导读:本文包含了清活号论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:“清活Ⅰ号”中药复方,活性氧簇(ROS),内皮细胞,解偶联蛋白(UCP2)
清活号论文文献综述
康英秀[1]（2008）在《“清活Ⅰ号”拮抗高糖诱导内皮细胞氧化应激损伤的机制探讨》一文中研究指出第一部分“清活Ⅰ号”中药复方拮抗高糖导致血管内皮细胞氧化应激的作用及机制研究目的:血管并发症是糖尿病患者首要的致残与致死因素。内皮细胞功能紊乱在糖尿病血管并发症的发生发展中起重要作用。内皮细胞功能紊乱的根本机制在于内皮细胞线粒体活性氧簇(ROS)生成过多。前期研究已证实“清活Ⅰ号”中药复方(QHYH)体内可以降低2型糖尿病患者尿微量白蛋白排泄率,体外可以改善高浓度葡萄糖抑制的微血管内皮细胞的生长。本研究的目的是研究“清活Ⅰ号”拮抗高糖导致的氧化应激、保护内皮细胞的抗氧化机制。最近有研究表明,基因水平抑制解偶联蛋白2(UCP2)的表达可使内皮细胞ROS生成增加。因此,我们也研究了UCP2的表达变化是否与高糖导致小鼠脑微血管内皮细胞ROS生成增加有关,及UCP2是否参与QHYH的抗氧化应激作用。方法:bEnd.3细胞分别以正常浓度葡萄糖(NG,5.6mM)、高浓度葡萄糖(HG,25mM)、高糖加“清活Ⅰ号”(1:100稀释)培养。分别以H_2DCF-DA和DAF-FMDA荧光探针检测内皮细胞ROS和一氧化氮(NO)的生成。UCP2 mRNA水平以实时荧光定量PCR检测。内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)、Akt磷酸化水平及UCP2蛋白表达水平以westem blotting检测。以UCP2 siRNA进行RNA干扰抑制UCP2表达。结果:高糖增加bEnd.3细胞ROS生成,HG组ROS生成较NG组增加(142.27±11.44%vs.100.00±1.92%in NG group,P＜0.01),同时使UCP2表达下调:高糖对UCP2 mRNA的抑制呈浓度依赖性,35mM时作用最强(69.90±4.84%,P＜0.01vs.NG group),也呈时间依赖性,35mM葡萄糖作用48小时抑制作用最强(66.93±4.73%,P＜0.001vs.Oh group)。高浓度葡萄糖(35mM)抑制eNOSSer1177和Akt Ser473的磷酸化(45.49±2.51%and 76.71±4.00%,P＜0.01vs.NG group)抑制bEnd.3内皮细胞NO生成(53.83±3.98%,P＜0.01vs.NG group).向高糖培养基中加入“清活Ⅰ号”,可逆转高糖导致的ROS生成增加(53.65±8.11%vs.142.27±11.44%in HG group,P＜0.001)、改善eNOS与Akt磷酸化(72.81±7.02%vs.45.49±2.51%in HG group,P＜0.05 and 120.98±1.20%vs.76.01±4.00%in HG group,P＜0.001)、NO生成(118.82±2.95%vs.53.83±3.98%in HG group,P＜0.001)、及UCP2蛋白表达(94.09±6.30%vs.53.83±3.98%in HG group,P＜0.001).通过UCP2 siRNA抑制UCP2蛋白表达后,“清活Ⅰ号”拮抗高糖导致的氧化应激的作用减轻,不能改善高糖诱导的ROS生成及NO产生的下调。结论:“清活Ⅰ号”可通过抑制ROS生成,促进Akt、eNOS磷酸化和NO生成,拮抗高糖诱导的内皮细胞氧化应激。“清活Ⅰ号”保护内皮细胞的作用可能部分与其上调UCP2的表达有关。本研究结果提示“清活Ⅰ号”作为抗氧化剂治疗糖尿病血管并发症具有应用前景。第二部分“清活Ⅰ号”分离物对内皮细胞ROS生成的影响及机制探讨目的:前期研究已证实“清活Ⅰ号”中药复方具有抗氧化应激作用。本实验的目的是对“清活Ⅰ号”中药复方进行分离提纯取,检测其分离物抑制ROS生成的作用,明确“清活Ⅰ号”中药复方中参与氧化应激作用的化合物,并探讨所筛选化合物抗氧化应激的作用机理。解偶联蛋白2(UCP2)的表达可抑制内皮细胞ROS生成增加。高糖对内皮细胞UCP2的表达具有抑制作用。我们的研究也证实了“清活Ⅰ号”可改善高糖对UCP2的抑制作用,“清活Ⅰ号”的抗氧化应激作用可能与其改善UCP2表达有关。因此检测了“清活Ⅰ号”分离所得化合物对bEnd.3细胞UCP2 mRNA水平的影响。NADPH氧化酶是内皮细胞中ROS的重要来源。NADPH氧化酶由gp91~(phox)、p22~(phox)、p67~(phox)、p47~(phox)等亚单位组成,因此本实验拟检测有效化合物对bEnd.3细胞NADPH氧化酶gp91~(phox)、p22~(phox)、p67~(phox)、p47~(phox)基因表达的影响。方法:以溶剂萃取法对“清活Ⅰ号”水煎剂进行分离,获得3个部分。以大孔树脂法对清活Ⅰ号进行分离,获得5个部分。bEnd.3细胞分别以正常浓度葡萄糖(NG,5.6 mM)、高浓度葡萄糖(HG,25 mM)、高糖加不同浓度“清活Ⅰ号”分离提取物培养。以H_2DCF-DA荧光探针检测bEnd.3细胞及人脐静脉内皮细胞(HUVEC)ROS的生成。以MTT法检测“清活Ⅰ号”分离物对内皮细胞(bEnd.3细胞与HUVEC细胞)增殖的影响。以MCI硅胶层析、反复柱层析等方法对有效部分进一步分离提取。以实时荧光定量PCR检测“清活Ⅰ号”分离所得有效化合物对bEnd.3细胞UCP2、gp91~(phox)、p22~(phox)、p67~(phox)、p47~(phox) mRNA水平的影响。结果:自“清活Ⅰ号”水煎剂中先后分离出28种粗提部分,通过对抑制高糖刺激ROS生成活性的筛选及进一步分离,共分离出12个化合物单体,其中9个为已知化合物,包括京尼平苷酸、京尼平苷、黄芪甲苷、葛根素、陈皮苷、西红花苷、川芎嗪、阿魏酸、绿原酸,文献均报道过其具有抗氧化活性。另叁个化合物:E3-M15-1、E3-M15-2和E1-H1-1,结构暂未知,亦不明确其是否具有抗氧化活性。抑制高糖刺激ROS生成活性检测发现西红花苷、川芎嗪、阿魏酸、绿原酸、E3-M15-1、E3-M15-2和E1-H1-1在两种细胞模型(bEnd.3细胞与HUVEC细胞)上对高糖刺激ROS生成均有抑制作用,且对内皮细胞无明显毒性作用(E3-M15-2高浓度组除外)。高浓度葡萄糖可抑制bEnd.3细胞UCP2 mRNA水平,“清活Ⅰ号”及其分离物(西红花苷、川芎嗪、阿魏酸、绿原酸、E3-M15-1、E3-M15-2和E1-H1-1)可不同程度使UCP2 mRNA水平恢复。高浓度葡萄糖可使gp91~(phox)、p22~(phox)、p67~(phox) mRNA表达升高;“清活Ⅰ号”及川芎嗪可抑制高糖诱导的gp91~(phox)、p22~(phox)、p67~(phox) mRNA升高;西红花苷可抑制高糖上调的gp91~(phox)与p67~(phox) mRNA水平:E3-M15-1可抑制高糖上调的gp91~(phox)、p22~(phox) mRNA水平,阿魏酸、绿原酸仅可抑制高糖上调的p22~(phox) mRNA水平。结论:“清活Ⅰ号”分离物西红花苷、川芎嗪、阿魏酸、绿原酸、E3-M15-1、E3-M15-2和E1-H1-1对高糖刺激ROS生成均有抑制作用,为“清活Ⅰ号”抗氧化应激作用的重要组成部分。“清活Ⅰ号”及其分离物(西红花苷、川芎嗪、阿魏酸、绿原酸、E1-H1-1)的抗氧化应激作用可能与其改善高糖对UCP2 mRNA的抑制及抑制高糖上调的NADPH氧化酶mRNA水平有关。(本文来源于《复旦大学》期刊2008-04-11）
张斌,高鑫,高健[2]（2008）在《清活Ⅰ号中药复方对高糖培养微血管内皮细胞增殖的影响》一文中研究指出目的观察清活Ⅰ号中药复方水煎剂及其药物血清对高浓度葡萄糖培养的微血管内皮细胞增殖的影响。方法采用中药血清药理学研究方法制备药物血清。原代培养SD大鼠肺微血管内皮细胞,中药复方水煎剂实验细胞分为NG-1组(葡萄糖5.56 mmol/L)、HG-1组(葡萄糖25 mmol/L)、中药-1组(葡萄糖25 mmol/L+清活Ⅰ号水煎剂)和NAC-1组[葡萄糖25 mmol/L+10 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(NAC)];药物血清实验细胞分为NG-2组(葡萄糖5.56 mmol/L)、HG-2组(葡萄糖25 mmol/L)、中药-2组(葡萄糖25 mmol/L+药物血清)和NAC-2组(葡萄糖25 mmol/L+10 mmol/L NAC)。培养24 h后,观察清活Ⅰ号水煎剂及其药物血清对25 mmol/L葡萄糖培养内皮细胞生长形态的影响,并采用锥虫蓝染色细胞计数观察细胞活力。结果NG-1、HG-1、中药-1、NAC-1组的平均细胞数分别为57 000、38 333、57 333和65 000个/孔,活细胞比率分别为96.5%、58.2%、94.0%和95.8%,各组间差异均有统计学意义(P值均<0.01)。NG-2、HG-2、中药-2、NAC-2组的平均细胞数分别为38 333、10000、37 083和55 000个/孔,活细胞比率分别为96.7%、41.7%、91.0%和94.7%,各组间差异均有统计学意义(P值均<0.01)。培养24 h后,HG-1组的内皮细胞增殖减少、活细胞减少;中药-1组的细胞生长情况和活细胞数恢复到NG-1组水平,与NAC-1组培养的细胞增殖情况相似;药物血清与中药水煎剂实验各组的细胞增殖情况基本一致。结论清活Ⅰ号水煎剂及其药物血清均能改善高浓度葡萄糖导致的血管内皮细胞损伤,其保护作用可能与其抗氧化作用有关。(本文来源于《上海医学》期刊2008年02期）
张斌[3]（2006）在《清活Ⅰ号中药复方保护血管内皮细胞高糖损伤的抗氧化应激分子机制及冠心病患者氧化应激水平测定》一文中研究指出目的：前期研究发现清活Ⅰ号中药方可以降低糖尿病患者尿微量白蛋白排泄率，并具有与天然抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)类似的保护血管内皮细胞高糖损伤的作用。本研究目的是探索清活Ⅰ号中药方保护血管内皮高糖损伤的抗氧化应激分子机制。 方法：采用电子顺磁共振波谱仪(EPR)和氧自由基捕获技术检测清活Ⅰ号中药复方及其各组方单味药体外清除氧自由基的能力，观察该中药复方对高糖培养bEnd.3内皮细胞氧自由基生成的影响。应用中药血清药理学研究方法观察该中药复方的药物血清对高糖培养SD大鼠肺微血管内皮细胞增殖的影响。运用Real time RT-PCR检测该中药复方对高糖培养bEnd.3内皮细胞解偶联蛋白(UCP)基因mRNA表达的影响，以及蛋白印迹方法测定细胞UCP蛋白分子的表达情况。 结果：清活Ⅰ号复方可淬灭体外羟自由基模型中82.2％的自由基，其组方单味药除了3号药外，其它组方单药可使模型中羟自由基减少23.1％～46.2％，中药复方和各组方药在一定浓度范围内，其淬灭氧自由基的作用存在量效关系。清活Ⅰ号复方的药物血清和NAC一样可改善高糖培养的SD大鼠肺微血管内皮细胞的增殖和活力。内皮细胞bEnd.3高糖培养时，EPR检测到了细胞生成的超氧阴离子明显增多，清活Ⅰ号中药、超氧岐化酶和NAC均可减少高糖培养内皮细胞氧自由基的生成，各组EPR检测到的氧自由基信号较高糖培养组分别下降了70％、56％和47.3％。Real time RT-PCR检测结果：UCP-1、UCP-3在5.56mM葡葡糖培养组bEnd.3细胞(NG组)和高糖培养的各组bEnd.3细胞中表达量很少或不表达，UCP-2基因mRNA的表达是单纯高糖培养组细胞(HG组)较NG组增高(p=0.09)，清活Ⅰ号中药(中药组)和NAC(NAC组)干预后则较HG组进一步明显上调(p分别为0.009、0.036)。Western blot分析则在中药组检测到的较明显的UCP-2蛋白分子的表达，NAC组有少量表达，HG组和NG组未检测到明显的UCP-2分子的表达。 结论：1．清活Ⅰ号中药复方及其各组方药均有较强的体外淬灭氧自由基作用，其中复方淬灭氧自由基的能力要明显强于任何单味组方药；2．清活Ⅰ号复方的药物血清具有类似天然抗氧化剂NAC减轻或是消除高糖致内皮细胞损伤的作用；3．高糖可导致血管内皮细胞超氧阴离子生成增多，清活Ⅰ号中药方具有清除细胞生成的超氧阴离子作用；4．清活Ⅰ号保护血管内皮损伤作用除了与该中药方具有直接淬灭氧自由基作用外，还可能与清活Ⅰ号中药能上调高糖环境中内皮细胞UCP-2的表达，减少线粒体超氧阴离子生成有关。目的：评价冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者氧化应激状态和血管内皮功能相关血清指标变化，为有抗氧化和保护血管内皮功能作用的清活Ⅰ号中药方用于冠心病患者治疗提供临床循证医学证据。 方法：正常健康对照200人，经冠状动脉造影检查(CAG)诊断的冠心病患者200例(CAG阳性组)和经CAG排除的非冠心病患者135例(CAG阴性组)。评估各组人群的糖、脂代谢等情况，分光比色法测定血清抗超氧阴离子自由基(O_2~(-．))活力、脂质过氧化物(MDA)、一氧化氮合酶(总NOS和iNOS)活性和一氧化氮(NO)水平并进行组间比较。 结果：CAG阳性组的血清抗O_2~(-．)活力、总NOS和iNOS、NO水平均明显低于正常对照组，血清MDA水平则明显高于正常对照组(p均＜0.001)。CAG阳性组血清抗O_2~(-．)活力与CAG阴性组相近(p=0.634)，但MDA水平仍高于CAG阴性组，并且总NOS、iNOS和NO水平低于GAG组(p≤0.001)。CAG阴性组血清抗O_2~(-．)活力比正常对照组低(p=0.002)，MDA水平高于正常对照组(p=0.001)，总NOS水平两组见相近(p=0.967)，但CAG阴性组的iNOS和NO水平较正常对照组低(p≤0.001)。CAG阳性组中糖调节异常者的比率(55.5％)高于CAG阴性组(37％)(p=0.001)。 结论：冠心病患者存在血管内皮功能障碍，体内氧化应激水平较高，其血清清除超氧阴离子能力下降；冠心病患者常合并糖调节异常；有抗氧化作用和保护内皮细胞高糖损伤作用的中药复方清活Ⅰ号可能有助于糖尿病患者和非糖尿病患者冠心病的防治。(本文来源于《复旦大学》期刊2006-04-01）
清活号论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的观察清活Ⅰ号中药复方水煎剂及其药物血清对高浓度葡萄糖培养的微血管内皮细胞增殖的影响。方法采用中药血清药理学研究方法制备药物血清。原代培养SD大鼠肺微血管内皮细胞,中药复方水煎剂实验细胞分为NG-1组(葡萄糖5.56 mmol/L)、HG-1组(葡萄糖25 mmol/L)、中药-1组(葡萄糖25 mmol/L+清活Ⅰ号水煎剂)和NAC-1组[葡萄糖25 mmol/L+10 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(NAC)];药物血清实验细胞分为NG-2组(葡萄糖5.56 mmol/L)、HG-2组(葡萄糖25 mmol/L)、中药-2组(葡萄糖25 mmol/L+药物血清)和NAC-2组(葡萄糖25 mmol/L+10 mmol/L NAC)。培养24 h后,观察清活Ⅰ号水煎剂及其药物血清对25 mmol/L葡萄糖培养内皮细胞生长形态的影响,并采用锥虫蓝染色细胞计数观察细胞活力。结果NG-1、HG-1、中药-1、NAC-1组的平均细胞数分别为57 000、38 333、57 333和65 000个/孔,活细胞比率分别为96.5%、58.2%、94.0%和95.8%,各组间差异均有统计学意义(P值均<0.01)。NG-2、HG-2、中药-2、NAC-2组的平均细胞数分别为38 333、10000、37 083和55 000个/孔,活细胞比率分别为96.7%、41.7%、91.0%和94.7%,各组间差异均有统计学意义(P值均<0.01)。培养24 h后,HG-1组的内皮细胞增殖减少、活细胞减少;中药-1组的细胞生长情况和活细胞数恢复到NG-1组水平,与NAC-1组培养的细胞增殖情况相似;药物血清与中药水煎剂实验各组的细胞增殖情况基本一致。结论清活Ⅰ号水煎剂及其药物血清均能改善高浓度葡萄糖导致的血管内皮细胞损伤,其保护作用可能与其抗氧化作用有关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
清活号论文参考文献
[1].康英秀.“清活Ⅰ号”拮抗高糖诱导内皮细胞氧化应激损伤的机制探讨[D].复旦大学.2008
[2].张斌,高鑫,高健.清活Ⅰ号中药复方对高糖培养微血管内皮细胞增殖的影响[J].上海医学.2008
[3].张斌.清活Ⅰ号中药复方保护血管内皮细胞高糖损伤的抗氧化应激分子机制及冠心病患者氧化应激水平测定[D].复旦大学.2006
标签：“清活Ⅰ号”中药复方; 活性氧簇(ROS); 内皮细胞; 解偶联蛋白(UCP2);