导读:本文包含了环介导等温扩增检测方法论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:猪水泡病病毒,环介导等温扩增技术,敏感性,特异性
环介导等温扩增检测方法论文文献综述
丁小龙,程芳珍,李茜,李国秀[1]（2019）在《反转录环介导等温扩增技术快速检测猪水疱病毒方法的建立》一文中研究指出为了建立一种针对猪水泡病毒(SVDV)的反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),用于减少猪水泡病与口蹄疫因临床症状相似而造成的误诊,试验针对SVDV VP1基因序列设计4个LAMP引物,其中外侧引物用于SVDV PCR检测,并利用RT-LAMP和RT-PCR方法进行敏感性试验、特异性试验以及临床样品检测。结果表明:针对SVDV的RT-LAMP检测方法的敏感性是RT-PCR的10倍; RT-LAMP方法的特异性良好,与口蹄疫病毒无交叉反应;两种方法对临床样品检测的符合率为100%。说明试验建立的RT-LAMP方法具有敏感性高、特异性强、快速等特点,适合实验室和临床对SVDV的快速诊断。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年21期）
冯洁,张泉,钱淼,谢建云,高诚[2]（2019）在《牛棒状杆菌环介导等温扩增快速检测方法的建立及初步应用》一文中研究指出目的建立牛棒状杆菌(C.bovis)环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法根据牛棒状杆菌16S rRNA基因保守区域设计一组特异性引物,对反应条件进行优化并对特异性和敏感性进行分析。结果建立的LAMP扩增方法仅能检测出牛棒状杆菌,其他常见细菌未见特异性扩增,检出牛棒状杆菌的最低模板量为118 fg/μL。结论建立的牛棒状杆菌LAMP检测方法操作简单、快速高效,结果易于观察,对仪器设备要求低,可用于牛棒状杆菌的快速检测。(本文来源于《实验动物与比较医学》期刊2019年05期）
苗丽,张秀平,王建昌,王永亮,程奇[3]（2019）在《肉制品中鸡源性成分重组酶介导等温扩增检测方法的建立及应用》一文中研究指出为了快速准确检测出肉制品中的鸡源性成分,本研究基于鸡线粒体细胞色素B基因(CytB),设计特异性引物和exo探针,建立了实时荧光重组酶介导等温扩增(RAA)方法,进行特异性、灵敏性和稳定性分析,并通过检测市售肉制品对所建立RAA方法的准确性和适用性进行分析。结果表明,该方法可以快速实现对高山鸡肉、乌鸡肉、芦花鸡肉、白羽鸡肉和野鸡肉基因组DNA的特异性扩增,而对猪肉、牛肉、羊肉等的DNA均没有扩增,可稳定检出的鸡源性成分最低质量分数为0.1%。在9份标识有鸡肉成分的市售样品中,7份检出鸡源性成分,有2份样品的鸡源性成分检测结果为阴性。本研究建立的实时荧光RAA方法操作简单,反应迅速,特异性强,灵敏度高,为肉制品中鸡源性成分的检测提供了技术保障。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2019年04期）
陈珍金,曹炜伟,石磊,叶蕾[4]（2019）在《猪伪狂犬病毒环介导等温扩增技术检测方法的建立》一文中研究指出为建立通用性猪伪狂犬病毒(PRV)环介导等温扩增快速检测方法,本实验根据PRV gB基因序列的保守区段设计四套特异性引物,基于环介导等温扩增技术引入环引物,筛选出特异性引物PRV-1,对其特异性、灵敏度进行评估,进行临床样本和人工干扰样本检测试验,并与实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)检测结果进行比较分析。结果表明该检测方法能够特异性的检出PRV的存在,具有良好的特异性;灵敏度检测下限为10fg/μL;且本文建立的检测方法其结果与临床样品和人工干扰样本qPCR检测结果具有高度的一致性。因此,本实验建立的PRV环介导等温扩增检测方法特异性强、灵敏度高,具有较好的稳定性,并且操作安全、简便、高效,该方法的建立为猪伪狂犬病的快速诊断和基层检疫提供了新的选择。(本文来源于《现代食品科技》期刊2019年09期）
付怡欣[5]（2019）在《基于连接反应及环介导等温扩增技术的结直肠癌KRAS基因突变检测新方法研究》一文中研究指出目的:本文拟以连接反应和环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)为基础,构建基于连接反应的环介导等温扩增新方法,实现KRAS基因突变的高灵敏、高特异性检测。方法:本研究首先对本方法的可行性进行了验证。研究中突变KRAS DNA(mutant DNA,mut DNA)能够与连接底物SLS1和SLS2互补配对,在连接酶的作用下,特异地连接而形成哑铃状结构(dumbbell-shaped structure,DSS)模板,从而启动下一步LAMP的扩增反应,产生大量长短不一的DNA双链,这时荧光染料SYBR Green I镶嵌到产生的DNA双链中产生明显的荧光信号。而与mut DNA相比,野生型KRAS DNA(wild-type DNA,wt DNA)与SLS2之间多了一个错配碱基,导致连接反应不能进行,不能进行后续的LAMP放大,产生微弱的荧光信号,由此对mut DNA和wt DNA进行区分。在明确方案可行后,对实验中的错配位点、连接温度、连接循环次数、Bst DNA聚合酶浓度和LAMP温度进行了优化,然后在最优实验条件下对本方案的线性范围和特异性进行了探究;最后将本方案运用到临床样本的检测中,并与PCR的检测结果进行比对。结果:本研究成功构建了一种基于连接反应的环介导等温扩增新方法用于KRAS基因突变的检测。在最佳的实验条件下(错配位点:第叁个位点、连接温度:63°C、循环次数:30个循环、Bst DNA聚合酶浓度:0.4 U/μL、LAMP温度:65°C),本方案具有较高的灵敏度和特异性。mut DNA浓度与拐点值(point of inflection,POI)在10 a M到100 p M之间有一个良好的线性关系;在与大量的wt DNA混合的情况下,可以检测到低至0.1%的mut DNA。此外,本方法对结直肠癌组织样本突变检测的结果与PCR方法的检测结果一致,两者有较好的相关性。结论:本研究所提出的基于连接的环介导等温扩增方法对突变的检测有很大潜力,有望应用于疾病诊断、个体化医疗和生物医学研究等领域,最终为生物研究和临床疾病的诊疗提供有力的技术支持。(本文来源于《遵义医科大学》期刊2019-06-30）
翟立文,刘文枝,许晨,范玉顶,江南[6]（2019）在《鲤浮肿病病毒环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立》一文中研究指出本研究针对鲤浮肿病病毒(carp edema virus, CEV)基因组核蛋白编码基因P4a的序列,设计2对特异性引物,以克隆构建的重组质粒为标准模板,通过优化反应体系中引物浓度组合、Mg~(2+)浓度、dNTPs浓度、反应温度和扩增时间等参数,建立了CEV环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。结果表明,CEV-LAMP方法的最佳反应温度为62℃,引物浓度组合为引物F3/B3 0.2μmol/L,引物FIP/BIP 1.2μmol/L, Betaine0.7 mol/L, Mg~(2+) 8.0 mmol/L, dNTPs 1.2 mmol/L,反应时间60 min。反应产物经凝胶电泳呈现梯型条带,添加SYBR Green I荧光染料后,呈现明显的绿色阳性反应。CEV-LAMP法灵敏度高,最低检测限为10 copies/μL,较常规PCR法灵敏度高100倍; CEV-LAMP法特异性强,与锦鲤疱疹病毒(KHV)、鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)、鳜传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)及鲤春病毒血症病毒(SVCV)无交叉反应。CEV-LAMP应用于患病鲤样本检测结果准确,简便快速,可为鲤浮肿病的现场诊断与防控提供技术支撑。(本文来源于《中国水产科学》期刊2019年05期）
钟鸣[7]（2019）在《禽腺病毒血清4型巢式PCR和环介导等温扩增检测方法建立及应用》一文中研究指出2015年6月起,由禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)引起的以心包积聚淡黄色液体、肝炎和肾炎为主要临床特征的新型家禽传染性疾病——心包积水-肝炎综合征(Hydropericardium hepatitis syndrome,HHS)在我国山东、安徽、江苏、河南等省份大面积流行。该病易发生混合感染,主要危害3~6周龄的肉鸡,死亡率最高可达90%,给家禽养殖业带来重大的经济损失。常规实验室检测方法需要特殊的仪器设备,仪器价格昂贵而且检测场地受到限制,检测耗时费力,在基层生产过程中存在诸多不便,所以建立一种快速、灵敏、便捷的检测方法十分必要。本研究建立了巢式PCR和环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)两种方法用于检测FAdV-4。通过对GenBank上已公布的27株禽腺病毒全基因序列进行比对,针对其高度保守区域设计特异性的分别针对I群禽腺病毒和FAdV-4的2对巢式PCR引物,建立了一种FAdV-4巢式PCR检测方法,并对该方法的反应条件以及反应体系进行优化。巢式PCR优化后反应条件为:第一轮反应最佳退火温度为60.4℃,退火时间35 s,循环30次,外引物浓度为0.9μmol/L,Mg~(2+)浓度为2.5 mmol/L,rTaq DNA聚合酶浓度为1 U;第二轮反应最佳退火温度为54.6℃,退火时间30 s,循环30次,内引物浓度为0.5μmol/L,Mg~(2+)浓度为1.0 mmol/L,rTaq DNA聚合酶浓度为1 U。该检测方法优化后呈现最高效率的特异性扩增,未见与其他鸡源易感病毒发生交叉反应,同时该检测方法具有较高的灵敏度,最低可检测到5.2 pg/μL的病毒DNA。同时,针对FAdV-4 Hexon基因序列设计了特异性LAMP引物,建立了一种对FAdV-4的LAMP检测方法,并对其反应条件和反应体系进行优化。优化后反应温度为62℃,反应时间为30 min,当外引物与内引物浓度之比为1:2时,扩增效果显着提升。当Mg~(2+)浓度为6.0μmol/L时显示当前最好扩增效果。灵敏性试验结果显示该方法比巢式PCR检测方法灵敏度高出10倍,同时具有良好的特异性。最后运用两种检测方法同时对102份临床样本进行检测,LAMP检测方法检出的阳性率为34.3%,巢式PCR方法检出的阳性率为20.5%,说明LAMP检测方法更特异灵敏而有较好的应用前景。(本文来源于《东北农业大学》期刊2019-06-01）
何亚鹏,陈怡静,时晓,张宝莉,温战华[8]（2019）在《传染性造血器官坏死病毒环介导等温扩增检测方法的建立和初步应用》一文中研究指出实验建立了一套反转录环介导等温扩增方法(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP),用于实验室及现场检测鲑鳟鱼传染性造血器官坏死病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)。针对IHNV的核蛋白基因设计特异性引物,以IHNV基因组RNA为模板,在反转录酶及Bst DNA聚合酶的作用下进行反转录LAMP,结果阳性样本表现为荧光绿色,阴性样本仍为红棕色。反应条件优化结果表明最适反应温度为64℃;特异性试验表明仅IHNV发生特异性扩增,而SVCV、HRV、VHSV和H_2O均不发生反应;敏感性试验表明该LAMP方法可检出浓度为1.0×10~(-4)μg/μL的IHNV核酸。本研究所建立的IHNV反转录LAMP检测法成本低、操作简单、反应迅速、不依赖专门的仪器,同时具有较高的灵敏度和特异性,适合IHNV的现场检测和大批量样品的检疫。(本文来源于《淡水渔业》期刊2019年03期）
徐滢,郝玉青,付明哲,张琪,李勤凡[9]（2019）在《小反刍兽疫病毒环介导等温扩增检测方法的建立》一文中研究指出为了建立适用于基层养殖场快速、可视化的小反刍兽疫病毒(PPRV)环介导等温扩增(LAMP)检测方法,根据GenBank公布的PPRV F基因保守区核苷酸序列为靶序列,设计一组特异性LAMP引物,优化反应条件(时间、温度)和反应体系(dNTP、Mg2+、甜菜碱浓度),并进行特异性和灵敏性试验,最后用建立的方法对临床样品RNA进行检测。结果表明,所建立的方法在65℃时反应45min即可获得清晰的梯状条带;扩增物经10×SYBR GreenⅠ荧光染料染色,紫外线照射之后即可直接判定结果;灵敏性试验表明,该方法能够检出的PPRV核酸的最低浓度为8.63ng/mL,与常规RT-PCR方法相比,灵敏度增高100倍;该方法特异性良好,与山羊痘病毒(GTPV)、羊支原体(Mccp)、羊口疮病毒(ORFV)均无交叉反应;对16份临床样品RNA检测结果显示,该方法与传统RT-PCR检测结果一致。建立的LAMP检测方法的特异性、灵敏度均好,可用于临床小反刍兽疫病毒的检测。(本文来源于《动物医学进展》期刊2019年03期）
乔艳,周前进,李孝军,苗亮,陈炯[10]（2019）在《环介导等温扩增联合横向流动试纸条检测简单异尖线虫/派氏异尖线虫方法的建立》一文中研究指出简单异尖线虫复合种(Anisakissimplexspeciescomplex)是人兽共患寄生虫,其中的简单异尖线虫(A. simplex sensu stricto)和派氏异尖线虫(A. pegreffii)能引起人异尖线虫病。本研究利用环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)结合流动试纸条(lateralflowdipstick,LFD)建立了简单异尖线虫/派氏异尖线虫的快检技术。本研究以简单异尖线虫核糖体DNA的内转录间隔区(ribosomal internal transcribed spacer 2, rDNA-ITS2)序列为检测靶标,设计6条特异性的引物进行(荧光)LAMP反应。将生物素化的LAMP产物与异硫氰酸荧光素标记的探针杂交并通过LFD可视化显示。结果表明,本研究建立的LAMP-LFD可以特异性检测出简单异尖线虫/派氏异尖线虫,而对其它10种蠕虫的检测结果呈阴性;针对两个异尖线虫姊妹种的第叁期幼虫(third-stagelarvae,L3)的检测灵敏度为单条虫体基因组DNA的10–5倍。优化后的LAMP反应时间为40min,加之探针杂交和LFD显色,整个检测时程只需50min。利用本LAMP-LFD方法对2015—2017年收集于140尾海鱼的1573条线虫进行检测的结果表明,简单异尖线虫/派氏异尖线虫是东海海域的优势种,这与经rDNA-ITS1-5.8S-ITS2测序的结果一致。因此, LAMP-LFD方法能快速、灵敏且准确地检测简单异尖线虫/派氏异尖线,在经济鱼类中简单异尖线虫复合种的筛检和常规检验检疫具有巨大潜力。(本文来源于《海洋与湖沼》期刊2019年02期）
环介导等温扩增检测方法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的建立牛棒状杆菌(C.bovis)环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法根据牛棒状杆菌16S rRNA基因保守区域设计一组特异性引物,对反应条件进行优化并对特异性和敏感性进行分析。结果建立的LAMP扩增方法仅能检测出牛棒状杆菌,其他常见细菌未见特异性扩增,检出牛棒状杆菌的最低模板量为118 fg/μL。结论建立的牛棒状杆菌LAMP检测方法操作简单、快速高效,结果易于观察,对仪器设备要求低,可用于牛棒状杆菌的快速检测。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
环介导等温扩增检测方法论文参考文献
[1].丁小龙,程芳珍,李茜,李国秀.反转录环介导等温扩增技术快速检测猪水疱病毒方法的建立[J].黑龙江畜牧兽医.2019
[2].冯洁,张泉,钱淼,谢建云,高诚.牛棒状杆菌环介导等温扩增快速检测方法的建立及初步应用[J].实验动物与比较医学.2019
[3].苗丽,张秀平,王建昌,王永亮,程奇.肉制品中鸡源性成分重组酶介导等温扩增检测方法的建立及应用[J].江苏农业学报.2019
[4].陈珍金,曹炜伟,石磊,叶蕾.猪伪狂犬病毒环介导等温扩增技术检测方法的建立[J].现代食品科技.2019
[5].付怡欣.基于连接反应及环介导等温扩增技术的结直肠癌KRAS基因突变检测新方法研究[D].遵义医科大学.2019
[6].翟立文,刘文枝,许晨,范玉顶,江南.鲤浮肿病病毒环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立[J].中国水产科学.2019
[7].钟鸣.禽腺病毒血清4型巢式PCR和环介导等温扩增检测方法建立及应用[D].东北农业大学.2019
[8].何亚鹏,陈怡静,时晓,张宝莉,温战华.传染性造血器官坏死病毒环介导等温扩增检测方法的建立和初步应用[J].淡水渔业.2019
[9].徐滢,郝玉青,付明哲,张琪,李勤凡.小反刍兽疫病毒环介导等温扩增检测方法的建立[J].动物医学进展.2019
[10].乔艳,周前进,李孝军,苗亮,陈炯.环介导等温扩增联合横向流动试纸条检测简单异尖线虫/派氏异尖线虫方法的建立[J].海洋与湖沼.2019