导读:本文包含了圆锥铁线莲论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:圆锥铁线莲,HUVB+D,代谢组学,茉莉酸
圆锥铁线莲论文文献综述
陈梦[1]（2018）在《紫外诱导圆锥铁线莲次生代谢扰动的调控机制研究及香豆素合成酶PPO的克隆与表达》一文中研究指出中药和天然药物有效成分含量偏低是限制中医药发展的关键因素。近年来,通过改良道地药材品质、改善药材种植环境等优化措施,中药材品质逐年提升。我们研究组运用紫外诱导技术,能显着提高药用植物中有效成分的含量,为提高药材品质提供了新的方法。植物响应紫外诱导的方式,主要体现为吸收紫外光次生代谢物的形成和积累。这些次生代谢产物多数为中药有效成分,包括黄酮、香豆素、蒽醌、萜类、生物碱等。圆锥铁线莲是浙北地区抗肿瘤和治疗慢性前列腺炎的常用中药,疗效肯定,但有效成分含量偏低,严重影响了圆锥铁线莲的推广和开发应用。前期我们对圆锥铁线莲响应紫外诱导以及暗培养(HUVB + D)代谢扰动进行了深入研究,发现在双重胁迫下圆锥铁线莲的生理状态及一系列次生代谢产物发生了显着变化和积累。有效成分含量显着增加,分析证明香豆素类化合物是扰动的次生代谢物中主要成分,主要包括 10-demethyl-luvangeti、4,6,7-trimethoxy-5-methyl-2H-chromen-2-one 和 luvangetin。研究组进一步通过相关实验证 明了多酚氧化酶(polyphenoloxidase,PPO)是香豆素基本结构七叶亭生物合成的关键酶,主要催化咖啡酸侧链的内酯化而形成七叶亭。本文在上述研究基础上进一步对圆锥铁线莲HUVB + D下次生代谢物扰动的调控机制进行了研究,并对香豆素生物合成途径的关键酶PPO进行了克隆和表达分析。本课题的主要研究内容和结果如下:(1)紫外诱导圆锥铁线莲次生代谢扰动的调控机制研究本文主要以代谢组学技术,并结合qRT-PCR、激素含量测定、生理指标以及酶活检测等技术手段,对HUVB + D胁迫下圆锥铁线莲中次生代谢扰动的调控机制进行研究。qRT-PCR 显示在 HUVB +D 下 UVR8(UV resistance locus 8)初始信号通路被激活。激素水平以及其生物合成途径中关键基因的表达量和中间产物含量测定显示茉莉酸(JA)和水杨酸(SA)信号通路亦被激活。基于GC-MS的代谢组学分析显示,HUVB + D胁迫处理后氨基酸代谢、碳水化合物代谢、有机酸代谢以及脂质代谢均有所增强。通过对照组(CG)、JA富集组(JG)、JA抑制组(IG)中差异变化代谢物聚类以及KEGG代谢通路分析,显示HUVB+ D胁迫后JG中咖啡酸和二氢香豆素类次生代谢物的含量大于CG和IG,而JG中脯氨酸的含量小于CG和IG;谷氨酸脱氢酶酶活检测结果显示JA可以增加氮源到碳源的转化率。上述结果表明,圆锥铁线莲在HUVB + D下UVR8初始信号通路被激活,并进一步激活了 JA和SA信号通路;JA和SA通过调节碳氮转化分别增加次生代谢物和脯氨酸的含量来降低HUVB + D胁迫下活性氧的水平,从而起到协调保护作用,增强了植物的胁迫耐受性。(2)圆锥铁线莲多酚氧化酶的克隆和表达通过分析圆锥铁线莲中多酚氧化酶转录组数据和RACE得到的序列片段,结合本研究中genomewalking技术,得到了总长度为1975bp的多酚氧化酶的碱基序列,其中包含长度为590个氨基酸的完整ORF区。对该序列所编码的蛋白进行理化性质预测以及系统进化树分析,预测圆锥铁线莲PPO分子量为66.32 kD、是位于叶绿体中不稳定的亲水性蛋白,且与荷花PPO亲缘关系最近。通过构建pET-28a(+)-CtPPO重组蛋白并在大肠杆菌BL21中经IPTG法诱导表达得到目的蛋白。SDS-PAGE检测分析确认在28℃、180rpm、0.8 mM的IPTG诱导表达6h条件下目的蛋白的表达量最高,并且在上清和沉淀中均有表达,且较多部分以包涵体形式存在。通过诱导条件优化,发现在16℃、180 rpm、0.8 mM的IPTG诱导可溶性蛋白表达量比例显着增高。对表达的重组蛋白上清进行Ni柱纯化,获得了较高纯度的CtPPO蛋白。通过以上研究基本阐明了圆锥铁线莲响应HUVB+D胁迫次生代谢扰动的信号转导和调控机制;并对香豆素七叶亭合成的关键酶PPO进行了克隆和原核表达。该研究丰富了植物次生代谢产物响应逆境作用机制的内容,为药用植物有效成分生物合成提供了新的思路,促进了中药资源的合理运用。(本文来源于《浙江大学》期刊2018-01-01）
高翠霞[2]（2016）在《紫外诱导圆锥铁线莲中吲哚生物碱合成机理研究及CtIPT的克隆与原核表达分析》一文中研究指出中国是药用植物资源最丰富的国家之一,而药用植物在人类疾病预防和治疗中占有重要地位。UV-B对药用植物的生长发育和次生代谢影响很大,但是,不同药用植物对UV-B的具体响应情况有所不同,许多机理有待进一步发现。吲哚生物碱是药用植物中非常具有研究价值的一类次生代谢产物,在UV-B逆境下含量增加,不仅能够增强植物自我保护能力以抵御逆境胁迫,还具有细胞毒性、抗癌、抗病毒、抗疟和抗炎等功效,能够直接增加植物的药用价值。细胞分裂素是由腺苷酸异戊烯基转移酶合成的一类植物激素,在UV-B逆境下含量减少,不仅能够调控药用植物生长发育使其形态学发生改变而处于抵御逆境胁迫的状态,还可能与UVR8信号通路中的某些调控因子相关,参与调控植物次生代谢产物的合成(如吲哚生物碱、香豆素、黄酮等),能够间接增加植物的药用价值。圆锥铁线莲属于毛茛科,具有非常高的药用价值。实验室前期从圆锥铁线莲中分离出了吲哚生物碱(6-hydroxyl-1H-indol-3-yl)carboxylic acid methyl ester,本课题在该研究成果的基础上进行了更深入的研究,主要研究内容和结果如下:(1)圆锥铁线莲中吲哚生物碱响应UV-B诱导的合成机理HPLC-TOF-MS/MS分析显示圆锥铁线莲经过UV-B诱导后其吲哚生物碱(6-hydroxyl-1H-indol-3-yl)carboxylic acid methyl ester 含量增加,表明圆锥铁线莲在UV-B诱导下体内吲哚生物碱合成途径呈增强状态。基于2-DE和GC-TOF-MS技术的蛋白质组学和代谢组学研究揭示了圆锥铁线莲经UV-B诱导后吲哚生物碱的合成机理,即与氨基酸代谢相关的蛋白和化合物含量显着增加,表明氨基酸代谢被激活。通过对丝氨酸脱氨酶进行酶活检测,结果显示该酶活经过UV-B诱导后显着增强,表明氨基酸代谢过程被UV-B辐射激活能够促进下游莽草酸代谢途径的增强。基于qRT-PCR技术的转录组学研究分析了圆锥铁线莲经UV-B诱导后吲哚生物碱合成途径上关键基因的变化情况,结果显示从莽草酸到色氨酸代谢过程中的8个关键基因的表达表现出上调共性;通过HPLC-TOF-MS/MS代谢组检测圆锥铁线莲经UV-B诱导后吲哚生物碱合成途径上关键化合物的变化情况,结果显示邻氨基苯甲酸盐、吲哚和色氨酸的含量都增加;通过对色氨酸合成酶进行酶活检测,结果显示该酶活经过UV-B诱导后显着增强,上述结果均表明增强了的莽草酸代谢途径能够促进吲哚生物合成途径的增强,最终为吲哚生物碱的合成奠定了基础。(2)圆锥铁线莲中腺苷酸异戊烯基转移酶的克隆与原核表达借助转录组测序,我们获得了圆锥铁线莲叶片中腺苷酸异戊烯基转移酶的EST片段,之后利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNAends,RACE),得到了长度为1374 bp的碱基序列,其中包括长度为332 aa的完整ORF区。接着对该序列编码的蛋白CtIPT进行理化性质预测、序列比对和系统进化树分析,结果显示该蛋白是一个分子量为37.2 kDa的亲水性蛋白,存在腺苷酸异戊烯基转移酶特征序列区域(ATP/GTP结合序列区域),且与番茄中的S1IPT3/4和拟南芥中的AtIPT3/5/7非常相似,表明该蛋白为腺苷酸异戊烯基转移酶。然后通过qRT-PCR检测UV-B诱导对CtIPT表达的影响,结果显示具有显着性抑制作用,表明CtIPT可能具有抵御紫外逆境胁迫的功能。再分别以pET-28a(+)、pGEX-4T-1和pMAL-c2X质粒为表达载体对CtIPT进行克隆,并在大肠杆菌BL21中进行原核表达,SDS-PAGE结果显示在16℃,180rpm,0.5mM IPTG诱导表达6 h的条件下均可以成功表达出目的蛋白,但是只有在BL21-pMAL-c2X-CtIPT(含MBP标签)中实现了可溶性表达。最后通过Amylose resin亲和层析柱进行分离纯化,得到了目的蛋白腺苷酸异戊烯基转移酶。(本文来源于《浙江大学》期刊2016-12-01）
杨丙贤[3]（2016）在《圆锥铁线莲叶片响应紫外诱导机制及香豆素生物合成途径的系统性研究》一文中研究指出药用植物体内的次生代谢产物通常是中药材发挥临床疗效的物质基础,也是评价药材质量的重要指标。植物药材中的大量天然活性成分是在逆境条件下产生和积累的。近年来,关于环境影响药材品质形成机制成为研究热点,目前大多数研究处于描述环境因子对药效成分积累的影响阶段,而阐明药材质量形成的机制报道较少。研究发现通过调节UV-B辐射剂量能显着提高药用植物中活性成分的含量,而UV-B影响药用植物代谢途径的机制,包括对基因调控和关键酶表达等,仅见黄酮类等少数成分的研究。我们从系统生物学的角度出发,分别应用代谢组学、转录组学和蛋白质组学技术,对圆锥铁线莲叶片应用高强度UV-B诱导和黑暗培养的响应机制进行了研究。结合qRT-PCR和酶学活性实验等技术阐明了次生代谢物香豆素生物合成的关键酶和关键底物,并推测出复杂香豆素的生物合成途径。本研究从整体上揭示了逆境条件下圆锥铁线莲叶片内各化学组分间的相互关系,阐明了药用植物次生代谢特异性响应的分子机制。本论文的主要研究内容和结果如下:(1)我们利用NMR,UPLC TOF-MS/MS和GC TOF-MS等技术对诱导前后圆锥铁线莲叶片的代谢物进行了定性定量分析。分析发现在高强度UV-B诱导后,主要为5个次生代谢物显着积累,而2个次生代谢物的含量显着减少,表明高强度UV-B诱导处理对圆锥铁线莲的影响主要体现在初生代谢水平上。而在高强度UV-B诱导后的黑暗培养阶段,有38个次生代谢物含量发生了显着的变化,其中有19个次生代谢物为响应胁迫处理特异合性成。这些代谢物主要属于脂肪酸类,内酯类,多酚类,苯甲酸类,香豆素类以及芪类。圆锥铁线莲叶片在高强度UV-B诱导后的黑暗培养阶段比高强度UV-B诱导阶段积累了更多的次生代谢物,同时在黑暗培养阶段次生代谢物的含量也显着增加,显示黑暗培养导致圆锥铁线莲叶片内发生了更加剧烈的扰动。(2)转录组学改变了单个基因分析的研究模式,它将基因组学研究带入高速发展的时代。我们应用差异转录组学技术对高强度UV-B诱导前后的圆锥铁线莲叶片进行了研究。通过Denovo拼接,我们得到了 103091条Unigene,其中长度在500 bp(含500 bp)以上的有29875条。我们对高强度UV-B诱导前后以及黑暗培养后的转录组表达谱进行了分析,结果显示次生代谢途径相关的Unigene数量在诱导及避光培养阶段依次上升。我们针对转录本表达谱中所涉及的次生代谢信息进行了深入研究。根据KEGG注释结果,最终分析发现包含Unigene最多的次生代谢途径为苯丙烷类,二苯乙烯类,黄酮和黄酮醇,莨菪烷类和异喹啉生物碱类。其中在苯丙烷代谢途径中,有54.4%的unigene在高强度UV-B诱导阶段上调表达,而在高强度UV-B诱导后的黑暗培养阶段有58.3%的unigene发生了上调表达,表明苯丙烷类代谢途径积极响应了高强度UV-B诱导和随后的黑暗培养胁迫。(3)为从整体上分析圆锥铁线莲叶片在高强度UV-B辐射和黑暗胁迫的代谢响应机制,我们对转录组、蛋白质组和代谢组数据进行了整合分析,以系统生物学的方法在代谢水平,转录组水平和蛋白质水平同时分析代谢网络的扰动情况,以期能够深入挖掘圆锥铁线莲叶片对高强度UV-B诱导及黑暗培养的响应机制。通过整合代谢组学和蛋白质组学数据,结果发现氨基酸代谢相关的代谢物的含量和蛋白质丰度在响应高强度UV-B诱导和黑暗培养阶段显着增加。聚类分析和KEGG代谢通路分析发现S-腺苷甲硫氨酸合成酶和半胱氨酸合酶的含量在逆境过程中是逐渐增加的,这些结果与验证实验结果说明高强度UV-B辐射显着提高了圆锥铁线莲叶片的抗氧化能力。同时,二氢硫辛酸脱氢酶,谷氨酸脱氢酶和γ-氨基丁酸的含量显着升高,表明高强度UV-B辐射增强了圆锥铁线莲叶片的活性氧清除能力,同时启动了 Y-氨基丁酸分流途径。通过对转录组和蛋白质组数据进行整合分析,发现转录后修饰,泛素蛋白酶体和核糖体蛋白等蛋白代谢相关的蛋白质和基因发生了显着变化。高强度UV-B辐射后,NADP依赖的苹果酸酶基因显着性上调表达,NADP-苹果酸脱氢酶蛋白含量明显增加,同时酶活性检测实验证明这两个酶的活性也显着增强。这些结果证明圆锥铁线莲叶片逆境耐受性因叁羧酸循环途径的激活而显着增强。(4)NMR和UPLC TOF-MS/MS的分析结果表明,高强度UV-B诱导使圆锥铁线莲产生一系列的香豆素类化合物,包括线型吡喃香豆素和结构比较独特的简单香豆素。应用qRT-PCR,酶学活性实验,结合NMR和LC-MSMS等技术,最终确定了香豆素合成的关键酶及关键底物,并合理推测出了复杂香豆素的合成途径。(5)对叶绿体基因组的深入研究有助于理解细胞核基因组与叶绿体基因组之间的相互调节关系,从而在分子水平上揭示次生代谢合成途径激活的生物机制。我们利用二代高通量测序平台对圆锥铁线莲叶绿体基因组进行了大规模测序分析。结果显示圆锥铁线莲叶绿体基因组全长159,528 bp,呈典型的四段式结构,其中LSC区长79,327bp,SSC区长18,111 bp,两个反向重复区长31,045 bp。圆锥铁线莲叶绿体基因组共有137个具有编码能力的功能基因。在已测序的毛茛科物种中,圆锥铁线莲叶绿体基因组的SSC区是最小的。对五种毛茛科的叶绿体基因组序列进行的比较分析发现圆锥铁线莲叶绿体基因组编码区的序列比非编码区更加保守。分析还发现圆锥铁线莲叶绿体基因组在LSC区存在叁个倒置区域,同时圆锥铁线莲和十大功劳的JLB和JLA处有较大的扩张。(本文来源于《浙江大学》期刊2016-07-01）
屠凌岚,郑晓亮,程丽艳,颜冬梅,郑高利[4]（2014）在《圆锥铁线莲对慢性非细菌性前列腺炎的治疗作用及机制研究》一文中研究指出本文研究圆锥铁线莲水提取物对实验性慢性非细菌性前列腺炎的治疗作用,并对其抗炎的作用机制进行初步探讨。采用苯甲酸雌二醇致去势大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型,研究圆锥铁线莲对慢性非细菌性前列腺炎的治疗作用。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,Western Blot和免疫组化法检测前列腺组织环氧酶2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的变化,探讨圆锥铁线莲发挥抗炎作用的可能机制。研究发现苯甲酸雌二醇致去势大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型中,圆锥铁线莲2 g/kg组可见前列腺液中白细胞数明显降低,卵磷脂小体数量明显增加;病理切片可见炎症细胞浸润和成纤维细胞增生的情况有所改善。圆锥铁线莲能明显降低苯甲酸雌二醇致去势大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型血清中IL-1β及TNF-α的含量,减少前列腺组织中COX-2和i NOS的表达。表明圆锥铁线莲水提取物对慢性非细菌性前列腺炎具有良好的抑制作用,其作用机制可能是通过调节炎症细胞因子水平、抑制COX-2以及i NOS的表达,从而避免局部产生过量的前列腺素(PG)和一氧化氮(NO),减轻局部炎性损伤实现的。(本文来源于《天然产物研究与开发》期刊2014年11期）
严靖[5]（2013）在《圆锥铁线莲的繁殖生物学研究》一文中研究指出本实验以南京老山林场内圆锥铁线莲(Clematis terniflora)居群为对象，研究了居群的开花与传粉生物学，确定了圆锥铁线莲的繁育系统，探讨了圆锥铁线莲种子的发芽特性及扦插生根的最优条件，对其繁殖生物学特性进行了初步的系统探索。主要结论如下：1.圆锥铁线莲开花物候期及繁育系统圆锥铁线莲为圆锥状聚伞花序，居群的花期为5月下旬~6月下旬，于6月8日进入盛花期，花期持续25天。通过花粉-胚珠比（P/O比）统计、授粉实验和杂交指数（OCI）统计叁种测定方法确定其繁育系统，结果表明圆锥铁线莲的繁育系统为以异交为主的混合交配系统，具有一定的自交潜力。P/O比并不适合作为确定圆锥铁线莲繁育系统的指示参数，而OCI值则能够较好的反应圆锥铁线莲的繁育系统。2.圆锥铁线莲的开花动态与传粉媒介圆锥铁线莲单花的开花动态可分为花蕾期、雌性期、两性期、雄性期和凋落期。圆锥铁线莲在个体水平上表现为异步雌蕊先熟，减少了雌雄功能间的干扰。在其整个散粉期内，花粉的生活力均较高，散粉盛期达93.25%，柱头可授期为6d左右。圆锥铁线莲以风媒传粉为主，昆虫在传粉过程中所起的作用尚需进一步研究。3.圆锥铁线莲种子的生物学特性圆锥铁线莲果实为瘦果，种子卵形，横径0.26±0.16cm，纵径0.41±0.19cm，千粒重9.89±0.44g，TTC法测得其生活力为67.8%。圆锥铁线莲种子的发芽率较低，研究表明湿沙层积、20mg/L6-BA处理和常温的组合为种子发芽的最佳条件组合，发芽率为53.33%，其中层积的温度对其发芽率影响最为显着，湿沙层积能显着提前其萌发时间。电导率法测得的结果与种子发芽率之间存在较高的线性相关，故电导法可快速测定圆锥铁线莲种子的活力。种子层积过程中可溶性糖、淀粉、蛋白质及粗脂肪的含量均呈下降的趋势，为其萌发提供养料。4.圆锥铁线莲的扦插繁殖技术对圆锥铁线莲进行了扦插繁殖研究，以半木质化茎段为插穗，在不同处理下观察其生根效果，结果表明6-BA较NAA能更好的促进插穗生根，50mg/L的6-BA处理最适于圆锥铁线莲的扦插生根，生根率达71.11%，说明低浓度的激素对圆锥铁线莲的扦插生根有促进作用。(本文来源于《南京林业大学》期刊2013-06-01）
刘小保,荣语媚,徐燕,李如意,张琳[6]（2012）在《圆锥铁线莲醇提物治疗大鼠非细菌性前列腺炎的实验研究》一文中研究指出目的评价圆锥铁线莲醇提物对实验性大鼠急、慢性非细菌性前列腺炎的药效。方法分别采用前列腺腹叶注入角叉菜胶溶液和侧叶注入消痔灵注射液,建立大鼠急、慢性非细菌性前列腺炎模型,并以前列腺液中白细胞总数和卵磷脂小体密度,前列腺指数,前列腺组织病理变化作为圆锥铁线莲醇提物的药效评价指标。结果圆锥铁线莲醇提物呈剂量依赖性的升高治疗组前列腺液中卵磷脂小体密度,降低前列腺指数和前列腺液中白细胞数,同时减轻病理切片中前列腺组织炎症细胞浸润与损伤程度。结论圆锥铁线莲对大鼠急、慢性非细菌性前列腺炎均有较好疗效。(本文来源于《中国现代应用药学》期刊2012年05期）
陈润泽,崔磊,郭彦娟,孙铭遥,宁伟[7]（2011）在《紫外诱导对圆锥铁线莲次生代谢的影响及其差异蛋白质组学研究(英文)》一文中研究指出Phytochemical studies have been carded out to reveal the effects of UV radiation on leaves of Clematis terniflora DC..Three compounds including one simple coumarin with three methoxyls and two pyrancoumarins were prominently induced by UV-B radiation and could not be detected in control and UV-A treatment groups.Harmful effects of UV-B radiation were found on the surface of leaves.The method of comparative proteomic research has been used to study the different expression levels of proteins under high intensity(120.8μw/cm2)UV-A and UV-B radiation.(本文来源于《第十届全国药用植物及植物药学术研讨会论文摘要集》期刊2011-08-10）
陈润泽[8]（2011）在《紫外诱导对圆锥铁线莲次生代谢的影响及其差异蛋白质组学研究》一文中研究指出紫外光根据波长范围可分为叁种：UV-A(320-400 nm)、UV-B(290-320nm)和UV-C(200-290 nm),作为一种非生物胁迫因子对地球生物产生了显着的影响,紫外光主要通过影响生物体的DNA、蛋白质合成以及各种信号传导途径而使生物体的生理代谢以及外部形态发生明显变化。地球表面的植被是保持地球生物循环以及生物圈完整性的重要组成部分,植物体表面大多分布有蜡质层、角质层、纤毛以及其它类型的坚硬组织,同时植物体在感受环境胁迫时会调整自身生理及代谢来抵御外界不良因素的影响,因此植物体对于紫外光胁迫的适应能力超过动物及微生物。紫外光能够对植物体产生多方面的影响,如使植株变矮、影响光合作用、影响蛋白质合成等,此外,植物体本身可以产生大量的次生代谢物质来抵御紫外光的损害,这些次生代谢产物多为苯丙素类化合物、生物碱、萜类化合物等,有些次生代谢产物是中药和天然药物活性成分,对于疾病的防治具有重要意义。蛋白质组学是对生物体或生物体的某种器官、组织、细胞以及相关基因所表达的所有蛋白质进行研究,它涉及到蛋白质的表达、蛋白质的氨基酸序列、蛋白质的结构功能、翻译后修饰以及蛋白质之间的相互作用等内容,是生命科学中与基因组学密切相关的重要研究领域之一。蛋白质在生物体结构组成、生物体的生长、发育、繁殖、代谢等各个环节都发挥着极其重要的作用,也是引起生物多样性的重要因素。随着基因组学的不断发展以及人们对基因组研究的不断深入,科研工作者发现对于生物体内直接行使功能的蛋白及酶的研究将成为继基因组之后的重要的研究领域。圆锥铁线莲系毛茛科铁线莲属植物,其地上部分在浙江北部地区被广泛用于治疗呼吸系统、泌尿系统炎症以及肿瘤,其含有的主要天然活性成分(次生代谢产物)为黄酮及木脂素类化合物。本课题对离体的圆锥铁线莲叶片进行不同时间以及不同波长范围的紫外光诱导,通过诱导前后指纹图谱的对比,发现紫外光对圆锥铁线莲次生代谢产物有显着的影响,并对诱导后发生变化的次生代谢产物进行分离纯化以及结构鉴定。通过我们的研究发现,UV-A对圆锥铁线莲新鲜叶片次生代谢的影响并不明显,而在120.83微瓦/平方厘米强度的UV-B下诱导一定时间后,指纹图谱中出现了叁个新的色谱峰,以色谱峰的峰面积为指标进行诱导条件的筛选,发现随着UV-B诱导时间的不断延长,叁个色谱峰的峰面积有不断增加的趋势,并确定最佳的诱导时间为4-6小时。对圆锥铁线莲新鲜叶片进行大量诱导后烘干,对叁个新峰进行追踪分离,采用UV、IR、NMR以及MS对分离得到的叁个化合物进行结构鉴定,最终发现UV-B能够诱导圆锥铁线莲产生香豆素类化合物,它们分别是2H,8H-Benzo[1,2-b:5,4-b']dipyran-2-one,10-hydroxy-8,8-dimethyl-(9CI)、4,6,7-叁甲氧基-5-甲基香豆素和鲁望橘内酯。为了揭示紫外光诱导圆锥铁线莲产生香豆素类化合物生物合成的机理,本课题采用双向电泳的方法对诱导前后叶片的差异蛋白进行了研究,通过Image Master5.0软件处理,得到七十叁个差异点,通过MALDI-TOF-MS分析对差异蛋白进行鉴定。综合上述内容,本课题研究的创新之处在于：①通过对照指纹图谱发现了不同波段紫外光对圆锥铁线莲次生代谢的影响,并对诱导后新产生的色谱峰(次生代谢产物)进行了分离纯化和结构鉴定；发现UV-B诱导能够使圆锥铁线莲叶片中产生一系列香豆素类化合物,不仅有简单香豆素,还包括线型吡喃香豆素；②发现UV-B对圆锥铁线莲的影响在诱导八小时之内随着诱导时间的不断延长而变得更加明显；③采用双向电泳技术对圆锥铁线莲紫外诱导前后的差异蛋白质组学进行了研究,最终得到七十叁个差异蛋白点,并对差异蛋白进行了质谱鉴定,从蛋白质水平揭示了紫外光对圆锥铁线莲的影响。(本文来源于《浙江大学》期刊2011-01-01）
孙凤,张琳,田景奎,程翼宇,肖培根[9]（2007）在《圆锥铁线莲化学成分的研究》一文中研究指出目的对圆锥铁线莲全草的乙醇提取物进行分离和结构鉴定。方法通过硅胶和凝胶柱色谱分离;利用多种波谱技术并结合酸水解方法鉴定其化学结构。结果分离鉴定了7个化合物,分别为正二十叁醇(Ⅰ)、正二十七烷酸(Ⅱ)、3,5,7,3′-四羟基黄酮(Ⅲ)、5,7,3′,5′-四羟基二氢黄酮(Ⅳ)、芹菜素(Ⅴ)、木犀草素(Ⅵ)和豆甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅶ)。结论化合物Ⅰ~Ⅳ为首次从铁线莲属中分离得到。(本文来源于《中国药学杂志》期刊2007年02期）
圆锥铁线莲论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
中国是药用植物资源最丰富的国家之一,而药用植物在人类疾病预防和治疗中占有重要地位。UV-B对药用植物的生长发育和次生代谢影响很大,但是,不同药用植物对UV-B的具体响应情况有所不同,许多机理有待进一步发现。吲哚生物碱是药用植物中非常具有研究价值的一类次生代谢产物,在UV-B逆境下含量增加,不仅能够增强植物自我保护能力以抵御逆境胁迫,还具有细胞毒性、抗癌、抗病毒、抗疟和抗炎等功效,能够直接增加植物的药用价值。细胞分裂素是由腺苷酸异戊烯基转移酶合成的一类植物激素,在UV-B逆境下含量减少,不仅能够调控药用植物生长发育使其形态学发生改变而处于抵御逆境胁迫的状态,还可能与UVR8信号通路中的某些调控因子相关,参与调控植物次生代谢产物的合成(如吲哚生物碱、香豆素、黄酮等),能够间接增加植物的药用价值。圆锥铁线莲属于毛茛科,具有非常高的药用价值。实验室前期从圆锥铁线莲中分离出了吲哚生物碱(6-hydroxyl-1H-indol-3-yl)carboxylic acid methyl ester,本课题在该研究成果的基础上进行了更深入的研究,主要研究内容和结果如下:(1)圆锥铁线莲中吲哚生物碱响应UV-B诱导的合成机理HPLC-TOF-MS/MS分析显示圆锥铁线莲经过UV-B诱导后其吲哚生物碱(6-hydroxyl-1H-indol-3-yl)carboxylic acid methyl ester 含量增加,表明圆锥铁线莲在UV-B诱导下体内吲哚生物碱合成途径呈增强状态。基于2-DE和GC-TOF-MS技术的蛋白质组学和代谢组学研究揭示了圆锥铁线莲经UV-B诱导后吲哚生物碱的合成机理,即与氨基酸代谢相关的蛋白和化合物含量显着增加,表明氨基酸代谢被激活。通过对丝氨酸脱氨酶进行酶活检测,结果显示该酶活经过UV-B诱导后显着增强,表明氨基酸代谢过程被UV-B辐射激活能够促进下游莽草酸代谢途径的增强。基于qRT-PCR技术的转录组学研究分析了圆锥铁线莲经UV-B诱导后吲哚生物碱合成途径上关键基因的变化情况,结果显示从莽草酸到色氨酸代谢过程中的8个关键基因的表达表现出上调共性;通过HPLC-TOF-MS/MS代谢组检测圆锥铁线莲经UV-B诱导后吲哚生物碱合成途径上关键化合物的变化情况,结果显示邻氨基苯甲酸盐、吲哚和色氨酸的含量都增加;通过对色氨酸合成酶进行酶活检测,结果显示该酶活经过UV-B诱导后显着增强,上述结果均表明增强了的莽草酸代谢途径能够促进吲哚生物合成途径的增强,最终为吲哚生物碱的合成奠定了基础。(2)圆锥铁线莲中腺苷酸异戊烯基转移酶的克隆与原核表达借助转录组测序,我们获得了圆锥铁线莲叶片中腺苷酸异戊烯基转移酶的EST片段,之后利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNAends,RACE),得到了长度为1374 bp的碱基序列,其中包括长度为332 aa的完整ORF区。接着对该序列编码的蛋白CtIPT进行理化性质预测、序列比对和系统进化树分析,结果显示该蛋白是一个分子量为37.2 kDa的亲水性蛋白,存在腺苷酸异戊烯基转移酶特征序列区域(ATP/GTP结合序列区域),且与番茄中的S1IPT3/4和拟南芥中的AtIPT3/5/7非常相似,表明该蛋白为腺苷酸异戊烯基转移酶。然后通过qRT-PCR检测UV-B诱导对CtIPT表达的影响,结果显示具有显着性抑制作用,表明CtIPT可能具有抵御紫外逆境胁迫的功能。再分别以pET-28a(+)、pGEX-4T-1和pMAL-c2X质粒为表达载体对CtIPT进行克隆,并在大肠杆菌BL21中进行原核表达,SDS-PAGE结果显示在16℃,180rpm,0.5mM IPTG诱导表达6 h的条件下均可以成功表达出目的蛋白,但是只有在BL21-pMAL-c2X-CtIPT(含MBP标签)中实现了可溶性表达。最后通过Amylose resin亲和层析柱进行分离纯化,得到了目的蛋白腺苷酸异戊烯基转移酶。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
圆锥铁线莲论文参考文献
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