导读:本文包含了新生内膜过度增生论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:胰岛素,动脉旁路移植术,静脉移植物,凋亡
新生内膜过度增生论文文献综述
周宁[1]（2009）在《胰岛素对犬自体移植静脉的保护及其新生内膜过度增生抑制的研究》一文中研究指出研究背景近年来,随着社会经济发展、人民生活水平提高、就业压力增大、生活方式改变、人口急速老龄化和易患因素发病率的逐年上升,心血管疾病已成为危害人们健康的“第一杀手”。由于科技进步,针对心血管疾病的药物和介入治疗取得了长足进步,然而,冠状动脉旁路移植术(CABG)和周围动脉旁路移植术在复杂心血管病变的处理上仍有着不可替代的作用。自体静脉移植物,尤其是大隐静脉移植物(SVG),由于方便取材和管段较长,是动脉旁路移植术中最常用移植物。但是,较之乳内动脉移植物(IMAG),较低的通畅率严重降低了SVG的临床应用价值。因此,如何提高SVG通畅率,仍是众多学者研究的热点。越来越多的临床证据表明极化液(GIK)/胰岛素应用可明显改善CABG术后糖尿病和非糖尿病患者的预后,而且,减少CABG术后糖尿病患者缺血性心血管事件的发生率。我们的前期实验发现GIK不仅对缺血/再灌注(I/R)心肌细胞有保护作用,而且对I/R冠脉内皮细胞具有显着的抗凋亡作用,而其中胰岛素起着关键作用,它是通过PI3K/Akt-eNOS-NO发挥对上述细胞的保护作用。研究发现动脉旁路移植术后早期,移植静脉的内皮细胞(ECs)和血管平滑肌细胞(VSMCs)的凋亡与早中期SVG的失败关系密切:ECs凋亡是SVG附壁血栓形成、新生内膜增生的始动因素,而VSMCs大量凋亡又可促进别的VSMCs增殖和迁移,导致新生内膜过度增生。有学者发现在非胰岛素抵抗状态下,应用胰岛素可抑制大鼠球囊损伤后颈动脉新生内膜过度增生。然而,极化液/胰岛素对I/R移植静脉有何影响,尤其是对I/R移植静脉ECs和VSMCs是否有直接的保护作用及其机制尚不明确。另外有学者发现较持久的胰岛素刺激可促进ECs中eNOS表达的上调,我们推测由此带来的血管内皮功能改善、一氧化氮(NO)释放增加,对动脉血管损伤后新生内膜过度增生有着抑制作用。但胰岛素应用后对在体的SVG新生内膜过度增生有无抑制效应尚未见报道。研究目的1.明确给予胰岛素治疗是否可以减轻在体I/R后移植静脉内皮细胞和血管平滑肌细胞的凋亡程度;2.探讨胰岛素对抗移植静脉ECs和VSMCs凋亡的信号转导机制,尤其是胰岛素与移植静脉PI3K/Akt信号转导途径之间的关系;3.观察动脉旁路移植术后短期内应用胰岛素是否对移植静脉新生内膜过度增生有抑制作用,并探讨可能机制。材料和方法杂种犬40只,雌雄不拘,体重12 ~ 15 kg,随机分为5组,每组8只,以3%戊巴比妥钠静脉注射麻醉后,行颈部单侧倒置颈外静脉-颈总动脉端端吻合模拟动脉旁路移植术模型,分别于移植静脉再灌注前5分钟直到之后4小时,给予以下4种液体以2 mL/kg/h静脉输注:(1)假手术组(Sham:0.9% NaCL);(2)生理盐水(Vehicle: 0.9%氯化钠);(3) GK(葡萄糖-钾液:葡萄糖: 250g/L,氯化钾:80 mmol/L);(4) GIK(葡萄糖: 250g/L,胰岛素: 60U/L,氯化钾:80 mmol/L);(5) GIK+Wort (Wortmannin,2.0μg/kg/h,再灌注前5 min开始,持续1 h静脉输注)。之后取出颈外静脉移植物行TUNEL凋亡染色和激活的caspase-3免疫组化染色,用Western blot法检测颈外静脉移植物中caspase-3活性、Akt和eNOS磷酸化水平。在另一组实验中,杂种犬16只,随机分为2组,每组8只,建立同样模型,分别于移植静脉再灌注前5分钟直到之后4小时,给予以下2种液体以2 mL/kg/h静脉输注:(1)生理盐水;(2) GIK;之后分别给予生理盐水0.5 mL和胰岛素4 U (并按此分为两组),2次/日,皮下注射,连续1月,于术后29天,腹腔注射BrdU(50 mg/kg),24小时后处死犬,取出静脉移植物和正常颈外静脉,分别行BrdU掺入和eNOS免疫组化染色,用Western blot法检测其中α-平滑肌肌动蛋白表达状况,用Verhoeff-van Gieson染色法衡量新生内膜增生程度。实验结果第一部分实验:1.术后短期内移植静脉中存在ECs和VSMCs的大量凋亡;2. GK处理可加重ECs和VSMCs的凋亡(与生理盐水组比较,P < 0.05 );3. GIK可显着降低I/R后移植静脉ECs和VSMCs的凋亡指数(分别与生理盐水组和GK组比较,P < 0.001)和中/内膜caspase-3的激活程度(分别与生理盐水组和GK组比较,P < 0.01);4. GK处理后明显抑制移植静脉中Akt和eNOS的磷酸化,并刺激caspase-3的活化(与生理盐水组比较,P < 0.05),GIK处理后则明显增强了Akt和eNOS的磷酸化(分别与生理盐水组和GK组比较,P < 0.001),并明显抑制caspase-3的活化(P < 0.05);加用Wortmannin后,GIK的这种效应被明显消除;第二部分实验:1.在术后1月,应用胰岛素可明显促进犬移植静脉中α-平滑肌肌动蛋白的表达(分别与犬正常颈外静脉和生理盐水组比较,P < 0.001);2.应用胰岛素后明显抑制犬移植静脉中/内膜的细胞增殖(细胞增殖指数11.15%±0.93%与生理盐水组的25.55%±2.02%比较,P < 0.001);3.应用胰岛素后明显促进犬移植静脉内膜eNOS的表达(分别与正常静脉组和生理盐水组比较,P < 0.05);4.胰岛素应用可减轻移植静脉新生内膜增生程度(中/内膜厚度136.51±8.97μm,与生理盐水组的185.92±8.34μm比较, P < 0.05)。结论1.再灌注期间高血糖症损伤自体移植静脉,应用胰岛素可有效保护自体移植静脉;2.胰岛素保护自体移植静脉的效应是通过PI3K-Akt信号转导途径抑制I/R后ECs和VSMCs凋亡来实现的;3.术后短期内连续应用胰岛素治疗可有效抑制自体移植静脉新生内膜过度增生;4.胰岛素减轻犬自体移植静脉新生内膜过度增生的效应可能有赖于抑制VSMCs的增殖和血管内皮功能的改善。(本文来源于《第四军医大学》期刊2009-11-01）
张坡[2]（2007）在《辛伐他汀抑制损伤血管新生内膜过度增生及促进再内皮化的研究》一文中研究指出研究背景内皮细胞损伤和功能不全是血管损伤后有害修复、动脉粥样硬化的始动因素和根本原因,平滑肌细胞增生迁移是其继发因素和外在表现。修复损伤血管的关键在于抑制平滑肌细胞过度增生与促进损伤内皮重建。既往关于增殖性血管疾病治疗的研究热点主要集中于平滑肌细胞增生机制的探讨及如何有效抑制平滑肌细胞过度增生。雷帕霉素和紫杉醇药物洗脱支架是临床防治损伤血管过度的有效手段,但往往会干扰内皮修复,引起损伤血管段再内皮化不全或延迟及迟发性支架内血栓形成。因此,筛选选择性抑制新生内膜增生不影响甚至损伤血管再内皮化的洗脱支架包被药物是新一代洗脱支架的研制方向。既往认为,参与损伤血管修复的细胞成分是血管壁平滑肌细胞和内皮细胞。近来研究发现,骨髓中存在血管祖细胞——平滑肌祖细胞(smooth muscle progenitor cells, SPCs)和内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)。血管损伤后这些细胞可动员入外周血,归巢于损伤血管段,平滑肌祖细胞分化为平滑肌细胞,促进新生内膜生成,同时可导致管腔狭窄;内皮祖细胞分化为内皮细胞,重建管腔内皮细胞单层,抑制损伤血管有害重构。最近动物实验和临床研究均证实新生内膜中约一半以上平滑肌细胞是骨髓来源的,约25%内皮细胞是内皮祖细胞来源的。说明骨髓源平滑肌祖细胞和内皮祖细胞是参与损伤血管修复的重要细胞源。因此,抑制平滑肌祖细胞增殖可减少血管损伤后新生内膜过度增生,促进内皮祖细胞增殖,有助于损伤血管再内皮化,抑制新内膜发展。他汀类药物具有良好的调脂作用,能够降低低密度脂蛋白胆固醇和升高高密度脂蛋白胆固醇。同时,在胆固醇水平相当的情况下,他汀类药物能显着降低心血管事件的发生率。此外,他汀类药物还具有抑制血小板聚集和血管中膜平滑肌细胞增殖,改善内皮功能,抑制炎症反应及增加斑块稳定性作用。新近研究显示他汀类药物能增加内皮祖细胞数量、改善内皮祖细胞功能。他汀类药物的这些生物学效应提示其有可能成为理想的第二代洗脱支架药物。由于损伤位点有效药物浓度过低,临床口服他汀类药物并不能抑制支架内再狭窄。局部用药有靶区有效血药浓度高、作用时间长和全身毒性低优点。尚不清楚局部应用他汀类药物能否有效抑制新生内膜增生,同时加速损伤区再内皮化。研究目的:1.观察临床广泛应用的洗脱支架包被药物雷帕霉素对内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响;2.观察辛伐他汀对血管内皮细胞、平滑肌细胞、内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响。3.观察辛伐他汀对平滑肌细胞表达平滑肌祖细胞趋化因子SDF-1α的影响;4.建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,观察局部应用辛伐他汀能否抑制损伤血管新生内膜过度增生并促进损伤血管再内皮化,为应用他汀类药物包被洗脱支架提供实验依据。实验方法1.观察雷帕霉素对内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响:采用密度梯度离心法从大鼠骨髓获取单个核细胞,分别重悬于平滑肌祖细胞和内皮祖细胞培养基中,接种在纤维连接素包被培养板,加入不同浓度雷帕霉素(0,0.01,0.1,1,10,100 ng/ml),培养12天后,α-SMA和CD34免疫荧光染色鉴定骨髓源性平滑肌祖细胞,荧光显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和Di I-acLDL双染阳性细胞为正在分化的内皮祖细胞,并在倒置荧光显微镜下计数。收集原代培养8天贴壁细胞,分别加入不同浓度雷帕霉素(0,0.1,1,10,100,200 ng/ml)培养0、12、24、48、96 h。然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验观察内皮祖细胞和平滑肌祖细胞的增殖、迁移和黏附能力。2.观察辛伐他汀对血管内皮细胞、平滑肌细胞、内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响:分别采用酶消化法和组织块法分离培养大鼠血管内皮细胞和平滑肌细胞,加入不同浓度辛伐他汀(0,0. 01,0.1,1,10μmol/L)培养0、6、12、24、48 h,然后分别采用3H-TdR掺入法、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验观察内皮细胞和平滑肌细胞的增殖、迁移能力。采用前述方法分离培养内皮祖细胞和平滑肌祖细胞,将其接种在纤维连接素包被培养板,加入不同浓度辛伐他汀(0,0. 01,0.1,1,10μmol/L),培养8 d,前述方法鉴定内皮祖细胞和平滑肌祖细胞,倒置荧光显微镜下计数。收集原代培养8 d的内皮祖细胞和平滑肌祖细胞,分别加入不同浓度辛伐他汀(0,0. 01,0.1,1,10μmol/L)培养0、6、12、24、48 h。然后分别采用3H-TdR掺入法、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验观察内皮祖细胞和平滑肌祖细胞的增殖、迁移和黏附能力。Western blot检测不同浓度辛伐他汀(0,0. 01,0.1,1,10μmol/L)作用24小时对内皮细胞、平滑肌细胞、内皮祖细胞和平滑肌祖细胞周期抑制蛋白P27表达的影响。3.观察辛伐他汀对平滑肌细胞表达平滑肌祖细胞趋化因子SDF-1α的影响:不同浓度辛伐他汀(0,0. 01,0.1,1,10μmol/L)干预平滑肌细胞24 h,1μmol/L辛伐他汀干预平滑肌细胞6～48 h ,RT-PCR检测SDF-1αmRNA表达。4.局部应用辛伐他汀对损伤血管新生内膜过度增生和再内皮化影响:建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,将400μg辛伐他汀溶于50μl F-127基质胶中,加在颈动脉外膜区域模拟洗脱支架。2周后,处死动物,取目标血管段,固定,石蜡包埋切片,HE染色观察新生内膜厚度,vWF染色观察损伤血管再内皮化程度。主要结果1.雷帕霉素对内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响:成功分离培养骨髓源内皮祖细胞和平滑肌祖细胞。内皮祖细胞vWF染色阳性,UEA-Ⅰ和DiLDL双染色阳性,可见梭形细胞首尾相连形成线状结构。平滑肌祖细胞α-SMA、CD34染色阳性。雷帕霉素浓度依赖性抑制骨髓单个核细胞向内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化。0.1 ng/ml的雷帕霉素作用12天,分化EPC数量减少59.3±5.8%(n=5,P<0.01),平滑肌祖细胞数量减少70.5±34.5%(n=5,P<0.01)。雷帕霉素浓度和时间依赖性抑制内皮祖细胞和平滑肌祖细胞增殖。1 ng/ml作用24 h显着抑制EPC (1 ng/ml雷帕霉素组与对照组之比为0.418±0.018 vs 0.580±0.034,n=5,P<0.01)和SPC(1 ng/ml雷帕霉素组与对照组之比为0.476±0.016 vs 0.687±0.043,n=5,P<0.01)增殖。1 ng/ml雷帕霉素作用12 h对EPC和SPC增殖无明显影响(n=5,P>0.05)。0.1 ng/ml雷帕霉素对EPC和SPC增殖影响不明显(n=5,P>0.05)。雷帕霉素也浓度依赖性抑制EPC和SPC迁移和黏附能力。2.辛伐他汀对血管内皮细胞、平滑肌细胞、内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响:辛伐他汀浓度和时间依赖性抑制平滑肌细胞增殖和迁移。0.01μmol/L辛伐他汀即可抑制平滑肌细胞增殖(0.01μmol/L辛伐他汀组与对照组之比为5647±268 vs 6038±218,n=5,P<0.05)和迁移(0.01μmol/L辛伐他汀组与对照组之比为41±3 vs 45±3,n=5,P<0.05)。0.01～10μmol/L的辛伐他汀不影响内皮细胞增殖(10μmol/L辛伐他汀组与对照组之比为4310±132 vs 4321±133,n=5,P>0.05)和迁移(10μmol/L辛伐他汀组与对照组之比为35±5 vs 37±5,n=5,P>0.05)。辛伐他汀浓度依赖性抑制骨髓单个核细胞向平滑肌祖细胞分化,促进其向内皮祖细胞分化。1μmol/L辛伐他汀作用24小时分化平滑肌祖细胞减少62.1±3.5%(1μmol/L辛伐他汀与对照组之比为32±5 vs 85±4,n=5,P<0.01),内皮祖细胞增加1.2±0.1倍(1μmol/L辛伐他汀与对照组之比为87±5 vs 39±4,n=5,P<0.01)。辛伐他汀浓度和时间依赖性促进内皮祖细胞增殖,最大作用剂量1.0μmol/ L,24 h达作用高峰。浓度和时间依赖性抑制平滑肌祖细胞增殖,1.0μmol/ L辛伐他汀作用24小时,内皮祖细胞数量增加2.2±0.1倍(1μmol/L辛伐他汀与对照组之比为3762±138 vs 1249±146,n=5,P<0.01),平滑肌祖细胞数量减少62.1±5.6%(1μmol/L辛伐他汀与对照组之比为1962±145 vs 4070±184,n=5,P<0.01)。辛伐他汀也抑制平滑肌祖细胞迁移和黏附,促进内皮祖细胞迁移和黏附。辛伐他汀浓度依赖性促进平滑肌细胞和平滑肌祖细胞周期抑制蛋白P27表达,抑制内皮祖细胞P27表达,不影响内皮细胞P27表达。3.辛伐他汀对平滑肌细胞表达平滑肌祖细胞趋化因子SDF-1α的影响:辛伐他汀浓度和时间依赖性抑制平滑肌细胞SDF-1αmRNA表达。4.局部应用辛伐他汀对大鼠损伤血管新生内膜过度增生和再内皮化影响:局部应用辛伐他汀抑制大鼠损伤颈动脉新生内皮过度增生,对照组与辛伐他汀组新生内膜面积之比为0.58±0.13 mm~2 vs 0.27±0.12 mm~2 (n=6,P<0.01),辛伐他汀组内膜/中膜比减少(对照组与辛伐他汀组之比为1.95±0.27 vs 0.97±0.24,n=6,P<0.01)。内皮细胞vWF免疫组化染色未观察到对照组和辛伐他汀组再内皮化差异。全文结论1.雷帕霉素时间和浓度依赖性抑制骨髓源平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附;雷帕霉素也减少骨髓源内皮祖细胞数量和抑制其功能。寻找新的洗脱支架药物需考虑其对平滑肌祖细胞和内皮祖细胞的影响。2.辛伐他汀选择性促进骨髓单个核细胞向内皮祖细胞分化,促进内皮祖细胞增殖、迁移和黏附,抑制其向平滑肌祖细胞分化。抑制平滑肌细胞和平滑肌祖细胞增殖、迁移和黏附,不影响内皮细胞增殖和迁移。3.辛伐他汀浓度和时间依赖性抑制平滑肌细胞SDF-1αmRNA表达,间接抑制平滑肌祖细胞参与的新生内膜增生。4.局部应用辛伐他汀能有效抑制损伤动脉新内膜过度增生,不影响损伤血管段再内皮化。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2007-05-01）
KanedaH.,Koizumi,T.,Ako,J.,P.J.,Fitzgerald,任付先[3]（2006）在《血管内超声病变特征对西罗莫司洗脱支架置入术后新生内膜过度增生的影响》一文中研究指出The effect of lesion characteristics on neointimal hyperplasia after sirolimus-eluting stent implantation was examined in 45 patients who underwent successful preinterventional intravascular ultrasound. There were no differences in neointimal hyperplasia between the moderate/severe calcified lesion group(calcium arc >120° ) and the non/mild calcified lesion group or between the positive vessel remodeling group(external elastic membrane area at the minimal lumen area site larger than that at the proximal reference site) and negative vessel remodeling group. No correlation between preinterventional plaque burden and neointimal hyperplasia was found. In patients who have coronary artery disease, sirolimus-eluting stents continue to demonstrate striking suppression of neointimal proliferation, irrespective of lesion characteristics previously associated with greater restenotic risk.(本文来源于《世界核心医学期刊文摘(心脏病学分册)》期刊2006年03期）
章希炜,杨宏宇,陈国玉,卢辉俊,高志伟[4]（2005）在《~(32)P球囊内放射治疗预防动脉损伤后新生内膜过度增生》一文中研究指出目的:选用家兔颈动脉球囊损伤模型观察放射性32P液体球囊血管内放射治疗对损伤后新生内膜过度增生的抑制作用。方法:健康家兔40只制作颈动脉球囊损伤模型,随机分成4组:10、20和40GY放射剂量治疗组和对照组。分别于术后3、7、14、28和56天处死动物,取颈动脉标本HE染色、原位标记凋亡细胞(TUNEL)和增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色,应用光学显微镜和计算机图像分析系统对切片进行图像分析,计算动脉中膜血管平滑肌细胞凋亡率、PCNA阳性率、内膜和中膜厚度及面积、残余管腔面积。结果:球囊损伤后动脉中膜平滑肌细胞开始增殖,并向内膜下迁移,其凋亡率和PCNA细胞阳性率均在伤后7天达到高峰。各治疗组各时间段血管平滑肌细胞凋亡率高于对照组(P<0.01),PCNA细胞阳性率低于对照组(P<0.01),20GY和40GY组相似,但都优于10GY组(P<0.01);伤后28天始血管内膜和中膜增厚,面积增加,残余管腔面积缩小,各治疗组伤后28天始血管内膜、中膜增厚面积增加和残余管腔面积缩小明显改善(P<0.01),20GY和40GY组相似,但都优于10GY组(P<0.01)。结论:放射性32P液体球囊血管内放射治疗可以明显抑制球囊损伤后动脉血管壁平滑肌细胞的增殖和迁移,减少新生内膜过度增生,预防管腔狭窄。(本文来源于《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊2005年12期）
许林锋,吴裕丹,Yamamoto,Itaru,冯敢生[5]（2001）在《~(192)Ir高线量率血管腔内照射对抑制兔血管平滑肌细胞增殖及新生内膜过度增生的研究》一文中研究指出目的 研究192 Ir高线量率血管腔内照射对用切割球囊导管行经皮血管腔内成形术(PTA)后的日本白兔髂动脉平滑肌细胞增殖抑制的经时反应和效果。方法 2 0只日本白兔经左侧颈总动脉放置切割球囊导管行髂动脉PTA术 ,随机于一侧髂动脉施行 12Gy剂量的血管腔内照射 ,非照射侧作为对照侧。实验动物于术后 1、2、3、4、8及 12周处死。根据新生内膜的形成情况 ,血管成形术后接受血管腔内照射的血管段按时间分为 3组 :即 1周组 5只、2～ 4周组 9只、8～ 12周组 6只。随后对标本进行了组织病理、形态学测量和免疫组织化学分析。结果 1周时 ,与照射侧比较 ,对照侧血管段创口修复处可见明显的新生内膜增生 ,新生内膜中抗增殖细胞核抗原 (PCNA)阳性细胞率呈一峰值 ;2～ 4周期间 ,与对照侧比较 ,照射侧血管段新生内膜增生明显减弱 (P <0 .0 1) ,新生内膜中PCNA阳性细胞率较对照侧低 ,差异有显着性意义 (P <0 .0 1) ;8～ 12周 ,照射侧血管段增生的新生内膜较对照侧仍处较低水平 ,新生内膜中PCNA阳性细胞率约低于 1%。经抗平滑肌细胞α胶原免疫组织化学染色 ,证实新生内膜中主要为平滑肌细胞。结论 由照射所致的新生内膜增生过程的抑制作用从开始时即已启动。 12Gy的192 Ir高线量率照射能有效地抑制用切割球囊导管损(本文来源于《中华放射学杂志》期刊2001年11期）
新生内膜过度增生论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究背景内皮细胞损伤和功能不全是血管损伤后有害修复、动脉粥样硬化的始动因素和根本原因,平滑肌细胞增生迁移是其继发因素和外在表现。修复损伤血管的关键在于抑制平滑肌细胞过度增生与促进损伤内皮重建。既往关于增殖性血管疾病治疗的研究热点主要集中于平滑肌细胞增生机制的探讨及如何有效抑制平滑肌细胞过度增生。雷帕霉素和紫杉醇药物洗脱支架是临床防治损伤血管过度的有效手段,但往往会干扰内皮修复,引起损伤血管段再内皮化不全或延迟及迟发性支架内血栓形成。因此,筛选选择性抑制新生内膜增生不影响甚至损伤血管再内皮化的洗脱支架包被药物是新一代洗脱支架的研制方向。既往认为,参与损伤血管修复的细胞成分是血管壁平滑肌细胞和内皮细胞。近来研究发现,骨髓中存在血管祖细胞——平滑肌祖细胞(smooth muscle progenitor cells, SPCs)和内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)。血管损伤后这些细胞可动员入外周血,归巢于损伤血管段,平滑肌祖细胞分化为平滑肌细胞,促进新生内膜生成,同时可导致管腔狭窄;内皮祖细胞分化为内皮细胞,重建管腔内皮细胞单层,抑制损伤血管有害重构。最近动物实验和临床研究均证实新生内膜中约一半以上平滑肌细胞是骨髓来源的,约25%内皮细胞是内皮祖细胞来源的。说明骨髓源平滑肌祖细胞和内皮祖细胞是参与损伤血管修复的重要细胞源。因此,抑制平滑肌祖细胞增殖可减少血管损伤后新生内膜过度增生,促进内皮祖细胞增殖,有助于损伤血管再内皮化,抑制新内膜发展。他汀类药物具有良好的调脂作用,能够降低低密度脂蛋白胆固醇和升高高密度脂蛋白胆固醇。同时,在胆固醇水平相当的情况下,他汀类药物能显着降低心血管事件的发生率。此外,他汀类药物还具有抑制血小板聚集和血管中膜平滑肌细胞增殖,改善内皮功能,抑制炎症反应及增加斑块稳定性作用。新近研究显示他汀类药物能增加内皮祖细胞数量、改善内皮祖细胞功能。他汀类药物的这些生物学效应提示其有可能成为理想的第二代洗脱支架药物。由于损伤位点有效药物浓度过低,临床口服他汀类药物并不能抑制支架内再狭窄。局部用药有靶区有效血药浓度高、作用时间长和全身毒性低优点。尚不清楚局部应用他汀类药物能否有效抑制新生内膜增生,同时加速损伤区再内皮化。研究目的:1.观察临床广泛应用的洗脱支架包被药物雷帕霉素对内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响;2.观察辛伐他汀对血管内皮细胞、平滑肌细胞、内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响。3.观察辛伐他汀对平滑肌细胞表达平滑肌祖细胞趋化因子SDF-1α的影响;4.建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,观察局部应用辛伐他汀能否抑制损伤血管新生内膜过度增生并促进损伤血管再内皮化,为应用他汀类药物包被洗脱支架提供实验依据。实验方法1.观察雷帕霉素对内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响:采用密度梯度离心法从大鼠骨髓获取单个核细胞,分别重悬于平滑肌祖细胞和内皮祖细胞培养基中,接种在纤维连接素包被培养板,加入不同浓度雷帕霉素(0,0.01,0.1,1,10,100 ng/ml),培养12天后,α-SMA和CD34免疫荧光染色鉴定骨髓源性平滑肌祖细胞,荧光显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和Di I-acLDL双染阳性细胞为正在分化的内皮祖细胞,并在倒置荧光显微镜下计数。收集原代培养8天贴壁细胞,分别加入不同浓度雷帕霉素(0,0.1,1,10,100,200 ng/ml)培养0、12、24、48、96 h。然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验观察内皮祖细胞和平滑肌祖细胞的增殖、迁移和黏附能力。2.观察辛伐他汀对血管内皮细胞、平滑肌细胞、内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响:分别采用酶消化法和组织块法分离培养大鼠血管内皮细胞和平滑肌细胞,加入不同浓度辛伐他汀(0,0. 01,0.1,1,10μmol/L)培养0、6、12、24、48 h,然后分别采用3H-TdR掺入法、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验观察内皮细胞和平滑肌细胞的增殖、迁移能力。采用前述方法分离培养内皮祖细胞和平滑肌祖细胞,将其接种在纤维连接素包被培养板,加入不同浓度辛伐他汀(0,0. 01,0.1,1,10μmol/L),培养8 d,前述方法鉴定内皮祖细胞和平滑肌祖细胞,倒置荧光显微镜下计数。收集原代培养8 d的内皮祖细胞和平滑肌祖细胞,分别加入不同浓度辛伐他汀(0,0. 01,0.1,1,10μmol/L)培养0、6、12、24、48 h。然后分别采用3H-TdR掺入法、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验观察内皮祖细胞和平滑肌祖细胞的增殖、迁移和黏附能力。Western blot检测不同浓度辛伐他汀(0,0. 01,0.1,1,10μmol/L)作用24小时对内皮细胞、平滑肌细胞、内皮祖细胞和平滑肌祖细胞周期抑制蛋白P27表达的影响。3.观察辛伐他汀对平滑肌细胞表达平滑肌祖细胞趋化因子SDF-1α的影响:不同浓度辛伐他汀(0,0. 01,0.1,1,10μmol/L)干预平滑肌细胞24 h,1μmol/L辛伐他汀干预平滑肌细胞6～48 h ,RT-PCR检测SDF-1αmRNA表达。4.局部应用辛伐他汀对损伤血管新生内膜过度增生和再内皮化影响:建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,将400μg辛伐他汀溶于50μl F-127基质胶中,加在颈动脉外膜区域模拟洗脱支架。2周后,处死动物,取目标血管段,固定,石蜡包埋切片,HE染色观察新生内膜厚度,vWF染色观察损伤血管再内皮化程度。主要结果1.雷帕霉素对内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响:成功分离培养骨髓源内皮祖细胞和平滑肌祖细胞。内皮祖细胞vWF染色阳性,UEA-Ⅰ和DiLDL双染色阳性,可见梭形细胞首尾相连形成线状结构。平滑肌祖细胞α-SMA、CD34染色阳性。雷帕霉素浓度依赖性抑制骨髓单个核细胞向内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化。0.1 ng/ml的雷帕霉素作用12天,分化EPC数量减少59.3±5.8%(n=5,P<0.01),平滑肌祖细胞数量减少70.5±34.5%(n=5,P<0.01)。雷帕霉素浓度和时间依赖性抑制内皮祖细胞和平滑肌祖细胞增殖。1 ng/ml作用24 h显着抑制EPC (1 ng/ml雷帕霉素组与对照组之比为0.418±0.018 vs 0.580±0.034,n=5,P<0.01)和SPC(1 ng/ml雷帕霉素组与对照组之比为0.476±0.016 vs 0.687±0.043,n=5,P<0.01)增殖。1 ng/ml雷帕霉素作用12 h对EPC和SPC增殖无明显影响(n=5,P>0.05)。0.1 ng/ml雷帕霉素对EPC和SPC增殖影响不明显(n=5,P>0.05)。雷帕霉素也浓度依赖性抑制EPC和SPC迁移和黏附能力。2.辛伐他汀对血管内皮细胞、平滑肌细胞、内皮祖细胞和平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附的影响:辛伐他汀浓度和时间依赖性抑制平滑肌细胞增殖和迁移。0.01μmol/L辛伐他汀即可抑制平滑肌细胞增殖(0.01μmol/L辛伐他汀组与对照组之比为5647±268 vs 6038±218,n=5,P<0.05)和迁移(0.01μmol/L辛伐他汀组与对照组之比为41±3 vs 45±3,n=5,P<0.05)。0.01～10μmol/L的辛伐他汀不影响内皮细胞增殖(10μmol/L辛伐他汀组与对照组之比为4310±132 vs 4321±133,n=5,P>0.05)和迁移(10μmol/L辛伐他汀组与对照组之比为35±5 vs 37±5,n=5,P>0.05)。辛伐他汀浓度依赖性抑制骨髓单个核细胞向平滑肌祖细胞分化,促进其向内皮祖细胞分化。1μmol/L辛伐他汀作用24小时分化平滑肌祖细胞减少62.1±3.5%(1μmol/L辛伐他汀与对照组之比为32±5 vs 85±4,n=5,P<0.01),内皮祖细胞增加1.2±0.1倍(1μmol/L辛伐他汀与对照组之比为87±5 vs 39±4,n=5,P<0.01)。辛伐他汀浓度和时间依赖性促进内皮祖细胞增殖,最大作用剂量1.0μmol/ L,24 h达作用高峰。浓度和时间依赖性抑制平滑肌祖细胞增殖,1.0μmol/ L辛伐他汀作用24小时,内皮祖细胞数量增加2.2±0.1倍(1μmol/L辛伐他汀与对照组之比为3762±138 vs 1249±146,n=5,P<0.01),平滑肌祖细胞数量减少62.1±5.6%(1μmol/L辛伐他汀与对照组之比为1962±145 vs 4070±184,n=5,P<0.01)。辛伐他汀也抑制平滑肌祖细胞迁移和黏附,促进内皮祖细胞迁移和黏附。辛伐他汀浓度依赖性促进平滑肌细胞和平滑肌祖细胞周期抑制蛋白P27表达,抑制内皮祖细胞P27表达,不影响内皮细胞P27表达。3.辛伐他汀对平滑肌细胞表达平滑肌祖细胞趋化因子SDF-1α的影响:辛伐他汀浓度和时间依赖性抑制平滑肌细胞SDF-1αmRNA表达。4.局部应用辛伐他汀对大鼠损伤血管新生内膜过度增生和再内皮化影响:局部应用辛伐他汀抑制大鼠损伤颈动脉新生内皮过度增生,对照组与辛伐他汀组新生内膜面积之比为0.58±0.13 mm~2 vs 0.27±0.12 mm~2 (n=6,P<0.01),辛伐他汀组内膜/中膜比减少(对照组与辛伐他汀组之比为1.95±0.27 vs 0.97±0.24,n=6,P<0.01)。内皮细胞vWF免疫组化染色未观察到对照组和辛伐他汀组再内皮化差异。全文结论1.雷帕霉素时间和浓度依赖性抑制骨髓源平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移和黏附;雷帕霉素也减少骨髓源内皮祖细胞数量和抑制其功能。寻找新的洗脱支架药物需考虑其对平滑肌祖细胞和内皮祖细胞的影响。2.辛伐他汀选择性促进骨髓单个核细胞向内皮祖细胞分化,促进内皮祖细胞增殖、迁移和黏附,抑制其向平滑肌祖细胞分化。抑制平滑肌细胞和平滑肌祖细胞增殖、迁移和黏附,不影响内皮细胞增殖和迁移。3.辛伐他汀浓度和时间依赖性抑制平滑肌细胞SDF-1αmRNA表达,间接抑制平滑肌祖细胞参与的新生内膜增生。4.局部应用辛伐他汀能有效抑制损伤动脉新内膜过度增生,不影响损伤血管段再内皮化。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
新生内膜过度增生论文参考文献
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