注射免疫老龄小鼠和成年小鼠,初次免疫四周后加强免疫一次。每次免疫两周后采用眶后静脉丛刺破法采血,用ELISA方法鉴定血清中抗HA特异性抗体的产生,血凝抑制实验计算抗体滴度。加强免疫四周后,用致死量的同源鼠适应流感病毒A/PR/8/34,或者异源鼠适应流感病毒A/California/04/2009进行攻毒。攻毒后每天固定时间对小鼠称重并观察发病情况,攻毒后15天对小鼠采取安乐处死,取脾脏淋巴细胞,进行ELISPOT检测特异性细胞因子的产生。(3)2μg PR8 VLPs分别通过肌肉注射(IM)和皮内注射(ID)两种途径免疫老龄小鼠和成年小鼠,免疫过程如前,用ELISA方法鉴定血清中抗HA特异性抗体的产生,血凝抑制实验计算抗体滴度。加强免疫四周后,用致死量的同源鼠适应流感病毒A/PR/8/34,或者异源鼠适应流感病毒A/California/04/2009进行攻毒。攻毒后每天固定时间对小鼠称重并观察发病情况,攻毒后15天对小鼠采取安乐处死,取脾脏淋巴细胞,ELISPOT检测特异性细胞因子的产生。结果:(1)VLPs特性检测结果:经纯化的Flic-PR8 VLPs和PR8 VLPs均保持了与流感病毒粒子相似的形态及大小,说明整合flagellin并不影响VLPs的正常结构。Western Blot与血凝实验结果表明,Flic-PR8 VLPs和PR8 VLPs中HA含量相同且具有正常的生物学活性;定量ELISA显示,每微克Flic-PR8 VLPs和PR8 VLPs均含有约6.8纳克HA蛋白;Cytokine ELISA表明,无论在成年小鼠还是老龄小鼠中Flic-PR8 VLPs和PR8 VLPs均能刺激树突状细胞产生细胞因子TNF-α,但是Flic-PR8 VLPs刺激TNF-α产生的能力更强,并且增加Flic-PR8 VLPs刺激浓度对TNF-α产生影响不大,充分说明了flagellin作为免疫佐剂在其中发挥了重要免疫增强作用。(2)VLPs免疫小鼠体内免疫应答反应检测结果:分别用Flic-PR8 VLPs和PR8 VLPs经肌肉注射途径免疫小鼠,成年小鼠组体内产生的血清特异性抗体水平显着高于老龄小鼠组。然而在老龄小鼠组内,经加强免疫后Flic-PR8 VLPs与PR8 VLPs相比,前者能诱导更高水平的IgG,且以IgG2a亚型为主。血凝抑制实验结果显示,血清HI滴度在Flic-PR8 VLPs免疫的老龄小鼠组达到了214,而PR8 VLPs免疫的老龄小鼠组其滴度只有128,前者为后者的1.7倍,该结果与ELISA结果相符,说明Flic-PR8 VLPs能诱导更高效的抗HA抗体。(3)病毒攻击实验结果:用致死剂量同源鼠适应A/PR/8/34流感病毒攻击时,虽然PR8 VLPs和Flic-PR8 VLPs均能够对被免疫老龄小鼠提供一定的保护作用,但对老龄小鼠的保护效果明显劣于成年小鼠组,体现在老龄小鼠体重下降程度较大,然而用致死剂量异源鼠适应A/California/04/2009流感病毒攻击时,只有Flic-PR8 VLPs能够对被免疫小鼠提供保护作用,而PR8 VLPs免疫的小鼠全部死亡,充分说明Flic-PR8 VLPs具有更好的免疫原性。(4)不同免疫途径免疫应答反应结果:PR8 VLPs经IM和ID途径分别免疫小鼠后,IM组中成年小鼠组HA特异性IgG抗体水平略高于ID组,与之相反的是,在老龄小鼠组,虽然经IM与ID免疫所产生的抗体水平均较成年小鼠组低15倍之多,但是ID组产生的IgG抗体水平约为IM组的1.5倍。进一步应用ELISA方法对IgG亚型抗体分析表明,在老龄小鼠中,经ID途径免疫能够诱发更高水平的抗原特异性IgG1产生,说明ID途径免疫能够通过Th2型免疫反应提高流感病毒VLPs在老龄小鼠中的免疫原性。与ELISA结果相符,经ID免疫的老龄小鼠组HI滴度达到了288,而IM免疫的老龄小鼠组HI滴度只有100,前者为后者的2.8倍左右,表明ID途径免疫能诱导高效价的抗HA抗体产生。(5)不同免疫途径条件下病毒攻击实验结果:ID途径免疫可提高对老龄小鼠免疫原性,主要表现在用致死剂量同源鼠适应A/PR/8/34流感病毒攻击时,IM与ID均能够对被免疫老龄小鼠提供一定程度保护作用,但对老龄小鼠的保护效果明显劣于成年小鼠组,表现在老年小鼠体重下降程度较大。但是用致死剂量异源鼠适应性A/California/04/2009流感病毒攻击,只有ID途径免疫PR8 VLPs能够对被免疫老龄小鼠提供保护,而IM途径免疫PR8 VLPs I的老龄小鼠全部死亡。结论:(1)成功制备了整合免疫佐剂的流感病毒Flic-PR8 VLPs和野生型流感病毒PR8 VLPs,两种流感病毒样颗粒的HA含量相同。(2)Flic-PR8 VLPs和PR8 VLPs肌肉注射免疫成年和老龄小鼠,Flic-PR8 VLPs显示较强的免疫原性。(3)肌肉注射和皮内注射两种途径免疫成年和老龄小鼠,成年小鼠组中两种免疫途径免疫原性未见显着差异,老龄小鼠组中皮内注射免疫途径的免疫原性明显高于肌肉注射免疫途径。(4)可以通过添加免疫佐剂和改变免疫途径两种方法入手,研发出针对老龄人群更为安全有效的新型流感疫苗。实验结果为深入探讨并开发针对免疫衰老的老龄人群的新型疫苗奠定了理论及实验基础。(本文来源于《第四军医大学》期刊2011-04-01）
胡建和,王青,杭柏林[8]（2010）在《禽流感病毒新型疫苗的研究进展》一文中研究指出疫苗免疫是禽流感防控的主要措施之一,随着生物技术的不断发展,基因工程亚单位疫苗、活载体疫苗、DNA疫苗等新型疫苗得以研究和开发,这为禽流感的防控提供了新的手段。新型疫苗除具有传统疫苗的保护效果外,在生物安全和普遍防控等方面也具有广泛的优势,是禽流感疫苗发展的新方向。(本文来源于《生物技术通报》期刊2010年08期）
胡志鹏[9]（2009）在《表达H5N1高致病性禽流感血凝素蛋白（HA）的新型重组杆状病毒载体疫苗在小鼠中诱导免疫应答的初步研究》一文中研究指出杆状病毒Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus (AcMNPV)可以高效转导多种物种和器官来源的哺乳动物细胞。因为具有遗传背景清楚,生理生化科研积累丰厚,生物安全性好,能承载较大外源基因,表达外源蛋白效率高,可对表达的蛋白进行糖基化修饰,以保证外源基因产物具备生物学活性,容易扩大规模达到生产要求,无细胞毒性等优势使杆状病毒成为一个倍受关注的新型哺乳动物细胞基因转导载体。近来,杆状病毒表面展示系统的进步和穿梭启动子系统在昆虫细胞/哺乳动物细胞中的广泛应用,特别是07年以来,研究证实重组杆状病毒载体可以通过直接注射的方式转导哺乳动物细胞,并在小鼠模型中诱导有效的免疫反应,使重组杆状病毒作为新一代疫苗载体的研究展现出卓越的优势,并引起广泛关注。禽流感是由A型禽流感病毒中有致病性的任何一种血清亚型毒株引起各种家禽及野生禽类感染并发生全身性或呼吸器官综合征的一类烈性传染病。最近的研究逐渐证实：禽流感病毒可以直接或间接传染给人类,并引起严重的病态和很高的死亡率(62%),因此引起医学界的广泛关注。面对迫在眉睫的潜在危机,世界卫生组织着重强调：急需有效而安全的流感疫苗。血凝素蛋白(Hemagglutinin, HA)是决定禽流感病毒宿主范围、致病性强弱和免疫原性的重要因素,对研究、认识禽流感病毒有重要意义,是当前研究的重点和热点。本研究首先通过分子流行病学和生物信息学分析,确定了A/Vietnam/1203/2004(Viet04)株H5N1型高致病性禽流感病毒的血凝素蛋白为典型代表,优化了血凝素蛋白基因编码序列,使其更适合在昆虫细胞和哺乳动物细胞中表达,并通过重迭延伸PCR技术人工合成了HA基因全长(1707bp)。然后,成功构建了能在病毒囊膜上展示HA蛋白的重组杆状病毒vAc-HA,矛口既胄邑展示HA蛋白又能在哺乳动物细胞中内源性表达HA蛋白的重组杆状病毒vAc-HA-DUAL.实验证明：vAc-HA和vAc-HA-DUAL两株重组杆状病毒均能在昆虫细胞(sf9)中正确表达HA蛋白。vAc-HA-DUAL还能在哺乳动物细胞(BHK和MDCK)内正确表达HA蛋白。同时,在哺乳动物细胞中,全长HA蛋白能被蛋白酶正确切割为HA1和HA2。HA蛋白能展示在重组杆状病毒的囊膜上,并且不影响重组杆状病毒的生产和应用。展示在重组杆状病毒表面的HA蛋白具有凝集红细胞的能力,并且能提高病毒进入部分哺乳动物细胞的效率,表明其具有生物学功能。本研究进一步在实验动物水平研究重组杆状病毒做为新型疫苗载体的功效。使用1×109pfu/只/次的剂量,通过直接注射免疫小鼠,共两次。初次免疫21天后,检测小鼠血清中总IgG抗体、总IgA抗体,HA特异性抗体的分泌水平,以及淋巴细胞经HA抗原再刺激之后,分泌IFN-γ、IL-4、IL-2、IL-6等细胞因子的能力,结果显示：相对vAc-GFP和PBS组对照,重组杆状病毒vAc-HA和vAc-HA-DUAL均能在小鼠模型中有效诱导机体产生显着体液免疫应答和细胞免疫应答,而且都具有良好的专一性。特别值得注意的是：重组杆状病毒vAc-HA诱导机体产生更偏向Th2途径的体液免疫应答,而vAc-HA-DUAL能诱导肌体产生更偏向Th1途经的细胞免疫应答,这是因为vAc-HA只在病毒颗粒表面展示HA抗原,具有蛋白疫苗的作用,而vAc-HA-DUAL除表面展示了HA抗原外,还能在病毒侵入细胞后在细胞中内源性表达HA抗原并递呈给免疫系统,从而发挥了蛋白疫苗和DNA疫苗的双重功效。综上所述,我们的研究结果证实：不同构造的重组杆状病毒作为抗原,可以在小鼠模型中诱导偏向Th1途经的细胞免疫应答或偏向Th2途经的体液免疫应答。重组杆状病毒不但可以通过表面展示递呈抗原,还能通过内源表达的方式发挥DNA疫苗的功效。为新型流感疫苗的研发提供了很有潜力的新途径和两种可以选择的策略。(本文来源于《复旦大学》期刊2009-10-20）
魏义举[10]（2007）在《一种新型流感病毒亚单位疫苗的表达、纯化及其初步免疫学效应的研究》一文中研究指出流感是一种流感病毒引起的严重性呼吸道疾病。流感病毒(Influenza virus，Ⅳ)具有高度传染性，能在短期内突然发生，迅速蔓延，造成不同程度的流行，甚至世界大流行，导致全球人力资源和物力资源的重大损失。流感病毒的主要表面抗原之一—血凝素(HA)，具有高度变异性，致使流感病毒疫苗一般每年都要更换，给疫苗的制备和生产造成了诸多不便。而流感病毒的跨膜蛋白—基质蛋白2(M2蛋白)，含有高度保守的抗原表位，是病毒亚型间交叉保护性疫苗的候选抗原。流感病毒变异速度非常快，尤其是当前禽流感病毒逐渐蔓延到人群中，对人类危害越来越大，因此研制出一种新颖的具有广泛保护作用的疫苗对于控制流感病毒流行具有极其重要的意义。本研究选择了A型流感病毒的缺失跨膜区M2以及H1N1和H3N2亚型流感病毒HA的7个保守的B细胞表位和T细胞表位。采用大肠杆菌偏爱的密码子对M2外膜区基因和HA多表位基因进行了优化设计。通过合成引物，利用重迭延伸PCR(OE-PCR)和搭桥式PCR方法分别扩增得到A型流感病毒M2蛋白缺失跨膜区基因和HA多表位基因，依次克隆到表达载体中，构建重组质粒pET28a+-M2d-HA，经测序表明，插入表达载体中的外源基因的序列与理论设计的基因序列完全一致。将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，筛选获得了高效表达重组融合蛋白的工程菌，表达重组蛋白约占菌体总蛋白总量的45％左右。表达产物以包涵体形式存在，经包涵体处理，亲和层析纯化后，重组蛋白稀释复性，再经阴离子交换层析纯化得到纯度在90％以上的目的蛋白。Western blot结果显示纯化的重组蛋白具有较好的抗原性和特异性。重组蛋白免疫小鼠后，利用ELISA实验检测重组蛋白在小鼠体内获得了很高的抗体免疫水平；利用免疫荧光实验观察，重组蛋白抗血清对MDCK细胞上的流感病毒能够产生很好的抗原性。本研究成功构建了流感病毒M2d-HA抗原多表位重组蛋白表达载体，在大肠杆菌中获得了高效表达；通过基因工程获取较高纯度的M2d-HA重组蛋白，同时对蛋白表达、纯化复性等实验条件进行了初步的探索；在昆明小鼠体内，对该重组蛋白的免疫学效应作了初步的研究，为进一步研究广谱型流感病毒亚单位疫苗提供了很好的理论依据和实验资料，也为流感病毒亚单位疫苗的开发及基础研究奠定了一定的实验基础。(本文来源于《中国协和医科大学》期刊2007-06-01）
新型流感病毒疫苗论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
A型流感病毒宿主范围广泛,如:人、猪、禽、犬等。由于猪呼吸道上皮细胞的受体分布特性,猪可以被禽类和人类流感病毒感染,而猪流感病毒也可感染人。因此,猪被认为是人、猪、禽流感病毒的天然“混合器”,猪流感病毒的常规监测具有重要的公共卫生安全学意义。目前抵抗流感病毒侵袭的最好方法是进行疫苗免疫。但由于流感病毒基因组特征,病毒基因极不稳定,进化频繁。疫苗形式及免疫策略有限,这使有效预防流感病毒的传染和传播变得困难。为评估广东地区猪群、执业人群感染多种亚型流感病毒的风险,从2013年3月至2014年3月,分别从广东省6个不同城市的生猪养殖场和活禽市场中分别采集猪群血清样本,共6510份。其中,生猪养殖场样本4910份,活禽市场样本1600份。通过血凝抑制(HI)检测血清中抗人类、猪和禽流感病毒抗体的水平,同时分析各采样城市地理位置、生长阶段(或活禽市场中存留时间)、季节等因素对血清阳性率影响。通过单因素分析法,计算各因素对猪群感染不同流感病毒风险的影响。结果显示,影响猪群不同亚型流感病毒感染的主要因素为生长阶段(或活禽市场内存留时间)和季节因素。在活禽市场中存留时间较长的猪只,感染禽流感的风险显着高于养殖场的猪。广东各地猪群在秋季感染流感病毒风险较其他季节高。此外与禽类有密切接触是猪群感染禽流感(及类禽猪流感)的主要风险因素。由2013年12月起至2014年1月,在广东省各地选取符合条件的猪场工人,禽场工人,活禽市场工作人员以及宠物医院兽医进行血清样本采集,同时采集无长期动物接触史的志愿者血清作为对照。利用HI试验检测志愿者血清中抗人类、猪、禽和犬流感病毒抗体的水平。运用单因素分析方法计算不同因素(如,年龄、性别、工作种类以及动物接触情况等)对人类血清抗体阳性率的影响。通过分析发现猪场工人感染经典猪流感和欧亚类禽猪流感的风险显着高于对照组。而禽场工人感染禽流感病毒AV/H7和AV/H9的风险则显着高于非禽类接触人群。活禽市场工作人员感染AV/H5、AV/H7和AV/H9的风险高于其他执业人群。活禽市场工作人员感染猪流感病毒的风险也高于对照组人群。该结果提示活禽市场工作人员同时面临两种不同宿主的流感病毒感染风险。Pichinde病毒(PICV)属于沙粒病毒科,沙粒病毒属成员,是双义编码RNA病毒。在感染初期主要攻击巨噬细胞和树突状细胞,并引起高水平的T细胞免疫反应。本研究将流感病毒PR8毒株的HA和NP基因同时嵌合到PICV载体上,构建成重组表达载体rP18tri-HA/NP。重组PICV嵌合表达流感的HA和NP蛋白。通过免疫小鼠,发现载体疫苗能有效诱导小鼠机体产生HA蛋白特异性中和抗体和NP蛋白特异性杀伤性T细胞免疫反应(CTLs)。利用MHC四聚体染色法(MHC Tetramer stain)检测特异性CTLs数量,结果显示首免后,小鼠CTL反应水平显着提高,并在二免后,该类型细胞数量仍能维持较高水平。不同分支或亚型流感毒株进行攻毒保护试验,结果显示免疫小鼠均能获得较好的交叉保护作用。评价机体抗载体免疫反应对疫苗免疫效果的影响,结果显示抗载体免疫反应会抑制疫苗诱导机体产生CTL免疫反应。评价嵌合不同亚型流感HA基因的疫苗交替免疫效果,经交替免疫嵌合H1和H3亚型流感病毒HA蛋白的载体疫苗后,小鼠能抵抗非免疫原流感病毒的侵袭。综上所述,该新型PICV载体疫苗能够有效地诱导机体产生体液和细胞免疫反应。为广谱流感疫苗的研制奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
新型流感病毒疫苗论文参考文献
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标签：流感病毒; 改良型痘苗病毒安卡拉株; 病毒载体疫苗;