导读:本文包含了人肝脏星状细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:肝刺激因子,细胞内,HSS,纤维化
人肝脏星状细胞论文文献综述
艾伟伦[1]（2017）在《肝刺激因子通过抑制肝脏星状细胞活化减轻肝脏纤维化的研究》一文中研究指出背景和目的肝脏受到损伤后,肝实质细胞发生坏死或凋亡,诱发炎症反应,分泌多种细胞因子,进而刺激静息状态的肝星状细胞(hepatic Stellate Cell,HSC)发生活化,进一步转分化为肌成纤维细胞(myofibroblast,MFB)。肌成纤维细胞可以分泌大量包含胶原在内的细胞外基质,导致肝脏纤维化。由此可见,HSC活化是肝纤维化发生与发展中的核心事件。鉴于HSC在肝脏纤维化发生发展过程中的重要作用,研究其活化的分子机制将有助于逆转或治疗肝脏纤维化。肝刺激因子(hepatic Stimulator Substance,HSS)是一种能刺激肝细胞增殖的生物活性物质。近期报道显示,HSS可通过保护线粒体膜孔道,维持细胞内钙离子稳态抑制细胞凋亡,发挥肝细胞保护作用,因而被认为是肝细胞内重要的存活因子(survival factor)。HSS与肝纤维化的发生发展也有一定关系。在小鼠肝纤维化模型中,过表达HSS可显着地减轻纤维化症状,而敲减HSS可明显加重小鼠CCl4和胆总管结扎诱导的肝纤维化(本实验室未发表资料),但HSS在肝脏纤维化发病与演化过程中的机制依然没有清楚地阐明。鉴于有报道称,HSS在肝实质细胞和HSC内均存在表达,我们不禁要问,HSS能否通过抑制肝星状细胞活化来达到减轻抑制肝脏纤维化的目的?为此,本实验培养HSC,通过调节其细胞内HSS表达水平,研究HSS对HSC活化的影响,并探讨其对肝纤维化产生的影响。本实验旨在从全新视角揭示HSS与HSC活化的关系,为预防及治疗肝纤维化提供理论基础。方法1、细胞模型的建立:选择并培养具有活化表型的肝星状细胞(LX-2)细胞系,并通过稳定转染的方法构建HSS高表达(HSS-Tx)和HSS敲减(HSS-sh RNA)的LX-2细胞系。2、HSC活化分子标记物的鉴定:通过western blot的方法检测HSS-Tx和HSSsh RNA细胞中HSC活化分子标记物a-SMA和Ⅲ型胶原的表达,以研究HSS与HSC活化之间的关系。3、活化型HSC细胞特征的检测:HSC活化特征包括增殖加快、迁移增强和凋亡减少。通过流式细胞仪分析细胞周期、MTS实验测定细胞活力和免疫荧光检测Ki67的阳性细胞数,研究HSS-Tx和HSS-sh RNA细胞增殖能力的变化;通过Transwell和Xcelligence实验检测两组细胞迁移能力的改变;并检测caspase-3/7活性以分析两组细胞的凋亡情况。4、HSS影响HSC活化的分子通路的探究:分别利用磷酸化MAPK抗体芯片和磷酸化酪氨酸激酶抗体芯片检测两组细胞差异活化的关键蛋白质,以研究HSS影响HSC活化的分子通路。5、HSS影响HSC细胞迁移的机制研究:分别利用高内涵细胞成像分析技术和激光共聚焦扫描显微镜检测细胞微丝的分布,纤维状-肌动蛋白(F-actin)和球状-肌动蛋白(G-actin)的含量,以分析两组细胞微丝的变化及其与迁移的关系。胞浆钙离子与微丝装配及细胞迁移关系密切,利用钙离子示踪剂显示胞浆内钙离子含量,反映钙离子变化和细胞运动的关系。6、HSS影响HSC线粒体动态性及线粒体钙离子的研究:HSS定位于HSC的线粒体,为探讨HSS是否通过影响线粒体功能进而改变HSC细胞迁移能力,首先利用活细胞染料标记两组细胞内的线粒体,并用激光共聚焦扫描显微镜和配套软件分析细胞的线粒体形态,通过ATP含量测定及Seahorse实验检测线粒体功能的变化,并使用线粒体钙离子示踪剂测定两组细胞线粒体钙离子的分布情况。7、回复实验:为进一步确定上述实验获得的实验结果,利用RNAi的方法抑制HSS-Tx细胞内HSS的表达,重复5和6的实验,即测定细胞内微丝的含量及分布,线粒体形态的变化等。结果1、Western blot结果显示,HSS转染的LX-2细胞(HSS-Tx)中HSS表达明显高于vector细胞,而且HSS-sh RNA转染的LX-2细胞(HSS-sh RNA)中HSS表达显着低于vector细胞,且在传代过程中能维持HSS高表达或低表达状态,说明细胞模型构建成功,可用于后续实验。2、Western blot结果显示,HSS-Tx细胞中a-SMA(P<0.05)和III型胶原(P<0.01)的表达明显低于HSS-sh RNA细胞,说明HSS可抑制HSC的活化。3、MTS法测定细胞活力结果显示,HSS-Tx组细胞活力在传代后36 h开始弱于HSS-sh RNA细胞(P<0.01),而且这种状况一直持续至72 h(P<0.05)。流式细胞仪结果显示,HSS-Tx组G0/G1期细胞比例明显多于HSS-sh RNA细胞。与此类似,其Ki67阳性细胞数也明显少于HSS-sh RNA(P<0.05)。Transwell实验结果显示,在相同时间内穿过小孔的HSS-Tx细胞数目明显少于HSS-sh RNA细胞,同样Xcelligence实验结果显示在接种后1 h至25 h,HSS-Tx细胞的迁移能力均明显弱于sh RNA细胞(P<0.0001),以上结果提示转染HSS基因可以抑制LX-2细胞的增殖及迁移。4、磷酸化MAPK通路抗体芯片结果显示,高表达HSS与敲减HSS两组细胞中,包括ERK,P38和AKT等在内的18种信号分子的磷酸化水平未见明显差异,而71个磷酸化酪氨酸激酶抗体芯片结果显示HSS-sh RNA细胞中Blk,Fyn,TNK1,FAK和TXK等与微丝装配相关激酶的磷酸化水平明显高于HSS-Tx组,提示HSS可能通过抑制上述激酶的活性,从而限制微丝装配。5、利用荧光标记的鬼笔环肽来标记HSS-Tx和HSS-sh RNA细胞内F-actin,通过高内涵细胞成像系统和激光共聚焦扫描显微镜显示F-actin含量和分布。结果显示,HSS-Tx组细胞内微丝数目明显少于HSS-sh RNA组(P<0.01),而且分布更为不规则。利用同样的方法标记细胞内G-actin,结果显示HSS-Tx组细胞内G-actin的含量显着高于HSS-sh RNA组,提示HSS抑制HSC细胞微丝的装配,减少应力纤维的生成。细胞免疫荧光实验显示HSS-Tx组细胞内胞浆内钙离子的含量明显少于HSS-sh RNA组(P<0.001)。6、利用Mito-tracker特异性标记活细胞线粒体,通过激光共聚焦扫描显微镜成像和相关软件分析显示,与HSS-sh RNA细胞相比,HSS-Tx细胞内线粒体形态变得更短而且更圆(P<0.0001),而且Western blot结果显示,与线粒体融合相关的MFN-2表达降低(P<0.01),说明HSS抑制了HSC细胞线粒体融合。测定细胞内线粒体氧代谢(采用Seahorse仪器),结果显示,HSS-Tx细胞的基础代谢能力下降,ATP含量明显低于HSS-sh RNA细胞(P<0.0001)。线粒体融合受到抑制,不仅使线粒体功能受到破坏,而且也影响到线粒体钙离子稳态,进而影响整个胞浆钙离子稳态。利用线粒体钙离子示踪剂显示HSS高/低表达细胞内线粒体内钙离子的变化,结果显示,HSS-Tx细胞线粒体内的钙离子浓度明显低于HSS-sh RNA细胞(P<0.0001)。7、Western blot结果显示,HSS-Tx细胞转染HSS si RNA pool后,HSS表达明显下调。转染HSS si RNA pool 3 d后,激光共聚焦扫描显微镜成像结果显示微丝分布开始变得规则,微丝含量明显增加,这些改变持续至转染7 d,而且更为明显。同样转染3 d后,线粒体开始变长,转染7 d时,线粒体形态改变最为明显;与之对应,细胞内ATP含量增加。结论1.HSS可以抑制HSCs活化。2.HSS破坏HSCs的线粒体动态性,使ATP合成减少,线粒体内钙离子含量下降,进而降低胞浆内钙离子浓度,抑制微丝装配,使HSCs活化与迁移能力下降。(本文来源于《首都医科大学》期刊2017-05-01）
任利,王志鑫,刘志胜,候立朝,阳丹才让[2]（2016）在《泡球蚴囊液对大鼠肝脏星状细胞增殖的影响》一文中研究指出目的探讨泡球蚴囊液对大鼠肝脏星状细胞(HSC-T6)增殖的影响及机制。方法采用不同浓度(0.00~0.90 mg/m L)泡球蚴囊液干预HSC-T6细胞24 h后,在倒置显微镜观察HSC-T6细胞形态变化,利用CCK-8法检测并绘制HSC-T6细胞的生长曲线,采用流式细胞仪检测并分析HSC-T6细胞在不同浓度的泡球蚴囊液培养条件下细胞周期的改变。结果 1 HSC-T6细胞在不同浓度(0.00~0.90 mg/m L)泡球蚴囊液干预24 h后,部分HSC-T6细胞收缩成长梭形,细胞生出许多细长的伪足。2当泡球蚴囊液浓度<0.05 mg/m L时,囊液干预对细胞增殖活性无明显影响(P>0.05),而当泡球蚴囊液浓度>0.05 mg/m L时,随着作用浓度的增加,细胞增殖活性显着增强(P<0.05)。3流式细胞仪检测结果显示,在上述浓度的泡球蚴囊液干预下,处于静止期/DNA合成前期(G0/G1期)的HSC-T6细胞减少(P<0.05),处于DNA合成期(S期)的HSC-T6细胞数量增加(P<0.05),而处于DNA合成后期、细胞分裂期(G2/M期)的细胞数量显着增多(P<0.05)。结论泡球蚴囊液对体外培养大鼠肝脏星状细胞增殖具有浓度依赖的促进作用,其具体机制可能涉及细胞周期调控。(本文来源于《中国普外基础与临床杂志》期刊2016年05期）
梁洪英,赵颖海,林春燕,李明勇,李蓉[3]（2015）在《肝脏星状细胞在肝细胞癌上皮间质转化中的作用及临床意义》一文中研究指出目的探讨肝星型细胞(Hepatic stellate cell,HSC)的表达与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系,并结合临床资料分析HSCs对原发性肝癌(primary hepatocelluar carcinoma,HCC)生物学行为的影响。方法通过免疫组织化学方法检测30例肝细胞癌癌组织及23例癌旁组织中的活化HSCs的特异性标记蛋白α-SMA及Twist,同时结合临床资料进行分析。结果肝细胞癌癌组织及癌旁组织中,α-SMA阳性表达率分别为60.0%和30.4%,组间差异有统计学意义(P<0.05);Twist阳性表达率分别为66.7%和39.1%,组间差异有统计学意义(P<0.05)。肝癌组中α-SMA和twist阳性表达组和阴性表达组之间的肿瘤分化程度和分期差异有统计学意义(P<0.05)。30例肝癌病理标本中,α-SMA与twist蛋白表达呈正相关(r=0.433,P<0.05)。结论 HSCs在HCC中高表达,对评估肝癌EMT及预后具有重要意义。(本文来源于《广东医学院学报》期刊2015年01期）
周鹏[4]（2013）在《肝脏星状细胞在肝细胞癌血管生成中的作用及其临床意义的研究》一文中研究指出目的：探讨肝脏星状细胞（hepatic stellate cell, HSC）在肝细胞癌中的表达及与肝细胞癌血管生成的相关性，分析HSC与肝细胞癌患者临床病理学指标及预后的关系。方法：随机选取安徽医科大学第一附属医院肝胆外科临床肝细胞癌标本库中2010年1月至2012年12月期间，施行肝细胞癌切除术患者标本50例，按标本选取部位分为肝细胞癌组和癌旁组，选取同期进行肝血管瘤切除术的手术标本中的正常肝组织标本8例作为阴性对照，通过免疫组织化学方法检测肝细胞癌癌组织及癌旁组织中的人平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)、血管内皮生长因子（vascularendothelial growth factor，VEGF）、CD-34的表达，结合临床及随访资料分析α-SMA与肝细胞癌血管生成指标之间的相关性及与临床病理参数和预后等的关系。所有资料均应用SPSS10.0统计软件包进行统计学处理。结果：肝癌组织中α-SMA、 VEGF、CD34均呈高表达状态，分别为（88%、72%、72.76±10.22），与癌旁组织及对照组比较具有统计学差异；α-SMA的表达与肝细胞癌血管生成指标（VEGF、MVD）之间具有相关性；按肝细胞癌组织中α-SMA表达阳性/阴性分组，各临床病理学指标中的是否合并癌栓，有无淋巴结转移，肿瘤包膜有无及肿瘤分化程度等四项指标在两组间存在显着性差异；α-SMA阳性组与阴性组间的肝细胞癌患者总体生存时间存在显着性差异，而无瘤生存时间无明显差异。结论：（1）HSCs在HCC中高表达，提示其与HCC的发生发展有关；（2）HSCs与HCC血管生成指标相关，提示其在HCC血管生成中发挥重要作用；（3）HSCs的表达可作为协助判断HCC生物学行为及预后的指标之一。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2013-03-01）
张荣涛,李向农[5]（2011）在《一种简便的大鼠肝脏星状细胞分离培养方法及鉴定》一文中研究指出目的探索简单经济的肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)分离培养方法,提高实验效率。方法取SD大鼠,行肝脏门静脉插管,用链酶蛋白酶、Ⅳ型胶原酶灌注,消化。细胞悬液经Percoll密度梯度离心液分离,台盼蓝染色鉴定细胞活性,Desmin抗体免疫组化鉴定纯度。结果 HSCs得率为(2.35±0.15)×107/每肝,细胞活率为(95.5±0.6)%,纯度为(92.4±1.5)%。结论该法有效简化了大鼠HSCs提取的方法,有利于原代大鼠HSCs的生物学研究。(本文来源于《中国肿瘤外科杂志》期刊2011年02期）
孙妩弋,桂双英,吴丽,王华,魏伟[6]（2010）在《芍芪多苷对肝纤维化大鼠肝脏星状细胞基质金属蛋白酶13及组织金属蛋白酶抑制因子1表达的影响》一文中研究指出目的:研究芍芪多苷(SQDG)对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠肝组织和转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的肝星状细胞(HSC)基质金属蛋白酶13(MMP-13)、组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)表达的影响,探讨SQDG抗肝纤维化作用的可能机制。方法:CCl4皮下注射建立大鼠肝纤维化模型,设立正常对照组、模型组、SQDG给药组(42.5,85,170 mg.kg-1)。放免法检测血清中I型胶原(C-I)水平;Masson染色对肝脏组织作病理检查;免疫组化法检测肝组织MMP-13,TIMP-1的表达。采用Western blot探讨SQDG体外对TGF-β1刺激的HSC MMP-13,TIMP-1及C-I表达的影响。结果:SQDG可显着降低纤维化大鼠血清中C-I含量;病理组织学检查发现,SQDG可降低化学性肝纤维化大鼠的纤维化程度,与模型组相比,纤维沉积、肝小叶的破坏等均有所减轻。免疫组化结果显示,SQDG(85,170 mg.kg-1)可显着升高肝纤维化大鼠肝脏局部MMP-13水平,降低TIMP-1水平。进一步研究发现,SQDG体外可明显抑制TGF-β1刺激的HSC-T6 TIMP-1表达,促进MMP-13的表达,同时降低C-I的表达水平。结论:SQDG可能通过调节肝纤维化大鼠肝组织MMP-13和TIMP-1的异常表达,促进HSCMMP-13的表达,抑制TIMP-1的表达,促进胶原降解而发挥抗肝纤维化的作用。(本文来源于《中国中药杂志》期刊2010年11期）
杨冬娣,刘金元[7]（2009）在《青蒿琥酯对肝纤维化小鼠肝脏星状细胞凋亡和增生的影响》一文中研究指出目的:探讨青蒿琥酯抗肝纤维化的可能机制。方法:采用四氯化碳致小鼠肝纤维化模型,利用免疫组化和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法对肝星状细胞的增生和凋亡基因进行检测。结果:青蒿琥酯高剂量组能明显降低PCNA的表达(P<0.01),确能促进凋亡基因的表达(P<0.01)。结论:青蒿琥酯对实验性肝纤维化具有明显的抑制作用,其机制可能是一方面通过抑制活化的肝星状细胞的增殖,另一方面通过调节凋亡基因的表达,进而减轻活化的肝星状细胞的增殖,恢复了凋亡和增殖的平衡态,从而起到抗肝纤维化的作用。(本文来源于《河南中医》期刊2009年05期）
李艳,侯毅鞠,张磊,韩超,赵龙[8]（2009）在《实验性大鼠肝脏星状细胞的培养》一文中研究指出目的完善大鼠肝星形细胞(HSC)的体外分离及培养方法,为肝纤维化的基础实验研究提供技术支持。方法选用Wistar大鼠经消化酶灌注肝脏后,用分离液分离HSC,通过观察其自发荧光及其显着特征性结构的脂肪染色、细胞免疫化学染色等方法鉴定。结果分离得到HSC,细胞得率为2×107/只,存活率为96%。结论通过本法成功分离及培养HSC,且方法经济、简便、稳定,有利于原代大鼠肝星状细胞的生物学研究。(本文来源于《吉林医药学院学报》期刊2009年01期）
杨毅,王宏伟,李玲,陆江阳[9]（2008）在《人肝脏间质树突状细胞的分布与形态学观察》一文中研究指出目的:观察人肝脏间质树突状细胞(DC)的形态、数量和分布特点,为进一步认识DC在肝脏免疫微环境中的构成特点提供依据。方法:运用光镜、电镜观察与免疫组化标记(CD11c、CD205、CD209)方法,观察研究人体肝脏间质DC的形态、数量和分布。结果:人肝脏间质DC超微形态具有特征性的胞质突起,细胞器不发达;CD11c标记DC的阳性率为(1.80±0.35)%,集中分布于肝汇管区、中央静脉旁和肝被膜下间质中;表达CD205和CD209的成熟DC含量较少,其阳性率分别为(1.33±0.21)%和(1.15±0.16)%,多位于肝汇管区血管周围。结论:间质DC是一种免疫前哨细胞,是肝脏免疫微环境的重要组成部分。(本文来源于《感染.炎症.修复》期刊2008年04期）
蒋智军,王伟林,梁廷波,沈岩,张珉[10]（2008）在《肝脏星状细胞在肝移植免疫耐受诱导机制中的作用》一文中研究指出目的揭示肝脏星状细胞(HSCs)是否为特异性免疫耐受细胞及其诱导肝脏移植免疫耐受的机制。方法建立大鼠肝脏移植耐受组(Lewis—DA)和排斥组(DA—Lewis)模型,每组5只移植大鼠,7天后取材提取移植大鼠HSCs并进行鉴定同时制备脾脏T淋巴细胞(TLCs),用流式细胞仪检测肝脏HSCs与TLCs共孵育后TLCs的凋亡,FCM检测肝脏HSCs表面FasL的表达,RT-PCR检测肝脏星状细胞FasL mRNA、B7-H1 mRNA和脾脏T淋巴细胞Fas mRNA水平变化,ELISA检测肝脏HSCs与脾脏TLCs共孵育后上清细胞因子IL-2、TNF-α、IL-10、TGF-β的变化。(本文来源于《2008年浙江省外科学术年会论文汇编》期刊2008-11-01）
人肝脏星状细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨泡球蚴囊液对大鼠肝脏星状细胞(HSC-T6)增殖的影响及机制。方法采用不同浓度(0.00~0.90 mg/m L)泡球蚴囊液干预HSC-T6细胞24 h后,在倒置显微镜观察HSC-T6细胞形态变化,利用CCK-8法检测并绘制HSC-T6细胞的生长曲线,采用流式细胞仪检测并分析HSC-T6细胞在不同浓度的泡球蚴囊液培养条件下细胞周期的改变。结果 1 HSC-T6细胞在不同浓度(0.00~0.90 mg/m L)泡球蚴囊液干预24 h后,部分HSC-T6细胞收缩成长梭形,细胞生出许多细长的伪足。2当泡球蚴囊液浓度<0.05 mg/m L时,囊液干预对细胞增殖活性无明显影响(P>0.05),而当泡球蚴囊液浓度>0.05 mg/m L时,随着作用浓度的增加,细胞增殖活性显着增强(P<0.05)。3流式细胞仪检测结果显示,在上述浓度的泡球蚴囊液干预下,处于静止期/DNA合成前期(G0/G1期)的HSC-T6细胞减少(P<0.05),处于DNA合成期(S期)的HSC-T6细胞数量增加(P<0.05),而处于DNA合成后期、细胞分裂期(G2/M期)的细胞数量显着增多(P<0.05)。结论泡球蚴囊液对体外培养大鼠肝脏星状细胞增殖具有浓度依赖的促进作用,其具体机制可能涉及细胞周期调控。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人肝脏星状细胞论文参考文献
[1].艾伟伦.肝刺激因子通过抑制肝脏星状细胞活化减轻肝脏纤维化的研究[D].首都医科大学.2017
[2].任利,王志鑫,刘志胜,候立朝,阳丹才让.泡球蚴囊液对大鼠肝脏星状细胞增殖的影响[J].中国普外基础与临床杂志.2016
[3].梁洪英,赵颖海,林春燕,李明勇,李蓉.肝脏星状细胞在肝细胞癌上皮间质转化中的作用及临床意义[J].广东医学院学报.2015
[4].周鹏.肝脏星状细胞在肝细胞癌血管生成中的作用及其临床意义的研究[D].安徽医科大学.2013
[5].张荣涛,李向农.一种简便的大鼠肝脏星状细胞分离培养方法及鉴定[J].中国肿瘤外科杂志.2011
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[8].李艳,侯毅鞠,张磊,韩超,赵龙.实验性大鼠肝脏星状细胞的培养[J].吉林医药学院学报.2009
[9].杨毅,王宏伟,李玲,陆江阳.人肝脏间质树突状细胞的分布与形态学观察[J].感染.炎症.修复.2008
[10].蒋智军,王伟林,梁廷波,沈岩,张珉.肝脏星状细胞在肝移植免疫耐受诱导机制中的作用[C].2008年浙江省外科学术年会论文汇编.2008