导读:本文包含了缺口酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:缺口酶,等温扩增,剪切,链置换扩增
缺口酶论文文献综述
邓世琼,董娟,陈刚毅,杜凤,邹家尉[1]（2015）在《基于缺口酶的链置换等温扩增技术》一文中研究指出传统的链置换等温扩增技术中需要加入修饰的底物,为了解决这一技术难题,实现常规底物下的链置换等温扩增技术,采用缺口酶Nt.BstNBI代替传统链置换等温扩增技术中的限制性内切酶,通过优化两种酶的比例、反应温度、反应时间、两种原装buffer的比例、buffer中的离子浓度等反应条件和引物浓度、引物序列以及引物前端保护序列的长度,最终建立了一种新型的链置换等温扩增技术.该方法可以检测到2 pmol/L的质粒DNA.扩增反应在15-30 min即可完成,并且产物可通过琼脂糖凝胶电泳进行直接检测.本研究建立的基于缺口酶的链置换等温扩增技术较之传统方法更加简便、快捷、环保且价格低廉,具有非常强的实际应用潜力,特别适用于现场检测.(本文来源于《应用与环境生物学报》期刊2015年06期）
何艳[2]（2010）在《缺口酶依赖的DNA链置换扩增技术的研究》一文中研究指出背景与目的:近年来核酸等温扩增技术迅猛发展,显现出广阔的应用前景。链置换扩增技术是一种快速、灵敏、特异的DNA等温扩增方法,但硫修饰的dNTP的掺入限制了其在分子生物学领域的应用范围。缺口酶是一种能在天然DNA特异序列内部或附近产生单链缺口,而对底物不需要任何修饰的限制性内切酶。本研究对链置换扩增技术进行革新,以缺口酶取代普通限制性内切酶与dNTP[αS]掺入,提出了缺口酶依赖的DNA链置换扩增技术(nickase-dependent DNA strand displacement amplification),使其适用于基层医疗卫生单位,用于某些疾病及病原体的检测。方法:1)以Lambda DNA或pUC18质粒DNA为模板扩增短目的片段,初步建立合适的扩增体系,摸索包括聚合酶与切口酶的相对用量,引物与模板的相对用量,反应条件(温度、时间、离子强度、pH值)等。2)以上述工作为基础探讨扩增较长目的片段(>500 bp)的可能性。3)分别以人全基因组DNA,淋球菌基因组DNA和白色念珠菌基因组DNA为模板扩增特异性片段。结果:1)以Lambda DNA为模板扩增出131/133 bp片段,优化条件建立了最适的短片段扩增体系;2)以Lambda DNA为模板扩增出200 bp,500 bp产物片段;3)以pUC18质粒DNA为模板扩增出500 bp产物片段;4)以Lambda DNA为模板扩增出1.2 kb产物片段,但产量及纯度有待改进。5)以人全基因组DNA,淋球菌基因组DNA和白色念珠菌基因组DNA为模板扩增,电泳未见单一目的片段。结论:1)本研究将缺口酶与链置换扩增技术相结合新创的缺口酶依赖的DNA链置换扩增(NDA)体系能以Lambda DNA及pUC18 DNA为模板快速敏感有效地扩增短目的片段。2)NDA体系扩增短目的片段其合适的扩增条件是:25μL反应体系中,dNTP终浓度为0.4μM, primers为1μM,NaCl为100 mM,Bst DNA polymerase Large Fragment用量为8 U,Nt.BstNBI为2 U,反应温度为55℃,反应时间为15-30 min;3)NDA方法有扩增较长(>500 bp)片段的可能,但是对于复杂基因组DNA,反应体系尚需进一步改进。(本文来源于《南华大学》期刊2010-05-01）
缺口酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景与目的:近年来核酸等温扩增技术迅猛发展,显现出广阔的应用前景。链置换扩增技术是一种快速、灵敏、特异的DNA等温扩增方法,但硫修饰的dNTP的掺入限制了其在分子生物学领域的应用范围。缺口酶是一种能在天然DNA特异序列内部或附近产生单链缺口,而对底物不需要任何修饰的限制性内切酶。本研究对链置换扩增技术进行革新,以缺口酶取代普通限制性内切酶与dNTP[αS]掺入,提出了缺口酶依赖的DNA链置换扩增技术(nickase-dependent DNA strand displacement amplification),使其适用于基层医疗卫生单位,用于某些疾病及病原体的检测。方法:1)以Lambda DNA或pUC18质粒DNA为模板扩增短目的片段,初步建立合适的扩增体系,摸索包括聚合酶与切口酶的相对用量,引物与模板的相对用量,反应条件(温度、时间、离子强度、pH值)等。2)以上述工作为基础探讨扩增较长目的片段(>500 bp)的可能性。3)分别以人全基因组DNA,淋球菌基因组DNA和白色念珠菌基因组DNA为模板扩增特异性片段。结果:1)以Lambda DNA为模板扩增出131/133 bp片段,优化条件建立了最适的短片段扩增体系;2)以Lambda DNA为模板扩增出200 bp,500 bp产物片段;3)以pUC18质粒DNA为模板扩增出500 bp产物片段;4)以Lambda DNA为模板扩增出1.2 kb产物片段,但产量及纯度有待改进。5)以人全基因组DNA,淋球菌基因组DNA和白色念珠菌基因组DNA为模板扩增,电泳未见单一目的片段。结论:1)本研究将缺口酶与链置换扩增技术相结合新创的缺口酶依赖的DNA链置换扩增(NDA)体系能以Lambda DNA及pUC18 DNA为模板快速敏感有效地扩增短目的片段。2)NDA体系扩增短目的片段其合适的扩增条件是:25μL反应体系中,dNTP终浓度为0.4μM, primers为1μM,NaCl为100 mM,Bst DNA polymerase Large Fragment用量为8 U,Nt.BstNBI为2 U,反应温度为55℃,反应时间为15-30 min;3)NDA方法有扩增较长(>500 bp)片段的可能,但是对于复杂基因组DNA,反应体系尚需进一步改进。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
缺口酶论文参考文献
[1].邓世琼,董娟,陈刚毅,杜凤,邹家尉.基于缺口酶的链置换等温扩增技术[J].应用与环境生物学报.2015
[2].何艳.缺口酶依赖的DNA链置换扩增技术的研究[D].南华大学.2010