润肤霜微生物限度检查方法研究

润肤霜微生物限度检查方法研究

(成都市食品药品检验研究院四川成都610045)

【摘要】目的:建立润肤霜的微生物限度检查方法。方法:按照《中国药典》2015年版,采用常规法对需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数、以及控制菌的检查进行方法学验证。结果:润肤霜的抑菌性较小,可采用常规法进行需氧菌总数计数、霉菌及酵母菌总数计数和控制菌的检查。结论:建立的方法准确可靠,可用于润肤霜的微生物限度检查。

【关键词】润肤霜;微生物限度检查;方法验证

【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2018)18-0031-02

ValidationofmicrobiallimittestmethodofCream

【Abstract】ObjectiveToestablishthemethodtodeterminethemicrobiallimittestsforcream.MethodsAccordingtotheChinaPharmacopoeia2015edition,theroutinemethodwasperformedformicrobiallimittestvalidationofcream.ResultsCreamhardlyhadtheantimicrobialactivity,theroutinemethodwasfeasibleformicrobiallimittest.ConclusionThemethodisaccurateandcanbeusedforthemicrobiallimittestofcream.

【Keywords】Cream;Microbiallimittest;Validationofmethod

润肤霜(人参霜)是以人参皂苷为主要成分,辅以混合醇、单硬脂酸干油酯、液体石蜡、甘油、乳化剂、香精和防腐剂的局部给药制剂,可益气活血,促进皮肤代谢,用于治疗面部红斑、丘疹、干燥、脱屑等皮肤炎症。按照《中国药典》2015年版四部非无菌药品微生物限度标准规定,确定其标准为需氧菌总数每1g不得过102cfu,霉菌和酵母菌总数每1g不得过101cfu,金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌每1g不得检出[1]。鉴于本品加入了防腐剂,对微生物的生长可能有一定的抑制作用,故本品在进行微生物限度检查时,应建立适合于本品的方法,消除样品的抑菌活性,建立可靠有效的方法[2,3,4]。

1.材料

1.1仪器

超净工作台(苏净安泰)SW-CJ-2FD;生化培养箱(上海一恒科技)LRH-250;隔水式恒温培养箱(上海一恒科技)GHP-7290。

1.2菌种

白色念珠菌[CMCC(F)98001]、黑曲霉[CMCC(F)98003]、金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)631001]、铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104],均来源于中国药品生物制品检定所,均为第4代培养物。

1.3培养基

胰酪大豆胨液体培养基(TSB)、甘露醇氯化钠琼脂、胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)、沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基和沙氏葡萄糖液体培养基(SDB),均由北京三药科技开发公司生产。

1.4样品

润肤霜(某医院生产)

2.方法与结果

2.1平皿法验证需氧菌总数计数

2.1.1菌液制备按照中国药典2015年版制备枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌及黑曲霉的菌悬液。

2.1.2供试液制备取本品10g,加含5%Tween-80的pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100mL,45℃水浴后用匀浆仪混匀,得1:10供试液。

2.1.3回收率测定

供试品对照组:

取1:10供试液50mL,取1mL分别注入2个平皿,共制备两组,测定供试品本底需氧菌以及霉菌和酵母菌总数;

菌液对照组:

分别取上述5种试验菌悬液0.5mL,加至50mLpH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液,混匀,取1mL注入平皿,每株试验菌平行制备2个平皿,倾注TSA培养基,测定所加的试验菌数。

试验组:

分别取上述5种菌悬液0.5mL,加至50ml的1:10供试液中,混匀,取1mL注入平皿,每株菌制备2个平皿,倾注TSA培养基。

分别取上述2种真菌悬液0.5mL,加至50ml的1:10供试液中,混匀,取1mL注入平皿,每株菌制备2个平皿,倾注SDA培养基。

如表1所示。

2.1.4结果从表1可以看出,取本品1:10供试液按平皿法进行计数时,TSA培养基中五种试验菌的回收率均在50%和200%之间,SDA培养基中两种真菌的回收率也在50%和200%之间。

2.2控制菌检查方法的验证

2.2.1金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的检查

试验组:

取1:10供试液10ml及金黄色葡萄球菌悬液1ml加入到100ml的TSB中,35℃培养24小时。划线接种于甘露醇氯化钠平板上,培养后观察是否有菌生长。

取1:10供试液10ml及铜绿假单胞菌悬液1ml加入到100ml的TSB中,35℃培养24小时。划线接种于溴化十六烷基三甲铵平板上,培养后观察是否有菌生长。

阳性对照组:

取制备好的金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌悬液1ml加入到100ml的TSB中,后续操作同上。

阴性对照组:

取10mlpH7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液加入到100ml的TSB中,后续操作同上。

供试品对照组:

取1:10供试液10ml加入到100ml的TSB中,后续操作同上。

2.3.2结果由表2和3可知,阴性对照组和供试品对照组均未检出控制菌,阳性对照组和试验组均检出相应的控制菌,因此,本品金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的检查可用常规法(TSB:100mL)。

3.讨论

本品在制备供试液的时溶解性较差,加入5%的吐温-80再水浴后,样品能较好溶解在其中,但本品为较粘稠的霜类,故需进一步用匀浆仪混匀,这样才能获得均质的供试液[5,6]。另外,本品的供试液有一定的粘附性,在用移液管或移液枪吸打供试液时,应缓慢操作,等待一段时间尽量使挂壁的供试液缓慢流下,以保证取样的准确性。

本品对细菌及真菌的抑制作用较小,微生物计数及控制菌检查均可采用常规法。根据验证结果将微生物限度检查方法记录如下:取本品10g,加含5%Tween-80的pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100mL,45℃水浴后用匀浆仪混匀,得1:10供试液。需氧菌总数以及霉菌和酵母菌总数计数可取1:10供试液按平皿法进行,铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的检查均可采用常规法(TSB:100mL)。

【参考文献】

[1]国家药典委员会.中国人民共和国药典[s].北京:中国医药科技出版社,2015四部:140.

[2]杨晓莉,李辉,马英英等.中国药典2015年版非无菌产品微生物限度检查:微生物计数法解读[J].药物分析杂志,2016,36(6):1101-1107.

[3]杨晓莉,李辉,马英英,等.中国药典2015年版非无菌产品微生物限度检查:控制菌检查法解读与对策[J].中国药师,2016,19(4):748-752.

[4]程龙,熊雯,陈霞.过敏康胶囊微生物限度检查的方法建立[J].中药与临床,2017,8(3):38-41.

[5]胡泽锴,毛腾霄.抗敏止痒霜微生物限度检查方法研究[J].海峡药学,2016,28(11):70-72.

[6]陈璐,汪洋,涂碎萍.抗痤霜微生物限度检查方法验证[J].国外医药抗生素分册,2016,37(6):266-269.

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