导读:本文包含了心肌慢性缺氧适应论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:细胞自噬,自噬体,慢性缺氧
心肌慢性缺氧适应论文文献综述
石宇[1]（2017）在《细胞自噬在紫绀型先心病心肌慢性缺氧适应中的机制的研究》一文中研究指出目的:本实验通过对紫绀型先心病患儿心肌组织中细胞自噬现象的检测,进而研究细胞自噬在心肌慢性缺氧适应性中的表达,对细胞自噬在缺氧心肌中的作用进行探讨。为如何于缺氧条件下减少心肌的损伤及改善紫绀型先心病患儿的治疗现况提供理论依据。方法:实验组:蚌埠医学院第一附属医院与南京儿童医院心脏外科2015年4月至2016年10月治疗的20例紫绀型先心病患儿,平均年龄为19.65±8.59月。对照组:收集蚌埠医学院第一附属医院与南京儿童医院心脏外科2015年4月至2016年10月治疗的20例非紫绀型先心病患儿,平均年龄为16.55±7.24月。取术中患儿右室流出道肥厚心肌组织为标本,一部分大小为5×5×5mm3放置于液氮罐中用于Western-blotting检测,另一部分快速切成1mm3以下,用5%的戊二醛固定,置于EP管中4℃避光保存。1mm3以下的样本制成超薄切片后通过电子透镜观察心肌组织中自噬体的形成情况;提取液氮储存的标本的心肌组织蛋白通过Western-blotting检测心肌组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值的大小和Beclin-1蛋白表达水平,然后对组间相关的数据进行分析。结果:通过电子透镜观察表明实验组和对照组相比,实验组心肌组织内细胞器排列紊乱,线粒体增多,大量的细胞器被降解,内质网肿胀,细胞器结构模糊,可见包绕部分细胞器及蛋白质的自噬小体。对照组细胞器降解较少,肌丝排列规律,无自噬小体的出现。Western-blotting表明试验组紫绀型先心病患儿LC3Ⅱ表达较高,且LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显大于对照非紫绀组,Beclin-1蛋白表达水平紫绀组明显高于非紫绀组。用SPSS18.0软件行t检验,结果显示两组之间LC3和Beclin-1表达水平的存有组间差异(p<0.05),表明两组之间对比表现的差异具有统计学意义,实验证明了在缺氧条件下心肌组织自噬现象明显被激活。结论:1.紫绀型先心病患儿心肌组织中电镜发现自噬体的形成,表明缺氧心肌细胞中存在细胞自噬的现象;2.紫绀组患儿LC3Ⅱ表达较高,且LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显大于对照组,Beclin-1蛋白表达水平实验组明显高于对照组。3.细胞自噬在心肌慢性缺氧中影响心肌的存活,在紫绀型先心病发生发展中起调控作用。(本文来源于《蚌埠医学院》期刊2017-05-01）
刘超[2]（2017）在《AMPKα2调节自噬参与心肌慢性缺氧适应的研究》一文中研究指出一、研究背景心肌慢性缺氧是临床诸多疾病的共同病理生理过程,可见于紫绀型先心病、肺源性心脏病以及高原性心脏病等全身系统性缺氧疾病,也常见于冠状动脉粥样硬化、心肌肥厚等因素所导致的心肌局部缺血缺氧状态。研究慢性缺氧心肌的适应性反应及其机制,对上述临床疾病的治疗具有重要意义。自噬是细胞内高度保守的分解代谢过程,基础水平的自噬有助于胞内蛋白和细胞器的更新以及细胞稳态的维持;但在营养缺乏、氧化应激等因素刺激下,自噬水平增高,从而降解多余蛋白以提供小分子代谢底物,同时也能清除受损细胞器从而避免细胞损伤。既往研究发现,在TAC诱导的小鼠心肌肥厚模型及心肌缺血/再灌注模型中,自噬水平增高;在来源于紫绀型先心病患者的手术标本中,检测发现自噬增强。自噬与心血管疾病的发生、发展存在密切联系,研究慢性缺氧心肌细胞自噬的变化及其机制,可能为治疗该类疾病提供潜在的干预靶点。AMPK是细胞内保守的丝/苏氨酸激酶,被认为是细胞内能量稳态调控的关键分子。当细胞内ATP含量减少时,AMPK被激活,抑制合成代谢,促进分解代谢和ATP生成。AMPK也是自噬通路的上游分子,在细胞应激时,AMPK的激活也参与了自噬通路的调控。研究发现,AMPK的激活可以促进慢性缺氧心肌细胞的适应与存活,但其具体机制仍有待进一步阐明。AMPK分子由α、β和γ叁个亚基构成,α为催化亚基,负责激活的AMPK分子的功能执行,存在α1与α2两种亚型,α2亚型在心脏分布较多。本课题研究中,我们首先建立小鼠的慢性缺氧模型,检测慢性缺氧对小鼠心肌细胞自噬水平的影响,然后采用AMPKα2基因敲除的小鼠,观察其对常氧或缺氧条件下小鼠心肌细胞自噬水平以及小鼠生存曲线的影响。二、研究方法1.小鼠慢性缺氧模型的建立:参照专利设计,制作一简易小动物常压低氧舱,依据文献资料,将小鼠放置于10%的低氧舱内饲养4周,建立慢性缺氧模型,并通过检测红细胞等相关指标,证实建模成功。2.慢性缺氧对小鼠心肌细胞自噬水平的影响:取野生型C57小鼠随机分为常氧组和缺氧组,通过Western blot检测小鼠心肌LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及p62表达的变化,用免疫荧光染色法检测小鼠心肌冰冻切片中LC3的变化。3.AMPKα2敲除对小鼠心肌细胞自噬的影响:采用AMPKα2+/-杂合子小鼠配对繁殖,后代小鼠行基因型鉴定,将野生型与AMPKα2-/-小鼠分别分为常氧组和缺氧组,即:野生型常氧组、野生型缺氧组、敲除型常氧组和敲除型缺氧组,共4组(每组n=10)。通过Western blot检测小鼠心肌细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值变化及免疫荧光染色法检测小鼠心肌细胞LC3表达的变化来反映自噬的改变,记录小鼠死亡的时间与例数,绘制小鼠生存曲线。叁、研究结果1.慢性缺氧模型的建立:和常氧组比较,缺氧组小鼠的红细胞与血红蛋白均显着增加(P<0.05);日均进食量与体重均显着降低(P<0.05);心脏/体重比值与双肺/体重比值均显着下降(P<0.05)。2.慢性缺氧对小鼠心肌细胞自噬水平的影响:和常氧组比较,Western blot显示缺氧组小鼠心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显着升高(P<0.05),p62水平显着降低(P<0.05);免疫荧光染色显示其冰冻切片中LC3表达明显增加。3.AMPKα2敲除对小鼠心肌细胞自噬的影响:常氧条件下,AMPKα2-/-小鼠心肌细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值较野生型无显着统计学差异(P>0.05);但缺氧条件下,AMPKα2-/-小鼠心肌细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值较野生型有显着下降(P<0.05),免疫荧光染色结果与Western blot结果一致。缺氧条件下,AMPKα2-/-小鼠中位生存时间明显缩短(P<0.05)。4.统计分析:使用SPSS13.0进行统计分析,两组均数比较采用t检验,多组(≥3)均数比较采用单因素方差分析。四、主要结论1.慢性缺氧条件下,野生型小鼠心肌细胞自噬水平增高,说明自噬可能是心肌细胞对慢性缺氧的适应性性机制之一。2.与野生型小鼠相比,在常氧条件下,AMPKα2敲除小鼠心肌细胞自噬水平无明显变化,但在慢性缺氧条件下,AMPKα2敲除小鼠心肌细胞自噬水平显着降低,中位生存时间显着较短,提示AMPKα2所介导的自噬可能在心肌慢性缺氧的适应中具有重要意义。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2017-05-01）
王海霞[3]（2016）在《Wnt/β-catenin信号通路在心肌慢性缺氧适应中的作用及机制》一文中研究指出背景及目的心肌在慢性缺氧时可以诱导机体产生内源性保护机制适应缺氧,以抵御或减轻缺氧造成的损伤,但目前心肌慢性缺氧适应机制仍不清楚。本研究以低氧条件下培养H9c2心肌细胞及青紫型先心病为研究对象,探讨Wnt/β-catenin信号转导通路在H9c2心肌细胞株及青紫型先天性心脏病心肌慢性缺氧适应中的作用及机制。方法(1)5%氧浓度下培养H9c2心肌细胞72 h,采用Western blotting和Real-time PCR技术检测Wnt/β-catenin信号转导通路核心分子β-catenin及抗凋亡因子bcl-2、survivin在低氧培养6 h、12 h、24 h、36h、48 h及72 h时蛋白及基因表达变化,以正常氧浓度下培养H9c2细胞做为对照组。(2)收集先心病患儿38例,非青紫型23例,青紫型15例,体外循环前留取右心耳组织,采用Western blotting、免疫组织化学技术检测先心病患儿心脏组织中β-catenin蛋白表达水平,并分析心脏组织中β-catenin表达水平随患儿年龄的变化,非青紫型先心病做为对照组。结果(1)随着缺氧时间延长β-catenin mRNA表达呈先增后降的趋势,与对照组相比,缺氧12 h、24 h、36 h时β-catenin mRNA表达明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05、P<0.01、P<0.05),而48 h、72 h时表达水平下降,与12 h、24 h及36 h相比差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)β-catenin蛋白在缺氧6 h、12 h、24 h、36 h时表达明显增加,其中36 h时表达最高,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.001、P<0.05、P<0.01、P<0.001)。48 h、72 h表达水平较36 h明显下降(P<0.001),基本降至对照组水平。随低氧培养时间延长,β-catenin蛋白表达也呈先升后降趋势。(3)bcl-2 mRNA于缺氧培养6 h、12 h时表达较对照组显着增加(均P<0.001),此后下降,36 h时表达降至最低水平。bcl-2蛋白在培养6 h、12 h、24 h时表达明显增加(P<0.001、P<0.001、P<0.001)。(4)与对照组相比,survivin mRNA表达水平于培养24 h明显增加(P<0.001)。同样,survivin蛋白在培养12 h、24 h时表达显着增加,24 h时表达最高(P<0.001、P<0.001)。(5)青紫组β-catenin表达水平较非青紫组低(P<0.001);β-catenin蛋白随患儿年龄增加表达下降(P<0.001、P<0.001),青紫组及非青紫组变化趋势一致;同年龄段青紫组患儿心脏组织β-catenin表达较非青紫组低(P<0.05、P<0.001、P<0.01)。结论(1)Wnt/β-catenin信号通路激活可能是H9c2心肌细胞慢性缺氧适应机制之一,其部分可能通过上调抗凋亡因子bcl-2及survivin表达起作用。(2)Wnt/β-catenin信号通路可能不是本研究中所处年龄段青紫型先心病患儿慢性缺氧适应主要信号通路,其与青紫型先心病心肌慢性缺氧适应的关系有待后续实验进一步研究。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2016-05-01）
赵鹏南,罗桂平,姜云瀚,李经纬,唐富琴[4]（2016）在《MiR-17-5p调控STAT3信号通路在心肌慢性缺氧适应中意义的研究》一文中研究指出目的探讨心肌慢性缺氧环境下,miR-17-5p的表达变化以及miR-17-5p对STAT3信号通路的调控对于缺氧心肌细胞的影响。方法 1选取新桥医院心外科2014年8月至2015年4月期间先心病患儿20例,其中紫绀型(年龄61.5±46.5月,术后诊断为法洛氏四联症)与非紫绀型(年龄43.2±32.1月,术后诊断为室缺伴右心室流出道狭窄)各10例。术中取右室流出道心肌组织作为标本,采用RT-PCR检测两组先心病患儿心肌组织miR-17-5p的表达情况。2建立大鼠源H9c2心肌细胞慢性缺氧适应模型,分为缺氧0、12、24、48、72 h组(n=5),RT-PCR分别检测各组miR-17-5p的表达。3脂质体转染antagomir miR-17-5p和agomir miR-17-5p至H9c2心肌细胞,建立过表达miR-17-5p和沉默miR-17-5p的H9c2心肌细胞系,慢性缺氧培养48 h,CCK8实验检测细胞增殖情况,TUNNEL实验检测细胞凋亡情况,Western blot检测STAT3,p-Tyr-705-STAT3及其下游调控蛋白c-myc蛋白表达。结果 1与非紫绀组(0.482±0.163)相比,紫绀组(1.450±0.705)患儿miR-17-5p表达明显升高(P<0.01)。2慢性缺氧细胞模型研究结果显示慢性缺氧时H9c2细胞miR-17-5p表达逐渐增高(P<0.01)。3缺氧环境下miR-17-5p过表达明显抑制p-Tyr-705-STAT3、STAT3、c-myc表达,引起心肌心肌细胞增殖受抑制,凋亡增加(P<0.01);而抑制miR-17-5p对p-Tyr-705-STAT3、STAT3、c-myc表达改变不明显,且对于心肌细胞的增殖和凋亡改变也不明显(P>0.05)。结论在心肌慢性缺氧过程中,miR-17-5p可能参与调控STAT3-c-myc信号通路,对于心肌细胞的存活和功能调节有重要意义。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2016年06期）
鞠胜杰[5]（2015）在《NEDD4蛋白调控AMPK活性参与心肌慢性缺氧适应的研究》一文中研究指出目的:慢性缺氧是多种心脏疾病共同的病理生理过程,临床常见的疾病包括紫绀型先天性心脏病、冠状动脉粥样硬化性心脏病、代偿性心肌肥厚、高原性心脏病等。在慢性缺氧过程中,心肌细胞面临严重能量应激、氧化应激、钙离子失衡等多种应激。应激作用导致心肌细胞自身结构重塑、体液内环境改变等多种适应性改变。既往研究证实,这些适应性反应可促使心肌细胞耐受多种外界刺激。目前,心肌细胞慢性缺氧适应的确切机制尚不完全清楚。能量代谢调节是心肌细胞慢性缺氧适应的关键环节。腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated Protein Kinase,AMPK)是一种在真核细胞中广泛存在的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,活化AMPK可调节多种信号通路增加心肌细胞能量的生成。AMPK被认为是心肌细胞能量代谢调节的关键激酶。神经前体细胞表达的发育下调基因4蛋白(Neural precursor cell expressed developmentally down-regulated protein 4,NEDD4)是一种含有HECT结构域的E3泛素连接酶,其结构中的WW结构域可能通过识别活化AMPK结构中的磷酸化苏氨酸残基而参与其活性调节。深入研究慢性缺氧时心肌细胞中NEDD4蛋白表达水平和AMPK活化水平的变化以及NEDD4蛋白对AMPK活性的可能调节作用,将有助于我们拓展对AMPK活性调节的认识。本研究以先天性心脏病患儿心肌组织和培养H9c2心肌细胞作为研究对象,观察在慢性缺氧条件下心肌细胞中NEDD4蛋白表达水平和AMPK活化水平的变化。同时,利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术构建NEDD4蛋白低表达细胞模型,观察干扰NEDD4蛋白表达对心肌细胞缺氧耐受的影响。旨在通过上述实验探讨NEDD4蛋白对AMPK活性的调节作用对心肌慢性缺氧适应的影响。方法:1.选取于2013年1月-2014年1月之间在第叁军医大学新桥医院心血管外科接受手术治疗的先天性心脏病患儿,根据患者术前血氧饱和度分为紫绀组和非紫绀组,取术中切除的肥厚右室流出道心肌组织作为临床标本,免疫组化染色观察NEDD4蛋白在心肌组织中的表达分布情况;ripa裂解法提取心肌标本中的总蛋白,采用westernblot法检测两组患儿心肌组织中nedd4蛋白表达水平及ampk活化水平变化。2.在慢性缺氧条件下培养h9c2心肌细胞。在不同缺氧时间段提取心肌细胞总蛋白,采用westernblot法检测nedd4蛋白表达水平和ampk活化水平变化。同时将以h9c2心肌细胞nedd4蛋白基因为靶点的sirna转染至心肌细胞,建立nedd4蛋白低表达细胞模型,在慢性缺氧条件下(94%n2,5%co2,1%o2)培养72h后westernblot法检测nedd4蛋白表达水平与ampk活化水平变化,流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况。结果:1.紫绀组先天性心脏病患儿术前氧饱和度明显低于非紫绀组(p<0.05),免疫组化检测提示nedd4蛋白主要在心肌细胞胞质中表达。与非紫绀组相比,紫绀组先天性心脏病患儿心肌组织中nedd4蛋白表达水平较低(p<0.05),nedd4蛋白表达水平与患者术前血氧饱和度呈正相关。2.westernblot结果显示,与非紫绀组患儿相比,紫绀组先天性心脏病患儿心肌组织中ampk活化水平(p-ampk/ampk蛋白条带灰度比值)显着增强(p<0.05)。3.在慢性缺氧条件下培养h9c2心肌细胞,westernblot结果证实,nedd4蛋白表达水平随着缺氧时间的延长而降低(p<0.05),至缺氧24h时降至最低值,此后维持这一低水平表达;ampk活化水平随着缺氧时间的延长而显着增加(p<0.05),在缺氧48h时达最大值,此后维持这一高活化水平;nedd4蛋白表达水平与ampk活化水平变化趋势呈负相关。4.流式细胞术结果提示:与常氧组相比,缺氧组心肌细胞凋亡比例显着增加(p<0.05),但干扰nedd4蛋白表达后,缺氧所致心肌细胞凋亡比例降低(p<0.05);westernblot结果提示,与阴性转染组相比,干扰转染组nedd4蛋白表达水平显着降低(p<0.05),而ampk活化水平显着增强(p<0.05)。结论:1.与非紫绀型先天性心脏病患儿相比,紫绀型先天性心脏病患儿心肌组织中nedd4蛋白表达水平较低,ampk活化水平增强。2.在慢性缺氧条件下培养h9c2心肌细胞,与常氧组相比,慢性缺氧组心肌细胞中nedd4蛋白表达水平降低,ampk活化水平增强。3.慢性缺氧增加心肌细胞凋亡,利用sirna下调心肌细胞nedd4蛋白表达后,ampk活化水平增强,缺氧所致的心肌细胞凋亡比例降低,这提示在慢性缺氧条件下NEDD4蛋白可能通过调控AMPK活性参与心肌慢性缺氧适应。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2015-05-01）
李畑波[6]（2015）在《AMPK激活促自噬反应参与心肌慢性缺氧适应的作用及机制研究》一文中研究指出研究背景及目的:先天性心脏病(congenital heart disease,CHD)是婴幼儿常见的疾病之一,目前CHD整体的手术治愈率较以前已明显改善,但紫绀型先天性心脏病(cyanotic congenital heart disease,CCHD)的手术死亡率仍然较高。慢性缺氧(chronic hypoxia)是大部分CCHD病的共有的病理生理过程。目前CCHD的心肌慢性缺氧适应的分子机制尚不清楚。因此,深入研究心肌细胞慢性缺氧适应的分子机制可为改善CCHD的临床治疗提供新的心肌保护策略。AMPK是广泛存在于真核细胞的Ser/Thr蛋白激酶,已有研究证实,在慢性缺氧条件下,活化的AMPK参与心肌细胞能量代谢。新近研究表明,在肿瘤细胞中,活化的AMPK和自噬反应密切相关。我们推测:在心肌细胞慢性缺氧适应中,AMPK可能通过调节自噬对心肌细胞产生保护作用。本研究拟从下面叁个方面进行验证:1.检测活化AMPK在慢性缺氧心肌组织中的表达水平;2.研究AMPK活化水平对心肌细胞慢性缺氧适应的影响;3.探讨AMPK活化水平对慢性缺氧心肌细胞自噬水平的影响。研究方法:1.选用清洁级4-6周龄雄性SD大鼠24只,随机将其平均分为常氧组和缺氧组。将缺氧组置入低压舱(模拟海拔5000m,气压405mm Hg),常氧组正常饲养。同时喂养28d后,处死大鼠后迅速取出心脏并分离出右心室部分作为标本;入选第叁军医大学第二附属医院心血管外科2013年全年行手术矫治的先心病患儿24例,平均将其分为紫绀组和非紫绀组,于术中收集切除的右室流出道心肌组织作为标本。采用Western blot分别检测p-AMPK在大鼠、人体缺氧和正常心肌组织中的表达水平。2.选用H9c2心肌细胞株,并将其分为常氧组、低氧组、阻断组、激活组。将低氧组、阻断组、激活组叁组细胞置入缺氧培养箱3d(94%N2,5%CO2,1%O2),建立H9c2心肌细胞株慢性缺氧模型;常氧组置入细胞培养箱3d(74%N2,5%CO2,21%O2),对照培养。分别向阻断组和激活组中加入AMPK特异性阻断剂Compound C和激活剂AICAR,采用Western blot验证活化AMPK的表达,流式细胞仪、TUNEL法检测并评价心肌细胞凋亡情况,Hoechst染色观察因细胞坏死引起的细胞核形态变化、LDH测定心肌细胞乳酸释放率评价心肌细胞坏死程度。3.采用westernblot分别检测常氧组、缺氧组、阻断组和激活组lc3的表达水平。结果:1.ampk在正常和慢性缺氧组织中的激活水平westernblot结果显示与正常心肌组织相比,缺氧心肌组织中p-ampk/ampk比值明显增高:在人体心肌组织方面,紫绀组心肌组织ampk蛋白磷酸化水平和非紫绀组相比,明显增加,p<0.005;在大鼠心肌组织方面,慢性缺氧组sd大鼠心肌组织中ampk蛋白激活水平和常氧组相比,明显增加,p<0.005。2.ampk激活对慢性缺氧心肌细胞的保护作用(1)心肌细胞ampk激活水平验证实验中,westernblot结果显示与低氧组相比,阻断组ampk激活水平降低,p<0.01;激活组ampk激活水平升高,p<0.01。(2)与低氧组相比,阻断组心肌细胞凋亡水平升高,与此同时,激活组心肌细胞凋亡水平降低。细胞流式术:与低氧对照组相比,ampk阻断组凋亡细胞比例明显增多,与此同时,ampk激活组凋亡细胞比例明显减少。tunel实验:与低氧对照组相比,ampk阻断组tunel-阳性细胞比例增多(p<0.05),与此同时,ampk激活组tunel-阳性细胞减少(p<0.05)。(3)与低氧组相比,阻断组心肌细胞坏死程度增高,与此同时,激活组心肌细胞坏死程度降低。hoechst染色:与低氧对照组相比,ampk阻断组不正常核细胞比例明显增多(p<0.01),与此同时,ampk激活组不正常核细胞比例减少(p<0.05)。ldh实验:与低氧对照组相比,ampk阻断组细胞乳酸释放率明显升高(p<0.01),与此同时,ampk激活组细胞乳酸释放率明显降低(p<0.05)。3.ampk激活对慢性缺氧心肌细胞自噬反应的影响westernblot结果显示与心肌细胞低氧组相比,ampk阻断组自噬水平(lc3Ⅱ/lc3Ⅰ)明显降低,p<0.01;ampk激活组自噬水平(lc3Ⅱ/lc3Ⅰ)明显升高,p<0.01。结论:1.紫绀型先心病和慢性缺氧sd大鼠的心肌组织中p-ampk/ampk比值与非紫绀型先心病和常氧sd大鼠的心肌组织相比明显增高。提示慢性缺氧心肌组织中ampk激活水平明显增加。2.慢性缺氧条件下培养h9c2细胞72h,加入compoundc阻断ampk激活,h9c2细胞凋亡和坏死水平增高;加入AICAR促进AMPK激活,H9c2细胞凋亡和坏死水平降低。提示在心肌慢性缺氧适应中,AMPK激活对H9c2细胞具有一定的保护作用。3.慢性缺氧条件下培养H9c2细胞72h,加入Compound C阻断AMPK激活,H9c2细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低;加入AICAR促进AMPK激活,H9c2细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增高。提示AMPK激活促进H9c2细胞自噬反应可能是心肌细胞适应慢性缺氧的机制之一。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2015-05-01）
鞠胜杰,李畑波,蹇朝,马瑞彦,李经纬[7]（2015）在《NEDD4调控AMPK活性参与心肌细胞慢性缺氧适应的研究》一文中研究指出目的探讨NEDD4在心肌细胞慢性缺氧适应过程中的作用及其可能的机制。方法1收集手术矫正的先心病患儿32例,其中紫绀型先心病18例,非紫绀型先心病14例。取术中切除的右室流出道心肌组织作为标本,用免疫组化染色检测NEDD4在心肌细胞中表达的分布,Western blot检测NEDD4在心肌组织中的表达情况;2将H9c2心肌细胞分为常氧组、慢性缺氧组和阳性对照组,其中慢性缺氧组又分为对照组、空白转染组和干扰转染组,设计合成以心肌细胞NEDD4基因为靶标的siRNA,通过阳离子脂质体将合成的siRNA转染至H9c2心肌细胞中,常氧培养(74%N2,5%CO2,21%O2)48 h后开始对慢性缺氧组心肌细胞进行缺氧刺激(94%N2,5%CO2,1%O2),缺氧刺激72 h后Western blot检测NEDD4、p-AMPK表达水平变化,流式细胞术检测缺氧刺激所致心肌细胞损伤情况。结果 1紫绀组患儿术前血氧饱和度明显低于非紫绀组(P<0.05);免疫组化染色结果显示NEDD4主要分布于心肌细胞质中;与非紫绀组相比,紫绀组患儿心肌组织中NEDD4表达水平显着下降[NEDD4/β-actin条带灰度比值:非紫绀组(0.72±0.07);紫绀组(0.42±0.06),P<0.05];2与常氧组相比,对照组心肌细胞死亡比例显着增加(P<0.05);但干扰NEDD4表达后,缺氧所致心肌细胞损伤比例降低(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与空白转染组相比,干扰转染组AMPK磷酸化水平显着增加[p-AMPK/AMPK条带灰度比值:空白转染组(0.21±0.01),干扰转染组(0.88±0.04),P<0.05]。结论 NEDD4可能通过调控AMPK活性参与慢性缺氧情况下心肌细胞代谢的适应调节。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2015年09期）
肖颖彬,蹇朝[8]（2015）在《心肌慢性缺氧适应的研究进展》一文中研究指出慢性缺氧相关性心血管疾病在临床上十分常见。心肌细胞在慢性缺氧时通过调控自身基因表达,改变代谢方式,增强自我维持能力,促进心肌的慢性缺氧适应。其中转录调节因子缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)发挥着中心性的调控作用。同时慢性缺氧也导致心肌损害,引起心脏功能受损。因此,研究心肌慢性缺氧适应的确切机制并加以利用,将可能为防治慢性缺氧性心肌损伤提供新的治疗策略。(本文来源于《西部医学》期刊2015年03期）
谢婧雯,刘晓燕[9]（2012）在《Akt信号通路在紫绀型先天性心脏病患儿心肌慢性缺氧适应中的作用》一文中研究指出目的:探讨Akt信号通路在紫绀型先天性心脏病患儿心肌慢性缺氧适应中的意义。方法:收集紫绀型和非紫绀型先天性心脏病患儿共50例,其中紫绀型26例(紫绀组),动脉血氧饱和度(SaO2)60%～89%;非紫绀型24例(非紫绀组),SaO2>95%,均不伴肺动脉高压[肺动脉收缩压<30mmHg(1mmHg=0.133kPa)]。心脏外科手术体外循环前留取右心耳组织,应用Western blot方法检测心肌组织蛋白激酶B(总Akt)和磷酸化蛋白激酶B(Ser473P-Akt)表达水平,免疫组织化学技术检测心肌组织总Akt和Ser473 P-Akt蛋白表达部位与水平。结果:与非紫绀组相比,紫绀组患儿心肌组织Ser473P-Akt蛋白表达水平明显增高(P<0.01),而2组患儿总Akt蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。紫绀组患儿心肌组织Ser473P-Akt蛋白大部分表达在心肌细胞的胞质,胞核亦有微弱表达,而非紫绀组心肌细胞则无明显Ser473P-Akt蛋白表达。2组患儿总Akt蛋白绝大部分也表达在心肌细胞的胞质,胞核亦有微弱表达,但表达部位和水平差异无统计学意义。紫绀组患儿心肌组织Ser473 P-Akt蛋白表达水平与患儿术前SaO2呈负相关(r=-0.771,P<0.01)。结论:Akt信号通路激活可能是紫绀型先天性心脏病患儿心肌慢性缺氧适应的重要信号调控机制之一。(本文来源于《临床心血管病杂志》期刊2012年05期）
谢婧雯[10]（2012）在《Akt信号通路在紫绀型先天性心脏病患儿心肌慢性缺氧适应中的作用研究》一文中研究指出背景与目的：先天性心脏病（简称先心病）的发病率为6~12‰，每年大约有15-20万先心病患儿出生[1]。紫绀型先心病是临床常见的先心病类型，心肌慢性缺氧是紫绀型先心病患儿重要的病理生理改变[2]。Akt信号通路对缺血缺氧损伤后心肌细胞的存活起主要调控作用[3]。近年来国内外的学者对Akt信号通路的研究主要集中于人类肿瘤[4-5]，Akt信号通路辅助肿瘤生长，主要通过增强细胞在缺氧环境下的适应能力和对营养供给缺乏的耐受能力,发挥其抑制肿瘤细胞凋亡，促进细胞存活的作用。小儿心肌慢性缺氧适应机制还不是十分清楚，对其信号通路的研究较少， Akt信号通路在其发生发展中的作用尚不明确。为此，本课题以紫绀型先心病患儿作为研究对象，非紫绀型先心病患儿作为病例对照，通过检测蛋白激酶B（总Akt）和磷酸化蛋白激酶B（Ser~(473)P-Akt）在两组患儿心肌组织中的蛋白表达水平和部位，以及其表达与动脉血氧饱和度（SaO_2）之间的关系，探讨Akt信号通路在紫绀型先心病患儿心肌慢性缺氧适应中的意义。方法：收集手术治疗的先心病患儿50例，根据术前有无紫绀分为两组，其中紫绀组26例， SaO_260%~89%；非紫绀组24例，SaO_2>95%，所有病例均不伴肺动脉高压（肺动脉压<30mmHg）。心脏外科手术体外循环前留取右心耳组织，应用Western blot技术，检测紫绀型和非紫绀型先心病患儿心肌组织总Akt和Ser~(473)P-Akt蛋白表达水平，将Ser~(473)P-Akt蛋白水平与患儿术前SaO_2进行相关性分析。应用免疫组织化学技术，检测紫绀型和非紫绀型先心病患儿心肌组织中总Akt和Ser~(473)P-Akt蛋白表达部位与水平。本课题设计方案经重庆医科大学附属儿童医院伦理委员会批准。结果：本研究主要结果如下：Western blot检测结果显示，与非紫绀组相比，紫绀组患儿心肌组织Ser~(473)P-Akt蛋白表达水平明显增高（p <0.001），而两组患儿总Akt蛋白表达水平差异无统计学意义（p>0.05）;紫绀组患儿心肌组织Ser~(473)P-Akt蛋白表达水平与患儿术前SaO_2呈显着的负相关（r=-0.771，P <0.01）。免疫组化检测证实，紫绀组患儿心肌组织Ser~(473)P-Akt蛋白大部分表达在心肌细胞的胞浆，心肌细胞的胞核亦有微弱表达，而非紫绀组心肌细胞则无明显Ser~(473)P-Akt蛋白表达。两组患儿总Akt蛋白绝大部分也表达在心肌细胞的胞浆，心肌细胞的胞核亦有微弱表达，但表达部位和水平无明显差异。结论：Akt信号通路激活可能是紫绀型先心病患儿心肌慢性缺氧适应重要信号调控机制之一。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2012-05-01）
心肌慢性缺氧适应论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
一、研究背景心肌慢性缺氧是临床诸多疾病的共同病理生理过程,可见于紫绀型先心病、肺源性心脏病以及高原性心脏病等全身系统性缺氧疾病,也常见于冠状动脉粥样硬化、心肌肥厚等因素所导致的心肌局部缺血缺氧状态。研究慢性缺氧心肌的适应性反应及其机制,对上述临床疾病的治疗具有重要意义。自噬是细胞内高度保守的分解代谢过程,基础水平的自噬有助于胞内蛋白和细胞器的更新以及细胞稳态的维持;但在营养缺乏、氧化应激等因素刺激下,自噬水平增高,从而降解多余蛋白以提供小分子代谢底物,同时也能清除受损细胞器从而避免细胞损伤。既往研究发现,在TAC诱导的小鼠心肌肥厚模型及心肌缺血/再灌注模型中,自噬水平增高;在来源于紫绀型先心病患者的手术标本中,检测发现自噬增强。自噬与心血管疾病的发生、发展存在密切联系,研究慢性缺氧心肌细胞自噬的变化及其机制,可能为治疗该类疾病提供潜在的干预靶点。AMPK是细胞内保守的丝/苏氨酸激酶,被认为是细胞内能量稳态调控的关键分子。当细胞内ATP含量减少时,AMPK被激活,抑制合成代谢,促进分解代谢和ATP生成。AMPK也是自噬通路的上游分子,在细胞应激时,AMPK的激活也参与了自噬通路的调控。研究发现,AMPK的激活可以促进慢性缺氧心肌细胞的适应与存活,但其具体机制仍有待进一步阐明。AMPK分子由α、β和γ叁个亚基构成,α为催化亚基,负责激活的AMPK分子的功能执行,存在α1与α2两种亚型,α2亚型在心脏分布较多。本课题研究中,我们首先建立小鼠的慢性缺氧模型,检测慢性缺氧对小鼠心肌细胞自噬水平的影响,然后采用AMPKα2基因敲除的小鼠,观察其对常氧或缺氧条件下小鼠心肌细胞自噬水平以及小鼠生存曲线的影响。二、研究方法1.小鼠慢性缺氧模型的建立:参照专利设计,制作一简易小动物常压低氧舱,依据文献资料,将小鼠放置于10%的低氧舱内饲养4周,建立慢性缺氧模型,并通过检测红细胞等相关指标,证实建模成功。2.慢性缺氧对小鼠心肌细胞自噬水平的影响:取野生型C57小鼠随机分为常氧组和缺氧组,通过Western blot检测小鼠心肌LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及p62表达的变化,用免疫荧光染色法检测小鼠心肌冰冻切片中LC3的变化。3.AMPKα2敲除对小鼠心肌细胞自噬的影响:采用AMPKα2+/-杂合子小鼠配对繁殖,后代小鼠行基因型鉴定,将野生型与AMPKα2-/-小鼠分别分为常氧组和缺氧组,即:野生型常氧组、野生型缺氧组、敲除型常氧组和敲除型缺氧组,共4组(每组n=10)。通过Western blot检测小鼠心肌细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值变化及免疫荧光染色法检测小鼠心肌细胞LC3表达的变化来反映自噬的改变,记录小鼠死亡的时间与例数,绘制小鼠生存曲线。叁、研究结果1.慢性缺氧模型的建立:和常氧组比较,缺氧组小鼠的红细胞与血红蛋白均显着增加(P<0.05);日均进食量与体重均显着降低(P<0.05);心脏/体重比值与双肺/体重比值均显着下降(P<0.05)。2.慢性缺氧对小鼠心肌细胞自噬水平的影响:和常氧组比较,Western blot显示缺氧组小鼠心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显着升高(P<0.05),p62水平显着降低(P<0.05);免疫荧光染色显示其冰冻切片中LC3表达明显增加。3.AMPKα2敲除对小鼠心肌细胞自噬的影响:常氧条件下,AMPKα2-/-小鼠心肌细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值较野生型无显着统计学差异(P>0.05);但缺氧条件下,AMPKα2-/-小鼠心肌细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值较野生型有显着下降(P<0.05),免疫荧光染色结果与Western blot结果一致。缺氧条件下,AMPKα2-/-小鼠中位生存时间明显缩短(P<0.05)。4.统计分析:使用SPSS13.0进行统计分析,两组均数比较采用t检验,多组(≥3)均数比较采用单因素方差分析。四、主要结论1.慢性缺氧条件下,野生型小鼠心肌细胞自噬水平增高,说明自噬可能是心肌细胞对慢性缺氧的适应性性机制之一。2.与野生型小鼠相比,在常氧条件下,AMPKα2敲除小鼠心肌细胞自噬水平无明显变化,但在慢性缺氧条件下,AMPKα2敲除小鼠心肌细胞自噬水平显着降低,中位生存时间显着较短,提示AMPKα2所介导的自噬可能在心肌慢性缺氧的适应中具有重要意义。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
心肌慢性缺氧适应论文参考文献
[1].石宇.细胞自噬在紫绀型先心病心肌慢性缺氧适应中的机制的研究[D].蚌埠医学院.2017
[2].刘超.AMPKα2调节自噬参与心肌慢性缺氧适应的研究[D].第叁军医大学.2017
[3].王海霞.Wnt/β-catenin信号通路在心肌慢性缺氧适应中的作用及机制[D].重庆医科大学.2016
[4].赵鹏南,罗桂平,姜云瀚,李经纬,唐富琴.MiR-17-5p调控STAT3信号通路在心肌慢性缺氧适应中意义的研究[J].第叁军医大学学报.2016
[5].鞠胜杰.NEDD4蛋白调控AMPK活性参与心肌慢性缺氧适应的研究[D].第叁军医大学.2015
[6].李畑波.AMPK激活促自噬反应参与心肌慢性缺氧适应的作用及机制研究[D].第叁军医大学.2015
[7].鞠胜杰,李畑波,蹇朝,马瑞彦,李经纬.NEDD4调控AMPK活性参与心肌细胞慢性缺氧适应的研究[J].第叁军医大学学报.2015
[8].肖颖彬,蹇朝.心肌慢性缺氧适应的研究进展[J].西部医学.2015
[9].谢婧雯,刘晓燕.Akt信号通路在紫绀型先天性心脏病患儿心肌慢性缺氧适应中的作用[J].临床心血管病杂志.2012
[10].谢婧雯.Akt信号通路在紫绀型先天性心脏病患儿心肌慢性缺氧适应中的作用研究[D].重庆医科大学.2012