本文主要研究内容
作者徐加利（2019）在《猪链球菌2型毒素-抗毒素系统yefM-yoeB的鉴定和功能研究》一文中研究指出：近年来,由于毒素-抗毒素(Toxin-antitoxin,TA)系统在细菌和古生菌基因组中大量的广泛存在,然对其生理功能的认识却十分有限,因此引起了越来越多的关注。TA系统最初发现于大肠杆菌低拷贝质粒中,利用一种称为是“分裂后杀伤机制”或“成瘾模块”的机制发挥质粒的稳定性功能。TA系统在影响细菌自身的生长调控、生物被膜的形成、毒力或其他不利条件的应激反应中发挥重要作用。这些模块已经在大肠杆菌和其他各种细菌中被鉴定,但其功能尚需进行深入研究。此外,TA系统存在于猪链球菌(Streptococcus suis)这一重要人兽共患病原菌基因组中,却鲜有报道。尽管目前关于猪链球菌致病性的研究有很多,但对其发病机制的认识仍然非常有限。因此,在本研究中,我们主要开展了猪链球菌2型yefM-yoeB TA系统的鉴定和功能研究,来探讨TA系统与猪链球菌致病性的关系。具体研究内容如下:1.猪链球菌2型毒素-抗毒素系统yefM-yoeB的鉴定生物信息学分析显示猪链球菌2型YefM和YoeB与大肠杆菌、肺炎链球菌的具有极高的同源性,且yefM-yoeB染色体位点存在于猪链球菌的大多数血清型菌株的基因组中。过量产生猪链球菌YoeB毒素会抑制大肠杆菌的生长,并且猪链球菌YoeB毒素的毒性可以被猪链球菌和肺炎链球菌而非大肠杆菌产生的YefM抗毒素中和。更重要的是,将猪链球菌yefM-yoeB系统导入不同种属的大肠杆菌后能影响细胞的正常生长。利用Pull down和Western blot实验证实猪链球菌的毒素蛋白YoeB能与其同源的抗毒素蛋白YefM在体内发生相互作用,并形成稳定的复合物YefM-YoeB。通过β-半乳糖苷酶活性检测实验,表明YefM或YefM-YoeB能够负向自动调节TA操纵子活性,抑制其转录活性。以上结果表明猪链球菌2型中有一对有活性的yefM-yoeB毒素-抗毒素系统。2.缺失yefM-yoeB没有显著影响猪链球菌2型对小鼠的致病性针对目前yefM-yoeB系统模型在细菌致病性方面研究未见深入报道,因此急需进行有关yefM-yoeB影响猪链球菌的生长特性和功能方面的研究。我们利用同源重组的方法成功构建了yoeB毒素基因缺失突变株?yoeB、yefM-yoeB基因缺失突变株?yefM-yoeB和互补菌株C?yefM-yoeB;经多次尝试均未得到敲除yefM抗毒素基因的缺失突变株。突变株?yoeB和?yefM-yoeB较野生株在生长,溶血活性方面没影响。缺失yefM-yoeB不影响猪链球菌2型在小鼠感染模型中的存活或组织定植能力。以上数据表明,猪链球菌yefM-yoeB是一个有活性且与毒力无关的TA系统。3.位于YefM上的Lys64位点改变影响猪链球菌2型的氧化应激反应和致病性利用SWISS-MODEL模拟YefM-YoeB毒素与抗毒蛋白的结构,初步假定其相互作用的关键位点。通过定点突变构建四株假定的抗毒素YefM无活性突变体CΔyefM(A54S)-yoeB、CΔyefM(N58A)-yoeB、CΔyefM(L61A)-yoeB和CΔyefM(K64A)-yoeB。探讨野生株WT、突变株、互补菌株和四株无活性突变体在生长、氧化应激、对小鼠的致病力和细胞毒性的影响。初步研究结果显示CΔyefM(K64A)-yoeB在正常生长、氧化应激、对小鼠的致病力和对hBMEC和HEp-2细胞毒性方面都显著降低;CΔyefM(L61A)-yoeB对HEp-2细胞毒性方面低于野生菌株和互补菌株。结果表明YefM的Lys64位点可能是YefM-YoeB相互作用的关键位点。本研究不仅在猪链球菌2型中首次鉴定了yefM-yoeB系统,同时也丰富了对yefM-yoeB系统的认识。
Abstract
jin nian lai ,you yu du su -kang du su (Toxin-antitoxin,TA)ji tong zai xi jun he gu sheng jun ji yin zu zhong da liang de an fan cun zai ,ran dui ji sheng li gong neng de ren shi que shi fen you xian ,yin ci yin qi le yue lai yue duo de guan zhu 。TAji tong zui chu fa xian yu da chang gan jun di kao bei zhi li zhong ,li yong yi chong chen wei shi “fen lie hou sha shang ji zhi ”huo “cheng yin mo kuai ”de ji zhi fa hui zhi li de wen ding xing gong neng 。TAji tong zai ying xiang xi jun zi shen de sheng chang diao kong 、sheng wu bei mo de xing cheng 、du li huo ji ta bu li tiao jian de ying ji fan ying zhong fa hui chong yao zuo yong 。zhe xie mo kuai yi jing zai da chang gan jun he ji ta ge chong xi jun zhong bei jian ding ,dan ji gong neng shang xu jin hang shen ru yan jiu 。ci wai ,TAji tong cun zai yu zhu lian qiu jun (Streptococcus suis)zhe yi chong yao ren shou gong huan bing yuan jun ji yin zu zhong ,que xian you bao dao 。jin guan mu qian guan yu zhu lian qiu jun zhi bing xing de yan jiu you hen duo ,dan dui ji fa bing ji zhi de ren shi reng ran fei chang you xian 。yin ci ,zai ben yan jiu zhong ,wo men zhu yao kai zhan le zhu lian qiu jun 2xing yefM-yoeB TAji tong de jian ding he gong neng yan jiu ,lai tan tao TAji tong yu zhu lian qiu jun zhi bing xing de guan ji 。ju ti yan jiu nei rong ru xia :1.zhu lian qiu jun 2xing du su -kang du su ji tong yefM-yoeBde jian ding sheng wu xin xi xue fen xi xian shi zhu lian qiu jun 2xing YefMhe YoeByu da chang gan jun 、fei yan lian qiu jun de ju you ji gao de tong yuan xing ,ju yefM-yoeBran se ti wei dian cun zai yu zhu lian qiu jun de da duo shu xie qing xing jun zhu de ji yin zu zhong 。guo liang chan sheng zhu lian qiu jun YoeBdu su hui yi zhi da chang gan jun de sheng chang ,bing ju zhu lian qiu jun YoeBdu su de du xing ke yi bei zhu lian qiu jun he fei yan lian qiu jun er fei da chang gan jun chan sheng de YefMkang du su zhong he 。geng chong yao de shi ,jiang zhu lian qiu jun yefM-yoeBji tong dao ru bu tong chong shu de da chang gan jun hou neng ying xiang xi bao de zheng chang sheng chang 。li yong Pull downhe Western blotshi yan zheng shi zhu lian qiu jun de du su dan bai YoeBneng yu ji tong yuan de kang du su dan bai YefMzai ti nei fa sheng xiang hu zuo yong ,bing xing cheng wen ding de fu ge wu YefM-YoeB。tong guo β-ban ru tang gan mei huo xing jian ce shi yan ,biao ming YefMhuo YefM-YoeBneng gou fu xiang zi dong diao jie TAcao zong zi huo xing ,yi zhi ji zhuai lu huo xing 。yi shang jie guo biao ming zhu lian qiu jun 2xing zhong you yi dui you huo xing de yefM-yoeBdu su -kang du su ji tong 。2.que shi yefM-yoeBmei you xian zhe ying xiang zhu lian qiu jun 2xing dui xiao shu de zhi bing xing zhen dui mu qian yefM-yoeBji tong mo xing zai xi jun zhi bing xing fang mian yan jiu wei jian shen ru bao dao ,yin ci ji xu jin hang you guan yefM-yoeBying xiang zhu lian qiu jun de sheng chang te xing he gong neng fang mian de yan jiu 。wo men li yong tong yuan chong zu de fang fa cheng gong gou jian le yoeBdu su ji yin que shi tu bian zhu ?yoeB、yefM-yoeBji yin que shi tu bian zhu ?yefM-yoeBhe hu bu jun zhu C?yefM-yoeB;jing duo ci chang shi jun wei de dao qiao chu yefMkang du su ji yin de que shi tu bian zhu 。tu bian zhu ?yoeBhe ?yefM-yoeBjiao ye sheng zhu zai sheng chang ,rong xie huo xing fang mian mei ying xiang 。que shi yefM-yoeBbu ying xiang zhu lian qiu jun 2xing zai xiao shu gan ran mo xing zhong de cun huo huo zu zhi ding zhi neng li 。yi shang shu ju biao ming ,zhu lian qiu jun yefM-yoeBshi yi ge you huo xing ju yu du li mo guan de TAji tong 。3.wei yu YefMshang de Lys64wei dian gai bian ying xiang zhu lian qiu jun 2xing de yang hua ying ji fan ying he zhi bing xing li yong SWISS-MODELmo ni YefM-YoeBdu su yu kang du dan bai de jie gou ,chu bu jia ding ji xiang hu zuo yong de guan jian wei dian 。tong guo ding dian tu bian gou jian si zhu jia ding de kang du su YefMmo huo xing tu bian ti CΔyefM(A54S)-yoeB、CΔyefM(N58A)-yoeB、CΔyefM(L61A)-yoeBhe CΔyefM(K64A)-yoeB。tan tao ye sheng zhu WT、tu bian zhu 、hu bu jun zhu he si zhu mo huo xing tu bian ti zai sheng chang 、yang hua ying ji 、dui xiao shu de zhi bing li he xi bao du xing de ying xiang 。chu bu yan jiu jie guo xian shi CΔyefM(K64A)-yoeBzai zheng chang sheng chang 、yang hua ying ji 、dui xiao shu de zhi bing li he dui hBMEChe HEp-2xi bao du xing fang mian dou xian zhe jiang di ;CΔyefM(L61A)-yoeBdui HEp-2xi bao du xing fang mian di yu ye sheng jun zhu he hu bu jun zhu 。jie guo biao ming YefMde Lys64wei dian ke neng shi YefM-YoeBxiang hu zuo yong de guan jian wei dian 。ben yan jiu bu jin zai zhu lian qiu jun 2xing zhong shou ci jian ding le yefM-yoeBji tong ,tong shi ye feng fu le dui yefM-yoeBji tong de ren shi 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自华中农业大学的徐加利，发表于刊物华中农业大学2019-07-15论文，是一篇关于猪链球菌论文,毒素抗毒素系统论文,氧化应激反应论文,毒力论文,华中农业大学2019-07-15论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自华中农业大学2019-07-15论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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