本文主要研究内容
作者杨宗轩（2019）在《Dux基因在小鼠合子基因组激活过程中的作用研究》一文中研究指出：哺乳动物受精后,合子基因组转录处于沉默状态,胚胎着床前发育主要受控于母源物质。随着卵母细胞中母源物质降解,新形成的胚胎基因组将发生大规模转录,这一事件被称为合子基因组激活(Zygotic genome activation,ZGA)。作为母源-合子转换的关键环节,ZGA是受精后发生的重要生物学事件。对胚胎的正常发育至关重要。深入了解ZGA事件,将有助于克服胚胎体外发育阻滞问题,从而为辅助生殖技术在临床实际应用扫除障碍。为研究Dux基因在小鼠早期胚胎发育,特别是在ZGA过程中的作用。首先利用RT-qPCR和免疫荧光技术检测Dux和Zscan4、MERVL、Eif1a等ZGA相关基因在早期胚胎发育各个时期的表达情况,结果表明Dux的mRNA在早期胚胎发育各时期均可被检测到,但在2-细胞时期表达量最高;与mRNA表达不同的是,Dux编码的蛋白仅能在2-细胞和4-细胞时期被检测到;作为ZGA事件的标志基因Zscan4、MERVL、Gm6763和Eif1a均呈现出在2-细胞特异性高表达,与Dux的表达模式相一致。为进一步研究Dux的作用,我们通过显微注射siRNA直接干扰Dux在受精卵中的表达,分析Dux的敲减对Zscan4、MERVL、Eif1a和Tcstv1等ZGA相关基因和胚胎发育的影响。检测结果表明,Dux的敲减效率约为60%。发育率统计分析表明,干扰组的桑椹胚与囊胚形成率均显著低于对照组(31%vs.83%,P<0.001;28%vs.76%,P<0.001)。此外,干扰组的胚胎发生2-细胞阻滞的现象。为解释这一现象,我们对ZGA相关基因进行定量检测,其中Zscan4的表达与Dux呈现正相关。因此,Zscan4与Dux可能存在直接作用的关系。为了验证这一推测,我们构建了双荧光素酶报告基因系统。双荧光素酶结果表明,DUX结合到Zscan4上游启动子的LTR处(156-163bp),直接调控Zscan4的表达。鉴于Dux在ZGA过程中所发挥的重要作用,为了能够直接在体内研究Dux的功能,我们构建了Dux过表达小鼠。为今后的研究提供了相关的实验材料。
Abstract
bu ru dong wu shou jing hou ,ge zi ji yin zu zhuai lu chu yu chen mo zhuang tai ,pei tai zhao chuang qian fa yo zhu yao shou kong yu mu yuan wu zhi 。sui zhao luan mu xi bao zhong mu yuan wu zhi jiang jie ,xin xing cheng de pei tai ji yin zu jiang fa sheng da gui mo zhuai lu ,zhe yi shi jian bei chen wei ge zi ji yin zu ji huo (Zygotic genome activation,ZGA)。zuo wei mu yuan -ge zi zhuai huan de guan jian huan jie ,ZGAshi shou jing hou fa sheng de chong yao sheng wu xue shi jian 。dui pei tai de zheng chang fa yo zhi guan chong yao 。shen ru le jie ZGAshi jian ,jiang you zhu yu ke fu pei tai ti wai fa yo zu zhi wen ti ,cong er wei fu zhu sheng shi ji shu zai lin chuang shi ji ying yong sao chu zhang ai 。wei yan jiu Duxji yin zai xiao shu zao ji pei tai fa yo ,te bie shi zai ZGAguo cheng zhong de zuo yong 。shou xian li yong RT-qPCRhe mian yi ying guang ji shu jian ce Duxhe Zscan4、MERVL、Eif1adeng ZGAxiang guan ji yin zai zao ji pei tai fa yo ge ge shi ji de biao da qing kuang ,jie guo biao ming Duxde mRNAzai zao ji pei tai fa yo ge shi ji jun ke bei jian ce dao ,dan zai 2-xi bao shi ji biao da liang zui gao ;yu mRNAbiao da bu tong de shi ,Duxbian ma de dan bai jin neng zai 2-xi bao he 4-xi bao shi ji bei jian ce dao ;zuo wei ZGAshi jian de biao zhi ji yin Zscan4、MERVL、Gm6763he Eif1ajun cheng xian chu zai 2-xi bao te yi xing gao biao da ,yu Duxde biao da mo shi xiang yi zhi 。wei jin yi bu yan jiu Duxde zuo yong ,wo men tong guo xian wei zhu she siRNAzhi jie gan rao Duxzai shou jing luan zhong de biao da ,fen xi Duxde qiao jian dui Zscan4、MERVL、Eif1ahe Tcstv1deng ZGAxiang guan ji yin he pei tai fa yo de ying xiang 。jian ce jie guo biao ming ,Duxde qiao jian xiao lv yao wei 60%。fa yo lv tong ji fen xi biao ming ,gan rao zu de sang shen pei yu nang pei xing cheng lv jun xian zhe di yu dui zhao zu (31%vs.83%,P<0.001;28%vs.76%,P<0.001)。ci wai ,gan rao zu de pei tai fa sheng 2-xi bao zu zhi de xian xiang 。wei jie shi zhe yi xian xiang ,wo men dui ZGAxiang guan ji yin jin hang ding liang jian ce ,ji zhong Zscan4de biao da yu Duxcheng xian zheng xiang guan 。yin ci ,Zscan4yu Duxke neng cun zai zhi jie zuo yong de guan ji 。wei le yan zheng zhe yi tui ce ,wo men gou jian le shuang ying guang su mei bao gao ji yin ji tong 。shuang ying guang su mei jie guo biao ming ,DUXjie ge dao Zscan4shang you qi dong zi de LTRchu (156-163bp),zhi jie diao kong Zscan4de biao da 。jian yu Duxzai ZGAguo cheng zhong suo fa hui de chong yao zuo yong ,wei le neng gou zhi jie zai ti nei yan jiu Duxde gong neng ,wo men gou jian le Duxguo biao da xiao shu 。wei jin hou de yan jiu di gong le xiang guan de shi yan cai liao 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自内蒙古大学的杨宗轩，发表于刊物内蒙古大学2019-08-13论文，是一篇关于合子基因组激活论文,胚胎发育论文,内蒙古大学2019-08-13论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自内蒙古大学2019-08-13论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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