导读:本文包含了自溶素论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:肺炎链球菌,胆碱结合蛋白,细胞壁
自溶素论文文献综述
邵致远,游雪甫,杨信怡[1]（2019）在《肺炎链球菌自溶素研究进展》一文中研究指出肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)是一种革兰阳性(G~+)条件致病菌,常定植于人鼻咽部,近一半健康人携带此菌~([1])。当人体免疫力降低,定植的肺炎链球菌可穿透黏膜等防御体系引起多种感染。临床上,肺炎链球菌是导致社区获得性肺炎、脑膜炎、中耳炎等的重要病原之一。易感人群包括儿童、老年人,及伴有其他基础疾病(如肿瘤、红(本文来源于《中国医药生物技术》期刊2019年03期）
谢兴凤[2]（2016）在《肺炎链球菌不同生长时间自溶素lytA基因表达的实时定量PCR分析》一文中研究指出目的研究肺炎链球菌的lytA基因在菌落生长的不同时间点的表达差异。方法根据GenBank中肺炎链球菌M66株的lytA基因序列(FN 549899.1)设计合成引物,以提取的17个生长时间点的肺炎链球菌的总RNA为模板,采用实时荧光定量PCR技术(QRT-PCR)分析lytA基因在不同生长时间点的基因表达量。实时荧光定量RT-PCR扩增反应结束后,利用溶解曲线对扩增反应进行特异性分析,采用双标准曲线法进行数据分析。结果经过内参基因16S RNA校正后,lytA基因表达量从18h到96h呈现逐渐升高的趋势,96h后开始下降,144h时出现第二次升高趋势。lytA基因在108h时的表达量最低,96h时的表达量最高,与其他时间点差异显着(P<0.05)。结论不同生长时间点的肺炎链球菌lytA基因表达量存在差异,这为进一步lytA基因与肺炎链球菌自溶的相关性研究奠定基础。(本文来源于《第七届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编》期刊2016-09-09）
李琼[3]（2015）在《肺炎链球菌自溶素LytA的结构和功能研究》一文中研究指出LytA存在于多种链球菌中,包括致病菌肺炎链球菌、假肺炎链球菌和轻型链球菌等。由于它在细菌自溶过程中发挥关键作用而得名自溶素。LytA是锚定在细菌细胞壁上的肽聚糖水解酶,能够水解N-乙酰胞壁酸和L-丙氨酸之间的酰胺键,但是其激活机制和发挥生理功能的分子机制仍然不清楚。我们解析了肺炎链球菌LytA的全长结构,分辨率为2.1A。LytA的全长结构为一个飞镖形状的同源二聚体,其相互作用区域位于C末端。每个亚基都包含有一个N端的酰胺酶结构域和一个C端的胆碱结合结构域,其中胆碱结合结构域有6个胆碱结合重复区,包括5个典型的和1个单层的胆碱结合位点。LytA N端的酰胺酶结构域上具有一个Y型的底物结合沟槽,结构分析结合生化实验证明其可能的底物为肺炎链球菌细胞壁的叁个分支：糖链、肽链和磷壁酸。另外,点突变结合酶活实验表明二聚化和所有胆碱结合位点被胆碱分子完全占据,才能使LytA具有完全催化活性的构象,进而使其2个酰胺酶结构域维持合适的距离来切割肽聚糖上相距103A的2个乳酰-酰胺键。另外,我们还对肺炎链球菌中的肽聚糖水解酶CbpD进行了结构和功能研究。为了获得上清表达、稳定性好和状态均一的目的蛋白,我们尝试了CbpD的多个截短版本。虽然最终未能解析其结构,但我们的工作会为后续的研究奠定基础。同时,我们构建了多个肽聚糖水解酶基因的敲除株,发现LytA和LytC倾向于水解初生肽聚糖,并且敲除会影响细菌粘附宿主细胞。(本文来源于《中国科学技术大学》期刊2015-10-01）
邹琴,孙文平,杨光,周杰,罗红[4]（2015）在《肺炎链球菌自溶素对感染性肺炎的诊断价值》一文中研究指出目的通过基因原核表达技术获取肺炎链球菌自溶素LytA重组蛋白(rLytA),探讨其对感染性肺炎患者的血清学诊断价值。方法根据Genbank中肺炎链球菌M66菌株lytA基因序列(FN549899.1)设计合成特异性引物;采用PCR技术以肺炎链球菌基因组DNA为模板扩增lytA基因序列;构建重组表达质粒pET32a(+)/lytA,经由IPTG诱导后通过等电点洗脱方法获取纯化的重组蛋白LytA;Western blot测定表达蛋白的抗体结合活性;以rLytA为抗原,建立ELISA反应模式,测定2013年3-6月36例临床诊断为CAP并经细菌学确定的患者血清标本中相应IgG和IgM抗体,评价对肺炎链球菌感染性肺炎的诊断价值。结果成功构建原核表达质粒pET32a(+)/lytA,表达的rLytA具有较好的抗体结合活性;CAP患者血清IgM和IgG类抗LytA的抗体滴度均高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),其诊断的敏感性均高于常规的痰培养和血培养(P<0.01)。结论以重组蛋白LytA为抗原建立ELISA反应模式可用于肺炎链球菌感染的血清学诊断,快速、客观,具有一定的应用价值。(本文来源于《中华医院感染学杂志》期刊2015年21期）
邹琴,杨光,罗红,宫晓红,孙文平[5]（2014）在《肺炎链球菌自溶素LytA小片段免疫活性的研究》一文中研究指出通过对肺炎链球菌(ATCC49619)自溶素lytA全序列基因的克隆和表达,获得部分小片段蛋白,初步研究其免疫活性。根据GenBank中肺炎链球菌M66菌株lytA基因序列(FN549899.1)设计合成特异性引物,采用PCR技术从肺炎链球菌(ATCC49619)基因组中扩增lytA全序列片段,构建克隆载体PGM-T/lytA,测序后与M66菌株比对显示,肺炎链球菌ATCC49619株碱基序列内存在新酶切位点BamHⅠ。以BamHⅠ、HindⅢ双酶切后,目的基因出现2个小片度,以约500 bp小片段构建重组表达载体pET32a(+)/lytA',经IPTG诱导后等电点洗脱法获取纯化的目的蛋白LytA'。将LytA'免疫小鼠,测定抗体效价,同时进行Western blot鉴定。测序显示肺炎链球菌ATCC49619菌株与M66菌株的lytA全基因序列同源性为98%,具有高度保守性,碱基不同主要位于下游部分,在444~450 bp之间新出现BamHⅠ酶切位点。构建的小片段重组表达质粒pET32a(+)/lytA'在BL21(DE3)中高效表达,获得纯化蛋白LytA',免疫BALB/c小鼠产生的抗体效价为132,经Western blot证实该蛋白具有较好的抗体结合活性,为进一步应用于疫苗及药物等相关研究奠定基础。(本文来源于《微生物学杂志》期刊2014年03期）
邹琴,罗红[6]（2014）在《肺炎链球菌自溶素LytA研究进展》一文中研究指出自溶素是一种内源性酶,广泛存在于细菌表面,参与细菌分裂、细胞黏附、细菌自溶以及细胞壁的更新等重要生理活动。本文对肺炎链球菌自溶素LytA结构、功能、调控及应用研究现状进行了综述。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2014年01期）
温玉兰,陈会,邓林强,胡锦辉,张国强[7]（2013）在《自溶素(lytA)基因限制性片段长度多态性用于肺炎链球菌鉴定的实验研究》一文中研究指出目的建立一种适用于临床的、操作简单的、高特异性的肺炎链球菌分子生物学鉴定技术。方法选取临床分离的肺炎链球菌102株及其他草绿色链球菌51株,分别采用OPT敏感试验、胆汁溶菌试验、商品化鉴定系统及自溶素基因片段长度多态性技术进行鉴定。结果 102株肺炎链球菌中101株OPT抑菌环直径≥14mm,其中17株介于14～19mm之间,1株为OPT耐药肺炎链球菌,抑菌环仅6mm;102株胆汁溶菌试验结果均为阳性;自动化鉴定系统鉴定准确率为93.1%。51株草绿色链球菌中19株OPT出现抑菌环,其中7株抑菌环≥14mm;胆汁溶菌试验均为阴性。自溶素(lytA)基因限制性片段长度多态性对102株肺炎链球菌鉴定准确率为100%,且能完全区分其它草绿色链球菌。结论自溶素基因限制性片段长度多态性技术对肺炎链球菌鉴定具有很高的特异性和敏感性,临床可作为传统鉴定的方法学补充。(本文来源于《中国医药指南》期刊2013年04期）
张红娟[8]（2012）在《单增李斯特菌在蜂产品中快速检测方法的建立及其自溶素基因lmo1521的功能鉴定》一文中研究指出单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，简称单增李斯特菌或LM）作为食源性致病菌广泛存在于我们生活的环境中，孕妇、老人和免疫力低下者食用被单增李斯特菌污染的食品，容易引起流产、胃肠炎、败血症等李斯特菌病。蜂产品作为我国出口和大众消费的重要食品之一，属于不需烹饪的即食食品，有被单增李斯特菌污染的潜在可能性。传统的国标方法耗时长，不能满足检测食品中单增李斯特菌的要求，而目前尚未见到蜂产品中LM的快速检测方法的报道，有必要建立一种快速检测蜂产品中单增李斯特菌的方法。自溶素是一类能够水解自身细胞壁的肽聚糖水解酶，少量纯化的自溶素即可达到良好的抗菌效果。单增李斯特菌中被识别的自溶素均具有GW锚定域和肽聚糖水解域，信息学数据表明位于单增李斯特菌EGD-e菌株中第1521基因，即lmo1521，在结构上与被识别的自溶素有明显的相似性，很可能属于一种新的自溶素基因。本研究以单增李斯特菌为研究材料，分别采用双重PCR和荧光定量PCR两种方法来达到快速检测蜂产品中单增李斯特菌的目的。另外通过原核表达来获得lmo1521融合蛋白，复性SDS-PAGE验证亲和纯化后的融合蛋白是否具有水解自身细胞壁的功能。其结果如下：1.单增李斯特菌在蜂蜜和蜂王浆中的生存采用培养和分子生物学的检测方法研究蜂产品中致病性单增李斯特菌的污染状况。将高浓度的病原菌人工污染到蜂蜜和蜂王浆中，室温存放一定时间后，在选择性培养基上增菌培养，单增李斯特菌能够在蜂蜜中存活数天，几乎不继续繁殖，而在蜂王浆中存活时间短、繁殖效力低。2.蜂产品中单增李斯特菌的快速检测技术以毒力基因hly和16sRNA基因为靶序列，建立双重PCR检测病原菌的方法；以5’、3’端标记FAM、TAMRA的hly基因探针进行荧光定量PCR检测。对未经增菌的人工污染蜂产品采用溶菌酶+蛋白酶K的方法提取DNA，同时采用本实验中建立的双重PCR和荧光定量PCR方法检测，蜂蜜和蜂王浆中单增李斯特菌检测灵敏度分别为102CFU/mL和103CFU/mL。3.自溶素基因lmo1521的原核表达及其功能鉴定利用高保真pfu酶从LM-CMC54002基因组中扩增得到了lmo1521基因并连到原核表达载体pET-22b中，重组质粒转化至原核表达菌株BL21（DE3）中进行表达，得到的带有6×His标签的lmo1521蛋白经Western blot技术鉴定为正确的表达产物。在30℃、IPTG的浓度为0.5mM的条件下，得到可溶性的融合表达蛋白。镍亲和柱纯化后得到的可溶性lmo1521蛋白，经过复性SDS-PAGE电泳验证其具有水解自身细胞壁的功能。(本文来源于《中国计量学院》期刊2012-09-01）
崔焕忠,张辉,范译文,康倩,钱爱东[9]（2012）在《单核细胞增生性李斯特菌自溶素研究进展》一文中研究指出自溶素是由细菌产生的可以降解细菌细胞壁的肽聚糖水解酶,参与细菌的分裂、细胞壁更新、细菌自溶等生理过程。自溶素也是细菌的重要毒力因子之一,参与细菌的黏附与侵袭,与细菌的致病性密切相关。本文对单核细胞增生性李斯特菌的胞壁水解酶p60、酰胺酶Ami、自溶素IspC、自溶素Auto与胞壁水解酶MurA等自溶素的蛋白结构、生理功能及致病性进行了简要介绍。(本文来源于《食品科学》期刊2012年11期）
江梦天[10]（2011）在《基于自溶素锚定的芽胞杆菌体内与体外活性展示系统的研究》一文中研究指出芽胞杆菌(Bacillus)细胞表面展示系统是一种具有热稳定性的、可用于多种外源蛋白展示的生物技术平台。苏云金芽胞杆菌(B. thuringiensis)在芽胞杆菌属是仅次于模式种枯草芽胞杆菌(B. subtilis)的重要细菌种。该菌突出的特征是在形成芽胞的同时,能产生具有杀虫活性的伴胞晶体,目前已发展成重要的的杀虫细菌,同时也在表面展示多功能活性系统的应用方而展现出良好的应用潜力,成为发展细菌表面展示系统的优良宿主菌而在国内外受到重视。本研究利用一种芽胞杆菌细胞壁锚定蛋白作为运载蛋白,发展了一种从体内连续性展示于苏云金芽胞杆菌营养细胞和芽胞、体外展示于多种芽胞杆菌的营养细胞和芽胞的多重活性展示系统,并分别以绿色荧光蛋白和一种细菌突变漆酶作为目标蛋白进行了展示活性分析。这一多重活性的细菌表面展示系统目前在国内外尚未见报道。苏云金芽胞杆菌m坛是从野生菌株YBT-1520基因组中分析推定的,编码一种具有较强的细胞壁锚定结合性能的自溶素。本研究首先利用RT-PCR技术测定了该蛋白编码基因mbg在野生菌株中经连续7天培养周期中的相对转录活性量,结果显示mbg基因转录在菌体培养至约80%芽胞裂解时达到最高的活性值。通过对Mbg蛋白结构的预测,推断其是一种N-乙酰氨基葡萄糖苷酶,其C端为催化结构域,N端是含有两个LysM的锚定结构域。为探索白溶素Mbg的N端结构域(Mbgn)作为表面展示体系中运载蛋白的活性,本研究通过将分别扩增得到的3个基因片段Pcry3Aa-mbgn-gfp连接到质粒载体pHT304上得到可在营养期起始表达融合蛋白Mbgn-GFP的重组质粒pMB164。经转化苏云金芽胞杆菌BMB171,筛选得到重组菌MB164。对重组菌MB164细胞的GFP特异荧光活性测定、免疫荧光显微镜观测和流式细胞仪分析测定结果表明,体内表达Mbgn-GFP融合蛋白不仅被高水平地锚定于营养细胞的表面,而且外源蛋白(GFP)是以其活性形式而展示于细胞表面。对重组菌MB164生长周期中各时期的GFP特异荧光活性进行了定时取样监测,结果表明在96h后(经显微镜观测,此时约70%芽胞被释放),MB164的总荧光活性发生约33%的增加,而对照的MB165总荧光活性值发生约34%的减少,说明由Mbgn锚定的GFP可被展示于芽胞的表面。为了进一步验证和分析,构建融合蛋白的表达纯化载体pMB313,融合基因mbgn-gfp连接到pET22b(+)载体上。用纯化的融合蛋白Mbgn-GFP对细胞和芽胞进行体外的锚定实验,苏云金芽胞杆菌的营养体细胞荧光强度位能达到180,而其芽胞和枯草芽胞杆菌的营养体、芽胞都能达到140,并且这种体外锚定性能还在其它种类的革兰氏阳性菌中实现,证明了Mbgn锚定功能的广泛性。随后,用漆酶蛋白WlacD作为功能蛋白替代报告蛋白GFP构建了Mbgn-WlacD表面展示体系重组质粒命名为pMB316,转化苏云金芽胞杆菌得到重组菌MB316。对重组菌细胞的漆酶活性进行测定,MB316营养体酶活性可达10.56 U/ml远高于对照菌株BMB171(1.148 U/ml),芽胞(4.648 U/ml)也具有一定活性。随后免疫荧光显微镜观测和流式细胞仪分析测定(Cy5荧光效率为33.43%)结果表明,体内表达Mbgn-WlacD融合蛋白不仅被高水平地锚定于营养细胞的表面,而且WlacD以其活性形式而展示于细胞表面同样使用纯化的融合蛋白对细胞和芽胞进行体外锚定,构建Mbgn-WlacD融合蛋白纯化载体,融合基因mbgn-wlacD连接至pTrcHisC,命名为pMB317。经Mbgn-WlacD纯化蛋白孵育的苏云金芽胞杆菌营养体酶活为2.74 U/ml(未孵育的仅为1.15 U/ml)、芽胞酶活性为1.86 U/ml(未孵育的为0.744 U/ml),枯草芽胞杆菌的营养体(2.22 U/ml)和芽胞(1.72 U/ml)表面也检测到漆酶活性,再次证实了Mbgn作为运载蛋白具有的锚定功能的广泛性。(本文来源于《华中农业大学》期刊2011-06-01）
自溶素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的研究肺炎链球菌的lytA基因在菌落生长的不同时间点的表达差异。方法根据GenBank中肺炎链球菌M66株的lytA基因序列(FN 549899.1)设计合成引物,以提取的17个生长时间点的肺炎链球菌的总RNA为模板,采用实时荧光定量PCR技术(QRT-PCR)分析lytA基因在不同生长时间点的基因表达量。实时荧光定量RT-PCR扩增反应结束后,利用溶解曲线对扩增反应进行特异性分析,采用双标准曲线法进行数据分析。结果经过内参基因16S RNA校正后,lytA基因表达量从18h到96h呈现逐渐升高的趋势,96h后开始下降,144h时出现第二次升高趋势。lytA基因在108h时的表达量最低,96h时的表达量最高,与其他时间点差异显着(P<0.05)。结论不同生长时间点的肺炎链球菌lytA基因表达量存在差异,这为进一步lytA基因与肺炎链球菌自溶的相关性研究奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
自溶素论文参考文献
[1].邵致远,游雪甫,杨信怡.肺炎链球菌自溶素研究进展[J].中国医药生物技术.2019
[2].谢兴凤.肺炎链球菌不同生长时间自溶素lytA基因表达的实时定量PCR分析[C].第七届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编.2016
[3].李琼.肺炎链球菌自溶素LytA的结构和功能研究[D].中国科学技术大学.2015
[4].邹琴,孙文平,杨光,周杰,罗红.肺炎链球菌自溶素对感染性肺炎的诊断价值[J].中华医院感染学杂志.2015
[5].邹琴,杨光,罗红,宫晓红,孙文平.肺炎链球菌自溶素LytA小片段免疫活性的研究[J].微生物学杂志.2014
[6].邹琴,罗红.肺炎链球菌自溶素LytA研究进展[J].中国病原生物学杂志.2014
[7].温玉兰,陈会,邓林强,胡锦辉,张国强.自溶素(lytA)基因限制性片段长度多态性用于肺炎链球菌鉴定的实验研究[J].中国医药指南.2013
[8].张红娟.单增李斯特菌在蜂产品中快速检测方法的建立及其自溶素基因lmo1521的功能鉴定[D].中国计量学院.2012
[9].崔焕忠,张辉,范译文,康倩,钱爱东.单核细胞增生性李斯特菌自溶素研究进展[J].食品科学.2012
[10].江梦天.基于自溶素锚定的芽胞杆菌体内与体外活性展示系统的研究[D].华中农业大学.2011