导读:本文包含了内皮细胞和平滑肌细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:抗原,CD31,多态性,单核苷酸,血小板内皮细胞黏附分子1,平滑肌蛋白1
内皮细胞和平滑肌细胞论文文献综述
李昊文,沈宓,李子瑞,张文丽,王宇新[1]（2019）在《血小板内皮细胞黏附分子1和平滑肌蛋白1基因多态性与颈动脉斑块易损性关系的研究》一文中研究指出目的研究血小板内皮细胞黏附分子1(PECAM1)、平滑肌蛋白1(LMOD1)基因多态性位点与缺血性卒中患者颈动脉斑块易损风险的关系。方法前瞻性纳入自2014年5月至2017年10月于北京天坛医院就诊的具有颈动脉斑块的缺血性卒中患者,采集人口统计学资料及相关临床信息,采用颈动脉高分辨MRI区分易损及稳定斑块,依次纳入易损斑块组与稳定斑块组。利用实时聚合酶链反应方法,使用Taq Man探针对易损斑块组及稳定斑块组患者PECAM1、LMOD1基因多态性位点rs1867624、rs2820315进行基因分型并进行统计学分析。采用二分类Logistic回归分析探讨影响颈动脉粥样硬化斑块易损性的危险因素。结果共纳入具有颈动脉斑块的缺血性卒中患者270例,其中189例具有易损斑块,81例具有稳定斑块。对两组患者PECAM1基因rs1867624位点的多态性分析显示,等位基因T是易损性斑块风险基因,其基因频率在易损斑块组、稳定斑块组中分别为87. 3%(330/378)、79. 6%(129/162; OR=1. 759,95%CI:1. 080～2. 864,P=0. 022)。对LMOD1基因SNP位点rs2820315的分析显示,等位基因C是易损性斑块的危险基因,其基因频率在易损斑块组、稳定斑块组中分别中为87. 6%(331/378)、80. 9%(131/162; OR=1. 667,95%CI:1. 014～2. 738,P=0. 042)。Logistic回归分析结果显示,年龄(OR=1. 069,95%CI:1. 022～1. 118,P=0. 004)、PECAM1基因rs1867624位点T/T基因型(OR=2. 202,95%CI:1. 035～4. 688,P=0. 041)和LMOD1基因rs2820315位点C/C基因型(OR=2. 199,95%CI:1. 005～4. 809,P=0. 048)是形成易损性斑块的风险因素。结论 PECAM1基因单核苷酸多态性位点rs1867624、LMOD1基因单核苷酸多态性位点rs2820315与颈动脉斑块易损性相关。(本文来源于《中国脑血管病杂志》期刊2019年04期）
季一楠,杨丽霞,刘蓓,杨淑娟,林庆铿[2]（2019）在《TRPC、ORAI1和NCX叁种钙调控蛋白在血管平滑肌细胞与血管内皮细胞中表达的差异》一文中研究指出目的研究TRPC、ORAI1和NCX叁种钙调控蛋白在血管平滑肌细胞、内皮细胞中表达的差异。方法通过实时荧光RT-PCR和Western blot分别检测了TRPC (TRPC1、TRPC3、TRPC4、TRPC5和TRPC6)、ORAI1和NCX (NCX1和NCX2)钙调控蛋白在血管平滑肌细胞与血管内皮细胞中的m RNA和蛋白表达水平。结果TRPC6、ORAI1在血管内皮细胞中m RNA和蛋白表达水平均高于血管平滑肌细胞;TRPC4、TRPC5和NCX2在血管平滑肌细胞中的m RNA和蛋白表达水平均高于在血管内皮细胞,尤其是TRPC4、TRPC5在蛋白表达水平差异有统计学意义(P <0.01)。结论通过差异性表达分析筛选出内皮细胞中高表达的TRPC6、ORAI1和平滑肌细胞中高表达的TRPC4、TRPC5,可能通过选择性钙通道蛋白的调控,从而抑制平滑肌细胞增殖和促进再内皮化,为动脉粥样硬化的预防和治疗、血管支架植入后再狭窄的发生发展提供理论依据。(本文来源于《昆明医科大学学报》期刊2019年02期）
周畅[3]（2019）在《KSHV K15P对内皮细胞与平滑肌细胞增殖和迁移的影响及其SOCE的研究》一文中研究指出目的研究卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)K15P蛋白对参与血管组成的内皮细胞、平滑肌细胞增殖迁移的作用,以及这些作用同钙库操控钙内流(SOCE)之间的相互关系。进一步深入了解K15P蛋白促进细胞增殖和迁移的分子机制。方法(1)操作第叁代慢病毒包装体系,制备慢病毒颗粒:分析含有K15P及其突变体序列的重组质粒p FJ-K15P、p FJ-K15P(YF),设计合成引物。通过PCR扩增目的片段,使用限制性内切酶Not I与Bam H I酶切和TA克隆法构建T载体与慢病毒表达载体p HAGE-CMV-MCS-K15P-Puro、p HAGE-CMV-MCS-K15P(YF)-Puro,使用脂质体转染法将构建好的慢病毒表达载体与两种辅助包装质粒PSPAX2和p MD2.g共转染,培养共转染后的HEK 293T细胞,48~36 h后收集含有病毒颗粒上清液保存。(2)内皮细胞的感染与稳定表达株的筛选:利用慢病毒感染人脐静脉内皮细胞(EA.hy926),通过嘌呤霉素对细胞进行筛选,获得具有嘌呤霉素抗性的细胞株,Western blot检测K15P与K15P(YF)蛋白的表达。(3)K15P蛋白的作用与SOCE之间的关系:培养稳定K15P与K15P(YF)蛋白的EA.hy926细胞,通过钙离子激动剂ATP引起细胞内钙释放,激活SOCE,通过单波长荧光法分别对慢病毒对照组、慢病毒K15P(YF)组和慢病毒K15P感染的内皮细胞内钙离子浓度的变化检测。使用双波长荧光法检测叁种EA.hy 926细胞在静息状态下细胞质钙离子浓度水平。(4)K15P蛋白与细胞增殖和迁移:利用CCK-8试剂盒检测叁种EA.hy 926细胞的增殖活性。细胞迁移实验(Transwell)观察叁种慢病毒感染EA.hy 926细胞引起的细胞迁移变化以及叁种慢病毒感染的EA.hy 926细胞共培养的人脐静脉平滑肌细胞(HUVSMC)的迁移变化。Western blot检测内皮、平滑肌细胞共培养体系中叁种慢病毒感染的EA.hy 926细胞对HUVSMCα-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)表达的影响,CCK-8试剂盒检测HUVSMC的增殖情况。结果(1)通过酶切、送测序,成功构建含有K15P及其突变体基因片段的重组质粒,应用脂质体转染法将重组慢病毒表达载体与两种辅助质粒PSPAX2和p MD2.g共转染,通过在HEK 293T细胞内的组装,获得相应的慢病毒颗粒。(2)经慢病毒感染后的EA.hy926细胞,通过嘌呤霉素筛选后可稳定表达嘌呤霉素抗性,Western blot检测到感染病毒的EA.hy926细胞中K15P蛋白的稳定表达。(3)在EA.hy 926细胞中,表达K15P的细胞与空载体对照、表达K15P(YF)的细胞相比,细胞内钙离子浓度明显升高,钙库释放明显减弱,而SOCE明显增强。(4)在EA.hy 926细胞中,K15P组与对照组和K15P突变体组相比,细胞增殖活性和迁移能力明显增强。与表达K15P的EA.hy 926细胞共培养的HUVSMC,细胞的α-SM-actin表达量减少,增殖活性和迁移能力也有一定的增强。结论构建含有K15P、K15P(YF)基因片段的慢病毒表达载体,成功建立可以高效表达K15P蛋白及其突变体的第叁代慢病毒系统。筛选出稳定表达K15P蛋白及其突变体的内皮细胞株。K15P能促进内皮细胞的增殖迁移,促进内皮细胞对共培养的平滑肌细胞的增殖和迁移作用。K15P能增加内皮细胞胞质内钙离子浓度以及增强SOCE。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2019-02-01）
刘雅蓉,吴鸿飞,戴敏[4]（2018）在《丹皮酚抑制脂多糖诱导的血管内皮细胞TNF-α释放对共培养体系中血管平滑肌细胞凋亡及p38MAPK信号通路的影响》一文中研究指出目的观察丹皮酚(Paeonol,Pae)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)损伤的大鼠血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)炎性因子释放及对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)凋亡的影响,阐明Pae抑制VSMCs凋亡是否通过影响VECs释放的炎性因子调控p38 MAPK信号通路。方法组织块预消化贴壁法原代培养VECs和VSMCs;Transwell小室建立VSMCs和VECs共培养体系;LPS诱导VECs损伤;MTT方法检测细胞存活率;ELISA检测VECs分泌肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)的水平;流式细胞仪检测VSMCs凋亡率;Western blotting检测VSMCs中p38MAPK信号通路及凋亡相关蛋白表达。结果与正常对照组比较,LPS可显着提高VECs分泌的TNF-α水平(P<0.05),明显升高共培养体系中VSMCs p38 MAPK信号通路蛋白及凋亡相关蛋白(p-MKK3/6、pp38、p53和Cleaved caspase-3)水平(P<0.05),显着提高VSMCs凋亡率(P<0.05);与LPS刺激组比较,Pae可显着抑制VECs分泌的TNF-α(P<0.05),明显降低共培养体系中VSMCs p38MAPK信号通路蛋白及凋亡相关蛋白(p-MKK3/6、p-p38、p53和Cleaved caspase-3)水平(P<0.05),显着降低VSMCs凋亡率(P<0.05)。结论 Pae可抑制VECs释放TNF-α,从而抑制p38MAPK信号通路,进而减少VSMCs凋亡。(本文来源于《安徽中医药大学学报》期刊2018年04期）
张华巍[5]（2018）在《血流剪切力调控内皮细胞外泌体分泌进而调控冠状动脉平滑肌细胞增殖和迁移》一文中研究指出研究背景:大部分粥样斑块好发的位置在血管分叉、弯曲以及狭窄等血流稍慢的地方。研究表明,由于剪切力高低的不同,造成的结果也不一样,大部分平直的血管,受到的是高剪切力刺激,也就是我们俗称的高剪切力,近期研究结论认为高剪切力具有抗动脉粥样硬化形成的作用。而在血管分叉,弯曲等位置,容易产生涡流,以致血流方向不均一,速度受到影响,与之前位置相比明显降低的剪切力(剪切力0± 4 dyne/cm2),这一剪切力与之前数据相比,也称之为低剪切力,一定程度上促进了动脉粥样硬化斑块的形成与发展。外泌体,主要是由细胞内部囊泡运输体组成。它的形成主要通过细胞外泌囊泡,囊泡直径一般在30-l00nm之间,外泌体最重要的功能是可以装载细胞的各种成分,同时可以选择性地传递至靶细胞,继而引起靶细胞的改变。其中,Exosomes区别于其他信号通路的最大特点能在细胞间直接摄取,并能有效的转运包括miRNA在内的核酸序列。目的:为了初步探索Exosomes是否参与致A S的机制中,并探讨血流剪切力对于外泌体分泌是否有影响。方法通过新生儿脐带提取HUVECs并培养,对于培养的上述细胞给予不同时间剪切力的干预并通过超速离心法分离外泌体。采用BCA法测量总的蛋白含量以及外泌体蛋白含量,同时通过免疫印迹法测量获得的外泌体的表型蛋白。实验结果1.外泌体表型蛋白western blot鉴定本实验对离心所得exosomes进行western blot方法检测TSG101,CD63表达情况,以细胞蛋白作为阳性对照,测量外泌体表型蛋白。2.低剪切力对HUVECs外泌体蛋白浓度的影响低剪切力刺激后外泌体数量随着时间的延长有着明显的改变,在24小时蛋白浓度达到了高峰,与对照组相比有着明显的差异。3.低剪切力对HUVECs外泌体蛋白/细胞蛋白浓度的影响给予不同时间的剪切力刺激后,刺激时间越长,外泌体分泌的数量越多,也证实了低剪切力下,外泌体的分泌与刺激时间成正相关。结论1.通过原始HUVECs细胞可以培养外泌体,同时应用超速离心法能有效的分离HUVECs 颗粒,提取 exosomes。2.内皮细胞中外泌体表达受剪切力调控:低剪切力刺激时间越长,外泌体分泌的数量越多。研究背景近年来随着对其研究的深入,外泌体这一特定基因携带体逐渐被人们认识。外泌体(Exosomes)是如何起作用的,它主要通过细胞外泌囊泡形成,囊泡直径一般在30-1OOnm之间,外泌体最重要的功能是可以装载细胞的各种成分,同时可以选择性地传递至靶细胞,继而引起靶细胞出现改变。目的外泌体主要起一个传递信号的作用,具体的影响作用还要靠其中携带的不同的miRNA的作用。而血流剪切力能否增强携带miRNA的作用。同时通过低剪切力的刺激使哪种miRNA引起改变呢。本研究通过培养的内皮细胞给予低剪切力刺激,通过免疫荧光法观察能否引起外泌体内所含基因的改变。实验方法通过新生儿脐带提取HUVECs并培养,对于培养的上述细胞给予不同时间剪切力的干预并通过超速离心法分离外泌体。对于不同组的外泌体细胞提取总的RNA,目的是通过荧光定量方式显示miRNA表达是否存在不同。结果与静止对照组相比,低剪切力刺激组明显上调miRNA-145,miRNA-143等基因的表达,而其它相关基因与静止组相比上调变化不大,(P<0.05)。结论1.外泌体主要是通过其携带的微小基因来进行信号传导,进而在细胞层面调控细胞的迁移与增殖。2.受剪切力的影响,在剪切力刺激后外泌体中携带的miRNAs表达差异相差较大。研究背景动物实验的冠脉血管内超声研究表明,大部分易损斑块容易发生的位置在哪,一般来说发生在低ESS的血管段。并且,基线上低ESS的程度严重影响了斑块进展。之前的研究中观察了体外作用下低剪切力引起内皮细胞外泌体分泌增加,同时改变了外泌体中所含的信号转导机制。目的本部分研究通过体外研究方式将提取的低剪切力刺激后的外泌体与静止状态下的外泌体分别转染冠状动脉平滑肌细胞,观察其对冠状动脉平滑肌细胞的作用,通过免疫荧光法及蛋白印迹法证实能否引起冠状动脉平滑肌细胞的增值与迁移。实验方法在外泌体与动脉平滑肌内皮细胞一起孵育后,为观察能否有效,通过荧光共聚焦显微镜观察hCASMCs摄取外泌体的效果,并通过MTT方法检测hCASMCs增值水平,Transwell实验检测hCASMCs迁移水平以及western blot检测hCASMCs相关表型蛋白实验结果1荧光共聚焦显微镜观察hCASMCs摄取外泌体荧光共聚焦显微镜可以观察到动脉平滑肌细胞能有效摄取外泌体。2 Transwell实验检测hCASMCs迁移水平与空白对照组相比,经过摄取低剪切力处理组的外泌体后,冠状动脉平滑肌细胞的迁移能力明显增加,与静止组摄取的外泌体相比,迁移能力得到明显提升,两组之间存在统计学差异,同样,酶标仪检测迁移细胞吸光度值也反映同样的结果(P<0.05)。3.低剪切力处理后HUVECs分泌的外泌体对hCASMCs增殖能力的影响与空白对照组相比,通过酶标仪检测迁移细胞吸光度值,经过摄取低剪切力处理组的外泌体后,冠状动脉平滑肌细胞的增值能力明显增加,与静止组摄取的外泌体相比,增值能力得到明显提升,两组之间存在统计学差异。(P<0.05)。4低剪切力处理后HUVECs分泌的外泌体对hCASMCs表型转换的影响叁组之间通过蛋白印迹法测量处理后的冠状动脉平滑肌细胞的表型蛋白,可见通过低剪切力处理的外泌体被摄取后,冠状动脉平滑肌内皮细胞对于Osteopontin,Epiregulin,Elasti几类蛋白与对照组和空白组相比有差异,a-SMA,Caldesmon,Calponin差异不大。结论1.将低剪切力处理组和对照组外泌体使用PKH67标记,与hCASMCs共孵育24小时。荧光共聚焦显微镜证实hCASMCs确实能够摄取外泌体。2.对比空白对照组(不加外泌体)、对照处理HUVECs分泌的外泌体刺激以及低剪切力处理HUVECs分泌的外泌体刺激,低剪切力处理的外泌体对于hCASMCs迁移能力较其他两组有了明显提高。3.低剪切力处理后HUVECs分泌的外泌体对hCASMCs增殖能力,对比空白对照组(不加外泌体)、对照处理HUVECs分泌的外泌体刺激,增殖能力有了明显提高。4.低剪切力处理的外泌体对于hCASMCs增生以及蛋白表型的变化较其他两组没有显着差异。研究背景通过前面的研究我们发现低剪切力可以刺激原始内皮细胞产生较多的外泌体。通过分泌的外泌体与平滑肌细胞的孵育培养,观察到平滑肌细胞可以充分的摄取外泌体,继而引起下一步的信号转导。而外泌体仅仅是作为一种直接转运RNA的载体,其可以转运多种小分子RNA,从而引起不同细胞之间的不同作用。不同的RNA在信号转导过程中起的作用是不一样的,到底是哪个基因在信号转导中起了主要作用,必须将其单独给予增强来证实这一点。目的单独将miRNA-145作为单独研究对象,并通过与其抑制剂及阴性对照组进行比较,观察该基因是否能增强细胞的增值与迁移,继而可以明确是否通过该基因的调控来促进平滑肌细胞的迁移与增殖。从而最终获取低剪切力是通过调节何种基因来改变平滑肌细胞的性能的。实验方法通过购买的合成的miR-145的mimic,inhibitor,和negative。对外泌体细胞进行转染,根据酶标仪测量转染的效率,同时通过转染的外泌体被内皮细胞摄取后,测量hCASMCs迁移能力,增殖水平以及外泌体对hCASMCs表型转换的影响。实验结果1转染效率的验证含miRNA-145,miRNA-145抑制剂以及阴性对照剂的不同组经过多代细胞培养后。含miRNA-145转染效果明显高于另外2组,与另外两组相比之间存在统计学差异。(P<0.05)。2 MTT法检测外泌体对hCASMCs增殖水平的影响采用MTT方法检测通过冠状动脉平滑肌细胞摄取含有不同miRNA的外泌体后,细胞增值能力的改变,通过酶标仪检测迁移细胞吸光度值,含miRNA-145外泌体的被内皮细胞摄取后,冠状动脉平滑肌细胞的增殖能力明显增加,与另外两组相比之间存在统计学差异。(P<0.05)。3.各组外泌体对hCASMCs迁移能力的影响与加入抑制剂的对照组及阴性试剂的对照组相比,经过摄取含miRNA-145组的外泌体后,冠状动脉平滑肌细胞的迁移能力得到明显提升,叁组之间存在统计学差异,(P<0.05)。4 Western blot检测外泌体对hCASMCs表型转换的影响叁组之间通过蛋白印迹法测量处理后的冠状动脉平滑肌细胞的表型蛋白,可见含有miRNA-145的外泌体被摄取后,冠状动脉平滑肌内皮细胞对于a-SMA,Caldesmon,Calponin,Osteopontin,Epiregulin,Elasti 几类表型蛋白与对照组和空白组相比有明显差异。结论1.在外泌体含有的基因中,miRNA-145对细胞增殖作用以及迁移能力是明显提高的。2.抑制了 miRNA-145后,其他基因对于平滑肌内皮细胞的增殖作用以及迁移能力没有太大影响。3.低剪切力是通过调节HUVECs分泌的外泌体中特定miRNA对冠状动脉平滑肌细胞增殖、迁移和表型转换产生作用。(本文来源于《中国人民解放军医学院》期刊2018-05-23）
郝亚,白雪,阮世超,庄青叶,陈岑[6]（2018）在《维生素C对内皮细胞和平滑肌细胞增殖的影响》一文中研究指出药物洗脱支架(Drug-eluting stent,DES)释放抗增殖的药物来抑制平滑肌细胞(Smooth muscle cells,SMCs)增殖,阻止内膜增生。但这些药物不可避免地会延迟内皮化,因此有必要寻找合适的药物选择性的抑制SMC增殖,同时促进内皮细胞(Endothelial cells,ECs)增殖。维生素C(L-ascorbic acid,L-AA)是一种用于口服或是直接加入细胞培养的药物,因此实验中在培养过夜的EC和SMC细胞中加入浓度为300μg/mL的L-AA、浓度为100μg/mL的雷帕霉素(Sirolimus,SIR)、高糖培养基(Dulbeccos modified eagle medium,DMEM)、杜氏磷酸缓冲液(Dulbeccos phosphate buffered saline,DPBS)和乙醇各100μL,培养7d观察,结果表明:SIR能够抑制EC增殖,而L-AA能够显着促进EC的增殖,同时也能够抑制SMC的生长;在培养过夜的EC和SMC细胞中加入100μL不同浓度的L-AA(1、100、300、500μg/mL和1000μg/mL),培养7d后,1、100μg/mL和300μg/mL的L-AA有利于EC增殖,而500μg/mL和1000μg/mL的L-AA会抑制EC增殖,并且300μg/mL和500μg/mL的L-AA可以显着抑制SMC增殖。由此表明维生素C可以成为潜在的用于药物洗脱支架的药物。(本文来源于《浙江理工大学学报(自然科学版)》期刊2018年03期）
郭庶,谭海萍,张宗尧,向明灯,李良忠[7]（2017）在《血管内皮细胞对血管平滑肌细胞影响的研究进展》一文中研究指出血管内皮细胞(VECs)和血管平滑肌细胞(VSMCs)是血管壁的主要组成细胞。VECs能够保护血管内环境、维持血压以及调节血管运动,是维持血管生理功能平衡的关键。VSMCs可通过舒张和收缩改变血管直径使血管保持适当血压。VECs与VSMCs相邻,它能最先感知血液中的刺激影响VSMCs,进而影响血管的生理状态。在病理条件下,VECs发生损伤和功能失调,导致VSMCs表型转换、增殖及凋亡,进而引发多种心血管疾病。目前,VECs对VSMCs的影响受到越来越多学者的关注,而VECs功能失调对VSMCs的影响与动脉粥样硬化形成之间的关系是今后研究的重点。(本文来源于《医学综述》期刊2017年24期）
冒慧敏[8]（2017）在《莪术成分Zedoarondiol对血管平滑肌细胞增殖和内皮细胞损伤的影响》一文中研究指出血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和内皮细胞损伤是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)和支架内再狭窄(in-stent restenosis,ISR)发生发展的关键环节。血小板源性生长因子-BB(platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)是血管损伤后释放的生长因子,是促进VSMCs增殖的强效促细胞有丝分裂剂。氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)是引起内皮细胞损伤的重要因素。ox-LDL刺激内皮细胞发生氧化应激及炎症反应,从而引起内皮细胞损伤。Zedoarondiol是从中药莪术中提取出的成分,属于倍半萜类化合物,具有抑制脂多糖诱导的巨噬细胞炎症反应、减轻D-半乳糖胺引起的肝损伤的作用。我们前期研究发现,以Zedoarondiol为主要成分的涂层支架可以显着抑制冠状动脉球囊损伤小型猪新生内膜增生,促进血管内皮化,其具体作用机制尚未阐明。基于前期研究,我们提出“Zedoarondiol通过腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)途径抑制PDGF-BB诱导的VSMCs增殖、通过转录因子NF-E2相关因子(NF-E2-related factor 2,Nrf2)途径减轻ox-LDL诱导的内皮细胞损伤”的假说。围绕该假说,我们进行了两方面的研究:(1)研究Zedoarondiol对PDGF-BB诱导的VSMCs细胞数、细胞活力、DNA合成及细胞周期的影响,以及对AMPK信号通路的作用;(2)研究Zedoarondiol对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氧化应激、炎症反应的影响,以及对Nrf2信号通路的作用。研究一Zedoarondiol对PDGF-BB诱导的VSMCs增殖的影响目的:证实莪术成分Zedoarondiol通过AMPK信号通路,抑制PDGF-BB诱导的VSMCs增殖。方法:采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉VSMCs,以PDGF-BB(20ng/m L)诱导VSMCs增殖。细胞计数法检测Zedoarondiol对PDGF-BB诱导的VSMCs细胞数的影响,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测对细胞活力的影响,Brd U掺入法检测Zedoarondiol抑制PDGF-BB诱导的VSMCs DNA合成的影响,流式细胞术分析Zedoarondiol对细胞周期的影响,Western blotting检测Zedoarondiol对AMPK、p-AMPK、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl Co A carboxylase,ACC)、p-ACC、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)、p-m TOR、p70核糖体蛋白S6激酶(p70 ribosomal protein S6 kinase,p70S6K)、p-p70S6K、细胞周期依赖性激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)、cyclin E、p53、p21蛋白表达的影响。结果:与control组相比,PDGF组VSMCs细胞数、细胞活力、DNA合成均增加(P<0.05),VSMCs细胞周期G0/G1细胞数减少(P<0.05),S期细胞数增加(P<0.05)。与PDGF-BB组相比,Zedoarondiol(20μg/m L)预处理可显着抑制PDGF-BB诱导的VSMCs细胞数(P<0.05)、细胞活力、DNA合成(P<0.05),增加VSMCs细胞周期G0/G1细胞数(P<0.05),减少S期细胞数(P<0.05),而对PDGF-BB处理的VSMCs细胞凋亡无明显影响(P>0.05)。Zedoarondiol(5~40μg/m L)对正常培养的VSMCs细胞活力无明显影响(P>0.05)。Western blotting显示:Zedoarondiol可上调PDGF-BB处理的VSMCs AMPK、ACC磷酸化和p53、p21蛋白表达(P<0.05),下调m TOR、p70S6K磷酸化和CDK2、cyclin E蛋白表达(P<0.05)。Zedoarondiol与AMPK激活剂compound C共同预处理(PDGF+Zed+compound C组),可减弱Zedoarondiol对VSMCs增殖的抑制作用,表现为与PDGF+Zed组相比,PDGF+Zed+compound C组VSMCs细胞数、细胞活力、DNA合成增加(P<0.05);与AMPK抑制剂5-氨基咪唑-4-甲酰胺-1-β-呋喃核糖苷(5-aminoimidazole-4-carboxamide 1-β-ribofuranoside,AICAR)共同预处理(PDGF+Zed+AICAR组),可加强Zedoarondiol抑制VSMCs增殖的作用,表现为与PDGF+Zed组相比,PDGF+Zed+AICAR组VSMCs细胞数、细胞活力、DNA合成进一步下降(P<0.05)。结论:Zedoarondiol抑制PDGF-BB诱导的大鼠VSMCs增殖,机制可能与活化AMPK、抑制下游的m TOR/p70S6K信号通路和上调p53/p21信号通路相关。研究二Zedoarondiol对ox-LDL诱导的血管内皮损伤的影响目的:证实莪术成分Zedoarondiol通过Nrf2途径减轻ox-LDL诱导的内皮细胞损伤。方法:以ox-LDL(150μg/m L)刺激HUVECs 24h,建立内皮细胞损伤模型。采用CCK-8法及乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活性检测观察Zedoarondiol对ox-LDL刺激的内皮细胞的保护作用,检测丙二醛(methane dicarboxylic aldehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力以观察内皮细胞氧化应激状态,以二氯荧光素双醋酸盐(dichlorodihydrofluorescin diacetate,DCFH-DA)染色法检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,酶联免疫吸附法(enzyme linked immuno sorbent assay,ELISA)检测细胞上清白介素-1β(interleukine-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)的含量,细胞免疫荧光染色观察Zedoarondiol对Nrf2核转位的影响,Western blotting检测Zedoarondiol对IL-1β、TNF-α、MCP-1、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和Nrf2蛋白表达的影响。结果:与control组相比,ox-LDL组内皮细胞活力和SOD活性显着下降(P<0.05),细胞培养上清LDH活力、细胞内MDA及ROS水平、细胞培养上清中IL-1β、TNF-α和MCP-1水平均显着升高(P<0.05)。Western blotting结果显示,IL-1β、TNF-α和MCP-1蛋白表达升高(P<0.05)。与ox-LDL组相比,Zedoarondiol(20μg/m L)预处理显着升高内皮细胞活力(P<0.05),降低细胞培养上清LDH活力及细胞内MDA、ROS水平(P<0.05),上调SOD活性(P<0.05)。Zedoarondiol预处理还可降低细胞培养上清IL-1β、TNF-α和MCP-1水平(P<0.05),抑制IL-1β、TNF-α和MCP-1蛋白表达(P<0.05)。Zedoarondiol对正常培养的HUVECs细胞活力、细胞内MDA和ROS水平、SOD活性,细胞培养上清中IL-1β、TNF-α和MCP-1水平及其蛋白表达均无明显影响(P>0.05)。细胞免疫荧光结果显示,Zedoarondiol可促进胞浆Nrf2向细胞核内转位。Western blotting结果显示,Zedoarondiol可上调细胞核组分Nrf2及HO-1的蛋白表达(P<0.05)。Zedoarondiol与Nrf2抑制剂全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)共同预处理(ox-LDL+Zed+ATRA组),则可减弱Zedoarondiol对ox-LDL刺激的内皮细胞的保护作用,表现为与ox-LDL+Zed组相比,ox-LDL+Zed+ATRA组MDA含量升高、SOD活性下降(P<0.05)。结论:Zedoarondiol可减轻ox-LDL诱导的内皮细胞氧化应激及炎症反应,保护内皮细胞,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路相关。(本文来源于《北京中医药大学》期刊2017-05-01）
杨春[9]（2017）在《托瑞米芬影响内皮细胞和平滑肌细胞生物学行为及机制的研究》一文中研究指出冠状动脉疾病(CAD)是目前严重威胁人类身体的重大疾病之一,在病变部位置入药物洗脱支架(DESs)是迄今最好的治疗方法,可减少血管再狭窄的几率,但再狭窄率(ISR)并没有完全消除,因此,再狭窄的预防和治疗成为心血管疾病研究领域中的热点。如何实现快速内皮化和抑制平滑肌过度增生是目前预防再狭窄面临的两大挑战。本文通过体外细胞实验,探究新一代抗肿瘤药物托瑞米芬(TOR)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)和血管平滑肌细胞(VSMCs)的细胞生物学行为的影响及其作用机制。本文主要研究内容及结果如下:(1)TOR影响内皮细胞生物学行为。研究表明TOR能抑制内皮细胞增殖且随着TOR浓度增大其抑制作用也逐渐加强;显着促进了内皮细胞的早期凋亡,晚期凋亡及细胞坏死;抑制内皮细胞的分裂并将细胞阻滞在G_0G_1期;延迟了内皮细胞的粘附时间却并未影响其粘附总数;显着抑制细胞的运动和迁移行为;≥7.5μM的TOR可以明显地改变细胞的形态结构。(2)TOR影响内皮细胞的机制。免疫荧光和免疫印记双重验证的方法检验PCNA、P53及Rho/ROCK信号通路的关键蛋白的表达量。研究结果表明:TOR浓度愈高,PCNA的表达量明显降低,暗示TOR抑制内皮细胞增殖的作用就愈明显;而P53的表达随TOR浓度的增加而增加,说明TOR是通过促进P53的表达而加速细胞的凋亡;TOR显着抑制了整合素Integrinβ1及Rho的表达,进而降低了ROCK信号通路中下游因子MLC和pMLC的表达水平。说明TOR可能是通过Integrinβ1-Rho-ROCK-(p)MLC信号通路抑制内皮细胞的迁移行为。(3)TOR影响平滑肌细胞生物学行为。研究表明该药物也能抑制平滑肌细胞增殖且随着浓度增大抑制作用逐渐增强;显着促进了平滑肌细胞的早期凋亡,晚期凋亡及细胞坏死;抑制平滑肌细胞的分裂并将细胞阻滞在G_0G_1期;延迟了平滑肌细胞的粘附时间并影响其粘附总数;显着抑制平滑肌细胞群体的运动和迁移行为;高浓度的TOR可以明显改变细胞的形态结构。(4)TOR影响平滑肌细胞的机制。采用免疫荧光和免疫印记双重验证的方法分别对PCNA,P53及Rho/ROCK信号通路中的关键蛋白的表达量进行分析,并运用流式细胞术对TOR影响平滑肌细胞的调亡行为作进一步的探讨。结果表明:随着TOR浓度增高,PCNA表达量明显降低,抑制平滑肌细胞增殖的作用就愈明显;而P53的表达随TOR浓度的增加而增加,说明TOR是通过促进P53的表达而加速细胞的凋亡;高浓度TOR促进了平滑肌线粒体膜电位下降进而使释放的活性氧水平升高,激活caspase3及9,最终促进了平滑肌细胞的凋亡。迁移机制的研究结果表明:TOR显着抑制了整合素Integrinβ1及Rho的表达,进而降低了ROCK信号通路中下游因子MLC和pMLC的表达水平。说明TOR可能是通过Integrinβ1-Rho-ROCK-(p)MLC信号通路抑制细胞的迁移行为。(本文来源于《重庆大学》期刊2017-04-01）
麻晓婷[10]（2017）在《SM22α缺陷的平滑肌细胞诱导内皮细胞功能失调》一文中研究指出目的:内皮细胞(endothelial cell,EC)功能失调和血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化与心血管疾病密切相关。平滑肌22 alpha(smooth muscle 22 alpha,SM22α)是细胞骨架相关蛋白,在分化型VSMC中高表达,参与细胞骨架重构和VSMC表型调节。缺失SM22α可加剧血管炎症。SM22α对VSMC的作用已得到充分证实,但其对VSMC的作用是否影响EC的功能尚无研究报道。本研究采用野生型(wild-type,WT)和SM22α基因敲除(SM22α-/-)小鼠VSMC条件培养基(VSMC conditioned medium,VSMC-CM)分别处理EC,观察其对EC功能的影响。方法:1应用Ang II处理C57BL/6 WT及SM22α-/-小鼠VSMC 24 h,收集细胞,采用免疫共沉淀和双荧光免疫染色检测VCAM-1与SMα-actin的相互作用。2收集Ang II处理24 h的VSMC-CM,孵育人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)24 h后,Western blot检测HUVEC中eNOS和MCP-1的表达,分析培养基NO含量。3应用WT或SM22α-/-VSMC条件培养基处理HUVEC,跨膜迁移分析检测不同培养条件下HUVEC对单核巨噬细胞趋化活性的影响。结果:1 SM22α缺失促进AngII诱导的VSMC膜结合型VCAM-1的表达为观察F-actin与膜表面VCAM-1表达之间的关系,首先分离细胞F-actin组分,用抗SMα-actin抗体沉淀,所得沉淀组分用Western blot检测与SMα-actin结合的VCAM-1。结果显示,从未刺激的WT VSMC F-actin中几乎检测不到VCAM-1;而静止状态的SM22α-/-VSMC的F-actin组分可检测出少量结合的VCAM-1;在Ang II刺激后,与WT相比,SM22α-/-VCAM-1与SMα-actin的结合活性显着增加。细胞免疫荧光染色结果显示,在WT VSMC中,F-actin呈束状,平行排列,而在SM22α-/-VSMC中,F-actin稀疏,主要分布在细胞皮层边缘区;与WT相比较,AngII诱导的SM22α-/-细胞皮层F-actin与VCAM-1共定位荧光强度增强,其主要分布于细胞膜表面,与免疫共沉淀结果一致。结果表明,SM22α缺失促进VSMC膜表面结合型VCAM-1的表达,这与细胞皮层F-actin的相互作用增强有关。2 SM22α-/-VSMC条件培养基抑制内皮细胞eNOS表达,NO释放减少为了研究VSMC缺失SM22α是否诱导EC功能障碍,用Western blot检测HUVEC eNOS表达。结果显示,与WT比较,Ang II处理和未处理的SM22α-/-VSMC-CM对内皮细胞eNOS表达均有抑制作用;并且,AngII处理24 h的SM22α-/-VSMC-CM抑制HUVEC中eNOS表达的作用比WT更加明显(P<0.01)。对HUVEC培养基中NO含量进行分析,结果显示,各组细胞NO释放量的变化趋势与eNOS表达变化具有平行关系,SM22α-/-VSMC-CM处理的HUVEC其NO合成明显低于野生组(P<0.01)。3 SM22α-/-VSMC条件培养基诱导内皮细胞MCP-1分泌增多为了证实SM22α-/-VSMC外泌物对EC是否有激活作用,检测HUVEC培养基中MCP-1的表达量。Western blot分析显示,SM22α-/-VSMC-CM处理的内皮细胞其培养基MCP-1表达量明显高于野生型处理组,而且,比较AngII处理后的诱导活性,SM22α-/-比WT升高更加明显(P<0.05)。细胞跨膜迁移实验结果显示,被VSMC-CM处理的内皮细胞外泌物可增加巨噬细胞跨膜迁移活性,而且与MCP-1的表达量呈正相关关系。结果表明缺失SM22α后AngII诱导的VSMC旁分泌可诱导EC功能失调进而加剧血管炎症。结论:1缺失SM22α促进VSMC炎症应答;2缺失SM22α的VSMC旁分泌诱导EC功能失调。(本文来源于《河北医科大学》期刊2017-03-01）
内皮细胞和平滑肌细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的研究TRPC、ORAI1和NCX叁种钙调控蛋白在血管平滑肌细胞、内皮细胞中表达的差异。方法通过实时荧光RT-PCR和Western blot分别检测了TRPC (TRPC1、TRPC3、TRPC4、TRPC5和TRPC6)、ORAI1和NCX (NCX1和NCX2)钙调控蛋白在血管平滑肌细胞与血管内皮细胞中的m RNA和蛋白表达水平。结果TRPC6、ORAI1在血管内皮细胞中m RNA和蛋白表达水平均高于血管平滑肌细胞;TRPC4、TRPC5和NCX2在血管平滑肌细胞中的m RNA和蛋白表达水平均高于在血管内皮细胞,尤其是TRPC4、TRPC5在蛋白表达水平差异有统计学意义(P <0.01)。结论通过差异性表达分析筛选出内皮细胞中高表达的TRPC6、ORAI1和平滑肌细胞中高表达的TRPC4、TRPC5,可能通过选择性钙通道蛋白的调控,从而抑制平滑肌细胞增殖和促进再内皮化,为动脉粥样硬化的预防和治疗、血管支架植入后再狭窄的发生发展提供理论依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
内皮细胞和平滑肌细胞论文参考文献
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