导读:本文包含了多表位联合论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:钩端螺旋体,c-di-GMP,环二鸟苷酸合成酶,磷酸二酯酶
多表位联合论文文献综述
肖国辉[1]（2018）在《问号钩端螺旋体c-di-GMP信号通路初步探究及其多表位联合疫苗的研发》一文中研究指出钩端螺旋体病是由致病性钩端螺旋体引起的在全球广泛流行的人兽共患疾病。其中问号钩端螺旋体是最主要的致病性钩体,它在污染的土壤、水和不同的宿主之间穿梭时,经历温度、pH、渗透压等多种条件的改变。因此钩体应该具备完善的胞外信号转导系统,可以通过感知胞外环境变化调整自身的生理代谢以适应变化的环境。Cyclic di-GMP(c-di-GMP)是一种新发现的细菌第二信使,可以通过感知信号的变化调控细菌的诸多生理行为比如细胞周期、毒力、生物的形成、运动性和趋化性等等。二鸟苷酸环化酶(diguanylatecyclases,DGC)和磷酸二酯酶(phosphodiesterases,PDE)分别负责细菌 c-di-GMP 的合成与降解。c-di-GMP 通过与受体分子结合导致受体分子空间结构和活性改变,进而影响受体参与的代谢活动,导致激活或者抑制因子下游基因的转与表达,从而影响细菌的生理代谢活动。本研究中,我们运用生物信息学方法系统性分析了 15种钩端螺旋体c-di-GMP代谢相关酶的分布及进化情况,结果发现15种钩端螺旋体基因组中都含有大量的c-di-GMP合成酶和降解酶基因,表明在钩体中c-di-GMP是一个非常重要的第二信使。鉴于问号钩端螺旋体是国内主要流行的致病性钩体种类,因此我们深入分析了问号钩端螺旋体赖株56601的c-di-GMP信号通路。结果发现问号钩体基因组中含有25个c-di-GMP代谢相关基因,分别编码13个GGDEF结构域蛋白,3个GGDEF-EAL结构域蛋白,5个EAL结构域蛋白和4个HD-GYP结构域蛋白,且大部分c-di-GMP代谢酶与信号感知结构域相耦联。运用双荧光报告质粒系统检测问号钩体c-di-GMP代谢相关基因的酶活性,结果显示大部分DGCs和PDEs具有合成或降解c-di-GMP的能力。当我们分别删除LA1483基因的GAF信号感知结构域和LA2932基因的PAS信号感知结构域后发现LA1483和LA2932蛋白失去合成c-di-GMP的能力,表明PAS和GAF结构域对DGCs蛋白执行合成酶功能非常重要。而我们删除LA2528基因的REC结构域序列后发现其仍然可以合成c-di-GMP。当问号钩体从28°C培养条件转移至37℃培养条件时,HPLC-MS/MS测量钩体c-di-GMP含量发现,c-di-GMP水平下降,real-time PCR检测发现c-di-GMP代谢相关基因的表达模式多样化。通过real-time PCR检测c-di-GMP代谢相关基因的mRNA相对表达丰度,发现大部分的基因表达量非常低,而LA1483基因表达量非常高,几乎是其他基因的几百倍。当问号钩体感染小鼠J774A.1细胞后,HPLC-MS/MS检测发现,问号钩体胞内c-di-GMP水平下降,然而real-time PCR结果显示感染期间似乎并不影响c-di-GMP代谢相关基因的表达。此外,通过EMSA实验我们鉴定出了两个能与问号钩体能够c-di-GMP发生结合的PilZ结构域蛋白。钩端螺旋体病是由致病性钩端螺旋体引起的再现性人兽共患病,全世界每年有将近50万份该病例报告。疫苗接种是预防和控制钩体病的最有效的措施。目前广泛应用的钩体疫苗还是灭活的钩体全菌疫苗。然而钩体全菌疫苗表现短时间免疫原性,副作用,血清群特异性明显等缺点,使得该疫苗的应用受到极大的限制。因此,开发一种通用的、高效力的和低毒性的钩体疫苗显得尤为急切。钩体外膜蛋白(Outer Membrane Proteins)OMPs,位于菌体表面,直接参与细菌与宿主的相互作用,且在不同血清型中比较保守,使得其成为目前钩体病疫苗开发的热点,但仍不能克服其血清群特异性免疫的特点。本实验中我们根据之前实验筛选和鉴定的钩体外膜蛋白OmpL1,LipL21和LipL32中的六个优势T-细胞和B-细胞联合抗原表位肽序列人工合成一条六表位肽联合DNA序列。通过DNA重组技术将六表位肽DNA序列串联四次,合成一条四重复的六表位肽融合序列,简称为r4R,并且克隆至pET28a表达载体中。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳检测显示重组质粒很好地表达了目的蛋白,且诱导表达的蛋白以可溶性形式存在。Western bolt实验证实r4R重组蛋白可以与钩体抗血清反应。通过MAT(Microscopic agglutination tests)检测r4R抗血清的交叉免疫反应,发现r4R抗血清可以与国内流行的主要血清型钩体产生凝集反应,表明r4R疫苗可能具有交叉保护效果。ELISA检测r4R抗血清发现IgG1和IgG2a水平明显升高,且IgG2a>IgG1。添加r4R刺激经r4R疫苗免疫后的小鼠脾细胞,经CCK-8试剂盒检测发现显着性促进脾细胞的增殖。ELISA检测脾细胞培养上清液发现IFN-γ水平明显升高。这些结果表明r4R疫苗倾向诱导Th1细胞免疫。在钩体攻毒实验中,我们发现免疫r4R疫苗后显着提高豚鼠的存活率,而PBS对照组的豚鼠则全部死亡。HE染色观察组织病变情况,r4R免疫的豚鼠各组织没有明显的病理改变,而PBS对照组豚鼠各组织均出现明显的病理改变。(本文来源于《浙江大学》期刊2018-03-01）
王爱秀,陈勇,蒋琳[2]（2015）在《恶性疟疾多表位联合疫苗研究进展》一文中研究指出恶性疟疾是目前严重危害人类健康的寄生虫病之一,尤其在非洲地区。目前最有前景的恶性疟疾疫苗是葛兰素史克公司研发的红细胞前期疫苗RTS’S/AS01,其正在进行III期临床试验。然而,疟原虫生活史复杂,抗原成分多,并且同一抗原在不同虫株间存在差异,单一抗原成分的疫苗依然不能有效地预防恶性疟疾。所以,研制一种多表位联合疫苗,使其可以在恶性疟原虫的多个阶段对人体进行免疫保护,达到预防恶性疟疾的目的,这将是恶性疟疾疫苗的发展方向。(本文来源于《微生物学免疫学进展》期刊2015年04期）
陈瑜[3]（2004）在《胃癌MG7-Ag模拟表位为基础构建多表位联合的基因疫苗的研究》一文中研究指出胃癌是严重威胁我国人民健康的恶性肿瘤，目前胃癌的治疗手段主要有手术切除和化疗，但均不能有效解决肿瘤转移、复发等问题。免疫治疗是肿瘤治疗的新方法，包括用外源性抗体治疗、用细胞因子调节免疫以及主动免疫治疗，用疫苗对患者的免疫系统产生特异性刺激。目前尚无有效的疫苗用于胃癌的主动免疫治疗。胃癌MG7抗原是本研究所在八十年代发现的特异性较高的肿瘤标志物，抗原分析表明其抗原决定簇位于糖链上。由于糖抗原免疫原性弱，纯化、制备困难，且不易诱导T细胞免疫反应。用分子模拟多肽替代糖抗原进行免疫治疗是解决问题的方法之一，并在动物模型中取得很好的效果。本研究所用噬菌体随机肽库技术筛选得到了MG7抗原的模拟肽表位，抗体竞争结合抑制实验证明模拟肽表位可以有效地模拟天然抗原，计算机辅助分析显示模拟表位可与HLA分子结合，这为胃癌疫苗的研究奠定了基础。 DNA疫苗具有诱导特异、高效、持久的免疫反应，制备简便 第四军医大学硕士学位论文等特点，已广泛用于肿瘤疫苗的基础研究。特别是可以模拟内源性抗原的加工呈递过程，诱发特异性细胞免疫反应。其免疫途径有肌肉注射、皮下注射、静脉注射等。目前进入临床实验的质粒DNA疫苗有针对黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、人类免疫缺陷病毒、乙肝病毒和疟原虫等疾病，多使用肌肉注射。安全性实验表明，人体对DNA疫苗耐受良好。 为了增强以表位为基础的DNA疫苗的免疫效果，常采用的策略有:辅助因子的融合或共注射:抗原表位基因与载体蛋白融合;多表位联合组建疫苗等。 多个表位联合的疫苗可以诱导机体产生针对各个不同表位的抗原特异性免疫反应，重复单一表位可通过增加表位的拷贝数和加强Thl细胞反应而提高疫苗的免疫效能。在设计多表位串联疫苗时，表位的侧翼序列对于表位的免疫原性影响很大，故在表位之间添加间隔序列(sPacer)非常关键。合适的sPacer能避免表位间的相互干扰，以及联合表位与MHC分子的非特异性结合;对于蛋白酶对抗原肤水解也有影响。 抗原模拟表位多为8一12多肤，在体内容易被降解，故难以激发有效的免疫反应，因此应选择适当的载体或佐剂保护抗原表位，并促进其递呈给T淋巴细胞，诱导特异性的免疫反应。热休克蛋白70(HSP7O)是MHCI类分子抗原呈递途径中的一种伴侣分子，在未与MHCI类分子结合之前，经蛋白酶体切割的内源性肤段很不稳定，而HSP70可与肤段结合，稳定肤段并将其送到内质网与TAP分子结合。HSP能够将肿瘤抗原肤转运至宿主的APC，再呈 第四军医大学硕士学位论文递给T细胞，从而促进抗原特异性免疫反应。HSP本身具有免疫刺激剂的作用，可增加多种细胞因子的分泌。HSP70在各种生物体中高度保守，不易引起异体间的免疫反应，不会干扰抗原特异性免疫的结果。因此，HSP70被认为是一种良好的免疫佐剂，可用于肿瘤疫苗的研究。以HSP7O为基础的疫苗已进入临床试验阶段。从肿瘤中提纯的HSP7O一肤复合物能引起机体产生特异性抗瘤反应。体外重组的HSP70一肤复合物或HSP7O与抗原表位的融合基因均能诱导抗原特异性的免疫反应，并进行免疫治疗。 趋化因子作为肿瘤疫苗的佐剂是增强疫苗效能的另一途径，在感染性疾病的疫苗研究中已有用。趋化因子MIG和IP一10不仅能够募集T细胞、NK细胞等，或将抗原肤段靶向转染APC细胞，还具有抑制血管生成的作用，可从双方面提高治疗肿瘤的效果。但是，趋化因子在肿瘤生物学中具有广泛的功能，可能通过与肿瘤细胞表达的趋化因子受体作用，在肿瘤的白细胞浸润的表型、新生血管生成、肿瘤细胞的生长、存活和转移等方面其重要作用。因此，在应用MIG或IP一10治疗胃癌之前，应首先明确胃癌中其受体CXC3的表达情况，以预测应用后的作用机理和效果。 目的以HSP7O为载体，GGGS为间隔序列，构建含有4个串联的MG7一Ag模拟表位与HSP70的融合基因疫苗，并观察该疫苗能否诱导BALB/c小鼠产生特异性体液免疫、细胞免疫及其体内抗瘤效应。检测胃癌组织中趋化因子受体CXCR3的表达水平。 方法1.将4个不同的胃癌MG7一Ag模拟表位依次设计于下游引物中，通过多次PCR将表位串联于一段无关的载体基因，将 第四军医大学硕士学位论文目的基因插入PMD一1 ST载体，酶切鉴定，测序后，利用BamHI和EeoRI将基因亚克隆入真核表达载体peDNA3 .IB载体，Hind111酶切除无关载体基因，用EcoRI和Xhol将热休克蛋白基因插入表位之后作为佐剂，得到多表位串联的DNA疫苗。采用脂质体转染的方法将重组质粒瞬时转染至小鼠骨髓瘤SPZ/0细胞。W已stemblotting鉴定重组蛋白4MG7一HSP70的表达2.peDNA3 .IB/4MG7一HSP70基因疫苗采用肌肉注射和静脉注射两种方式免疫接种BALB/c小鼠，每隔2周加强免疫一次，共免疫3次。以生理盐水、空载体质粒、peDNA3 .1(+)/HSP70质粒和pcDNA3.l(+)/IMG一HSP70质粒为对照。分别于初次免疫后2、4、6周收集血清，进行ELISA。第6周时取小鼠脾细胞，用MTT法进行体外杀伤实验，检测?(本文来源于《第四军医大学》期刊2004-04-01）
多表位联合论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
恶性疟疾是目前严重危害人类健康的寄生虫病之一,尤其在非洲地区。目前最有前景的恶性疟疾疫苗是葛兰素史克公司研发的红细胞前期疫苗RTS’S/AS01,其正在进行III期临床试验。然而,疟原虫生活史复杂,抗原成分多,并且同一抗原在不同虫株间存在差异,单一抗原成分的疫苗依然不能有效地预防恶性疟疾。所以,研制一种多表位联合疫苗,使其可以在恶性疟原虫的多个阶段对人体进行免疫保护,达到预防恶性疟疾的目的,这将是恶性疟疾疫苗的发展方向。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
多表位联合论文参考文献
[1].肖国辉.问号钩端螺旋体c-di-GMP信号通路初步探究及其多表位联合疫苗的研发[D].浙江大学.2018
[2].王爱秀,陈勇,蒋琳.恶性疟疾多表位联合疫苗研究进展[J].微生物学免疫学进展.2015
[3].陈瑜.胃癌MG7-Ag模拟表位为基础构建多表位联合的基因疫苗的研究[D].第四军医大学.2004