导读:本文包含了脱细胞脊髓支架论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:脱细胞支架,电针,脊髓,脑源性神经营养因子
脱细胞脊髓支架论文文献综述
郭雨佳,姜晶晶,李雅,付欣雅,孟德源[1]（2019）在《脱细胞支架联合电针对坐骨神经损伤大鼠脊髓前角运动神经元的保护作用》一文中研究指出目的 :探讨脱细胞支架(AS)联合电针对坐骨神经损伤(SNI)大鼠脊髓前角运动神经元的保护作用。方法 :首先制备AS,用于桥接损伤的神经。其次切除大鼠右侧坐骨神经10 mm,建立大鼠SNI模型。将SNI模型大鼠随机分为模型组(M)、AS桥接组(AS)和AS联合电针治疗组(AST)。模型组不予任何干预,AS组将支架桥接于两断端处,AST组在支架桥接术后2 d给予电针进行治疗,采用20 Hz、1 mA疏密波相间的电流,针刺穴位为环跳和阳陵泉,每次电针15 min,7 d 1个疗程。电针4周后,用电生理记录仪检测各组大鼠坐骨神经传导速度和波幅,用尼氏染色观察各组大鼠脊髓前角运动神经元的形态结构,用免疫印迹检测各组大鼠脊髓脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)蛋白的表达。结果 :AST组大鼠坐骨神经传导速度和波幅明显高于AS组;尼氏染色显示AST组脊髓前角运动神经元胞体形态较完整,尼氏体呈蓝紫色、斑块状,偶见部分核移位现象,尼氏体的数量明显多于AS组和模型组;免疫印迹结果显示AST组脊髓内BDNF和NGF蛋白表达量均高于AS组和模型组。结论 :脱细胞支架联合电针不仅可增加大鼠坐骨神经传导速度及波幅,还可阻止脊髓前角运动神经元中尼氏体肿胀与溶解,并可上调脊髓内BDNF和NGF蛋白的表达,对SNI所致的脊髓前角运动神经元损伤有保护作用。(本文来源于《解剖学杂志》期刊2019年01期）
郭昱[2]（2017）在《缓释VEGF脊髓脱细胞支架移植治疗大鼠脊髓半切损伤的血管重建作用》一文中研究指出【目的】:观察缓释血管内皮生长因子(VEGF)脊髓脱细胞支架移植入脊髓半切损伤大鼠后损伤段血管重建情况,初步评估VEGF在脊髓损伤后对脊髓神经功能恢复的作用。【方法】:1.分别采用乳化-溶剂挥发法制备空白纳米微球(B-NPs)、VEGF纳米微球(V-NPs),化学萃取法制备脊髓脱细胞支架,京尼平交联制备空白微球脊髓脱细胞支架(B-ASCS)、缓释VEGF脊髓脱细胞支架(V-ASCS)并使用扫描电镜观察其表征、评估其性能。2.SD大鼠半切模型的建立及实验分组。将48只大鼠随机分为单纯脊髓损伤组(对照组,12只)、假手术组(12只)、脊髓损伤后空白微球-脊髓脱细胞支架植入组(B-ASCS组,12只),脊髓损伤后缓释VEGF脊髓脱细胞支架植入组(V-ASCS组,12只)。3.各组大鼠分别于脊髓损伤后1周、4周、8周后行心脏灌注,Microfil造影剂行血管铸型,再使用高分辨率Micro CT扫描,重建损伤段微血管,定量分析血管参数动态变化观察再生情况、术后8周HE染色观察植入物与宿主整合情况、尼式体及髓鞘染色观察髓鞘及尼氏体再生及形态学分析,于3天、7天、14天、21天、28天、42天、49天、56天行BBB评分评价神经功能。【结果】1.通过乳化-溶剂挥发法可制备理想的V-NPs,其药物包封率高、缓释性良好;采用化学萃取法制备的ASCS程序简便,去除细胞较彻底,并能尽量保持细胞外基质的完整性,最大限度的保持其天然叁维空间立体结构。通过京尼平的交联改性作用,在对脱细胞支架改性的同时,成功地将缓释纳米微球结合到脱细胞支架上,形成新型缓释纳米微球交联脱细胞脊髓支架的缓释系统;该缓释系统不仅保留了ASCS原有的天然叁维空间立体结构,而且保存了纳米微球良好的缓释性能。2.Micro CT形态学结果:对照组损伤部位左侧微血管被破坏,且再生延迟;假手术组微血管形态正常;B-ASCS组与V-ASCS皆有微血管形成,V-ASCS组微血管恢复更佳。3.Micro CT 3D血管形态定量参数结果:B-ASCS组和V-ASCS组中扫描部位血管容积/扫描部位总体积(VV/TV)在损伤后1周时较对照组显着增加(P<0.01);血管密度(VDn)结果与VV/VT类似。损伤后4周,V-ASCS组VV/VT急剧下降,而B-ASCS组VV/VT略有变化;B-ASCS组与V-ASCS组中VDn降低,4组间VDn除了对照组和假手术组外,无统计学差异(P>0.05);在损伤后8周,B-ASCS组与V-ASCS组VV/VT未观察到明显统计学差异,V-ASCS组明显低于假手术组(P<0.05);V-ASCS组在VDn上与假手术组接近,而且高于B-ASCS组(P<0.05)。损伤后1周,V-ASCS组血管分支密度(VBDn)最高,B-ASCS组次之,假手术组最低(P>0.01),随后V-ASCS组VBDn在损伤后的4周和8周急剧下降,在损伤后8周接近假手术组(P>0.05),而在B-ASCS组中VBDn下降较慢。在损伤后1周,接受过半切损伤的大鼠血管直径(VD)均增加(P<0.01),而组间没有明显统计学差异,而且VD随着时间而降低,在损伤后4周和8周,B-ASCS组、V-ASCS组与假手术组之间VD相比没有显着统计学差异(P>0.05)。4.BBB评分:在各时间点,对照组、B-ASCS组与V-ASCS组较假手术组BBB评分明显降低,差异具有统计学意义;在各时间点对照组较B-ASCS组、V-ASCS组BBB评分明显降低,差异具有统计学差异;B-ASCS组与V-ASCS组BBB评分只有在第28,35和42天显着更高,余时间点无明显统计学差异。5.HE染色:术后8周,相对于假手术组而言,对照组的空腔最大,没有组织桥接,断端可见胶质瘢痕形成。B-ASCS组与V-ASCS组中的支架植入物可以通过桥接与宿主整合,V-ASCS组相较于B-ASCS组桥接更好,空隙更少。6.尼式体及髓鞘染色:术后8周,对照组空腔中无明显尼氏体及髓鞘形成,在同一时间段,B-ASCS组与V-ASCS组中可见的髓鞘及尼氏体,髓鞘排列紊乱,尼氏体体积较正常减小,但V-ASCS组髓鞘及尼氏体数量更多,假手术组可见到完整的髓鞘组织,以及正常体积的尼氏体。【结论】1.空白微球脊髓脱细胞支架与缓释VEGF脊髓脱细胞支架移植入脊髓半切损伤大鼠皆可促进损伤段血管的再生,缓释VEGF脊髓脱细胞促进血管再生效果更明显。2.VEGF在组织学上可以促进大鼠损伤段的轴突及髓鞘恢复,能促进大鼠下肢神经功能的有限的恢复。(本文来源于《福建医科大学》期刊2017-06-01）
吴志强[3]（2017）在《缓释VEGF脱细胞脊髓支架的制备、表征及细胞相容性研究》一文中研究指出目的构建一种新型VEGF-PLGA交联脱细胞脊髓支架的缓释系统,分析该缓释系统性能;初步研究纳米微球(B-NPs)、脊髓脱细胞支架(ASCS)、PLGA纳米微球脱细胞支架(B-ASCS)与骨髓间充质干细胞(BMSCs)的生物相容性,为后续联合移植治疗脊髓损伤(SCI)提供新材料、新方法和理论依据。方法1.分别采用乳化-溶剂挥发法制备B-NPs、VEGF-PLGA纳米微球(V-NPs)、化学萃取法制备ASCS,并评价其性能;2.通过京尼平的交联改性作用,在对ASCS交联改性的同时,分别将B-NPs、V-NPs结合到ASCS上,制备纳米微球交联脱细胞脊髓支架的缓释系统,并用形态学、交联率、药物释放曲线等评价其相关性能;3.将B-NPs、ASCS、B-ASCS分别与P3代BMSCs共培养,于1天、3天、5天、7天用CCK-8检测BMSCs细胞增殖情况。结果1.通过乳化-溶剂挥发法制备的B-NPs、V-NPs,扫描电镜检测示微球形态均良好、表面光滑,但V-NPs的平均粒径(203.2±4.7nm)稍大于B-NPs(180.3±3.9nm),V-NPs的粒径分布(150-250nm)比B-NPs(100-280nm)更为均匀;用紫外分光光度法检测V-NPs包封率为90.8±3.1%,体外VEGF165持续缓释时间可达30天。采用化学萃取法制备的ASCS,HE染色见支架呈现大小不等的网孔状结构,细胞成分基本去除;SEM扫描见支架呈不规则网孔状叁维结构,细胞外基质表面粗糙状,并呈层状排列,形成不规则空腔,孔径约45.6±10.9μm,孔隙率达82.2±2.9%。2.通过京尼平的交联改性作用,在对ASCS交联改性的同时,分别将B-NPs、V-NPs结合到ASCS上,形成B-ASCS、V-ASCS支架。SEM扫描见B-ASCS、V-ASCS仍保持良好的叁维网孔状结构,孔隙率分别为75.0±1.9%、73.9±2.1%,交联率分别达71.9±3.9%、71.4±4.7%;紫外分光光度法检测V-ASCS支架中的V-NPs缓释性能良好,VEGF165缓释持续时间亦可达30天。3.将B-NPs、ASCS及用京尼平交联形成的B-ASCS分别与P3代BMSCs共培养后,并于1天、3天、5天、7天用CCK-8检测,结果显示叁组材料中BMSCs均增殖明显、生长状态良好,且组间BMSCs增殖性均无明显差异,无统计学意义(P>0.05)。结论1.通过乳化-溶剂挥发法可制备理想的V-NPs,其药物包封率高、缓释性良好;采用化学萃取法制备的ASCS程序简便,去除细胞较彻底,并能尽量保持细胞外基质的完整性,最大限度的保持其天然叁维空间立体结构,符合本课题前期要求。2.通过京尼平的交联改性作用,在对脱细胞支架改性的同时,成功地将缓释纳米微球结合到脱细胞支架上,形成新型缓释纳米微球交联脱细胞脊髓支架的缓释系统;该缓释系统不仅保留了ASCS原有的天然叁维空间立体结构,而且保存了纳米微球良好的缓释性能。3.B-NPs、ASCS及用京尼平交联形成的B-ASCS均与BMSCs具有良好的生物相容性,无明显细胞毒性,可为后续联合移植治疗SCI提供新材料、新方法和理论依据。(本文来源于《福建医科大学》期刊2017-06-01）
曹泰玮[4]（2017）在《脱细胞脊髓支架的制作及其体内安全性评价的实验研究》一文中研究指出目的本研究旨在应用脱细胞的方法将细胞完全去除,成功制作出大鼠脱细胞脊髓支架,并且最大限度的保留了脊髓细胞外基质的空间叁维立体结构。将制备好的脱细胞脊髓支架磨碎后用生理盐水溶解制成脱细胞脊髓支架颗粒悬浊液,通过大鼠尾静脉注射,来评估其在大鼠体内的安全性,从而为脱细胞脊髓支架应用于治疗脊髓损伤提供依据。方法1.取Wistar大鼠4只,麻醉后手术取出脊髓,采用脱细胞方法将脊髓中神经细胞脱掉后,制作出脱细胞支架。将制备的支架进行HE染色及髓鞘染色光镜下观察脱细胞脊髓组织结构,验证大鼠脊髓支架是否成功脱掉细胞成分。2.取制备的脱细胞脊髓支架,磨碎后放入500ml生理盐水中,制成脱细胞脊髓支架悬浊液。取Wistar大鼠48只,平均分成2组,一组为实验组,另一组为对照组,每组24只,再分为6个时间节点,每个时间节点4只,分别对应1天、2天、3天、7天、10天、14天,实验组每只大鼠经尾静脉注射脱细胞脊髓悬浊液2ml,对照组每只大鼠经尾静脉注射生理盐水2ml,分别于尾静脉注射后1天、2天、3天、7天、10天、14天取血后处死,检测血清中谷丙转氨酶(ALT)和肌酐(CR)含量,进行统计学分析,处死的大鼠分别取肺脏、肝脏、脾脏、心脏及肾脏制作成组织切片进行HE染色后观察其组织学变化。结果1.采用化学萃取法制备的Wistar大鼠脱细胞脊髓支架,呈白色,短柱状,大小有所减小,触之质地柔韧。HE染色、髓鞘染色显示成功制备的支架由直径不同的孔隙组成,细胞已彻底脱掉,已不含细胞成分,髓鞘已被脱除,各个孔洞的壁由细胞外基质组成。2.实验组大鼠经尾静脉注射脱细胞脊髓悬浊液后,肺部出现明显的炎症反应和增生表现。实验组肝细胞较对照组肿胀,相邻细胞之间边界显示不清,胞核变大,胞浆相对松散,表现为空泡变性。此现象在经尾静脉注射后第1天较重,随时间延长不断减轻,到第10天肝细胞恢复到正常形态。通过测定血液中谷丙转氨酶(ALT)的含量,发现前两天谷丙转氨酶含量处在较高水平,之后逐渐降低到正常值。肾脏病理检查未见明显改变,血清学检查发现肌酐(CR)值在实验组与对照组之间无差异。实验组大鼠脾脏组织切片表现为淋巴小结较对照组增大,边缘区界限模糊,这种现象随着时间的延长而逐渐减轻。实验组心脏组织切片无显着异常。结论1.本实验采用化学萃取的方法脱掉脊髓中的细胞成分,成功制作出大鼠脱细胞脊髓支架,将细胞成分彻底脱除,并且最大限度的保留了脊髓细胞外基质的空间叁维立体结构。2.将脱细胞脊髓支架悬浊液经大鼠尾静脉注射后,对大鼠体内部分器官存在一过性的毒性反应,对肝脏组织形态和肝功能以及肺的组织形态具有一过性损害,在脾脏一过性引发由B细胞参与的体液免疫,对心脏细胞的组织形态无损害,对肾脏的组织形态及肾功能无损伤。相对传统的生物材料支架,脱细胞脊髓支架具有较好的生物相容性、机械强度及形态。为将来进行脱细胞脊髓支架移植治疗脊髓损伤提供了依据。(本文来源于《天津医科大学》期刊2017-05-01）
邢辉[5]（2016）在《构建NT-3交联脱细胞脊髓支架缓释系统及研究其体外实验》一文中研究指出背景:近年来,为了治疗脊髓损伤(spinal cord injury,SCI),组织工程学,通过支架材料复合种子细胞,额外添加营养因子,对脊髓再生进行重构,从而促进其功能恢复。其中支架材料可以提供适宜微环境和一定的机械支撑,促使种子细胞的粘附、生长,在组织工程修复中具有相当重要作用。目前常用的脊髓支架材料,如:透明质酸、PLGA丝蛋白-壳聚糖复合支架材料等。虽然以上材料具有各自独特的优点,但是它们不具备脊髓特有结构,如微观叁维网状结构,因此在脊髓修复重建中有局限作用。前期研究,脊髓组织被脱细胞,得到ECM叁维空间结构,胶原、纤维连接蛋白、层粘连蛋白等被保留,即脱细胞脊髓支架材料。但前期的脊髓脱细胞方法尚不稳定,主要表现在脱细胞彻底而细胞外基质保留不完整,或者细胞外基质保留完整而脱细胞不彻底,此外脱细胞脊髓支架复合种子细胞后还遭遇神经营养因子匮乏的难题。因此,进行一下研究:(1)脱细胞方法被优化,支架的制备过程被稳定化;(2)并采用化学交联的方法结合神经营养因子-3(NT-3),使NT-3交联脱细胞脊髓支架的缓释系统具有缓释活性作用;(3)NT-3交联脱细胞脊髓支架复合种子细胞后具有独特的作用,可以促进种子细胞粘附、增殖等。目的:1.脱细胞方法被优化,脊髓ECM结构被保留,细胞被彻底去除。2.采用碳化二亚胺(EDC)化学交联的作用,将NT-3结合到脱细胞脊髓支架上,制备NT-3交联脱细胞脊髓支架的缓释系统,分析该缓释系统NT-3的缓释性、缓释NT-3的生物活性。3.大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)被复合NT-3交联脱细胞脊髓支架上,支架对BMSCs粘附、增殖的影响。方法:1.传统法和优化法,制备脊髓支架,采用肉眼观察、扫描电镜、光镜、冻干、称重、酶解等技术对比研究支架的特性。2.elisa法被用来检测nt-3缓释性,缓释nt-3的生物学活性被e18孕鼠体内胚鼠的背根神经节验证,nt-3交联脱细胞脊髓支架整体蛋白分解性被bca蛋白测定法检测。3.对bmscs进行复苏、培养、传代等操作,得到p3代bmscs,复合到脱细胞脊髓支架和nt-3交联脱细胞脊髓支架后,共培养4小时后采用dapi检测bmscs在不同支架的粘附性;在不同的时间点,如共培养24小时、48小时后,不同支架对bmscs增殖的影响被cck-8检测。结果:1.优化组制备的支架“优”等级为80%,he评分“优”等级的支架经过dapi染色,激光共聚焦显微镜检测,内部结构脱细胞彻底,评分也为“优”等级;电子显微镜扫描可见叁维网状结构,孔径平均为31.02um,含水率为(228.14±19.39)%,孔隙率为(71.82±2.10)%;在4、8、12、16、20小时不同时间段的抗酶解性为(8.268±1.229)%、(16.16±1.568)%、(23.5±2.252)%、(28.582±2.243)%、(35.904±1.911)%。优化组支架脱细胞彻底,制备效率高,孔径与传统组支架相当,但是含水率、孔隙率、抗酶解性均优于传统组支架。2.脱细胞脊髓支架与nt-3通过edc交联,nt-3交联脱细胞脊髓支架被成功构建,采用elisa法测定nt-3在不同时间段的缓释量,缓释性可达35天,在1、4、7、14、21、28、35天时间段的nt-3缓释浓度分别为(480.52±69.88)pg/ml、(111.43±5.34)pg/ml、(66.11±17.99)pg/ml、(121.35±7.85)pg/ml、(61.34±9.88)pg/ml、(36.22±16.37)pg/ml、(29.95±12.95)pg/ml;翻倍提高nt-3浓度后,采用背根神经节法验证缓释nt-3的生物学活性,第一天nt-3缓释液可以促进(72.00±8.19)根神经突生长,第四天为(32.67±8.14)根,第七天为(10.33±2.52)根,第十四天为(31.67±8.96)根,二十一天为(8.33±3.79)根,二十八天为(5.00±1.00)根,叁十五天为(4.67±1.53)根,阴性对照为(9.00±2.00)根,阳性对照为(93.67±33.23)根。其中低于阴性对照组的是二十八天、叁十五天、二十一天结果;在培养基中,被分解的nt-3交联脱细胞脊髓支架整体蛋白,经bca蛋白浓度测定试剂盒测定,在1、4、7、14、21、28天的不同时间段内缓释的蛋白浓度均低于0.2ug,证明被加入培养基条件下,nt-3交联脱细胞脊髓支架可以保留28天。3.3.7×105/ml,40ul大鼠骨髓间充质干细胞悬液被后复合nt-3交联脱细胞脊髓支架后,4小时细胞粘附数量为(109±5)个,优于交联支架(46±19)个;浓度为1.0×105/ml,10ul大鼠骨髓间充质干细胞悬浮液,与不同组支架共培养24小时和48小时后,nt-3交联脱细胞脊髓支架均有利于大鼠骨髓间充质干细胞增殖。结论:1.脱细胞法被成功优化,细胞成分被较彻底地去除,脊髓ECM叁维空间结构被较完整地保留,各项指标如“优”等率、孔隙率、含水率、酶解率优于传统制备支架。2.NT-3交联脱细胞脊髓支架在ELISA法检测下,NT-3缓释性可达35天;缓释NT-3,具有生物学活性;经BCA蛋白测定法,NT-3交联脱细胞脊髓支架,在培养箱中,加入培养基,可以保留28天。3.BMSCs被NT-3交联脱细胞脊髓支架复合,相比于脱细胞脊髓支架,具有促进BMSCs粘附、增殖的作用。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2016-05-01）
邢辉,任先军,蒋涛,阴洪,孙超[6]（2016）在《EDC交联结合化学萃取制备脱细胞脊髓支架及其生物学特性研究》一文中研究指出[目的]采用EDC(碳化二亚胺)交联结合化学萃取法制备脱细胞脊髓支架,探讨脱细胞脊髓支架制备效率,分析支架的生物学特性,观察支架能否保留细胞外基质黏多糖成分。[方法]采用EDC交联结合化学萃取法(液氮结合42℃恒温水浴反复冻融6次+1%Triton X-100+1%脱氧胆酸钠+EDC交联+液氮结合42℃恒温水浴反复冻融6次+1%Triton X-100+1%脱氧胆酸钠)处理正常脊髓20根,得到脱细胞脊髓支架(支架组);对照于正常大鼠脊髓组织(对照组)。通过HE染色检验支架组脱细胞效果,统计脱细胞脊髓支架的等级评分"优"、"良"、"一般"、"差"的百分比;选取HE染色脱细胞彻底、评分为"优"的脊髓支架,DAPI染色验证其内部细胞残留情况的等级评分是否一致为"优";通过电镜扫描观察两组内部叁维结构并分析其孔径;分析脊髓组织脱细胞处理前后的含水率、孔隙率、抗酶解性的变化;通过免疫组化的方法,观察两组材料细胞外基质中黏多糖分布情况。[结果]支架组通过HE染色观察到脱细胞彻底、评分为"优"的百分比为80%;HE染色观察评分为"优"支架经DAPI染色验证其内部细胞残留量评分也为"优";其叁维结构完整,其孔径均值为9.07μm;含水率为(228.14±19.39)%;孔隙率为(71.82±2.10)%;在胰酶中,第20 h的酶解率平均为(35.904±1.911)%;免疫组化分析鉴定细胞外基质中包含一定的黏多糖。对照组中正常脊髓经HE染色和DAPI染色观察到大量细胞;叁维网孔状结构,孔径均值为40.7μm;含水率和孔隙率分别为(109.32±12.44)%和(61.18±4.19)%;在胰酶中,第20 h的酶解率平均为(25.704±1.030)%;细胞外基质中包含大量的黏多糖成分。[结论]EDC交联结合化学萃取法制备的支架脱细胞彻底、制备效率高,具有叁维网状结构、良好的含水率、空隙率、抗酶解性,一定程度上保留细胞外基质中黏多糖成分,符合组织工程学支架制备要求,为脊髓支架提供了一种新的选择。(本文来源于《中国矫形外科杂志》期刊2016年08期）
刘洋[7]（2016）在《脱细胞脊髓支架制备及其生物相容性的实验研究》一文中研究指出目的本研究旨在应用脱细胞技术,在彻底去除细胞的前提下,尽量保持细胞外基质的完整性,最大限度的保持其天然叁维空间立体结构,成功制备出脱细胞脊髓支架,采用制备好的脱细胞脊髓支架与大鼠脊髓神经元细胞进行共培养,观察细胞在支架材料上的生长情况,为今后进行脱细胞脊髓支架移植治疗脊髓损伤提供了依据。方法1.取SPF级Wistar雌性大鼠10只,采用化学萃取法制备脱细胞脊髓支架。采用HE染色、髓鞘染色、扫描电镜观察脱细胞脊髓表面结构,将大鼠脊髓支架组织DNA提取,并进行DNA含量分析以明确大鼠脊髓支架是否成功脱掉细胞成分。2.取实验用幼年SD鼠2只,麻醉后取出脊髓组织并剪碎,置入装有细胞培养液的培养瓶中培养采用酶消化法对细胞进行分离纯化。细胞在体外增殖,传代后,对其用NSE免疫组化染色进行鉴定,并观察生长状况,绘制生长曲线。传至第2代后,将神经元细胞收集并与脱细胞脊髓支架共培养24小时,MTT观察细胞存活情况。3.将脱细胞脊髓支架消毒后修整为0.5cm的小段,取第叁代大鼠脊髓神经元细胞共基培养。用倒置显微镜观察细胞生长情况,利用HE染色观察神经元脱细胞脊髓支架结合生长情况,利用NSE、NEUN染色鉴定共培养细胞是否为神经元细胞,利用扫描电镜观察整体空间叁维结构。结果1.采用化学萃取法制备的大鼠脱细胞脊髓支架,Wistar大鼠脱细胞脊髓支架呈乳白色,半透明状,扁圆柱形,直径和长度均略微变短,质地柔软,韧性增大,无异味。HE染色、髓鞘染色显示大鼠脱细胞脊髓支架横切面上呈现大小不等的网孔状结构,细胞成分基本完全去除,未见细胞核蓝色颗粒和红色细胞质存在,轴突和髓鞘均已去除,网孔壁由均质粉红染色的细胞外基质构成,网孔内外均未见细胞残留,髓鞘扫描电子显微镜显示大鼠脱细胞脊髓支架呈不规则网孔状结构,细胞外基质呈层状排列,形成不规则圆形空腔,具备优秀的叁维立体网孔状结构,孔壁较薄,表面积较大,孔洞间相互连通,经DNA琼脂糖凝胶电泳检测后未见DNA条带,大鼠脱细胞脊髓支架脱细胞完全,不含脱氧核糖核酸类物质,细胞已完全除去。2.制备的大鼠脊髓神经元细胞免疫组化NSE抗体染色结果显示细胞胞体呈棕褐色,细胞核呈蓝紫色,该细胞呈典型的神经元细胞形态,即所制备的细胞为大鼠脊髓神经原细胞。3.大鼠脊髓神经元细胞与大鼠脱细胞脊髓支架共培养后HE染色结果显示大鼠脊髓神经元细胞粘附于大鼠脱细胞脊髓支架生长,细胞生长状态良好。扫描电镜显示大鼠脊髓神经元细胞在叁维通道中充分生长,形成聚集的细胞区域,不影响大鼠脱细胞脊髓支架空间结构,NEUN染色及NSE显示神经元细胞轴突生长状态良好,形态结构完整,说明大鼠脱细胞脊髓支架与大鼠脊髓神经元细胞具备良好的生物相容性与适应性。结论1.采用化学萃取法制备的大鼠脱细胞脊髓支架在彻底去除细胞的前提下,尽量保持细胞外基质的完整性,最大限度的保持其天然叁维空间立体结构。2.将大鼠脊髓神经元细胞与大鼠脱细胞脊髓支架共培养,大鼠脊髓神经元细胞细胞生长状态良好,在脱细胞脊髓支架的空间通道中聚集生长,细胞轴突生长状态良好形态结构完整,并且脱细胞脊髓支架空间结构保存完整,大鼠神经元细胞在脱细胞脊髓支架中紧密排列,大鼠神经元细胞和大鼠脱细胞脊髓支架具备良好的生物相容性。(本文来源于《天津医科大学》期刊2016-04-01）
张嗣晓,陆继业,梅劲,卢斌,罗科峰[8]（2016）在《去甲二氢愈创木酸交联猪去细胞脊髓支架及其相关特性研究》一文中研究指出目的 :观察去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)交联猪去细胞脊髓支架的结构及性能。方法:取成年猪胸段脊髓,采用2次冻融化学萃取法对脊髓行去细胞处理,再用2.5g/L NDGA溶液进行交联处理。在体视显微镜及扫描电镜下分别观察猪去细胞脊髓支架及NDGA交联猪去细胞脊髓支架的结构。采用Instrong生物力学测试仪检测正常猪脊髓(正常组)、猪去细胞脊髓支架(未交联支架组)及NDGA交联猪去细胞脊髓支架(交联支架组)的极限抗拉强度和弹性模量。取第4代SD大鼠星形胶质细胞分别与未交联支架和NDGA交联支架联合培养,采用CCK8法检测细胞生长率,评价支架的细胞毒性。将未交联支架和交联支架分别包埋至SD大鼠背部皮下,在1、2、4周取出检测其包埋后的降解率,并取包埋4周的组织行HE染色,评价支架的生物相容性。结果:正常组脊髓组织为圆柱状,呈乳白色,横切面可见灰质与白质分界明显;未交联支架基本保持原组织外形,呈白色半透明状,白质与灰质无明显分界;交联支架质地稍变硬,呈棕黄色。扫描电镜显示未交联支架与交联支架内的基质纤维保存完好,相互交织成网状叁维结构,内部孔洞连通。未交联支架的抗拉强度及弹性模量较正常组显着性下降(P<0.05);交联支架抗拉强度和弹性模量较未交联支架显着性增强,两组比较有统计学差异(P<0.05),但仍低于正常组(P<0.05)。星形胶质细胞在交联支架及未交联支架中均生长良好,共培养时间越久,OD值越大,两组相同时间点OD值比较无统计学差异(P>0.05)。相同时间点交联组在体内降解率明显低于未交联组(P<0.05)。包埋4周后未交联组支架HE染色可见炎症细胞及成纤维细胞浸润,并且有肉芽组织聚集在内部孔隙中;交联组支架炎症细胞明显减少,且可见新生血管状结构。结论:NDGA交联猪去细胞脊髓支架与未交联猪去细胞脊髓支架比较叁维结构未见明显改变,但生物力学性能和体内抗降解能力显着性增强,生物相容性提高,且无明显细胞毒性,可作脊髓损伤修复的支架材料。(本文来源于《中国脊柱脊髓杂志》期刊2016年03期）
李一鹏,陈旭义,朱祥,卢磊,涂悦[9]（2015）在《脱细胞脊髓基质支架的制备及生物特性》一文中研究指出背景:以脱细胞脊髓基质材料为构架的脊髓生物支架,已被证实可恢复或部分恢复受损的脊髓神经功能。目的:介绍脱细胞脊髓基质支架的制备方法和部分生物特性,对近年来其在脊髓组织工程中的应用及进展作一概述。方法:应用计算机检索CNKI和PubM ed数据库中2005年1月至2014年10月关于脱细胞脊髓基质支架材料在脊髓损伤中应用的文章,在主题和摘要中,中文以"脱细胞脊髓,支架材料,脊髓损伤,组织工程学"为检索词检索,英文以"acellular spinal cord;engineering tissue;spinal cord injury;scaffold"为检索词进行检索。结果与结论:脱细胞脊髓基质支架具有较低的抗原性、优良的生物相容性及类似脊髓的叁维支架结构,但存在力学性能差及结构不稳定等缺点。通过京尼平、戊二醛等交联剂改性后可明显提高支架的生物性能。目前国内外已对脱细胞脊髓基质支架在神经修复再生方面的应用做了一些探索,为脊髓组织工程学打下了基础。由于脱细胞脊髓基质支架的诸多优点,脱细胞脊髓基质材料有望成为脊髓组织工程学的理想材料。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2015年21期）
田婷[10]（2015）在《脱细胞神经支架复合PMSCs修复大鼠横断性脊髓缺损的实验研究》一文中研究指出脊髓损伤是临床常见的高致残率的疾病,由于损伤神经元的再生能力极其微弱,加之微环境中抑制性因素的存在,导致脊髓损伤后的神经再生及功能恢复非常有限。目前脊髓损伤的治疗理念是重塑损伤脊髓的空间结构,改善神经元再生环境进而诱导轴突再生,组织工程是实现这一理念的有效途径。本研究应用脱细胞神经支架复合胎盘间充质干细胞(PMSCs),构建组织工程化神经支架复合体,治疗大鼠脊髓横断性缺损,为临床应用组织工程治疗脊髓损伤提供理论基础。首先,选择改良脱细胞方法,制备理想的脱细胞神经支架。行HE染色、甲苯胺蓝染色、Laminin免疫荧光染色,观察脱细胞神经支架组织形态特征；扫描电镜、透射电镜观察脱细胞神经支架超微结构,DNA含量测定检测脱细胞神经支架细胞残留,细胞增殖率和肌袋埋入反应检测支架的细胞毒性和生物相容性。随后,构建组织工程化复合体,应用散点注射法将PMSCs注入脱细胞神经支架,构建细胞支架复合体,37℃,5%C02培养箱中培养。最后,制作大鼠横断性脊髓缺损模型,移植神经支架复合体,术后4W,免疫荧光检钡PMSCs在体生长、迁移及分化情况,BBB评分、脚印分析及电生理检测损伤大鼠的功能恢复,透射电镜观察轴突及髓鞘再生。HE染色、甲苯胺蓝染色、透射电镜结果显示,改良法制备的脱细胞神经支架,细胞脱除彻底,ECM蛋白含量丰富；扫描电镜结果显示,支架叁维空间结构完整,管道通畅；细胞毒性检测结果显示,支架无胞毒性；生物组织相容性检测结果显示,无炎症细胞浸润,细胞相容性检测结果显示,细胞长入支架并大量存活,生长状态良好。神经支架复合体移植术后4W,取材行冰冻切片,荧光显微镜观察显示,PMSCs生长状态良好,向损伤区两端双向迁移,兔疫荧光结果显示植入的PMSCs分化为神经元细胞。透射电镜观察显示,与对照组相比,支架复合体组大鼠新生髓鞘数目明显增多,厚度明显增厚,直径明显增大；BBB评分显示,支架复合体组大鼠BBB评分明显提高,术后8w达到13分；脚印分析测定表明支架复合体组大鼠前后足协调性明显改善,术后8w, ILC、AR分别为1.8,12；电生理检测结果显示,支架复合体组运动诱发电位振幅为0.54±0.05mV,潜伏期为9.98±0.33ms, PMSCs组可记录到轻微电信号,生理盐水组无电信号记录。综上所述,改良法制备的脱细胞神经支架,是构建神经支架复合体的理想材料；改良脱细胞支架复合PMSCs构建神经支架复合体,治疗大鼠横断性脊髓损伤,有助于促进大鼠功能恢复；本研究为临床上应用组织工程化桥接神经元治疗脊髓损伤提供理论基础和技术支撑。(本文来源于《滨州医学院》期刊2015-03-30）
脱细胞脊髓支架论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】:观察缓释血管内皮生长因子(VEGF)脊髓脱细胞支架移植入脊髓半切损伤大鼠后损伤段血管重建情况,初步评估VEGF在脊髓损伤后对脊髓神经功能恢复的作用。【方法】:1.分别采用乳化-溶剂挥发法制备空白纳米微球(B-NPs)、VEGF纳米微球(V-NPs),化学萃取法制备脊髓脱细胞支架,京尼平交联制备空白微球脊髓脱细胞支架(B-ASCS)、缓释VEGF脊髓脱细胞支架(V-ASCS)并使用扫描电镜观察其表征、评估其性能。2.SD大鼠半切模型的建立及实验分组。将48只大鼠随机分为单纯脊髓损伤组(对照组,12只)、假手术组(12只)、脊髓损伤后空白微球-脊髓脱细胞支架植入组(B-ASCS组,12只),脊髓损伤后缓释VEGF脊髓脱细胞支架植入组(V-ASCS组,12只)。3.各组大鼠分别于脊髓损伤后1周、4周、8周后行心脏灌注,Microfil造影剂行血管铸型,再使用高分辨率Micro CT扫描,重建损伤段微血管,定量分析血管参数动态变化观察再生情况、术后8周HE染色观察植入物与宿主整合情况、尼式体及髓鞘染色观察髓鞘及尼氏体再生及形态学分析,于3天、7天、14天、21天、28天、42天、49天、56天行BBB评分评价神经功能。【结果】1.通过乳化-溶剂挥发法可制备理想的V-NPs,其药物包封率高、缓释性良好;采用化学萃取法制备的ASCS程序简便,去除细胞较彻底,并能尽量保持细胞外基质的完整性,最大限度的保持其天然叁维空间立体结构。通过京尼平的交联改性作用,在对脱细胞支架改性的同时,成功地将缓释纳米微球结合到脱细胞支架上,形成新型缓释纳米微球交联脱细胞脊髓支架的缓释系统;该缓释系统不仅保留了ASCS原有的天然叁维空间立体结构,而且保存了纳米微球良好的缓释性能。2.Micro CT形态学结果:对照组损伤部位左侧微血管被破坏,且再生延迟;假手术组微血管形态正常;B-ASCS组与V-ASCS皆有微血管形成,V-ASCS组微血管恢复更佳。3.Micro CT 3D血管形态定量参数结果:B-ASCS组和V-ASCS组中扫描部位血管容积/扫描部位总体积(VV/TV)在损伤后1周时较对照组显着增加(P<0.01);血管密度(VDn)结果与VV/VT类似。损伤后4周,V-ASCS组VV/VT急剧下降,而B-ASCS组VV/VT略有变化;B-ASCS组与V-ASCS组中VDn降低,4组间VDn除了对照组和假手术组外,无统计学差异(P>0.05);在损伤后8周,B-ASCS组与V-ASCS组VV/VT未观察到明显统计学差异,V-ASCS组明显低于假手术组(P<0.05);V-ASCS组在VDn上与假手术组接近,而且高于B-ASCS组(P<0.05)。损伤后1周,V-ASCS组血管分支密度(VBDn)最高,B-ASCS组次之,假手术组最低(P>0.01),随后V-ASCS组VBDn在损伤后的4周和8周急剧下降,在损伤后8周接近假手术组(P>0.05),而在B-ASCS组中VBDn下降较慢。在损伤后1周,接受过半切损伤的大鼠血管直径(VD)均增加(P<0.01),而组间没有明显统计学差异,而且VD随着时间而降低,在损伤后4周和8周,B-ASCS组、V-ASCS组与假手术组之间VD相比没有显着统计学差异(P>0.05)。4.BBB评分:在各时间点,对照组、B-ASCS组与V-ASCS组较假手术组BBB评分明显降低,差异具有统计学意义;在各时间点对照组较B-ASCS组、V-ASCS组BBB评分明显降低,差异具有统计学差异;B-ASCS组与V-ASCS组BBB评分只有在第28,35和42天显着更高,余时间点无明显统计学差异。5.HE染色:术后8周,相对于假手术组而言,对照组的空腔最大,没有组织桥接,断端可见胶质瘢痕形成。B-ASCS组与V-ASCS组中的支架植入物可以通过桥接与宿主整合,V-ASCS组相较于B-ASCS组桥接更好,空隙更少。6.尼式体及髓鞘染色:术后8周,对照组空腔中无明显尼氏体及髓鞘形成,在同一时间段,B-ASCS组与V-ASCS组中可见的髓鞘及尼氏体,髓鞘排列紊乱,尼氏体体积较正常减小,但V-ASCS组髓鞘及尼氏体数量更多,假手术组可见到完整的髓鞘组织,以及正常体积的尼氏体。【结论】1.空白微球脊髓脱细胞支架与缓释VEGF脊髓脱细胞支架移植入脊髓半切损伤大鼠皆可促进损伤段血管的再生,缓释VEGF脊髓脱细胞促进血管再生效果更明显。2.VEGF在组织学上可以促进大鼠损伤段的轴突及髓鞘恢复,能促进大鼠下肢神经功能的有限的恢复。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
脱细胞脊髓支架论文参考文献
[1].郭雨佳,姜晶晶,李雅,付欣雅,孟德源.脱细胞支架联合电针对坐骨神经损伤大鼠脊髓前角运动神经元的保护作用[J].解剖学杂志.2019
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[3].吴志强.缓释VEGF脱细胞脊髓支架的制备、表征及细胞相容性研究[D].福建医科大学.2017
[4].曹泰玮.脱细胞脊髓支架的制作及其体内安全性评价的实验研究[D].天津医科大学.2017
[5].邢辉.构建NT-3交联脱细胞脊髓支架缓释系统及研究其体外实验[D].第叁军医大学.2016
[6].邢辉,任先军,蒋涛,阴洪,孙超.EDC交联结合化学萃取制备脱细胞脊髓支架及其生物学特性研究[J].中国矫形外科杂志.2016
[7].刘洋.脱细胞脊髓支架制备及其生物相容性的实验研究[D].天津医科大学.2016
[8].张嗣晓,陆继业,梅劲,卢斌,罗科峰.去甲二氢愈创木酸交联猪去细胞脊髓支架及其相关特性研究[J].中国脊柱脊髓杂志.2016
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