导读:本文包含了肾上腺素能受体激酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:肝细胞癌,肿瘤微环境,巨噬细胞,β2-AR
肾上腺素能受体激酶论文文献综述
吴婧婧[1]（2018）在《G蛋白偶联受体激酶2调控M2巨噬细胞β2肾上腺素受体信号在肝细胞癌中的作用》一文中研究指出原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)约占原发性肝癌的90%,是一种高度恶性肿瘤,全球肿瘤相关死因第二位。由于HCC的病因尚未完全明确,并且缺乏特效的药物与治疗手段,HCC患者复发率高,预后较差。因此,关于HCC的新治疗方法迫切需要。肿瘤微环境是指肿瘤发生发展过程中所处的局部生物环境,主要包括免疫细胞、新生血管细胞、肿瘤相关成纤维细胞以及一些细胞外基质等。巨噬细胞为单核细胞谱系的单核吞噬白细胞,根据功能不同分为两型,即M1和M2型巨噬细胞。肿瘤微环境中浸润的巨噬细胞称为肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAM),以M2型为主。研究表明,TAM与肿瘤进展相关。肝脏内分布大量的自主神经,包括交感神经和副交感神经。交感神经系统激活并释放去甲肾上腺素和肾上腺素,能够激活肿瘤细胞或宿主基质细胞的β肾上腺素能受体(β-adrenergic receptor,β-AR),促进多种实体肿瘤的生长和转移。β2-AR是β-AR的亚型,属于G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,GPCR),具有七个跨膜螺旋的共同特征。有文献研究表明,β2-AR在肝癌中过表达,激活β2-AR可促进肝癌进展。同时,β2-AR也在巨噬细胞表面分布,激活小鼠体内β2-AR可调控巨噬细胞表型,使其向M2型分化。然而,肝癌M2巨噬细胞中β2-AR的激活对肝癌的影响及其相关机制尚不清楚。G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)属于GRK家族,是体内一类重要的激酶,分布广泛。GRK2的主要作用是使激动剂结合的GPCR磷酸化和脱敏。本实验室前期研究表明,抑制GRK2的表达可明显促进肝癌细胞系HepG2生长。GRK2是否通过调控M2巨噬细胞中的β2-AR参与HCC进程,目前不清楚。本研究首先收集肝癌患者及肝内胆管结石患者石蜡标本,以及肝癌患者新鲜肝组织标本,通过研究肝癌患者石蜡切片中CD163和CD206的共表达及肝癌患者新鲜肝组织标本中CD163和CD206的表达,探讨M2巨噬细胞与HCC的相关性;通过研究肝癌患者石蜡切片中β2-AR和CD163及GRK2和CD163的共定位,探讨M2巨噬细胞中β2-AR和GRK2的表达与HCC的关系。其次,体外特异性激动M2巨噬细胞的β2-AR,将肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721和M2巨噬细胞上清共培养,检测肝癌细胞功能变化;进一步使用GRK2 siRNA转染M2巨噬细胞,检测干扰M2巨噬细胞GRK2表达对肝癌细胞的影响,以及M2巨噬细胞β2-AR下游信号通路的变化,分析GRK2调控M2巨噬细胞的β2-AR影响HCC的机制。目的:收集临床HCC患者肝癌石蜡切片及新鲜肝癌组织,观察M2巨噬细胞在肝癌中的表达,以及β2-AR、GRK2分别与M2巨噬细胞的共定位情况,并与患者临床特征进行分析。体外诱导M2巨噬细胞,特异性激动β2-AR,与两种肝癌细胞共培养,并进一步下调M2巨噬细胞GRK2的表达,明确M2巨噬细胞中GRK2调控β2-AR信号在肝癌中的作用及相关机制。方法:整体实验,收集行肝癌切除术的80例HCC患者,10例肝内胆管结石(对照)的组织石蜡标本,以及20例肝癌患者新鲜肝组织标本和其中6例相应的癌旁组织(对照),统计患者临床资料。根据美国癌症分期联合委员会(American Joint Committee on Cancer,AJCC)2010年制定的TNM(Tumor Node Metastasis)分期标准,分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期,其中Ⅰ+Ⅱ期患者共34人,Ⅲ+Ⅳ期患者共46人。通过免疫荧光双染法标记CD163、CD206(M2巨噬细胞标记物),通过Western blot法检测人肝癌新鲜组织中CD163和CD206的表达;通过免疫荧光双染法分别标记β2-AR和CD163以及GRK2和CD163,Image-Pro Plus计算β2-AR和GRK2分别与CD163的共表达情况,比较对照组、Ⅰ+Ⅱ期肝癌及Ⅲ+Ⅳ期肝癌共表达的变化。体外实验,选取人THP-1细胞系,诱导M2巨噬细胞,用免疫荧光双染法标记CD163、CD206进行鉴定。选用人肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721,收集经选择性β2-AR激动剂特布他林(terbutaline,Terb)刺激的M2巨噬细胞分泌的上清液,与肝癌细胞共培养。MTT、划痕和Transwell实验分别检测肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力;转染GRK2 siRNA后,收集经Terb刺激的M2巨噬细胞上清,与肝癌细胞共培养,再次用MTT、划痕和Transwell实验检测肝癌细胞功能变化。分别收集GRK2 siRNA染前后,经Terb刺激的M2巨噬细胞分泌的上清液,抗体蛋白芯片法检测各组中细胞因子的变化;Western blot和流式法检测GRK2 siRNA转染前后,Terb刺激不同时间点M2巨噬细胞膜上β2-AR表达的变化;ELISA试剂盒检测GRK2 siRNA转染前后,Terb刺激不同时间点M2巨噬细胞中cAMP表达的变化;Wsetern blot法检测GRK2 siRNA转染前后,M2巨噬细胞β2-AR下游信号通路分子PKA、CREB、p-CREB、STAT3、p-STAT3表达变化。结果:1.M2巨噬细胞在肝癌组织中的表达免疫荧光双染结果表明,Ⅰ+Ⅱ期肝癌患者肝组织切片CD163和CD206的共表达比对照组上升,在Ⅲ+Ⅳ期肝癌患者肝组织切片中进一步升高。同时,Western blot结果表明,Ⅰ+Ⅱ期肝癌患者新鲜肝组织中CD163和CD206的表达比对照组升高,在Ⅲ+Ⅳ期肝癌患者新鲜肝组织中进一步升高。2.β2-AR和CD163,GRK2和CD163的在肝癌组织切片中的共表达及与患者临床特征的关系免疫荧光双染结果表明,β2-AR和CD163的共表达在晚期肝癌患者中升高;而GRK2和CD163的共表达在晚期肝癌组中减少。SPSS 16.0软件分析共表达与患者临床特征关系的结果表明,β2-AR和CD163,GRK2和CD163的共表达均与性别、年龄、肿瘤包膜是否完整、是否有肝炎病毒感染无关。而β2-AR与CD163的共表达在肿块较大或有血管受侵的患者中升高,在有局部淋巴结转移的患者中未见明显变化;GRK2与CD163的共表达在肿块较大或有血管受侵、有局部淋巴结转移的患者中降低。3.M2巨噬细胞的诱导和鉴定人THP-1细胞经PMA(320 nmol/L,24 h)和IL-4(20 ng/mL,24 h)、IL-13(20ng/mL,24 h)诱导后,由圆形悬浮细胞变为类圆形或纺锤形贴壁细胞。免疫荧光双染结果表明,>90%的诱导后细胞均有CD163和CD206共表达。4.Terb对M2巨噬细胞吞噬功能的影响流式结果显示,M2巨噬细胞的吞噬功能比THP-1吞噬功能明显提升。经Terb刺激后,M2巨噬细胞吞噬功能下降,当Terb浓度达到10~-55 mol/L时,吞噬功能下降最为明显。故后续实验Terb浓度选为10~-55 mol/L。5.激动M2巨噬细胞的β2-AR促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭,下调GRK2表达进一步促进了肝癌细胞功能Terb激动M2巨噬细胞的β2-AR后,通过MTT、划痕实验和Transwell实验,分别将M2巨噬细胞上清与肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721共培养。结果表明,激动M2巨噬细胞的β2-AR,促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭。进一步将GRK2siRNA转染M2巨噬细胞,发现下调M2巨噬细胞的GRK2表达,进一步促进了共培养的肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。6.下调β2-AR激动的M2巨噬细胞中GRK2,增加其培养上清中促肿瘤因子的分泌为了进一步探讨下调M2巨噬细胞GRK2表达,对M2巨噬细胞上清液中细胞因子分泌的影响,采用抗体芯片检测了其培养上清液中的细胞因子水平。结果显示,GRK2 siRNA+Terb组中IL-6、MMP-9、VEGF的表达较Terb组明显上升。7.下调β2-AR激动的M2巨噬细胞中GRK2表达延缓细胞膜上β2-AR的内化Western blot和流式结果显示,GRK2 siRNA+Terb组和Terb组细胞膜β2-AR的表达在Terb刺激10 min达峰值,但GRK2 siRNA组比Terb组的表达有明显提升。同时,GRK2 siRNA+Terb组中M2巨噬细胞胞膜β2-AR的表达在达峰后的下降比Terb组明显减慢,提示下调M2巨噬细胞中GRK2表达,延缓细胞膜上β2-AR的内化,使其在胞膜上作用时间延长。8.下调β2-AR激动的M2巨噬细胞中GRK2表达,促进β2-AR下游信号通路激活为了进一步明确M2巨噬细胞中β2-AR被激活后,下游信号通路的变化,采用ELISA试剂盒检测了cAMP的变化。结果显示,下调M2巨噬细胞中GRK2表达后,cAMP的表达在Terb刺激5 min时比Terb单独作用组明显升高,并在Terb作用10 min时达峰值,表达量约是Terb单独作用组峰值的2倍。在Terb作用15 min时,GRK2 siRNA+Terb组的表达量仍明显高于Terb组。同时,Western blot实验结果显示,GRK2 siRNA+Terb组中PKA、p-CREB和p-STAT3的表达明显高于Terb组。提示下调M2巨噬细胞中GRK2表达,激活了β2-AR/cAMP/PKA/CREB和β2-AR/cAMP/IL-6/STAT3信号通路,可能与肝癌进展相关。结论:1.CD163和CD206的共表达在HCC患者肝组织切片中增多,且Ⅲ+Ⅳ期患者比Ⅰ+Ⅱ期患者更明显,CD163和CD206的表达在HCC患者新鲜肝癌组织中增多,且Ⅲ+Ⅳ期患者比Ⅰ+Ⅱ期患者更明显。提示晚期HCC患者肝组织中M2巨噬细胞的数量增多。2.β2-AR和CD163的共表达在Ⅲ+Ⅳ期肝癌组织中上升,GRK2和CD163的共表达在Ⅲ+Ⅳ期肝癌组织中下降。β2-AR和CD163的共表达在肿块直径大或有TNM分期晚的患者中上升;GRK2和CD163的共表达在上述临床特征患者及有区域淋巴结转移患者中降低。提示M2巨噬细胞的β2-AR和GRK2异常表达可能参与HCC的进展。3.特异性激动M2巨噬细胞的β2-AR,与其上清共培养的肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721的增殖、迁移和侵袭能力增强。下调β2-AR激动的M2巨噬细胞中GRK2的表达,进一步促进与其上清共培养的HepG2、SMMC-7721肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。提示GRK2可调控M2巨噬细胞的β2-AR促进肝癌细胞的生长和转移。4.下调β2-AR激动的M2巨噬细胞中GRK2的表达,激活β2-AR/cAMP/PKA/CREB和β2-AR/cAMP/IL-6/STAT3信号通路,使M2巨噬细胞分泌促肿瘤细胞因子增多,促进了肝癌细胞的恶性生物学行为。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2018-10-01）
李锐,柴慧娟,屈扬扬,李丹丹,刘艳丽[2]（2014）在《不同G蛋白耦联受体激酶对β-肾上腺素受体诱导心肌钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活化的影响》一文中研究指出目的探讨不同G蛋白耦联受体激酶(GRK)对β-肾上腺素受体(β-AR)诱导的心肌钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活化的影响。方法雄性小鼠(体质量20~28 g)分为野生对照组(WT:SPF级C57BL/6小鼠,作为阳性对照)、GRK2,3,5,6基因敲除组(GRK2KO、GRK3KO、GRK5KO、GRK6KO)和β1、2-AR突变组[GRK(-):β-AR缺乏GRK磷酸化位点,作为阴性对照]。各组小鼠分别给予异丙基肾上腺素(ISO)刺激或等量生理盐水2周,断颈处死动物,切取左心室并剥离粘连组织,经液态氮处理后贮存于-80℃。Western blot用于检测有活性的CaMKⅡ(p-CaMKⅡThr286/T-CaMKⅡ)的表达变化;采用ELISA方法检测心肌匀浆CaMKⅡ活性;HE染色检测心肌细胞组织学变化。结果给予ISO刺激后,与阳性对照WT小鼠变化相同,GRK2KO,GRK3KO和GRK6KO小鼠心肌组织中p-CaMKⅡ表达水平明显增加(ISO刺激与非刺激小鼠比较,均为P<0.05),而GRK5KO与阴性对照GRK(-)小鼠变化相同,ISO刺激组与非刺激组相比心肌组织中p-CaMKⅡ表达无明显增加;ELISA检测也发现,ISO刺激后WT及GRK2KO,GRK3KO,GRK6KO小鼠心肌组织匀浆的CaMKⅡ活性显着增加(ISO刺激与非刺激小鼠比较,均为P<0.05),而GRK5KO及GRK(-)小鼠ISO的CaMKⅡ活性无明显增加。HE染色发现,WT小鼠ISO刺激与非刺激组相比心肌横截面积明显增大[(1388.2±270.3)μm2比(825.5±414.9)μm2,P<0.05],GRK5KO小鼠ISO刺激组与非刺激组比较,心肌横截面积无明显差异[(837.1±112.8)μm2比(883.5±235.9)μm2,P>0.05]。结论 GRK5对β-AR诱导的CaMKⅡ激活是必要的;GRK5基因敲除可能通过引起CaMKⅡ表达改变而改善β-AR持久兴奋诱导的心肌肥厚。(本文来源于《中国心血管杂志》期刊2014年04期）
苗也,陈晖,李敏,李虹伟[3]（2013）在《β肾上腺素受体激酶抑制剂对心肌梗死后心力衰竭大鼠β肾上腺素受体信号传导的影响》一文中研究指出目的对心肌梗死后心力衰竭大鼠经尾静脉注射腺病毒介导的β肾上腺素受体激酶抑制剂(βARKct),观察其对神经内分泌激素以及β肾上腺素受体信号传导的影响。方法体重250 g左右的雄性SD大鼠24只随机分为3组,其中2组结扎冠状动脉左前降支形成急性前壁心肌梗死,4周后形成心力衰竭:模型组大鼠尾静脉注射空腺病毒载体,治疗组心力衰竭大鼠尾静脉注射腺病毒介导的β肾上腺素受体激酶抑制剂(Ad-βARKct);另一组为假手术组尾静脉注射空腺病毒载体。4周后测定各组大鼠血儿茶酚胺和NT-ProBNP水平以及左心室非梗死区心肌组织儿茶酚胺水平、β肾上腺素受体激酶(βARK1)以及β肾上腺素受体的表达。结果与模型组比较,治疗组大鼠血NT-ProBNP水平降低(P<0.01),血儿茶酚胺水平降低而心肌组织儿茶酚胺水平升高(均P<0.01),βARK1 mRNA水平降低(P<0.01)且βARK1蛋白表达水平降低(P<0.01),β肾上腺素受体mRNA水平升高(P<0.01)。结论通过尾静脉注射Ad-βARKct可以明显改善心肌梗死后心力衰竭大鼠的神经内分泌激素水平及β肾上腺素受体信号传导。(本文来源于《中华临床医师杂志(电子版)》期刊2013年24期）
苗也,陈晖,周力,李敏,李虹伟[4]（2013）在《β肾上腺素受体激酶抑制剂对心肌梗死后心力衰竭大鼠血流动力学的影响》一文中研究指出目的对心肌梗死后心力衰竭大鼠经尾静脉注射腺病毒介导的β肾上腺素受体激酶抑制剂(βARKct),观察其对血流动力学的影响。方法体重250 g左右的雄性SD大鼠随机分为3组,其中两组结扎冠状动脉左前降支形成急性前壁心肌梗死,4周后形成心力衰竭:对照组心衰大鼠尾静脉注射空腺病毒载体,实验组心衰大鼠尾静脉注射腺病毒介导的肾上腺素受体激酶抑制剂;另一组为假手术组尾静脉注射空腺病毒载体。4周后测定各组大鼠左室射血分数及血流动力学指标。结果与假手术组相比,对照组及实验组大鼠左室射血分数下降(P<0.05),左心室内压力变化最大速率(±dp/dt max)绝对值下降(P<0.05);与对照组相比,实验组大鼠左室射血分数升高(P<0.05),左心室内压力下降最大速率(-dp/dt max)绝对值升高(P<0.05)。结论通过尾静脉注射腺病毒介导的肾上腺素受体激酶抑制剂(Ad-βARKct)可以明显改善心肌梗死后心力衰竭大鼠的射血分数及血流动力学指标。(本文来源于《临床和实验医学杂志》期刊2013年10期）
刘艳丽,刘奔,屈扬扬,柴慧娟,李锐[5]（2013）在《氧化应激和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II参与β肾上腺素受体持久激动引起的大鼠心肌肥厚》一文中研究指出持久激动β肾上腺素受体(β adrenergic receptor,βAR)可导致病理性心肌肥厚,但其机制尚不明确。本研究观察抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的心肌肥厚大鼠的心肌氧化应激水平及钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II,CaMKII)表达的影响,探讨βAR持久激动诱发心肌肥厚机制中CaMKII和氧化应激的作用。健康雄性Wistar大鼠,随机分成4组:正常对照组(CTRL),ISO处理组(ISO),正常NAC组(CTRL+NAC)和ISO处理+NAC组(ISO+NAC),每组6只。ISO及ISO+NAC组动物每天腹腔注射3mg/kgISO,CTRL及CTRL+NAC组腹腔注射相同体积的生理盐水;CTRL+NAC及ISO+NAC组动物每日自由饮用含15g/LNAC的饮用水。每周用无创动脉血压仪检测鼠尾动脉血压,连续2周;以心重指数(HW/BW)和左心室组织HE染色检测心肌肥厚情况;荧光测定法检测心肌线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Western blot检测左室心肌NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)以及有活性的CaMKII(p-CaMKII/CaMKII)的表达变化。结果显示,与CTRL组相比,ISO组大鼠出现明显的心肌肥厚,心肌线粒体ROS水平升高(P<0.05),心肌组织NOX4和p-CaMKII的表达均显着增加(分别为CTRL组的1.4倍和1.6倍,P<0.05);NAC显着改善了ISO诱导的心肌肥厚,降低了ISO诱导的心肌线粒体ROS过度生成(P<0.05vsISO),有效抑制了ISO诱发的NOX4及p-CaMKII表达上调(P<0.05vsISO);CTRL+NAC组各项指标与CTRL组大鼠无差异;各组动物尾动脉血压亦无显着性差异。上述结果提示,氧化应激和CaMKII在βAR持久兴奋诱发心肌肥厚机制中起重要作用,NAC可以通过抑制心肌细胞线粒体及NADPH氧化酶应激途径降低氧化应激水平,抑制CaMKII激活,从而改善βAR持久激动引起的心肌肥厚。(本文来源于《生理学报》期刊2013年01期）
宋羽,沈祥春,陶玲,张燕,肖婷婷[6]（2012）在《环维黄杨星D对去甲肾上腺素诱导心肌细胞G蛋白偶联受体激酶-2表达的影响》一文中研究指出目的观察环维黄杨星D(CVB-D)对去甲肾上腺素(NE)诱导心肌细胞损伤的保护作用及对G蛋白偶联受体激酶-2(GRK-2)表达的影响。方法体外培养新生SD大鼠原代心肌细胞,建立NE诱导的心肌细胞损伤模型,以细胞存活率,培养上清液乳酸脱氢酶的(LDH)活性反映心肌细胞损伤。酶联免疫吸附法(ELISA)测定环磷酸腺苷(cAMP)含量,Western blot分析G蛋白偶联受体激酶-2(GRK-2)蛋白表达。结果 NE能降低细胞存活率,提高培养液LDH活性,降低细胞内cAMP含量,增加GRK-2蛋白表达。CVB-D对NE诱导上述指标异常具有明显的改善作用。结论(本文来源于《中国药理学通报》期刊2012年10期）
李双双,许华,熊源长[7]（2012）在《蛋白激酶PKB/Akt参与alpha_(2A)肾上腺素受体调控CCI大鼠神经病理性疼痛的机制研究》一文中研究指出目的:观察在神经病理性疼痛(neuropathic pain,NPP)状态下α_(2A)-AR及蛋白激酶PKB/Akt在坐骨神经慢性缩窄性损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠模型脊髓背角上的表达变化;初步探讨α_(2A)-AR与蛋白激酶PKB/Akt在CCI大鼠神经病理性疼痛发生发展过程中的上(本文来源于《全国第叁次麻醉药理学术会议论文集》期刊2012-07-06）
李琳[8]（2011）在《β肾上腺素能受体活化蛋白激酶C_ε诱导心肌细胞肥大及其机制探讨》一文中研究指出背景：心肌肥大是高血压、冠心病、瓣膜病及先心病等多种心血管疾病共同的病理改变,是心肌细胞对多种不良刺激的病理性代偿过程。心肌肥大是导致心血管疾病发病率和病死病残率显着升高的独立危险因素。心肌肥大的发生发展涉及多种促心肌肥大信号(如理化刺激、激素水平、组织因子等),这些信号单独或共同激活多条信号转导通路,最终促成和/或加重心肌肥大。阐明心肌肥大的病因、发病机理,对改进防治方法、开发有效药物和降低病死病残率意义重大。尤其对心肌肥大信号转导机制的研究近年来已成为国内外研究的热点。心脏的肾上腺素能信号转导通路包括α肾上腺素能受体(αAR)和β肾上腺素能受体(βAR),当αAR和βAR被激活时,分别引起磷脂酶C(PLC)/蛋白激酶C(PKC)和腺苷酸环化酶/蛋白激酶A (PKA)信号通路的活化。体外心肌细胞培养和转基因鼠活体研究均证实心脏的肾上腺素能信号转导通路对心肌肥大起重要作用。自1948年Ahlquist等将肾上腺素受体分为αAR和βAR以来,一直认为PKC信号转导通路是由αAR介导的,但Schmidt等的研究表明,环磷酸腺苷(cAMP)可活化一种新近发现的鸟嘌呤交换因子：直接被cAMP激活的交换蛋白(Epac),从而激活PLCs和PKC,提示βAR与PKC之间也可能存在由Epac和PLC介导的信号转导通路。目的：探讨pAR激动剂异丙肾上腺素(Iso)刺激心肌细胞后是否激活PKCs并阐明其机制。探讨Epac和磷脂酶C在其中发挥的作用,及其与细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路的关系和对心肌肥大的影响。方法：以原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞为实验细胞,研究组分别用βAR激动剂Iso (lμmol/L, lmin~30min、Epac激动剂8-CPT (lμmol/L,1Omin)、磷脂酶C抑制剂U73122(2μmo/L,30min)处理细胞。分别用携带具有显性抑制效应(DN)的突变型Epac (Epac R279K, Epac抑制剂)腺病毒、编码兔肌肉cAMP依赖的蛋白激酶抑制剂(Ad.PKI)腺病毒和标记绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒感染心肌细胞,确认感染成功后,给予Iso (lμmol/L, lmin)处理。采用Western blot方法半定量检测心肌细胞颗粒部分的PKCs蛋白,激光共聚焦显微镜观察心肌细胞内PKCs的转位情况。用特异性PKCs转位抑制肽(PKCε inhibitor peptide)和阴性对照肽(PKCε scramble peptide)转染心肌细胞,分别测定经Iso (10μmol/L)孵育48h后心肌细胞表面积和蛋白含量,以及经Iso(lμmol/L,1Omin)处理后磷酸化ERK1/2(pERK1/2)蛋白表达的变化。研究中每项处理均设有严格对照。采用SPSS11.0统计软件进行分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果：①刺激pAR引起PKCs活化转位,心肌细胞颗粒部分PKCs在加入Iso孵育1min后开始增加,30min时恢复至基线水平。观察到活化转位的PKCs在心肌细胞内分布于核膜周围,以Iso孵育后1min~15min明显。②加入Iso (lμmol/L, lmin)和Epac激动剂8-CPT孵育细胞后,均引起细胞颗粒部分PKCε增加(P<0.05): Iso和8-CPT均引起PKCε转位于细胞核周围,两组PKCs核周染色评分均高于对照组(P均<0.05)。③预先用Ad. PKI腺病毒感染心肌细胞,抑制PKA活性后,Iso所致的细胞颗粒部分PKCε增加未受抑制(P<0.01),定性和定量观测Ad.PKI也未能抑制Iso引起的PKCε核周转位(P<0.01)。④用编码Epac R279K的腺病毒感染心肌细胞,抑制或阻断Epac的作用后再给Iso处理,细胞颗粒部分PKCε没有增加,Iso所致的PKCε活化被阻断。⑤磷脂酶C抑制剂U73122(2μmol/L,30min)与心肌细胞预孵育后,Iso刺激引起的PKCs活化转位消失,细胞颗粒部分PKCε无增加(P>0.05), PKCε也未发生核周转位。⑥Iso引起PKCε活化可导致pERK1/2表达增加并诱导心肌细胞肥大。分别用PKCs转位抑制肽和阴性对照肽转染心肌细胞后,再给Iso处理(lμmol/L,1Omin),阴性对照肽组中Iso增加pERK1/2的表达(P<0.05): PKCε抑制肽组中Iso未增加pERK1/2表达(P>0.05),提示抑制PKCε活化后,Iso所致的pERKl/2表达增加受到抑制。用PKCs阴性对照肽转染心肌细胞后,经Iso处理组心肌细胞表面积和蛋白含量均较对照组增加,对照组和Iso组心肌细胞表面积分别为1319.79±460.00μm2和1874.36±479.52μm2(P<0.05),蛋白含量分别为0.64±0.06和0.92±0.11(P<0.01)。用PKCε转位抑制肽转染细胞后,经Iso处理组心肌细胞表面积和蛋白含量与对照组比较无增加,对照组和Iso组细胞表面积分别为1268.78±501.63μm2和1604.85±489.88μm2,蛋白含量分别为0.73±0.12和0.62±0.07(P均>0.05),提示PKCε抑制肽阻断了Iso诱导的心肌细胞肥大。结论：①刺激心肌细胞βAR引起PKCε活化转位,提示心肌细胞中pAR与PKCε可能存在相互作用。②刺激βAR引起的PKCε活化转位可能不依赖于PKA.③Epac口PLC可能介导了刺激βAR引起的PKCε激活。pAR活化PKCε的途径可能是：激活βAR引起Epac活化,活化的EpaC激活PLC,从而介导PKCε活化转位至胞核周围.④pERK1/2表达增加和心肌细胞肥大是Iso激活PKCε信号转导通路的不良效应之一。βAR活化PKCε可激活ERK信号转导通路,可能参与了诱导心肌细胞肥大。(本文来源于《昆明医科大学》期刊2011-09-01）
张幼怡[9]（2011）在《单磷酸腺苷激活蛋白激酶抑制交感神经/肾上腺素受体过度激活引起的心脏重塑》一文中研究指出高血压的主要危害是对靶器官的损害,高血压心脏病是高血压的主要并发症。高血压导致的心肌重塑是心力衰竭和心律失常的重要病理基础。高血压心脏重塑和心力衰竭的致病因素有许多,但是慢性交感神经张力增加和β-肾上腺素受体(β-AR)的过度激活是重要因素之一。慢性交感神经和β-AR的激活对心脏是有害的,在心衰恶化、心脏功能异常和心肌重塑进展中发挥重要的作用。交感神经系统激活,释放儿茶酚胺,通过肾上腺素受体,如β-AR,经非经典信号途径可以介导心脏炎症因子分泌增加、细胞外基质增加、抑制心脏血管新生,等"有害"效应。同时,也会抑制心脏的内源性保护机制。单磷酸腺苷激活蛋白激酶(AMPK)是调节能量代谢的关键酶,被称为"能量代谢感受器",近年来它在心脏疾病中的保护作用倍受关注。我们的研究表明,当小鼠心脏AMPK活性受到抑制时,加剧β-AR激动剂异丙基肾上腺素(ISO)刺激引起心脏病理性重塑过程。药物或者运动训练激活心脏AMPK活性,能够通过抑制mTOR/p70S6kinase通路,抑制β-AR激动引起的心肌细胞蛋白质合成,从而抑制心肌肥厚;通过抗氧化应激途径减少β-AR引起的心肌ROS生成增加,从而抑制心肌纤维化。(本文来源于《第八届海峡两岸心血管科学研讨会论文集》期刊2011-08-15）
鲁美丽,王洪新,杨育红,张蕾,刘冬梅[10]（2010）在《κ阿片受体激动通过钙调神经磷酸酶和胞外信号调节激酶信号抑制异丙肾上腺素诱导的乳鼠心肌肥大》一文中研究指出目的探讨κ阿片受体(κ-OR)激动抑制异丙肾上腺素(Iso)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的信号转导机制。方法利用体外培养模型,以Iso 10μmol/L诱导心肌细胞肥大,观察κ-OR激动剂U50488 H1μmol/L的作用,并进一步探索在钙调神经磷酸酶(CaN)特异性抑制剂环孢菌素A(CsA)、细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂U0126、L型钙通道阻滞剂维拉帕米及β肾上腺素受体阻断剂普萘洛尔存在的情况下,κ-OR的激活对心肌肥大的影响。Lowry法测心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统测细胞体积;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察胞内[Ca2+]i瞬间变化;Western blot法测CaN、ERK表达。结果U50488 H1μmol/L可以明显抑制Iso诱导的心肌蛋白含量增加、体积增大和胞内[Ca2+]i瞬间变化的增高,其抑制程度与CsA、U0126、维拉帕米及普萘洛尔相似;U50488 H可以抑制Iso诱导的CaN表达增加和ERK磷酸化增加;CaN抑制剂CsA可以抑制Iso诱导的ERK磷酸化增加,ERK抑制剂U0126可以抑制Iso诱导的CaN表达增加。结论κ-OR激动通过CaN、ERK信号抑制Iso诱导的心肌肥大,在这一过程中,CaN、ERK信号在蛋白水平上存在交互作用。(本文来源于《中华高血压杂志》期刊2010年03期）
肾上腺素能受体激酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨不同G蛋白耦联受体激酶(GRK)对β-肾上腺素受体(β-AR)诱导的心肌钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活化的影响。方法雄性小鼠(体质量20~28 g)分为野生对照组(WT:SPF级C57BL/6小鼠,作为阳性对照)、GRK2,3,5,6基因敲除组(GRK2KO、GRK3KO、GRK5KO、GRK6KO)和β1、2-AR突变组[GRK(-):β-AR缺乏GRK磷酸化位点,作为阴性对照]。各组小鼠分别给予异丙基肾上腺素(ISO)刺激或等量生理盐水2周,断颈处死动物,切取左心室并剥离粘连组织,经液态氮处理后贮存于-80℃。Western blot用于检测有活性的CaMKⅡ(p-CaMKⅡThr286/T-CaMKⅡ)的表达变化;采用ELISA方法检测心肌匀浆CaMKⅡ活性;HE染色检测心肌细胞组织学变化。结果给予ISO刺激后,与阳性对照WT小鼠变化相同,GRK2KO,GRK3KO和GRK6KO小鼠心肌组织中p-CaMKⅡ表达水平明显增加(ISO刺激与非刺激小鼠比较,均为P<0.05),而GRK5KO与阴性对照GRK(-)小鼠变化相同,ISO刺激组与非刺激组相比心肌组织中p-CaMKⅡ表达无明显增加;ELISA检测也发现,ISO刺激后WT及GRK2KO,GRK3KO,GRK6KO小鼠心肌组织匀浆的CaMKⅡ活性显着增加(ISO刺激与非刺激小鼠比较,均为P<0.05),而GRK5KO及GRK(-)小鼠ISO的CaMKⅡ活性无明显增加。HE染色发现,WT小鼠ISO刺激与非刺激组相比心肌横截面积明显增大[(1388.2±270.3)μm2比(825.5±414.9)μm2,P<0.05],GRK5KO小鼠ISO刺激组与非刺激组比较,心肌横截面积无明显差异[(837.1±112.8)μm2比(883.5±235.9)μm2,P>0.05]。结论 GRK5对β-AR诱导的CaMKⅡ激活是必要的;GRK5基因敲除可能通过引起CaMKⅡ表达改变而改善β-AR持久兴奋诱导的心肌肥厚。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肾上腺素能受体激酶论文参考文献
[1].吴婧婧.G蛋白偶联受体激酶2调控M2巨噬细胞β2肾上腺素受体信号在肝细胞癌中的作用[D].安徽医科大学.2018
[2].李锐,柴慧娟,屈扬扬,李丹丹,刘艳丽.不同G蛋白耦联受体激酶对β-肾上腺素受体诱导心肌钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活化的影响[J].中国心血管杂志.2014
[3].苗也,陈晖,李敏,李虹伟.β肾上腺素受体激酶抑制剂对心肌梗死后心力衰竭大鼠β肾上腺素受体信号传导的影响[J].中华临床医师杂志(电子版).2013
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[5].刘艳丽,刘奔,屈扬扬,柴慧娟,李锐.氧化应激和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II参与β肾上腺素受体持久激动引起的大鼠心肌肥厚[J].生理学报.2013
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[7].李双双,许华,熊源长.蛋白激酶PKB/Akt参与alpha_(2A)肾上腺素受体调控CCI大鼠神经病理性疼痛的机制研究[C].全国第叁次麻醉药理学术会议论文集.2012
[8].李琳.β肾上腺素能受体活化蛋白激酶C_ε诱导心肌细胞肥大及其机制探讨[D].昆明医科大学.2011
[9].张幼怡.单磷酸腺苷激活蛋白激酶抑制交感神经/肾上腺素受体过度激活引起的心脏重塑[C].第八届海峡两岸心血管科学研讨会论文集.2011
[10].鲁美丽,王洪新,杨育红,张蕾,刘冬梅.κ阿片受体激动通过钙调神经磷酸酶和胞外信号调节激酶信号抑制异丙肾上腺素诱导的乳鼠心肌肥大[J].中华高血压杂志.2010